LncRNA XIST靶向miR-511-3p调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨LncRNA XIST通过靶向miR-511-3p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养食管癌细胞Eca109,将细胞分组,分别为:si-NC组(转染si-NC)、si-XIST组(转染si-NC)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-511-3p组(转染miR-511-3p)、si-XIST+anti-miR-NC组(共转染si-XIST和anti-miR-NC)和si-XIST+anti-miR-511-3p组(共转染si-XIST和anti-miR-511-3p)。qRT-PCR检测XIST和miR-511-3p的表达;MTT检测细胞的增殖水平;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测PCNA和MPP-2的蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证XIST和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常食管黏膜上皮细胞相比,食管癌细胞中XIST表达明显增加,miR-511-3p表达明显降低(P<0.05);干扰XIST或过表达miR-511-3p可以明显抑制食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭。XIST可以靶向调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以逆转干扰XIST对食管癌细胞Eca109增殖、迁移和侵袭的作用。结论XIST可通过上调miR-511-3p抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,旨在为食管癌提供新的作用靶点。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

miR-511-5p/FEM1C轴通过激活自噬对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-511-5p(miR-511-5p)对乳腺癌细胞的影响及其潜在调节机制。方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测乳腺癌组织和细胞系中miR-511-5p的表达水平。利用miR-511-5p mimics、miR-511-5p inhibitor和/或fem-1同系物C(FEM1C)过表达载体,以及相对应的空白对照载体转染乳腺癌细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖水平,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测自噬相关蛋白(LC3Ⅱ、Beclin1和p62)和PI3K/AKT通路关键蛋白的表达。TargetScan数据库预测miR-511-5p与FEM1C的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因分析进行验证。此外,通过给裸鼠皮下注射mimics NC和miR-511-5p mimics转染的乳腺癌细胞,建立异种移植瘤模型。结果 乳腺癌组织和细胞中miR-511-5p表达均显著下调(P<0.05)。与其他细胞系相比,MDA-MB-231细胞系中miR-511-5p的表达最低。与mimics NC组相比,miR-511-5p mimics组细胞中自噬作用增强,细胞增殖和侵袭能力显著下调,而凋亡水平显著上调(P均<0.05)。与miR-511-5p mimics组相比,miR-511-5p mimics+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组中自噬作用减弱,细胞增殖和侵袭能力显著上调,而凋亡水平显著下调(P均<0.05)。FEM1C作为miR-511-5p的靶基因,且两者的表达呈负相关。在功能上,miR-511-5p通过靶向FEM1C显著抑制了p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的比率,增加了自噬水平(P<0.05);而过表达FEM1C显著促进了细胞的增殖和侵袭能力,抑制了细胞凋亡(P<0.05),逆转了miR-511-5p mimics对MDA-MB-231细胞的影响。裸鼠体内成瘤实验结果显示,miR-511-5p过表达可抑制肿瘤生长。结论 miR-511-5p通过下调FEM1C的表达来诱导自噬和阻断PI3K/AKT信号通路,进而抑制细胞增殖和侵袭并促进凋亡,为乳腺癌的治疗提供了新的靶点。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

miR-511-3p调节小儿咳嗽变异性哮喘患者巨噬细胞极化和过敏性炎症的机制

目的探究miR-511-3p调节小儿咳嗽变异性哮喘(CVA)患者巨噬细胞极化和过敏性和M2细胞内TNF-α和TGF-β的分泌量;细胞转染法构建miR-511-3p表达细胞,RT-PCR和Western blot检测M1巨噬细胞相关标志物蛋白表达;用氢氧化铝和卵蛋白致敏并用的卵蛋白激活法构建CVA小鼠模型,用流式分选法分离小鼠巨噬细胞,用ELSA法检测灌洗液中巨噬细胞极化相关标志因子TNF-α和TGF-β及IRF3表达分泌量;用RT-PCR法和Western Blot法检测CVA患者血浆样本中miR-511-3p的转录水平。结果通过miR-511-3p转染发现,miR-511-3p过表达时,M1型巨噬细胞中TNF-α表达减少,CCL17表达增多(P <0.05);CVA小鼠模型中TNF-α和IRF3磷酸化水平减少,TGF-β增多(P <0.05);同时与非哮喘患者相比,CVA患者miR-511-3p表达减少(P <0.05)。结论 miR-511-3p可调节小儿CVA患者机体IRF3磷酸化水平,促使巨噬细胞向M2方向极化,抑制体内过敏性炎症。

LncRNA OIP5-AS1靶向miR-511-3p抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究LncRNA OIP5-AS1对肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及作用机制。方法采用qRT-PCR法检测OIP5-AS1和miR-511-3p的表达量;采用MTT法检测细胞增殖;采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法检测CyclinD1、MMP-2蛋白表达量;双荧光素酶报告实验检测OIP5-AS1和miR-511-3p的靶向关系。结果与正常细胞肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞A549、NCI-H23和NCI-H2170中OIP5-AS1表达显著增加,miR-511-3表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);敲低OIP5-AS1或者过表达miR-511-3p显著抑制了肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭;OIP5-AS1可以靶向负调控miR-511-3p的表达,抑制miR-511-3p可以部分回复敲低OIP5-AS1对肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 LncRNA OIP5-AS1通过靶向调控miR-511-3p的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

基因间长链非编码RNA00963通过靶向miRNA-511-3p调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨基因间长链非编码RNA00963(LINC00963)对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法常规培养正常胰腺上皮细胞h TERT-HPNE和胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、Pa Tu8988,将Capan-1细胞分为NC组、si-NC组、si-LINC00963组、pc DNA-NC组、pc DNA-LINC00963组、mi RNA-NC组、mi RNA-511-3p组、anti-mi RNA-NC组、anti-mi RNA-511-3p组、si-LINC00963+anti-mi RNA-NC组、si-LINC00963+anti-mi RNA-511-3p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测LINC00963和mi RNA-511-3p的表达水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶报告实验检测LINC00963和mi RNA-511-3p的靶向调控关系。结果与正常胰腺上皮细胞h TERT-HPNE比较,胰腺癌细胞系Capan-1、SW1990、PaTu8988中LINC00963相对表达量均升高,mi RNA-511-3p相对表达量均降低(P﹤0.05)。与si-NC组比较,siLINC00963组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均降低,细胞活性降低,细胞迁移和侵袭数目均减少(P﹤0.05);与mi RNA-NC组比较,mi RNA-511-3p组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均明显降低,细胞活性明显降低,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P﹤0.01)。mi RNA-511-3p与LINC00963野生型报告质粒共转染后Capan-1细胞的荧光素酶活性明显低于mi RNA-NC与LINC00963野生型报告质粒共转染后的细胞(P﹤0.01)。与si-LINC00963+anti-mi RNA-NC组比较,si-LINC00963+anti-mi RNA-511-3p组中cyclin D1、MMP2、MMP9相对表达量均升高,细胞活性升高,细胞迁移和侵袭数目均增加(P﹤0.05)。结论低表达LINC00963可通过靶向上调miRNA-511-3p的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

黄芩苷通过调节miR⁃223⁃3p/NLRP3通路对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用

目的研究黄芩苷调节miR⁃223⁃3p/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用。方法构建脓毒症ALI大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、地塞米松组、低剂量黄芩苷组、中剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清TNF⁃α(肿瘤坏死因子⁃α)、IL⁃1β(白细胞介素1β)、IL⁃10水平;苏木素⁃伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织含水量及肺泡液体清除率(AFC);实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定各组大鼠肺组织miR⁃223⁃3p水平;蛋白印迹法测定各组大鼠肺组织NLRP3水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平升高(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平降低(P<0.05);同时模型组大鼠肺泡完整性破坏,肺泡萎陷,肺间质明显水肿,大量炎症细胞浸润,肺组织病理得分升高(P<0.05)。经黄芩苷治疗后,随着给药剂量增高,血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平降低(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平升高(P<0.05),呈剂量依赖性;同时大鼠肺泡结构恢复,肺间质水肿缓解,炎症细胞浸润减少,肺组织病理评分降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论黄芩苷可通过下调促炎因子IL⁃1β、TNF⁃α水平,上调抑炎因子IL⁃10水平以缓解脓毒症ALI大鼠肺损伤,可能与miR⁃223⁃3p/NLRP3通路有关。

miR-203a-3P通过靶向PRMT5抑制胃癌细胞增殖

目的:探讨miR-203a-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响。方法:收集胃癌组织标本44例,采用Real-time PCR方法检测胃癌组织标本中miR-203a-3p的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系;生物信息学预测miR-203a-3p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证;免疫组化检测胃癌组织标本中PRMT5的表达情况,分析其表达水平与miR-203a-3p表达的相关性;利用脂质体介导的瞬时转染方法过表达miR-203a-3p或同时过表达miR-203a-3p和PRMT5,并通过CCK-8实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:胃癌组织中miR-203a-3p的表达水平与正常组织对照相比显著降低(P<0.01),并且miR-203a-3p的表达水平与肿瘤细胞的分化程度显著相关;荧光素酶报告基因实验证实miR-203a-3p可以直接结合在PRMT5 3'-UTR上,即PRMT5是miR-203a-3p的直接靶基因;在胃癌组织标本中,PRMT5表达水平显著高于正常组织对照(P<0.01),并且其表达水平与miR-203a-3p表达呈显著负相关(r=-0.4124,P<0.01);过表达miR-203a-3p后,胃癌BGC823细胞的增殖能力显著低于miR-NC对照组(P<0.01),并且,"挽救"实验表明在过表达miR-203a-3p的细胞中同时过表达PRMT5后会部分恢复miR-203a-3p对细胞增殖的抑制(P<0.01)。结论:miR-203a-3p可通过下调靶基因PRMT5的表达,进而抑制胃癌细胞增殖。因此,miR-203a-3p可作为胃癌疾病临床治疗的潜在靶点。

miR23b-3p和miRl25b-5p通过Etsl下调载脂蛋白（a）水平

目的探讨miR23b-3p和miRl25b-5p对HepG2细胞中载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响及其作用机制。方法以HepG2细胞为研究对象，EtslsiRNA通过Lipo2000转染HepG2细胞，Westernblot检测细胞内Etsl及Apo（a）蛋白水平；通过Lipo2000分别将miR23b一3pmimic和miRl25b-5pmimic转染HepG2细胞，

miR-129-1-3p在浆液性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:检测miR-129-1-3p在浆液性卵巢癌组织与正常输卵管伞端组织中的表达,并分析miR-129-1-3p与卵巢浆液性上皮性癌临床病理特征之间的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)定量分析100例浆液性卵巢上皮性癌组织、50例正常输卵管伞端组织中miR-129-1-3p的表达,并将检测结果与临床和病理特征资料进行统计学分析。结果:浆液性卵巢癌组织中的miR-129-1-3p表达量显著低于正常输卵管伞端组织(P<0.01)。miR-129-1-3p的表达与FIGO分期、患者年龄、病理分化程度、淋巴结转移、血清CA125值无统计学差异(P>0.05)。结论:miR-129-1-3p可能作为抑癌因子参与了卵巢上皮性癌的发生发展,对卵巢上皮性癌具有潜在的辅助诊断意义,为寻找卵巢上皮性癌的生物靶向治疗提供理论依据。

LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系

目的探讨血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系。方法增殖期面部血管瘤患儿93例,均接受普萘洛尔治疗,随访治疗后血管瘤复发情况,并将患儿分为复发组(23例)和无复发组(70例)。治疗前、后采集静脉血,qRT⁃PCR检测血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达,分析血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的关系。结果无复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达较治疗前增高(P<0.05),复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达低于无复发组(P<0.05)。治疗后瘤体分级Ⅲ~Ⅳ级患儿血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达高于Ⅰ~Ⅱ级患儿(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示miR⁃199a⁃5p低表达、miR⁃378a⁃3p低表达、治疗后瘤体分级Ⅰ~Ⅱ级是增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的危险因素(P<0.05)。结论血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p低表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后血管瘤复发有关。

血清miR127-3P与原发性肝癌的相关性研究

目的探讨原发性肝癌患者血清miR127-3P表达水平。方法回顾性纳入2016年1月1日—2018年6月1日在我院就诊的95例原发性肝癌患者、35例乙肝肝硬化患者、30例慢性乙型肝炎患者及30例健康体检者作为研究对象。于清晨空腹抽取外周静脉血3 mL并采用RT-PCR法检测比较所有研究对象血清中miR127-3P的相对表达量的差异,采用Pearson相关分析原发性肝癌患者血清AFP水平与miR127-3P相对表达量的相关性,同时采用logistic回归分析原发性肝癌患者血清miR127-3P相对表达量的影响因素。利用受试者操作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析miR127-3P的相对表达量在鉴别原发性肝癌与乙肝肝硬化、慢性乙型肝炎及健康体检者的临床效能。结果原发性肝癌患者、乙肝肝硬化患者、慢性乙型肝炎患者及健康体检者血清miR127-3P相对表达量分别为0.60(0.50~0.63),0.46(0.41~0.51)、0.29(0.2~0.46)、0.25(0.21~0.31),两两比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示原发性肝癌患者血清AFP与miR127-3P相对表达量呈显著正相关性(r=0.868,P=0.000),且原发性肝癌患者的分化程度越低(Or=3.236)、TNM分期越高(Or=4.369)、存在远处转移(Or=5.687)是血清miR127-3P的相对表达量升高的危险因素。ROC曲线结果显示,miR127-3P的相对表达量鉴别原发性肝癌与肝硬化、慢性乙型肝炎及健康体检者的曲线下面积分别为0.829(95%CI:0.755~0.903)、0.870(95%CI:0.783~0.957)和0.945(95%CI:0.891~0.999),当截断值分别为0.535、0.445和0.410时,此时敏感度和特异度分别为68.4%和94.3%、91.6%和73.3%、91.6%和90%。结论原发性肝癌患者血清miR127-3P相对表达量显著升高,有可能作为原发性肝癌的一个辅助诊断指标。

Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织和细胞中的表达及相互调控关系

目的:探讨Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织及细胞中的表达水平及相互调控关系。方法:运用RT-PCR检测Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织、癌旁组织及MCF-7、MCF-10a细胞中的相对表达水平。运用统计学方法探讨两者的相关性。运用Targetscan软件分析Bmi-1与miR-221-3P存在的结合位点,构建双荧光报告基因载体验证Bmi-1与miR-221-3P的相互结合作用。Western-blotting检测乳腺癌组织及细胞中Bmi-1蛋白的相对表达水平。结果:Bmi-1在乳腺癌组织及MCF-7细胞中呈高表达,而miR-221-3P的表达水平明显下调,两者呈负相关性,相关系数为r=-0.826。在转染克隆有Bmi-1基因3'UTR质粒的实验中,miR-221-3P组与空白组、miR-221-3P抑制剂组、NC组、NC抑制剂相比较,P<0.05,差异极显著。降低Bmi-1的表达水平之后,miR-221-3P的表达水平显著上调。结论:Bmi-1在乳腺癌组织和细胞中呈高表达,miR-221-3P在乳腺癌组织和细胞中呈低表达,miR-221-3P负性调控Bmi-1的表达,为阐明乳腺癌的发病机制指明方向。

过表达miRNA-291b-3p诱导H9C2细胞胰岛素抵抗

目的研究过表达miRNA-291b-3p对诱导H9C2细胞胰岛素抵抗的影响。方法 1用10ng/ml TNF-α处理心肌细胞系H9C2细胞24h,通过Real time PCR检测miR-291b-3p表达水平,Western blot分析AKT/GSK信号通路活性,用蒽酮法检测细胞糖原水平;2构建miR-291b-3p mimics腺病毒载体,感染H9C2细胞48h,分析miR-291b-3p水平、AKT/GSK信号通路活性和糖原水平的变化。结果 1TNF-α处理H9C2细胞24h,miR-291b-3p的表达水平明显升高,同时AKT/GSK信号通路活性受到抑制,心肌细胞糖原水平升高;2miR-291b-3p mimics腺病毒感染H9C2细胞48h,miR-291表达水平升高,AKT/GSK信号通路活性降低,心肌细胞糖原水平升高。结论 H9C2细胞中TNF-α或过表达miR-291b-3p可抑制AKT/GSK信号通路活性,出现胰岛素抵抗。

延龄草苷通过上调miR⁃1247⁃3p表达减轻高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤

目的探讨延龄草苷对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRVEC)损伤的影响及作用机制。方法5、10、20μmol/L的延龄草苷作用于30 mmol/L葡萄糖诱导的HRVEC细胞,或30 mmol/L葡萄糖诱导转染miR⁃1247⁃3p模拟物的HRVEC细胞,或20μmol/L的延龄草苷作用于30 mmol/L葡萄糖诱导的转染miR⁃1247⁃3p抑制剂的HRVEC细胞,DCFH⁃DA法检测细胞中ROS水平,酶联免疫吸附法检测MDA和SOD水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl⁃2和Bax蛋白表达,RT⁃qPCR法检测miR⁃1247⁃3p表达。结果延龄草苷降低了高糖诱导的HRVEC中ROS和MDA水平、凋亡率及Bax蛋白表达(P<0.05),提高了SOD活性、Bcl⁃2蛋白表达及miR⁃1247⁃3p表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。过表达miR⁃1247⁃3p降低了高糖诱导的HRVEC中ROS和MDA水平、凋亡率和Bax蛋白表达(P<0.05),提高了SOD活性和Bcl⁃2蛋白表达(P<0.05)。抑制miR⁃1247⁃3p逆转延龄草苷对高糖诱导的HRVEC细胞氧化应激和凋亡的影响(P<0.05)。结论延龄草苷可能通过上调miR⁃1247⁃3p表达抑制高糖诱导的HRVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。

重度子痫前期患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体的表达意义

目的探究重度子痫前期(PE)患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p及杀伤细胞抑制性受体(KIR)表达水平及临床意义。方法回顾性分析2019年3月—2022年8月于合肥市第一人民医院南区就诊143例PE患者临床资料。根据PE严重程度将患者分为重度PE组(n=85)和轻度PE组(n=58),另选取同期正常妊娠孕妇65例为对照组。比较3组及PE患者中不同妊娠结局患者的外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平;受试者工作特征曲线(ROC)评估miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR对重度PE的诊断效能;Logistic回归分析miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者妊娠结局的关系。结果与对照组比较,轻度PE组、重度PE组外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平升高,且重度PE组高于轻度PE组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR诊断重度PE的AUC值分别为0.836、0.835和0.879(P<0.05),最佳阈值分别为1.43、1.70和52.13μg/L。各组不良妊娠结局发生率比较差异有统计学意义(P<0.05),且重度PE组最高,轻度PE组高于对照组(P<0.05)。轻度及重度PE患者中,结局不良患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平均高于结局良好者(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,重度PE、miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR与PE患者不良妊娠结局呈正相关(P<0.05)。结论PE患者外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR表达水平偏高,并与病情严重程度相关,可能会增加PE患者不良妊娠结局风险。检测外周血miR⁃221、miR⁃651⁃3p、KIR水平或可为临床重度PE的诊断提供参考。