补骨脂异黄酮通过miR-497-5p调控对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移的机制研究

目的:探讨补骨脂异黄酮通过调控miR-497-5p抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移的机制研究。方法:体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用浓度为0、9、18、36μg/ml补骨脂异黄酮处理细胞,记为Con组、低剂量组、中剂量组、高剂量组;按照脂质体法miR-NC、miR-497-5p转染细胞,记为miR-NC组、miR-497-5p组;按照脂质体法anti-miR-NC、anti-miR-497-5p转染细胞后,使用36μg/ml补骨脂异黄酮处理细胞,记为高剂量组+anti-miR-NC组、高剂量组+anti-miR-497-5p组。CCK8、克隆实验检测细胞增殖;伤口愈合实验检测细胞迁移;Western blot实验检测Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达水平;qRT-PCR实验检测miR-497-5p表达水平。结果:补骨脂异黄酮呈剂量关系降低瘢痕疙瘩成纤维细胞活性、迁移率(P<0.05),减少克隆细胞数(P<0.05),降低Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达水平(P<0.05),增加miR-497-5p表达水平。与miR-NC组相比,miR-497-5p组细胞活性、迁移率降低(P<0.05),克隆细胞数减少(P<0.05),Cyclin D1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。抑制miR-497-5p可以逆转补骨脂异黄酮对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移的影响。结论:补骨脂异黄酮可能通过上调miR-497-5p抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移。

血清miR-497-5p、FGF-2在阿尔茨海默病患者中的表达及相关性分析

目的探讨miR-497-5p、人成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)患者中的表达水平、诊断价值及两者的相关性。方法收集50例首诊AD患者和37例正常受试者(对照组)的临床资料,其中将AD患者分为轻度AD组18例、中度AD组18例和重度AD组14例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-497-5p的表达水平,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测FGF-2水平,采用简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评估AD患者的认知功能,分析miR-497-5p与MMSE、FGF-2水平的相关性。采用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线评价miR-497-5p,FGF-2水平对AD的诊断效能。结果与对照组和轻度AD组比较,中度、重度AD组患者miR-497-5p表达水平明显升高(P<0.01),FGF-2水平明显下降(P<0.01);AD组miR-497-5p与MMSE评分、FGF-2水平呈负相关(r分别为-0.724、-0.748,P<0.01);ROC曲线分析结果显示,miR-497-5p、FGF-2及两者联合指标诊断中度、重度AD及鉴别轻度和中度,轻度和重度AD时,均有较高的曲线下面积、敏感度和特异性,两者联合指标诊断及鉴别效能最优。结论中重度AD患者血清miR-497-5p上调,FGF-2水平下调,两者联合检测对中重度AD有一定的诊断价值,并提供一定的参考。

华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路调控肺癌细胞的增殖、凋亡及血管生成

目的:探讨华蟾素介导miR-497-5p/VEGFA通路对肺癌细胞增殖、凋亡及血管生成的影响。方法:选取肺癌细胞株A549、H460为研究对象,以不同浓度华蟾素(0、25、50、75、100、125、150μg/mL)作用细胞株,采用MTT检测细胞活力。随后,设置组别为空白组、华蟾素组(100μg/mL华蟾素)、华蟾素+inhibitor NC组、华蟾素+miR-497-5p inhibitor组,通过MTT检测细胞活力;克隆形成实验检测克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中VEGF、VEGFA蛋白表达;RT-qPCR检测细胞中miR-497-5p表达;并采用荧光素酶报告实验确定miR-497-5p靶向VEGFA。结果:随着华蟾素浓度的升高,A549、H460细胞增殖活力明显下降(P<0.01);与空白组相比,华蟾素组A549、H460细胞克隆形成能力明显降低、细胞凋亡明显增加、VEGF和VEGFA蛋白表达明显降低、miR-497-5p mRNA表达明显升高(P<0.01);荧光素酶报告实验显示miR-497-5p靶向VEGFA;与华蟾素+inhibitor NC组相比,华蟾素+miR-497-5p inhibitor组A549、H460细胞中miR-497-5p mRNA表达明显降低、VEGF和VEGFA蛋白表达明显升高、细胞克隆形成能力明显增加、细胞凋亡明显被抑制、细胞增殖活力明显增加(P<0.05)。结论:华蟾素可能通过调控miR-497-5p/VEGFA通路从而抑制肺癌细胞增殖和血管生成,并诱导细胞凋亡。

miR-497-5p通过HMGA2调控食管鳞癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-497-5p通过高迁移率族蛋白A2(HMGA2)对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭能力的影响。方法:利用UALCAN、GEPIA数据库分析miR-497-5p和HMGA2 mRNA在食管癌中的表达。通过生物信息学网站starBase分析miR-497-5p和HMGA2在食管癌样本中表达的相关性。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-497-5p对HMGA2基因的调控。采用细胞划痕实验和Transwell实验分析miR-497-5p通过HMGA2对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:miR-497-5p在食管癌中的表达明显低于其对照样本(P<0.05),HMGA2 mRNA在食管癌中的表达明显高于其对照样本(P<0.05)。miR-497-5p和HMGA2的表达成负相关,miR-497-5p对靶基因HMGA2具有直接调控作用。miR-497-5p mimic组细胞的迁移和侵袭能力明显低于阴性对照(NC)组(P<0.001);而miR-497-5p mimic+HMGA2组细胞的迁移和侵袭能力与miR-497-5p mimic组相比明显上升(P<0.01)。结论:miR-497-5p通过HMGA2调控食管鳞癌细胞的迁移和侵袭。

LncRNA VIM-AS1通过miR-497-5p/FBXW7轴调控高糖环境下视网膜内皮细胞的迁移和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)VIM反义RNA 1(VIM-AS1)在糖尿病视网膜病变中的潜在分子机制。方法:使用q RT-PCR测定LncRNA VIM-AS1、miR-497-5p和FBXW7 mRNA的表达。使用蛋白质印迹检测FBXW7蛋白水平。分别使用CCK-8实验、伤口愈合实验和流式细胞技术分析评估细胞增殖、迁移和凋亡。通过双荧光素酶报告基因分析验证lncRNA VIM-AS1、miR-497-5p和FBXW7之间的结合关系。结果:在高糖处理的ARPE-19细胞中,LncRNAVIM-AS1和FBXW7的表达显著降低,而miR-497-5p的表达上调。LncRNA VIM-AS1可以通过竞争性结合miR-497-5p上调FBXW7的表达。LncRNA VIMAS1过表达能够促进HG处理的ARPE-19细胞的增殖和迁移,并抑制细胞凋亡,而miR-497-5p过表达消除了lncRNA VIM-AS1过表达对HG处理的ARPE-19细胞的影响。此外,FBXW7敲低消除了miR-497-5p对HG处理的ARPE-19细胞表型的抑制。结论:lncRNA VIM-AS1可通过调控miR-497-5p/FBXW7轴促进HG处理的ARPE-19细胞增殖和迁移,同时抑制细胞凋亡,提示lncRNA VIM-AS1作为治疗靶点潜力巨大。

miR-497阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制SGC-7901人胃癌失巢凋亡抵抗细胞的生长和转移

目的 探讨微小RNA 497(miR-497)在胃癌转移中的作用及机制。方法 SGC-7901胃癌亲本细胞培养在超低黏附环境中,重新贴壁后建立SGC-7901细胞失巢凋亡抵抗模型,集落形成实验、流式细胞术、 TranswellTM实验和划痕愈合实验检测其细胞生物学行为与亲本细胞的差异、荧光定量PCR检测miR-497表达、 Western blot法检测无翅基因/β联蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路关键蛋白以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白如波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)等表达的变化;亲本细胞和凋亡抵抗SGC-7901细胞转染miR-497抑制物(miR-497 inhibitor)或miR-497模拟物(miR-497 mimic), CCK-8法检测其增殖活性、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力、 TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移能力、 Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。通过在失巢凋亡抵抗SGC-7901细胞中转染miR-497 mimic,在裸鼠皮下接种,测量并记录肿瘤组织的体积及质量的变化,Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。结果 与亲本细胞相比,SGC-7901胃癌失巢凋亡抵抗细胞增殖速度更快、集落形成更强,凋亡率更低,侵袭和迁移能力更强,miR-497表达明显下降。下调miR-497后细胞增殖能力显著增强,侵袭、迁移能力明显增强,Wnt1、 β-catenin蛋白表达量显著增加,vimentin表达显著增加,E-cadherin表达下降,而上调miR-497表达结果相反。miR-497过表达组的肿瘤组织生长速度、肿瘤的体积与质量明显低于对照组;Wnt1、 β-catenin、 vimentin蛋白表达量显著下降,而E-cadherin表达明显上调。结论miR-497在SGC-7901失巢凋亡抵抗细胞中低表达,miR-497通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的活化和EMT,抑制胃癌细胞的生长和转移。

妊娠期糖尿病孕妇血清miR-497-5p和miR-574-5p水平的表达及临床意义

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血清miR-497-5p和miR-574-5p水平的表达及临床意义。方法选取2020年1月至2022年1月于该院妇产科就诊的70例GDM患者作为GDM组,另选取同期产检的血糖正常的孕妇50例作为对照组。对比两组孕妇血清脂糖代谢指标[空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、载脂蛋白A(apoA)、载脂蛋白B(apoB)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)]水平,以及miR-497-5p和miR-574-5p相对表达水平。采用Pearson法分析血清miR-497-5p和miR-574-5p水平与临床指标的相关性,采用Logistic回归建立GDM发病的回归评估模型,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-497-5p和miR-574-5p水平对GDM的诊断价值。结果两组TC水平对比,差异无统计学意义(P>0.05);GDM组TG、LDL-C、FBG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均高于对照组(P<0.05),HDL-C低于对照组(P<0.05)。GDM组血清miR-497-5p、miR-574-5p相对表达水平均低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-497-5p、miR-574-5p水平与HDL-C呈正相关(P<0.05),与LDL-C、FBG、HbA1c、apoA、apoB、FINS及HOMA-IR均呈负相关(P<0.05)。Logistic回归模型及ROC曲线分析显示,血清miR-497-5p、miR-574-5p单独及联合应用诊断GDM的曲线下面积(AUC)分别为0.737、0.803、0.859,二者联合应用对GDM的诊断效能高于单独检测。结论GDM孕妇血清miR-497-5p、miR-497-5p相对表达水平下降,且其相对表达水平与FBG、HbA1c及HOMA-IR均呈负相关,二者联合检测对GDM有较高的诊断效能。

MicroRNA-195/497对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达的影响

目的探讨microRNA-195/497(miR-195/497)在香烟烟雾提取物(CSE)诱导的人支气管上皮细胞中影响转化生长因子-β(TGF-β)表达的作用机制。方法用3%CSE诱导BEAS-2B细胞模拟慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病机制,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-195、miR-497、SMAD7及TGF-β基因表达。双荧光素酶报告实验验证miR-195、miR-497与SMAD7的靶向关系,将miR-195mimic和miR-497 mimic转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测SMAD7的表达。将miR-195 mimic、miR-497 mimic和si-SMAD7转染至3%CSE处理的细胞中,qRT-PCR检测miR-195、miR-497、SMAD7、TGF-β的基因表达,Western blotting检测SMAD7、TGF-β的蛋白表达。结果3%CSE组miR-195、miR-497 mRNA相对表达量低于正常细胞组(P<0.05),SMAD7、TGF-βmRNA相对表达量高于正常细胞组(P<0.05)。miR-195 mimic组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-195 mimic组与mimic NC组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-497 mimic组WtSMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组与mimic NC组Mut-SMAD7mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。miR-195 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。miR-497 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组(P<0.05)。3%CSE组细胞miR-195和miR-497相对表达量较Control组下降(P<0.05),SMAD7及TGF-β蛋白相对表达量升高(P<0.05);miR-195 mimic+3%CSE组细胞miR-195相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-497相对表达量无明显差异(P>0.05);miR-497 mimic+3%CSE组细胞miR-497相对表达量较3%CSE组升高(P<0.05),SMAD7、TGF-β下降(P<0.05),而miR-195相对表达量无明显差异(P>0.05);si-SMAD7+3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较3%CSE组下降(P<0.05),而miR-195、miR-497无明显差异(P>0.05)。3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较Control组升高(P<0.05),miR-195 mimic+3%CSE组、miR-497 mimic+3%CSE组、si-SMAD7+3%CSE组较3%CSE组下降(P<0.05)。结论miR-195/497可通过调控SMAD7的表达影响CSE诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达。

has-miR-497-5p靶向CCNE1对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖的影响

目的 评价has-miR-497-5p对类风湿性关节炎滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响。方法 利用miRDB、TargetMiner、TargetScan和miRTarBase数据库预测has-miR-497-5p的作用靶基因,然后利用DAVID数据库对靶基因进行GO分析和KEGG信号通路富集,String数据库对靶基因进行互作分析;以HFLS-RA为研究对象,MTT检测has-miR-497-5p对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测has-miR-497-5p对细胞周期的影响;利用qRT-PCR检测has-miR-497-5p对HFLS-RA细胞CCNE1、CCND1、CCND2和CDK6 mRNA的影响;MTT评价has-miR-497-5p在沉默CCNE1后对细胞增殖的影响。结果 生物信息学预测has-miR-497-5p的靶基因共计125个,生物学过程主要集中于胸腺发育、蛋白质磷酸化、细胞凋亡和细胞周期等方面;信号途径主要富集于癌症相关的microRNA、PI3K-Akt途径和细胞周期等;细胞周期中的富集蛋白互作分析显示,CCNE1、CCND1、CCND2和CDK6之间存在相互作用;has-miR-497-5p过表达可以显著抑制细胞增殖(P<0.05),明显抑制细胞周期的S期(P<0.05);qRT-PCR结果显示,has-miR-497-5p模拟剂可以显著降低CCNE1、CCND1、CCND2和CDK6 mRNA表达(P<0.05);沉默CCNE1显著抑制细胞增殖(P<0.05)。结论 has-miR-497-5p可能通过靶向CCNE1抑制HFLS-RA增殖。

星形细胞瘤患者癌组织和血清miR-497表达下降及其临床意义

目的检测星形细胞瘤患者癌组织和血清中miR-497的表达水平及治疗前后血清miR-497的变化,探讨其作为分子标志物的可能性。方法采集8例星形细胞瘤患者癌组织、4例癌旁组织、3例正常脑组织以及133例治疗前患者的(WHOⅡ级55例、Ⅲ级45例和IV级33例)血清样本,用实时荧光定量RT-PCR法检测miR-497含量,并以80例年龄、性别匹配的健康人作对照。对其中14例患者进行术前、术后血清miR-497含量的比较,ROC曲线分析miR-497对星形细胞瘤的诊断价值。结果miR-497在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织和正常脑组织(F=13.78,P<0.05),在患者血清中的浓度也显著降低[(112.69±54.58)fmol/L vs(254.32±142.12)fmol/L,t=10.31,P<0.01]。用于星形细胞瘤诊断的miR-497 ROC曲线下面积(AUCROC)为0.894(95%CI,0.853～0.935),敏感性为82%,特异性为90%。血清miR-497在患者术后明显上升[术后(165.69±56.87)fmol/L vs术前(93.77±38.50)fmol/L,t=3.92,P<0.01]。结论星形细胞瘤患者癌组织和血清miR-497低表达,miR-497有望作为该病诊断及预后评价的检测指标。

miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖

目的研究miR-497在宫颈癌HeLa细胞中对细胞周期蛋白E1(CCNE1)的靶向作用及其对HeLa细胞增殖的影响。方法构建pre-miR-497、CCNE1野生型(WT-CCNE1)和突变型(MT-CCNE1)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证pre-miR-497载体的有效性,采用MTT法检测miR-497对HeLa细胞增殖的影响,采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR和Western blot法验证miR-497对CCNE1的靶向关系。结果测序结果提示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-497、pmirGLO-CCNE1野生型和突变型表达载体构建成功,qRT-PCR证明转染pre-miR-497的HeLa细胞miR-497的表达显著升高。MTT法结果显示转染pre-miR-497的HeLa细胞增殖活性显著低于阴性对照miR组(P<0.05)。此外,双萤光素酶法检测共转染pre-miR-497和WT-CCNE1的HeLa细胞,其萤光素酶活性显著低于对照组(P<0.01),qRT-PCR及Western blot法也分别证实转染pre-miR-497的HeLa细胞其CCNE1的mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.05)。结论 miR-497能够通过靶向CCNE1调控宫颈癌HeLa细胞的增殖活性。

miR-497靶向Bcl-2调控肝癌细胞增殖及凋亡的研究

目的:探讨mi R-497靶向Bcl-2对肝癌细胞增殖、凋亡的调控作用。方法:选取肝癌组织及相应远癌正常组织,分别采用逆转录PCR(reverse transcriptton PCR,RT-PCR)、Western blot检测组织中mi R-497及Bcl-2蛋白表达;选取肝癌细胞系Hep G2,分别转染mi R-497 mimics及对照寡核苷酸,采用RT-PCR、Western blot检测组织中mi R-497及Bcl-2蛋白表达,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡,采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光酶活性。结果:1)与远癌正常组织相比,肝癌组织中mi R-497表达明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显增高(P<0.05);2)与转染对照寡核苷酸相比,转染mi R-497可使Hep G2中mi R-497表达增高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);3)与转染对照寡核苷酸相比,共转染mi R-497与Bcl-2-WT可使Hep G2荧光素酶活性降低(P<0.05);4)转染mi R-497后,Hep G2增殖活性较转染对照寡核苷酸明显降低(P<0.05),而转染mi R-497+Bcl-2后,Hep G2增殖活性较单纯转染mi R-497明显提高(P<0.05);5)转染mi R-497后,Hep G2总凋亡比例较转染对照寡核苷酸明显增高(P<0.05);而转染mi R-497+Bcl-2后,Hep G2总凋亡比例较单纯转染mi R-497明显降低(P<0.05)。结论:mi R-497可通过靶向Bcl-2抑制肝癌细胞增殖同时促进细胞凋亡。

急性脑梗死患者外周血miR-497表达与炎症氧化应激的关系及对预后的预测价值

目的急性脑梗死(ACI)患者外周血miR-497表达与炎症氧化应激的关系及对预后的预测价值。方法选择2017年5月至2019年9月期间在本院接受静脉溶栓治疗的80例ACI患者作为ACI组,同期体检的60例健康体检者作为对照组,检测并比较两组外周血miR-497的表达水平,血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)的含量及氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。根据90 d时的改良Rankin量表(mRS)评分评估预后。结果 ACI组患者外周血中miR-497的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ACI组中miR-497表达≥中位数患者的血清TNF-α、IL-6、IL-17、MDA含量高于miR-497表达<中位数患者,SOD、GSH-Px含量低于miR-497表达<中位数患者;ACI组中预后不良患者外周血中miR-497的表达水平高于预后良好患者,差异均有统计学意义(P<0.05);ROC曲线下面积为0.841 1(95%CI:0.750 9~0.931 3,P<0.05),外周血miR-497表达水平对ACI患者的预后具有预测价值。结论 ACI患者外周血miR-497表达增加与炎症氧化应激过度激活及预后不良有关。

术后结合替莫唑胺对神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的影响

目的:分析神经胶质瘤患者术后结合替莫唑胺对血清mi R-181b及mi R-497表达的影响。方法:将收治的76例神经胶质瘤术后患者随机分为A、B两组。其中A组(38例)采用司莫司汀方法治疗,B组(38例)采用司莫司汀联合替莫唑胺的方法治疗。观察比较两组患者的临床疗效,术后1、2、3年生存率,Karnofsky评分。同时收集患者治疗前、治疗后的血清样本,以检测mi R-181b及mi R-497表达的变化。结果:B组患者的客观有效率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组中位生存期以及术后1、2、3年生存率明显高于A组(P<0.05);B组术后的Karnofsky评分显著高于A组(P<0.05)。术后血清mi R-181b浓度明显提高[术后(162.34±51.79)fmol/L vs.术前(91.37±40.41)fmol/L,P<0.05];术后血清mi R-497明显提高[术后(166.23±53.68)fmol/L vs.术前(88.36±36.72)fmol/L,P<0.05]。结论:术后结合替莫唑胺能够提高神经胶质瘤患者血清mi R-181b及mi R-497的表达,延长患者生存期。

恩格列净通过miR-497-3p/GPLD1通路调控高糖诱人肾小球微血管内皮细胞增殖凋亡的机制研究

目的:探究恩格列净(EMPA)调控人肾小球微血管内皮细胞(HRGEC)增殖、凋亡的作用机制。方法:30mmoL/L的葡萄糖诱导HRGEC建立高糖环境下的肾损伤细胞模型。恩格列净(250、500、1000nmoL/L)处理受损细胞。脂质体法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-497-3p组(转染miR-497-3p)、si-NC组(转染si-NC)、si-鱼糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D1(GPLD1)组(转染si-GPLD1)、EMPA+miR-497-3p+pcDNA组(共转染miR-497-3p和pcDNA)、EMPA+miR-497-3p+pcDNA-GPLD1组(共转染miR-497-3p和pcDNA-GPLD1)转染HRGEC细胞,并用30mmoL/L的葡萄糖或500nmoL/L恩格列净处理。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术检测细胞增殖率、凋亡率。蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞GPLD1、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-9蛋白表达。双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation assay,RIP)实验检测细胞中miR-497-3p与GPLD1的结合力。结果:与NG组相比,HG组HRGEC细胞增殖率显著降低,凋亡率显著升高,miR-497-3p表达显著降低(P<0.05);与HG组相比,恩格列净(250、500、1000nmoL/L)组细胞增殖率显著升高,凋亡率显著降低,miR-497-3p表达显著升高(P<0.05),选出恩格列净的最适浓度500nmoL/L。miR-497-3p显著抑制野生型GPLD1细胞的荧光活性,促进Ago2-GPLD1的表达,负向调控GPLD1的蛋白表达。过表达miR-497-3p、敲减GPLD1具有相似的促进高糖诱导HRGEC细胞增殖,抑制凋亡的作用,并上调PCNA蛋白,下调P21、Caspase-3、Caspase-9蛋白。过表达GPLD1显著削弱恩格列净、过表达miR-497-3p对高糖诱导HRGEC细胞的增殖、凋亡调控作用。结论:恩格列净促进高糖诱导HRGEC细胞增殖,抑制凋亡,其机制与调控miR-497-3p/GPLD1信号通路相关。

miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌患者中的表达差异及机制研究

目的:探讨微小核糖核酸miR-497和miR-34a在铂敏感和铂耐药卵巢上皮癌(EOC)患者中表达的差异及机制。方法:选取2008年1月-2012年1月于我院妇产科行卵巢癌分期手术或肿瘤细胞减灭术的EOC患者72例,术后均行以铂类药物为基础的规范化疗,并进行随访(时间为2008年7月-2016年7月)。根据患者对铂类药物的敏感性将其分为铂敏感组(42例)和铂耐药组(30例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测两组患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平,并考察其与患者总生存时间的相关性;采用巢式降落式甲基化特异性聚合酶链反应法检测患者miR-497和miR-34a启动子区DNA甲基化水平,采用蛋白印迹法考察组蛋白H3第9位赖氨酸残基二甲基化(H3K9me2)水平,采用染色质免疫共沉淀法检测miR-497和miR-34a启动子区H3K9me2水平。结果:铂敏感组患者miR-497和miR-34a的表达水平均显著高于铂耐药组,差异均有统计学意义(P<0.05);72例患者的总生存期为(45.7±17.5)个月,与其miR-497和miR-34a表达水平呈正相关(r2分别为0.2714、0.3782,P<0.01)。铂耐药组患者miR-497和miR34a启动子区DNA甲基化水平均显著高于铂敏感组,且其启动子区H3K9me2水平也显著高于铂敏感组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而铂耐药组患者H3K9me2水平虽略高于铂敏感组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EOC患者肿瘤组织中miR-497和miR-34a的表达水平与铂化疗的敏感性及患者的生存时间有关,启动子区DNA甲基化和组蛋白甲基化可能是其表达变化的机制之一。

miR-497-5p靶向WWP1调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA-497-5p(miR-497-5p)是否通过靶向含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡。方法实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)测定瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFB)和正常皮肤成纤维细胞(NFB)中miR-497-5p、WWP1 mRNA和蛋白表达。TargetScan预测miR-497-5p和WWP1的靶向关系,双荧光素酶报告和Western blot进一步验证。构建miR-497-5p过表达或抑制WWP1表达的细胞,Western blot检测WWP1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。共转染miR-497-5p和pcDNA-WWP1,观察WWP1过表达对miR-497-5p过表达诱导的KFB细胞增殖和凋亡的影响。结果与NFB相比,KFB内miR-497-5p表达量明显下调(P<0.05),WWP1mRNA和蛋白表达量显著上调(P<0.05)。miR-497-5p靶向调控WWP1的表达。miR-497-5p过表达明显降低KFB 48h、72h的细胞活性、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达,提高细胞凋亡率、p21、Bax蛋白水平(P<0.05),与抑制WWP1表达结果相同。WWP1过表达逆转了miR-497-5p过表达对KFB增殖、WWP1、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,以及对细胞凋亡、p21、Bax蛋白表达的促进作用。结论过表达miR-497-5p通过靶向调控WWP1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,并诱导其凋亡。

miR-145和miR-497在宫颈癌SiHa细胞中的表达及对增殖的影响

目的研究miR-145和miR-497在宫颈癌Si Ha细胞的表达及对增殖的影响。方法以宫颈癌Si Ha细胞为研究对象,转染pre-miR-145和pre-miR-497,采用实时荧光定量PCR和MTT检测miR-145和miR-497在宫颈癌Si Ha细胞中的表达及对增殖的影响。结果采用实时荧光定量PCR检测miR-145和miR-497在宫颈癌Si Ha细胞中的表达,结果显示,实验组中miR-145和miR-497的表达量显著高于blank组(P=0.001),MTT结果显示转染miR-145和miR-497的Si Ha细胞其增殖活性明显受到抑制(P<0.05)。结论 miR-145和miR-497能够显著抑制宫颈癌Si Ha细胞的增殖。

沉默circZFR通过调控miR-497-5p表达抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:研究环状RNA(circular RNAs,circRNAs)circZFR是否通过调控微小RNA(microRNA,miRNA/miR)-497-5p的表达影响脊索瘤细胞增殖、迁移及侵袭。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测脊索瘤组织中circZFR和miR-497-5p的表达。在脊索瘤U-CH1细胞中转染si-circZFR或miR-497-5p。噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotease-9,MMP-9)蛋白表达,StarBase预测工具和双荧光素酶报告实验分析circZFR与miR-497-5p的靶向结合。si-circZFR和anti-miR-497-5p共转染,观察下调miR-497-5p表达对沉默circZFR表达诱导的U-CH1细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结果:与髓核组织比较,脊索瘤组织中的circZFR表达量明显增加,miR-497-5p表达量显著减少(P<0.05)。沉默circZFR表达或过表达miR-497-5p明显降低U-CH1细胞48 h、72 h的细胞活性、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量,显著提高p21蛋白水平(P<0.05)。circZFR靶向调控miR-497-5p的表达。下调miR-497-5p表达逆转了沉默circZFR表达对脊索瘤U-CH1细胞增殖、迁移、侵袭、CyclinD1、MMP-2及MMP-9蛋白表达的抑制作用,和对p21蛋白表达的促进作用。结论:沉默circZFR表达可以抑制脊索瘤细胞的增殖、迁移及侵袭,其作用机制与靶向调控miR-497-5p的表达有关。

吉西他滨通过上调miR-497抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移

目的研究mi R-497在抑制宫颈癌侵袭迁移中的作用。方法将不同浓度梯度的吉西他滨作用于C33a细胞,MTT法检测细胞存活率计算IC50;给予宫颈癌细胞半数致死剂量的吉西他滨,Transwell及Wound Healing Assay检测吉西他滨对宫颈癌细胞侵袭迁移能力的影响。分别给予C33a细胞3.15mg/L及6.3mg/L的吉西他滨后,q RT-PCR检测mi R-497变化及Western blot检测已知mi R-497下游蛋白的变化。将mi R-497 mimic转入C33a细胞后,Transwell及Wound Healing Assay检测mi R-497对宫颈癌细胞侵袭迁移能力的影响。在给予C33a细胞吉西他滨的同时加入anti-mi R-497,即在mi R-497被抑制的情况下Western blot检测mi R-497下游与侵袭迁移相关的靶蛋白的变化,Transwell及Wound Healing Assay检测宫颈癌细胞侵袭迁移能力。结果吉西他滨可以有效地抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移;吉西他滨促进宫颈癌细胞中mi R-497的表达;mi R-497可以抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移;在mi R-49被阻遏的情况下,吉西他滨不能有效地抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移。结论吉西他滨通过上调mi R-497的表达抑制宫颈癌细胞的侵袭迁移。