miR⁃744⁃5p和miR⁃543在HIV相关神经认知障碍患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的探讨HIV相关神经认知障碍(HAND)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中miR⁃744⁃5p和miR⁃543表达水平及其对HAND诊断的临床价值。方法选取HIV⁃1感染患者76例,分为HAND组(45例)和对照组(31例)。采用qRT⁃PCR法检测患者外周血PBMCs中miR⁃744⁃5p和miR⁃543表达水平;ELISA法检测血清IL⁃6、IL⁃10、IL⁃16、IL⁃18和TNF⁃α水平;全自动生化分析仪检测血清HDL、TG、LDL和TC含量。统计学方法分析HIV⁃1感染者发生HAND的危险因素以及miR⁃744⁃5p和miR⁃543表达水平对HAND的临床诊断价值。结果与对照组比较,HAND组患者外周血PBMCs中miR⁃744⁃5p表达水平、IL⁃10和IL⁃16水平升高,miR⁃543表达水平和HDL水平降低,其它炎症及脂代谢指标无显著性变化;统计学分析表明,miR⁃744⁃5p高表达以及miR⁃543低表达均是HIV⁃1感染者发生HAND的独立危险因素,而miR⁃744⁃5p和miR⁃543均对HAND有良好的临床诊断价值,且两者联合诊断效果更佳。结论miR⁃744⁃5p和miR⁃543对预测HAND有良好的临床诊断价值,这可能与慢性炎症以及脂代谢过程有关。

LncRNA XIST靶向miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用机制研究

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)XIST通过miR-543对胶质瘤细胞增殖凋亡的作用及机制。方法RT-PCR检测胶质瘤细胞株U251、T98G、U87-MG、A172、SW1783中XIST表达水平及si-XIST转染U251细胞后XIST与miR-543表达;在胶质瘤细胞U251中敲低XIST后,MTT法、流式细胞术检测胶质瘤细胞的增殖和凋亡情况;用双荧光素酶报告基因验证LncRNA XIST与miR-543的靶向关系。结果XIST在U251细胞中表达水平(0.79±0.08)最高,故以U251细胞进行后续实验;与XIST组[(2.35±0.17)、(0.37±0.05)]相比,si-XIST组U251细胞XIST表达水平(0.25±0.19)较低,miR-543表达水平(3.15±0.36)较高(P<0.05);与XIST组[(0.57±0.09)、(0.81±0.01)、(1.15±0.04)]相比,si-XIST组胶质瘤U251细胞A570在24、48、72 h[(0.22±0.02)、(0.31±0.03)、(0.55±0.04)]明显降低(P<0.05)。与XIST组(1.12±0.56)%相比,si-XIST组细胞凋亡率(35.64±4.31)%较高(P<0.05)。共转染XIST-wt和miR-543处理组中相对荧光素酶活性显著下降[(1.15±0.22)vs(0.22±0.03)](P<0.05)。结论干扰LncRNA XIST可通过靶向负调控miR-543表达,抑制胶质瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。

circRASA2靶向miR-543/TRAF6轴对LPS诱导的牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探讨circRASA2在牙周炎中的可能作用及其潜在调控机制。方法:采用脂多糖(LPS)诱导牙周膜细胞(PDLCs),建立牙周炎细胞模型。CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测细胞中成骨分化相关蛋白表达。分别利用数据库circinteractome和starBase预测circRASA2的靶miRNA及下游靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证目的基因之间的靶向关系。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计分析。结果:circRASA2在LPS处理的PDLCs细胞中高表达;LPS诱导PDLCs细胞增殖活力、迁移能力和成骨分化能力降低,而敲低circRASA2能促进LPS处理下PDLCs的增殖、迁移和成骨分化能力。circRASA2靶向并负调控miR-543的表达,过表达miR-543能促进LPS处理下PDLCs的增殖、迁移和成骨分化能力。TRAF6是miR-543的下游靶基因,敲低circRASA2可通过miR-543的海绵作用,下调TRAF6的表达。过表达TRAF6能逆转circRASA2敲低对PDLCs增殖、迁移和成骨分化能力的促进作用。结论:circRASA2通过miR-543/TRAF6轴在体外加速牙周炎的病理进程,通过靶向降低circRASA2的表达,可能改善牙周炎症状。

基于AMPK-ACC信号通路探究miR-543对肺癌细胞放疗敏感性的机制研究

目的:放射抗性是非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)放疗的一个重要障碍。据报道,miR-543在包括NSCLC在内的各种类型的癌症中是一种肿瘤促进因子。本研究旨在探索miR-543在调节NSCLC细胞放射敏感性中的潜在作用。方法:qRT-PCR检测miR-543的表达;CCK8、集落形成实验和流式细胞术等手段探究miR-543对NSCLC细胞生物学功能的影响。WB检测AMPK-ACC信号通路相关蛋白的表达。利用回复实验和辐射处理实验进一步验证miR-543通过AMPK-ACC信号通路对NSCLC细胞的恶性进展和放疗抗性的影响。结果:miR-53在NSCLC组织和细胞中均表达上调。沉默miR-53可以抑制NSCLC细胞的增殖能力,促进细胞周期阻滞和凋亡的发生,减弱放疗抗性。此外,miR-53参与调控AMPK-ACC信号通路,而使用compound C(AMPK-ACC信号通路的抑制剂)可以减弱miR-53沉默对NSCLC细胞行为及放疗敏感性的影响。结论:本研究的结果表明,miR-53可以通过调控AMPK-ACC信号通路增强NSCLC细胞的放疗抗性的机制,提示靶向miR-53可能是改善NSCLC的放射治疗敏感性的潜在治疗靶点。

miR-543调控ATG-7影响肝癌细胞HepG2凋亡

目的探讨microRNA-543(miR-543)通过调控其靶基因自噬相关基因7(ATG-7)对肝癌细胞凋亡的影响。方法通过荧光定量PCR及western blot实验观察多株肝癌细胞株里miR-543和ATG-7的表达情况;选取与人源胚胎肾细胞(293T)相比ATG-7高表达的HepG2肝癌细胞分组,瞬时转染miR-543摸拟物和miR-543抑制剂,在HepG2细胞中使用Western blot方法检测ATG-7蛋白表达变化,再使用qRT-PCR检测miR-543和ATG-7的mRNA水平;经过microRNA数据库预测miR-543与ATG-7的结合区域,构建ATG-73’UTR野生型及突变型的荧光素酶质粒和miR-543质粒后,通过荧光素酶报告基因实验观察野生型及突变型的荧光素酶活性变化;用流式细胞仪检测转染miR-543模拟物和ATG-7质粒的HepG2细胞凋亡情况。结果多株肝癌细胞株中ATG-7蛋白水平表达情况不一,ATG-7的mRNA和miR-543表达水平呈负相关;选用ATG-7相对高表达的HepG2细胞,过表达miR-543后发现miR-543 mRNA升高后,ATG-7蛋白和mRNA水平随之降低;降低miR-543,ATG-7蛋白和mRNA水平随之升高;通过荧光素酶报告基因证实miR-543结合ATG-7 mRNA 3’UTR区域的特定序列来降低ATG-7的mRNA水平;通过细胞凋亡实验证实miR-543通过下调ATG-7抑制肝癌细胞凋亡。结论在肝癌细胞中miR-543下调ATG-7抑制肝癌细胞的凋亡。

miR-543对胶质瘤SHG-44细胞侵袭、迁移的影响及机制研究

目的探讨miR-543在胶质瘤SHG-44细胞侵袭、迁移中的作用、分子靶点及可能的作用机制。方法采用miR-543 mimic、inhibitor及各自NC序列转染胶质瘤SHG-44细胞,获得5组细胞,分别分为Control组(无转染)、mimic NC组(转染mimic NC片段)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC片段)、miR-543 mimic组(转染miR-543 mimic)、miR-543 inhibitor组(转染miR-543 inhibitor);Real-time PCR检测各组转染后miR-543表达水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;明胶酶谱实验检测细胞上清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性;Real-time PCR及Western blot检测细胞中微小RNA 543(miR-543)潜在作用靶点局部黏着斑激酶(FAK)、上皮间质转化调控蛋白(TWIST1)、多囊肾病蛋白2(PKD2)mRNA及蛋白水平的表达;Western blot检测细胞中蛋白激酶B(AKT)通路活化情况。结果与Control组相比,mimic NC组及inhibitor NC组细胞的侵袭及迁移能力、FAK、TWIST1、PKD2、MMP-2、MMP-9表达及AKT的磷酸化水平差异均无统计学意义(P均>0.05);与mimic NC组相比,miR-543 mimic组能够有效抑制SHG-44细胞的迁移及侵袭能力,抑制MMP-2、MMP-9活性,抑制FAK、TWIST1、PKD2分子和蛋白水平的表达,抑制AKT的磷酸化(P均<0.01);与inhibitor NC组相比,miR-543 inhibitor组细胞迁移能力增强,侵袭能力升高,MMP-2、MMP-9活性增强,FAK、TWIST1、PKD2表达上调,AKT通路磷酸化水平升高(P均<0.05)。结论 miR-543可能通过对下游靶基因的调节影响AKT通路活化,进而影响胶质瘤SHG-44细胞的迁移及侵袭。

miR-543对胶质瘤细胞SHG-44增殖和凋亡的影响

目的:观察miR-543对人胶质瘤细胞SHG-44增殖和凋亡的作用。方法:设计并合成miR-543寡核苷酸模拟物(miR-543 mimic)及阴性对照mimic NC序列、寡核苷酸抑制物(miR-543 inhibitor)及阴性对照inhibitor NC序列,将人胶质瘤细胞SHG-44株分为Control(对照组)、mimic NC组、inhibitor NC组、miR-543 mimic组和miR-543 inhibitor组,各组细胞转染相应序列; Real-time PCR检测miR-543及其靶基因氨酰基-tRNA合成酶相互作用多功能蛋白3(AIMP3) mRNA的表达,应用噻唑蓝细胞增殖实验(MTT)评估SHG-44细胞的增殖,应用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,应用Western Blot检测细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E与细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、bax的表达变化。结果:与对照组相比,转染miR-543 mimic后,SHG-44细胞中miR-543 RNA表达水平显著上调(P <0. 01),其靶基因AIMP3 mRNA表达水平显著下调(P <0. 01);转染miR-543 inhibitor后,细胞中miR-543 RNA表达水平显著下调(P <0. 01),AIMP3 mRNA表达水平显著上调(P <0. 01);转染miR-543 mimic后,细胞增殖水平显著降低(P <0. 01);转染miR-543 inhibitor后,细胞增殖水平显著升高(P <0. 01);转染miR-543 mimic后,细胞处于G1期的细胞数量明显增加(P <0. 01),同时细胞凋亡率也显著增加(P <0. 01),而转染miR-543 inhibitor后细胞凋亡率显著减少(P <0. 01); Westrn Blot结果显示,与对照组相比,转染miR-543 mimic后,细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抗凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达显著下调(P <0. 01),促凋亡相关基因bax蛋白表达显著上调(P <0. 01);转染miR-543 inhibitor后,细胞中cyclin D1、cyclin E、Bcl-2蛋白表达显著上调(P<0. 01),bax蛋白表达显著下调(P <0. 01)。结论:miR-543可能通过下调细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E及抗凋亡相关基因Bcl-2的表达,上调促凋亡基因bax的表达进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

miR-543靶向HDAC3调控LPS诱导的气道上皮细胞损伤

目的:探讨miR-543靶向组蛋白脱乙酰酶3(HDAC3)对脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞损伤的影响。方法:用50μg/ml的LPS诱导气道上皮细胞BEAS-2B,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测miR-543和HDAC3表达。流式细胞术检测细胞凋亡。ELISA试剂盒检测细胞培养液上清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量。双荧光素酶报告实验和Western blot确定miR-543对HDAC3的靶向调控关系。将miR-543模拟物、HDAC3小干扰RNA分别转染BEAS-2B细胞,检测过表达miR-543或干扰HDAC3对LPS诱导的BEAS-2B细胞损伤的影响。结果:LPS处理后BEAS-2B细胞miR-543表达降低,HDAC3表达、细胞凋亡率升高,培养液上清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05)。过表达miR-543或干扰HDAC3表达后,LPS诱导的BEAS-2B细胞凋亡率降低,培养液上清中IL-6、IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。过表达HDAC3能够逆转miR-543过表达对LPS诱导的BEAS-2B细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α水平及凋亡的影响(P<0.05)。miR-543靶向负调控HDAC3表达。结论:miR-543通过靶向HDAC3能够抑制LPS诱导的气道上皮细胞凋亡和炎症反应。

MiR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控及其机制研究

目的:探讨miR-543对人白血病细胞株K562增殖与凋亡的调控作用及其机制。方法:选择2018年2月-2018年9月在本院接受治疗的CML患者46例(男性27例,女性19例)作为CML组,同时选择30例同期体检健康者作为对照组。利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-543模拟物(mimic)及阴性对照mimic转染至K562细胞后,应用CCK8方法检测miR-543对K562细胞增殖的影响,荧光素酶报告法分析miR-543对Wnt基因的靶向关系,流式细胞术检测miR-543对白血病细胞凋亡影响,Western blot方法检测Wnt、β-catenin、BCL-2、C-Myc及BAX表达水平。结果:慢性髓系白血病患者的miR-543水平显著低于健康对照组(P <0.05);miR-543 mimic组的miR-543的表达水平显著高于空白对照组(P <0.05);miR-543 mimic组的Wnt基因mRNA水平显著低于空白对照组(P <0.05)。miR-543 mimic可降低Wnt野生质粒的荧光素酶表达水平(P <0.05);miR-543 mimic对Wnt突变质粒的荧光素酶表达水平无抑制作用(P <0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞增殖水平显著低于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P <0. 05)。miR-543 mimic组K562细胞凋亡水平显著高于空白对照组及阴性对照scramble mimic组(P <0. 05)。miR-543 mimic组细胞的Wnt、β-catenin、BCL-2及C-Myc蛋白水平均显著低于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P <0.05);miR-543 mimic组的BAX蛋白水平高于空白对照组及阴性对照(scramble mimic)组(P <0.05)。结论:miR-543可靶向Wnt蛋白,抑制Wnt信号通路活性,从而抑制白血病细胞的增殖能力,提高细胞凋亡水平。

宫腔镜术治疗宫腔黏连后患者miR-543、miR-135a表达与再复发关系

目的:探究宫腔黏连宫腔镜术治疗后患者子宫内膜组织中miR-543、miR-135a表达及复发关系。方法:回顾性选取2017年9月-2019年9月本院收治的行宫腔镜术治疗的中、重度宫腔黏连患者78例,根据宫腔镜治疗1年后复发情况分为复发组23例、未复发组55例。采用实时荧光定量PCR法检测患者子宫内膜组织中miR-543、miR-135a表达,Pearson法分析miR-543、miR-135a与SIRT1 mRNA、TGF-βmRNA表达相关性;logistic回归模型分析影响宫腔镜治疗后复发的危险因素;ROC曲线分析miR-543、miR-135a表达对宫腔镜治疗后复发的预测价值。结果:复发组重度黏连、术前月经量过少、术前闭经比例、术前宫腔操作次数及SIRT1 mRNA、TGF-βmRNA水平等均高于未复发组,miR-543、miR-135a表达低于未复发组(均P<0.05)。miR-543、miR-135a均与SIRT1 mRNA、TGF-βmRNA水平呈负相关(P<0.05)。重度黏连、术前宫腔操作次数多、高SIRT1 mRNA水平、高TGF-βmRNA水平、低miR-543水平、低miR-135a水平是影响宫腔镜术治疗后复发的独立危险因素(P<0.05),二者联合预测治疗后复发的曲线下面积为0.856(95%CI:0.771~0.924),敏感度为91.3%,特异度为74.5%。结论:宫腔黏连患者子宫内膜组织中miR-543、miR-135a表达降低,且对宫腔镜术治疗黏连复发有一定评估价值。

lncRNA LINC01082靶向调控miR-543抑制膀胱癌恶性进展的实验研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01082对膀胱癌细胞生物学行为的影响机制。方法采用RT-qPCR检测40例膀胱癌组织及对应癌旁组织、膀胱癌细胞系(BIU87、5637、J82、UM-UC-3)中LINC01082和miR-543的表达水平,并分析其相关性。双荧光素酶报告基因实验检测LINC01082和miR-543的靶向关系,将J82细胞分别转染LINC01082过表达质粒(LINC01082组)及对应空载体(空载体组)、miR-543模拟物(miR-543组)及对应阴性质粒(miR-NC组)和共转染LINC01082过表达质粒和miR-543模拟物(LINC01082+miR-543组),设未转染组为空白组。采用MTT法、Transwell实验和流式细胞术分别检测各组细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡率变化,Western blot检测细胞中Ki-67、MMP-9、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果与癌旁组织比较,膀胱癌组织中LINC01082表达水平降低,而miR-543表达水平升高(P<0.05),且二者表达水平呈负相关;与正常膀胱上皮细胞比较,BIU87、5637、J82、UM-UC-3细胞中LINC01082表达水平降低,miR-543表达水平升高(P<0.05)。转染miR-543模拟物可使野生型LINC01082质粒的荧光素酶活性降低(P<0.05);与空白组比较,LINC01082组细胞增殖能力、迁移、侵袭能力和细胞中Ki-67、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与LINC01082组比较,LINC01082+miR-543组细胞增殖能力、迁移、侵袭能力和细胞中Ki-67、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平明显升高,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论LINC01082在膀胱癌中低表达,可能通过靶向miR-543发挥抑癌作用。

lncRNA MEG3通过调控miR-543/PTEN分子轴抑制胰腺癌细胞增殖及转移的机制

目的探讨lncRNA MEG3(MEG3)通过调控miR-543/PTEN分子轴介导胰腺癌细胞增殖和转移的分子机制。方法采用qRT-PCR检测胰腺癌组织及细胞系中MEG3的表达水平;采用CCK-8、Transwell和Westernblot探讨过表达MEG3对PANC-1细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响;采用双荧光素酶报告基因检测MEG3、miR-543及PTEN的靶向调控关系。进一步探讨MEG3通过调控mi R-543/PTEN分子轴对PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT的作用机制。结果 MEG3在胰腺癌组织和细胞系中低表达。同时,过表达MEG3抑制PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT。双荧光素酶报告基因和体外实验证实MEG3通过靶向下调miR-543对PTEN的抑制作用,进而抑制PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT。结论 MEG3通过调控miR-543/PTEN分子轴抑制PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT,并可能为胰腺癌临床早期诊断和治疗提供潜在的分子靶点。

miR-543在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞侵袭与转移的影响

目的:研究微小RNA-543(microRNA-543,miR-543)在宫颈癌组织中的表达,以及miR-543对宫颈癌细胞转移及侵袭的影响。方法:应用荧光实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测正常宫颈组织及宫颈癌组织中miR-543的表达水平。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达后,应用划痕实验检测miR-543对宫颈癌细胞迁移距离的影响,应用Transwell实验检测miR-543对宫颈癌细胞转移和侵袭的影响。结果:miR-543在宫颈癌组织中的表达显著高于正常宫颈组织。沉默宫颈癌细胞中miR-543的表达,宫颈癌细胞的迁移距离显著缩短、细胞转移及侵袭能力受到明显抑制。结论:miR-543在宫颈癌组织中表达升高,并可促进宫颈癌细胞转移与侵袭。

血清miR-543、miR-25-3p、miR-370在肺癌中表达及意义

目的探讨血清微小RNA-370(miR-370)、微小RNA-25-3p(miR-25-3p)、微小RNA-543(miR-543)在肺癌患者中的表达及意义。方法选取2018年8月至2020年8月盘锦辽油宝石花医院收治的82例肺癌患者(肺癌组)、40例肺部良性肿瘤患者(良性组)及40例健康体检人群(对照组),比较各组miR-370、miR-25-3p、miR-543,采用受试者工作特征曲线(ROC)及ROC下面积(AUC)分析miR-370、miR-25-3p、miR-543诊断肺癌价值,比较不同病理特征患者miR-370、miR-25-3p、miR-543,采用Spearman分析miR-370、miR-25-3p、miR-543与T分期、分化程度相关性,采用多因素Logistic回归方程分析疗效的相关影响因素。结果肺癌组miR-370、miR-543低于对照组,miR-25-3p高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌组不同T分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移患者miR-370、miR-25-3p、miR-543比较,差异有统计学意义(P<0.05);miR-370、miR-543与T分期呈负相关,与分化程度呈正相关(P<0.05);miR-25-3p与T分期呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);miR-370、miR-25-3p、miR-543诊断肺癌的AUC分别为0.775、0.826、0.843,miR-370、miR-25-3p联合miR-543诊断肺癌的AUC为0.942(P<0.05)。结论 miR-370、miR-543在肺癌中表达降低,miR-25-3p在肺癌中表达升高,可作为肺癌诊断标志物,并有助于肺癌患者病理特征的评估,从而为临床诊治疾病提供参考信息。

miR-543调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭的机制分析

目的探讨与分析miR-543调控肾透明细胞癌(CCRCC)细胞增殖和侵袭的机制。方法 CCRCC细胞系ACHN随机分为三组:空白组、阴性对照(NC)组与miR-543组,NC组与miR-543组分别转染照NC与miR-543模拟剂,空白组不进行转染。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞转移与侵袭比率,Western blot检测蛋白表达水平。结果转染后24 h与48 h,与NC组与空白组相比,miR-543组的细胞增殖抑制率显著增加(P<0. 05),细胞凋亡率显著增加(P <0. 05),细胞转移与侵袭相对数显著降低(P <0. 05),SDF-1、CXCR7蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),NC组与空白组比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。且miR-543对细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞转移与侵袭、SDF-1和CXCR7蛋白相对表达量的影响均不具有时间依赖性。结论 miR-543能抑制调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡,且不具有时间依赖性,其作用机制可能与抑制SDF-1/CXCR7表达有关。

miR-543调控乳腺癌细胞增殖和侵袭的机制分析

目的探讨miR-543调控乳腺癌细胞增殖和侵袭的效果与机制。方法对数生长期的人乳腺癌细胞(MDA-MB-468)分为三组:对照组、miR-543组与空白组,对照组、miR-543组分别转染mimics NC与miR-543 mimics,空白组转染等体积的磷酸盐缓冲液。MTT法检测细胞增殖指数,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞转移与侵袭,qRT-PCR检测mRNA表达水平,Western Blotting检测蛋白表达水平。结果转染后24 h与36 h,miR-543组的miR-543相对表达水平显著高于空白组与对照组(P<0.05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P>0.05)。转染后24 h与36 h,miR-543组的细胞增殖指数、转移与侵袭指数、B细胞特异性小鼠白血病病毒插入位点1(B-cell-specific Moloney murine leukemia virus insertion site 1,Bmi-1)蛋白相对表达水平显著低于空白组与对照组(P<0.05),细胞凋亡指数显著高于空白组与对照组(P<0.05),空白组与对照组对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-543在乳腺癌细胞中可抑制Bmi-1基因的表达,促进细胞凋亡,发挥抑制细胞增殖和侵袭的作用。

LncRNA-MEG3和KLF4在鼻咽癌发生发展中的作用及可能机制

目的探讨LncRNAs-MEG3在鼻咽癌发生发展中的作用及其可能的分子机制。方法qRTPCR检测鼻咽癌细胞中MEG3与miR-543的含量,荧光素酶报告法研究MEG3与miR-543的关系,分析MEG3和KLF4介导的鼻咽癌细胞增殖和凋亡的变化,Western blot检测KLF4、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果鼻咽癌细胞株中MEG3的表达呈下降趋势,miR-543的表达呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);荧光素酶报告和Western blot显示MEG3可结合miR-543以调控KLF4的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡并影响Bcl-2和Bax蛋白表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA-MEG3可通过吸附结合miR-543靶向调控KLF4的表达,发挥抑制鼻咽癌发生发展的作用。LncRNA-MEG3可能是鼻咽癌靶向治疗的一种新的生物标志物。

HCG11靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性

目的研究HCG11和miR-543对血肿瘤屏障通透性的作用及可能机制。方法应用Real-time PCR检测人脑微血管内皮细胞(endothelial cells, ECs)和人胶质瘤微血管内皮细胞(glioma endothelial cells, GECs)中HCG11和miR-543的表达以及二者的结合作用。应用Lipo3000将HCG11表达沉默和/或miR-543过表达质粒载体分别转染GECs,验证转染效率后,通过测量跨内皮细胞阻抗值(transendothelial electric resistance, TEER)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)渗透量,检测血肿瘤屏障通透性。应用Real-time PCR和Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表达。荧光素梅报告基因系统分析miR-543与HCG11的结合作用。结果 HCG11在GECs中表达显著增加,miR-543在GECs中表达显著降低;HCG11表达沉默、miR-543过表达均显著降低TEER值,增加HRP渗透量,降低ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表达水平。MiR-543与HCG11存在靶向结合作用。HCG11表达沉默显著增加miR-543的表达,增加血肿瘤屏障通透性。结论 HCG11通过靶向结合miR-543调节血肿瘤屏障通透性。