miR⁃455⁃3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR⁃455⁃3p调控Keap1/Nrf2信号对气道平滑肌细胞凋亡的影响。方法收集2021年1月至2023年1月我院普胸外科收治的60例COPD患者,作为COPD组;另选取60例无COPD病史的肺部良性肿瘤患者正常肺组织作为健康对照组(Control组)。分离气道平滑肌细胞(ASMCs),将COPD患者气道平滑肌细胞随机分为miR⁃455⁃3p组、miR⁃NC组、miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组。RT⁃PCR检测Control组和COPD组患者中miR⁃455⁃3p的表达,并检测转染过不同质粒的各组COPD患者气道平滑肌细胞中miR⁃455⁃3p的表达。分别采用CCK⁃8、Transwell小室法及流式细胞仪检测COPD患者气道平滑肌细胞增殖、侵袭和凋亡能力;采用ELISA检测COPD患者气道平滑肌细胞培养上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平;蛋白质印迹检测细胞中Keap1和Nrf2蛋白表达。结果与Control组相比,COPD组患者ASMCs中miR⁃455⁃3p表达降低(P<0.05);与NC组相比,miR⁃455⁃3p组ASMCs中miR⁃455⁃3p表达增加(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组ASMCs中miR⁃455⁃3p表达明显降低(P<0.05)。NC组和miR⁃NC组ASMCs增殖、侵袭、凋亡能力及IL⁃6和TNF⁃α水平相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR⁃NC组相比,miR⁃455⁃3p组ASMCs增殖、侵袭能力及细胞上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平明显降低,凋亡能力明显增加(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组ASMCs增殖、侵袭能力及细胞上清液中IL⁃6、TNF⁃α水平明显增加,凋亡能力明显降低(P<0.05)。NC组和miR⁃NC组细胞中Keap⁃1、Nrf2蛋白表达相比差异无统计学意义(P>0.05);与miR⁃NC组相比,miR⁃455⁃3p组细胞中Keap⁃1蛋白表达明显降低,Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.05);与miR⁃455⁃3p组相比,miR⁃455⁃3p+si⁃Nrf2组细胞中Keap⁃1蛋白表达明显增加,Nrf2蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论过表达miR⁃455⁃3p可抑制COPD患者气道平滑肌细胞增殖和侵袭,诱导凋亡,其作用机制和激活Keap1/Nrf2信号通路有关。

miR-455-3p在结直肠癌组织中表达的临床意义及对癌细胞增殖的影响

目的:探讨miR-455-3p在结直肠癌组织中表达的临床意义及对癌细胞增殖的影响。方法:基于GEO数据库(GSE30454和GSE108153),使用limma包分析结直肠癌组织中显著差异表达的miRNAs;借助包含TCGA数据库的UALCAN平台分析miR-455-3p在结直肠癌组织中的差异表达,并通过Kaplan-Meier Plotter网站初步分析miR-455-3p与患者生存的关联;原位杂交(in situ hybridization,ISH)法检测结直肠癌及配对癌旁组织(n=185对)中miR-455-3p的表达情况,并利用两样本秩和检验进行比较;通过Pearson χ^(2)检验和非条件Logistic回归分析miR-455-3p表达与患者临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier法Log-rank检验、多因素COX回归以及多因子降维(multifactor dimensionality reduction,MDR)法分析miR-455-3p预测结直肠癌患者预后的潜力;qPCR和MTT法检测miR-455-3p在结直肠癌细胞株中的表达及对细胞增殖能力的影响。结果:miR-455-3p、miR-1181、miR-1290和miR-622是两组GEO芯片中的共同差异基因。基于TCGA数据的差异分析和Kaplan-Meier曲线发现miR-455-3p在结直肠癌中的下调与患者预后不良密切相关(P=0.007 9,HR=0.21)。miR-455-3p在结直肠癌中表达减少与肿瘤大小和原发位置显著相关(P<0.05)。miR-455-3p高表达预示结直癌患者生存时间延长(P<0.001),为预后的独立保护因素(P<0.001,HR<1)。miR-455-3p单因素模型具备有效评估无病生存期(disease-free survival,DFS)和总体生存期(overall survival,OS)的潜力(P<0.05,Cross-validation consistency=10/10)。miR-455-3p在结直肠癌细胞株中表达下调(P<0.05),过表达miR-455-3p显著抑制结直肠癌细胞的增殖能力(P<0.05)。结论:miR-455-3p抑制结直肠癌细胞增殖,其低表达有望成为结直癌患者早期诊断和预后评估的潜在生物标志物。

miR-455-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞乳脂代谢的影响

【目的】探讨miR-455-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(CiMECs)乳脂代谢的影响,为研究微小RNA(miRNA)对山羊乳腺功能的调控机制提供理论依据。【方法】利用单一小分子化合物RepSox(TGFβR-1/ALK5抑制剂)诱导山羊成纤维细胞(GEFs),诱导8 d后观察细胞形态变化,采用特异性标记物免疫荧光染色和油红O染色鉴定CiMECs是否诱导成功。使用脂质体将miR-455-3p的过表达载体(miR-455-3p mimics、miR-455-3p mimics-NC)和干扰载体(miR-455-3p inhibitors、miR-455-3p inhibitors-NC)转染至CiMECs,通过细胞增殖及毒性检测(CCK-8)试剂盒、甘油三酯检测试剂盒、实时荧光定量PCR检测miR-455-3p对于CiMECs的增殖率、甘油三酯分泌情况及乳脂代谢基因表达量。【结果】GEFs诱导8 d后形成类似于山羊乳腺上皮细胞的岛状、多核和鹅卵石状细胞形状。免疫荧光结果显示,CiMECs可表达上皮特异性标志物抗原,包括细胞角蛋白14(CK14)和CK18;油红O染色结果显示,诱导后的细胞具有分泌脂滴的功能。CiMECs转染结果显示,miR-455-3p mimics极显著促进了miR-455-3p的表达(P<0.01),miR-455-3p inhibitors显著抑制了miR-455-3p的表达(P<0.05)。CCK-8及甘油三酯检测结果表明,与对照组相比,miR-455-3p mimics组细胞增殖率、甘油三酯分泌量均极显著降低(P<0.01),miR-455-3p inhibitors组细胞增殖率、甘油三酯分泌量均显著增加(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,诱导后CiMECs中HADHB基因表达量极显著降低(P<0.01);miR-455-3p mimics组HADHB基因表达量极显著升高(P<0.01),miR-455-3p inhibitors组HADHB基因表达量显著降低(P<0.05)。【结论】通过抑制miR-455-3p可促进奶山羊CiMECs增殖,降低脂肪代谢基因HADHB的表达,从而提高山羊奶中脂肪酸含量。研究结果可为后续利用miRNA改善山羊乳品质提供参考。

急性胰腺炎患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系研究

目的 探讨急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)患者血清miR-455-3p,miR-141-3p水平表达与病情严重程度的关系。方法 选取2021年11月~2023年11月于都江堰市人民医院就诊的AP患者133例(AP组)作为研究对象;根据病情程度将AP患者分为重症组(n=43)和轻症组(n=90)。同期选取于该院体检健康者135例作为对照组。实时荧光定量PCR(RT-q RCR)法检测血清miR-455-3p和miR-141-3p水平。Spearman相关性分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平与急性生理与慢性健康评分Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ,APACHE Ⅱ)、Ranson评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-455-3p,miR-141-3p水平对重症AP的诊断价值;多因素Logistics回归分析影响重症AP的发生因素。结果 AP组血清miR-455-3p(0.61±0.13)低于对照组(1.12±0.21),miR-141-3p水平(1.37±0.11)高于对照组(1.04±0.15),差异具有统计学意义(t=23.863,20.513,均P<0.05)。重症组患者血清miR-455-3p水平(0.53±0.10)低于轻症组(0.64±0.12),miR-141-3p水平(1.51±0.14)高于轻症组(1.30±0.15),差异具有统计学意义(t=6.056,7.713,均P<0.05)。重症组患者血清淀粉酶(serum amylase,AMS)、脂肪酶(lipase,LPS)水平及APACHEⅡ,Ranson评分高于轻症组,差异具有统计学意义(t=2.227,2.290,18.267,11.259,均P <0.05)。Spearman相关性分析结果表明,AP患者血清miR-455-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈负相关(r=-0.702,-0.783,均P <0.05),miR-141-3p与APACHEⅡ,Ranson评分呈正相关(r=0.787,0.734,均P <0.05)。ROC曲线结果表明血清miR-455-3p,miR-141-3p水平单独及联合诊断重症AP的AUC分别为0.848,0.822和0.919,且二者联合诊断优于单独诊断(Z=3.081,2.524,均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示miR-455-3p是影响重症AP的保护因素,miR-141-3p是影响重症AP的危险因素(P<0.05)。结论 AP患者血清miR-455-3p下降和miR-141-3p升高与病情严重程度密切相关。

miR-455-3p调控sirt1表达对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细胞,并用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫荧光染色对其鉴定。NP细胞分成Ctrl组、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)组、IL-1β+NC inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-NC组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-sirt1组,除Ctrl组外的五组细胞均使用10 ng/mL的IL-1β诱导NP细胞退变模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-455-3p及sirt1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测增殖;JC-1染色检测线粒体膜电位;Hoechst染色检测凋亡;蛋白免疫印迹检测sirt1、增殖(PCNA、Ki67、Cyclin D1)和凋亡(Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3)相关蛋白及CollagenⅡ、Aggrecan表达;双荧光素酶报告分析实验验证miR-455-3p与sirt1的靶向关系。结果大鼠椎间盘NP细胞被成功分离。与IL-1β组、IL-1β+NC inhibitor组比较,IL-1β+miR-455-3p inhibitor组miR-455-3p表达、凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3表达及Bax/Bcl-2比值下降,细胞活力、PCNA、Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、CollagenⅡ、Aggrecan表达升高(P<0.05)。miR-455-3p直接靶向负调控sirt1表达。干扰sirt1可逆转抑制miR-455-3p表达对NP细胞增殖、凋亡的影响。结论抑制miR-455-3p表达可通过靶向调控sirt1,抑制IL-1β诱导的NP细胞凋亡并促进NP细胞增殖。

miR-455-3p通过靶基因HDAC2抑制心肌梗死后心肌肥厚

目的:探讨miR-455-3p在心肌梗死后心肌肥厚中的作用。方法:比较miR-455-3p在心肌梗死组和空白对照组的表达。心肌细胞过表达miR-455-3p情况下分析细胞表面积和心肌肥厚基因表达。荧光素酶活性检测和Western blot法确定受miR-455-3p调控的靶基因。通过心肌梗死模型组大鼠体内miR-455-3p的过表达确定miR-455-3p对心肌肥厚的影响。结果:在体外和体内试验中发现在心肌肥厚中miR-455-3p均被下调。体外实验,过度表达miR-455-3p可以抑制心肌肥厚。与miR-455-3p相比,心肌肥厚中HDAC2被上调。HDAC2是一种新型的miR-455-3p靶基因。心肌梗死大鼠过表达miR-455-3p通过降低HDAC2的表达能抑制心肌梗死后心肌肥厚。结论:miR-455-3p是心肌肥厚的重要调节因子,为心肌梗死后心肌肥厚的治疗提供新的理论基础。

miR-455-3p靶向HDAC2对卵巢上皮性癌细胞生长和运动的影响

目的研究miR-455-3p通过靶向HDAC2对卵巢上皮性癌细胞生长和运动的影响。方法荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与HDAC2靶向关系;构建HDAC2pcDNA载体过表达HDAC2,细胞转染mimic,将细胞随机分为4组:Control组、mimic组、HDAC2组、mimic+HDAC2组进行后续实验。BRDU染色检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测Ki67、PCNA、c-MycmRNA水平;Transwell检测细胞侵袭;划痕试验检测细胞迁移;Westernblot检测血管内皮生长因子(VEGF)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)蛋白表达水平。结果miR-455-3p和HDAC2存在直接靶向作用关系。与HDAC2组相比较,mim-ic+HDAC2组BRDU阳性细胞数降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Ki67、PCNA、c-MycmRNA水平降低(P<0.05),侵袭细胞数降低(P<0.05),划痕愈合率降低(P<0.05),VEGF、Vimentin、Fibronectin蛋白水平降低(P<0.05)。结论miR-455-3p通过靶向HDAC2诱导卵巢癌细胞HO-8910凋亡,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,降低运动能力。

miR-455-3p在胃癌中的表达及其与MVD和VEGF表达的相关性研究

目的探讨miR-455-3p在胃癌中的水平及其与微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测80例胃癌组织(胃癌组)中miR-455-3p水平,免疫组化法检测80例胃癌组织中MVD和VEGF表达,并分析胃癌组织中miR-455-3p水平与MVD和VEGF表达的相关性。选取同期的37例浅表性胃炎和12例正常胃黏膜组织作对照(对照组)。结果胃癌组的miR-455-3p水平为1.16±0.59,低于对照组的2.61±0.88,差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组的VEGF阳性表达率和MVD分别为71.3%(57/80)和54.9±7.3,均高于对照组的28.6%(14/49)和27.5±6.1,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中miR-455-3p水平与VEGF表达(r=-0.783,P<0.05)和MVD(r=-0.824,P<0.05)均呈负相关。结论 miR-455-3p在胃癌中为低表达,并与VEGF表达和MVD呈负相关,有可能在调控胃癌组织血管生长中发挥重要作用。

MEG3-miR-455-PI3K/Akt信号通路对大脑中动脉闭塞小鼠模型缺氧损伤神经干细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNA MEG3)靶向微小RNA-455(miR-455)调控磷脂酰肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对小鼠脑梗死缺氧神经干细胞(NSCs)损伤模型细胞增殖、凋亡、分化及氧化应激水平的影响。方法构建大脑中动脉闭塞(MCAO)小鼠模型,取18只SPF大鼠随机分为假手术组、MCAO组,每组9只。原代分离与培养NSCs,建立NSCs缺氧损伤模型。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测母系表达基因3(MEG3)、miR-455的表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;使用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量。用双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-455的靶向关系。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulin-Ⅲ)、磷酸化磷脂酰肌醇激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、PI3K、Akt蛋白表达量。结果与假手术组比较,MCAO组MEG3表达水平明显升高(P<0.05),miR-455表达水平明显降低(P<0.05);与对照组比较,模型组MEG3、p21、Bax表达水平明显升高(P<0.05),miR-455、CyclinD1、Bcl-2、GFAP、β-tubulin-Ⅲ表达水平明显降低(P<0.05),SOD、GSH-Px活性明显降低(P<0.05),48 h、72 h细胞增殖活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及MDA活性明显升高(P<0.05);抑制MEG3表达后,细胞活力明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2、GFAP、β-tubulin-Ⅲ表达及SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),p21、Bax表达水平明显降低(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实MEG3与miR-455存在靶向关系。结论LncRNA MEG3靶向miR-455及抑制PI3K/Akt信号通路激活进而抑制缺氧诱导的NSCs增殖、分化,诱导细胞凋亡及促进氧化应激。

miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇耐药的关系

目的 探讨miRNA-455-3p在乳腺癌组织中的表达及与紫杉醇(PTX)耐药的关系。方法 选取80例乳腺癌患者,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测乳腺癌组织和癌旁组织中miRNA-455-3p的相对表达量及PTX耐药和PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p、自噬相关蛋白(ATG12)mRNA的相对表达量。将miRNA-NC、miRNA-455-3p mimics分别转染至乳腺癌耐药MCF-7/PTX细胞,分别作为miRNA-NC组、miRNA-455-3p组,采用蛋白质印迹法检测细胞凋亡情况以及P糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)蛋白的相对表达量。相关性分析采用Spearman相关分析。结果 乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。PTX敏感乳腺癌患者乳腺癌组织中miRNA-455-3p的相对表达量明显高于PTX耐药患者,ATG12 m RNA相对表达量明显低于PTX耐药患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。miRNA-455-3p组细胞凋亡率明显高于miRNA-NC组,P-gp、GST-π蛋白相对表达量均明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,乳腺癌组织中miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关(r=-0.697,P﹤0.01)。结论 乳腺癌组织miRNA-455-3p的表达与ATG12的表达呈负相关,通过靶向抑制ATG12的表达降低耐药乳腺癌细胞的自噬活性,促进细胞凋亡,有助于改善乳腺癌细胞对PTX药物的敏感性。

miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究

目的探讨miRNA-455-3p对HCT116结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及机制研究。方法采用脂质体LipofectamineTM3000将miR-455-3p mimics和miR-455-3p NC转入HCT116结肠癌细胞中,Real-time PCR检测细胞中miR-455-3p表达,MTT法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases2,MMP2)、MMP9、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路相关蛋白的表达。结果与miR-455-3p NC组比较,miR-455-3p mimics组miR-455-3p表达量显著提高(P<0.01),细胞活力、迁移能力、侵袭能力均显著降低(P<0.01),MMP2、MMP9、PI3K及p-AKT表达量均显著下调(P<0.01)。结论 miR-455-3p mimics可能通过阻断PI3K/AKT信号通路抑制HCT116细胞的迁移及侵袭。

miR-455-3p靶向HIPK2调控高糖环境下成骨细胞的增殖和凋亡

背景:以往研究表明多种miRNA在骨形成中发挥作用,miR-335-5p可保护成骨细胞免受氧化应激,对枸橼酸铁铵诱导的成骨细胞具有保护作用,但miR-335-5p对高糖环境下成骨细胞增殖和凋亡的影响尚未可知。目的:探讨miR-455-3p靶向HIPK2对高糖环境下成骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:双荧光素酶报告基因分析法验证miR-455-3p对HIPK2的靶向作用。体外用高糖诱导MC3T3-E1细胞,分为空白组、高糖组、高糖+miR-control组、高糖+miR-455-3p组、高糖+si-control组、高糖+si-HIPK2组、高糖+miR-455-3p+pcDNA组和高糖+miR-455-3p+pcDNA-HIPK2组。qRT-PCR检测miR-455-3p和HIPK2mRNA的表达,MTT法检测细胞存活率,流式细胞检测细胞凋亡,Westernblot检测HIPK2、p-STAT3和STAT3蛋白的表达。结果与结论:①HIPK2是miR-455-3p的靶基因,miR-455-3p可负性调控HIPK2的表达;②高糖处理可抑制miR-455-3p的表达,促进HIPK2的表达;③过表达miR-455-3p或抑制HIPK2表达均可促进高糖条件下MC3T3-E1细胞的存活和抑制凋亡;④过表达HIPK2可部分逆转miR-455-3p对高糖条件下成骨细胞的存活促进和凋亡抑制作用;⑤miR-455-3p通过调控HIPK2抑制成骨细胞中p-STAT3的表达;⑥结果表明,miR-455-3p通过靶向下调HIPK2抑制高糖诱导的成骨细胞凋亡,促进成骨细胞增殖,这可能与抑制STAT3信号通路有关。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA DLEU2/miR-455-3p/OTUD7B轴通过PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌恶性发展

目的:探讨长链非编码RNA DLEU2(lncRNA DLEU2,DLEU2)对宫颈癌恶性发展的影响。方法:利用TCGA数据库和qRT-PCR分析DLEU2在宫颈癌组织和细胞系中的表达。采用CCK-8、Western blotting、免疫荧光、细胞划痕、Transwell和TUNEL实验检测干扰DLEU2(sh-DLEU2)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析DLEU2和miR-455-3p的靶基因,评估miR-455-3p inhibitor/mimic对宫颈癌细胞生长和PI3K/AKT信号通路的影响。裸鼠荷瘤实验检测干扰DLEU2后对瘤体体内生长的影响。结果:宫颈癌组织和细胞系中DLEU2表达显著上调(P<0.01)。sh-DLEU2可抑制Hela和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.001)。DLEU2与miR-455-3p相结合,OTUD7B为miR-455-3p的靶基因。miR-455-3p inhibitor促进细胞恶性发展并激活PI3K/AKT信号通路,而sh-DLEU2可逆转其作用(P<0.01);miR-455-3p mimic也可部分逆转Oe-OTUD7B对细胞的作用(P<0.01)。此外,sh-DLEU2抑制了裸鼠荷瘤组织的生长(P<0.01)。结论:DLEU2通过miR-455-3p/OTUD7B轴激活PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌的恶性发展。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

miR-455-3p通过靶向BMP2调节地塞米松诱导的软骨细胞自噬性死亡

目的:探究miR-455-3p通过靶向BMP2对地塞米松(Dex)诱导的软骨细胞自噬性死亡的影响。方法:荧光素酶报告实验验证miR-455-3p与BMP2靶向关系。从SD大鼠中分离软骨细胞,Dex处理后的软骨细胞转染miR-455-3p mimic或联合转染pcDNA-BMP2,将软骨细胞分为4组:Control组、Dex组、Dex+mimic组和Dex+mimic+BMP2组。RT-PCR检测BMP2、Ki67、PCNA mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖,免疫荧光检测LC3含量,Western blotting法检测BMP2、Caspase-3、Caspase-9、LC3II、LC3I、Beclin1、ATG7蛋白表达水平。结果:miR-455-3p和BMP2存在直接靶向作用关系。与Control组比较,Dex组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与Dex组比较,Dex+mimic组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著升高,细胞增殖倍数显著降低,LC3含量显著升高,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。与Dex+mimic组比较,Dex+mimic+BMP2组BMP2 mRNA水平和蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9比值显著降低,细胞增殖倍数显著升高,LC3含量显著降低,LC3II/LC3I比值和Beclin1、ATG7蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:miR-455-3p通过靶向BMP2调节Dex诱导的软骨细胞自噬性死亡。

miR-455-3p靶向调控HDAC2抑制非小细胞肺癌细胞的恶性生物学过程

目的研究miR-455-3p在非小细胞肺癌中的生物学功能及其机制。方法通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分析癌旁组织和癌组织中miR-455-3p和组蛋白脱乙酰基酶2(HDAC2)的表达水平。将A549细胞分为4组:miR NC组、miR-455-3p mimics组、si NC组和si HDAC2组。通过MTT实验分析细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹分析HDAC2和Ki-67的表达水平,通过双荧光素酶报告基因实验和生物信息学分析miR-455-3p的靶点。结果miR-455-3p在非小细胞肺癌组织中低表达而HDAC2高表达(癌旁组织和癌组织中miR-455-3p分别为1.03±0.02、0.46±0.01;癌旁组织和癌组织中HDAC2分别为0.17±0.01、0.43±0.02,P<0.05);过表达miR-455-3p或者抑制HDAC2后都能抑制A549细胞增殖和侵袭能力,并诱导A549细胞凋亡;miR-455-3p能够靶向抑制HDAC2的表达(癌旁组织和癌组织分别为1.01±0.03、0.21±0.01;P<0.05)。结论miR-455-3p在非小细胞肺癌组织中低表达而HDAC2高表达,此外,miR-455-3p通过靶向调节HDAC2进而抑制非小细胞肺癌的体外增殖。

miR-455-3p通过靶向调控转脂蛋白4抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖、迁移及上皮间质转化

目的:探讨miR-455-3p对卵巢癌细胞SKOV-3增殖、迁移能力及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并研究其作用机制。方法:人卵巢上皮细胞株IOSE80、卵巢细胞系SKOV-3和A2780细胞培养完成后,将miR-455-3p mimic及其阴性对照分别瞬时转染至细胞中。qPCR实验检测IOSE80、SKOV-3和A2780细胞miR-455-3p和转脂蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)mRNA表达水平,Wb检测FABP4和EMT相关蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验用于评估细胞迁移能力,生物信息学预测miR-455-3p的靶基因,应用双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p与FABP4的靶向关系。结果:与正常卵巢上皮细胞IOSE80相比,卵巢癌细胞SKOV-3和A2780中miR-455-3p低表达(均P<0.05),而FABP4高表达(均P<0.05)。此外,过表达miR-455-3p明显抑制SKOV-3细胞的增殖和迁移能力(均P<0.05)。过表达miR-455-3p通过上调E-cadherin表达、下调N-cadherin和Vimentin表达而抑制EMT进程(均P<0.05)。FABP4是miR-455-3p的靶基因,且miR-455-3p能特异性结合FABP4 3’-UTR,并负调控其表达水平(P<0.05)。过表达FABP4能够明显逆转miR-455-3p对SKOV-3细胞增殖和迁移的抑制作用(均P<0.05)。结论:miR-455-3p在卵巢癌中作为一个抑癌蛋白,通过靶向调控FABP4从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移及EMT,有望成为卵巢癌新的潜在治疗靶点。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。