上皮性卵巢癌患者血清中miRNA-576-3p和miRNA-766-5p的表达及临床意义

目的:为了提高临床对上皮性卵巢癌患者的诊断准确率,探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清中微小RNA-576-3p(miR-576-3p)和微小RNA-766-5p(miR-766-5p)的表达及临床意义。方法:选取2017年8月至2022年8月期间本院收治的103例EOC患者作为研究组,103例卵巢囊肿患者作为良性对照组,另取103例同期在本院体检的健康者作为健康对照组。测定并分析患者血清miR-576-3p和miR-766-5p表达水平及相关性,并探讨与EOC发生有关的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-576-3p和miR-766-5p对EOC的诊断价值。结果:三组PLR和NLR值存在显著性差异(χ^(2)=151.671、69.059,P<0.05);研究组血清miR-576-3p表达水平(0.76±0.22)低于健康对照组(1.02±0.17)和良性对照组(0.92±0.12)(F=57.959,P<0.001),而研究组miR-766-5p表达水平(1.24±0.45)显著高于健康对照组(1.01±0.11)和良性对照组(1.11±0.31)(F=13.227,P<0.001),且治疗后血清miR-576-3p表达水平升高(0.89±0.11)(t=5.364,P<0.001),血清miR-766-5p表达水平降低(1.11±0.35)(t=2.314,P<0.05);FIGO分期III+IV期(0.58±0.16)、发生淋巴结转移(0.60±0.18)以及低分化程度(0.63±0.20)的EOC患者血清miR-576-3p表达水平低于FIGO分期I+II(0.87±0.26)、未发生淋巴结转移(0.85±0.35)以及高分化程度(0.82±0.31)的EOC患者(P<0.05),血清miR-766-5p表达水平变化趋势则与之相反;PLR(OR=2.114)、NLR(OR=1.594)和miR-766-5p(OR=1.730)均为发生EOC的危险因素,miR-576-3p(OR=0.627)则为保护因素(P<0.05);血清miR-576-3p、miR-766-5p、PLR、NLR以及联合检测诊断EOC的曲线下面积(AUC)分别为0.801(95%CI=0.739~0.853)、0.741(95%CI=0.676~0.800)、0.906(95%CI=0.857~0.942)、0.776(95%CI=0.713~0.831)、0.970(95%CI=0.937~0.989),联合检测优于各自单独检测(Z联合vs miR-576-3p=6.149、Z联合vs miR-766-5p=6.300、Z联合vs PLR=3.550、Z联合vs NLR=5.592,P均<0.001)。结论:血清miR-576-3p和miR-766-5p表达水平与EOC的发生存在一定的相关性,联合检测诊断EOC的敏感度较高,在辅助临床诊断EOC方面具有一定的应用价值。

基于miR-766-5p/Hdac3信号轴的调控网络促进急性心肌梗死发展及诱导心肌凋亡

本研究主要是miR-766-5p-HDAC3信号轴影响急性心肌梗死(AMI)病理发展通过诱导心肌细胞H9C2凋亡导致心肌纤维化(MF)。方法 采用qRT-PCR实验检测AMI患者及AMI小鼠中miR-766-5p表达;双荧光素梅报告实验(Dual-Luciferase?Reporter)验证HDAC3是miR-766-5p的靶向mRNA及qRT-PCR和Westernblot检测HDAC3与miR-766-5p的调控关系;Tunel细胞凋亡实验检测缺氧培养箱中miR-766-5pinhibitor对H9C2细胞凋亡的调控;心脏超声心动图检测心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠左心室射血分数(LVEF);Masson和SiriusRed染色法检测分析心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠四周后左心室纤维化变化;采用CD31抗体(内皮细胞的标志基因)对小鼠左室切片进行免疫组化分析;凋亡实验检测miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠心脏中Tunel阳性细胞。结果 miR-766-5p异常表达与AMI存在相关调控作用;miR-766-5p可下调HDAC3mRNA和蛋白的表达;心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠左心室射血分数(LVEF)有所好转,NppamRNA的表达量明显低于AMI小鼠;心肌注射miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠左心室纤维化减少,显示其心肌梗死程度有所好转;AMI组阳性信号明显增加,心肌注射miR-766-5pinhibitor后显著更加增强;miR-766-5pinhibitor的AMI小鼠心脏中Tunel阳性细胞的数量远远少于AMI小鼠。结论 miR-766-5p通过抑制HDAC3的表达显著促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的病理进程。

miR-766-3p调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制

目的探讨微小RNA(miR-766-3p)对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR与免疫组化分别检测肺癌组织及癌旁组织中miR-766-3p、KIFC1的表达。体外培养肺癌细胞A549,利用脂质体试剂Lipofectamine2000将miR-766-3p mimics、si-KIFC1转染至A549细胞,MTT检测细胞活力;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-766-3p与KIFC1的靶向关系。结果 miR-766-3p在肺癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),KIFC1的表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-766-3p过表达与抑制KIFC1的表达后,细胞活力显著降低,迁移与侵袭细胞数显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-766-3p可通过降低肺癌细胞中KIFC1的蛋白水平从而抑制细胞增殖、迁移及侵袭能力。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

lncRNA MIR4435-2HG靶向miR-376a-3p调控胆管癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MIR4435-2HG(MIR4435-2HG)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对微小RNA-376a-3p(miR-376a-3p)的调控作用。方法 qRT-PCR法检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic与人胆管癌细胞RBE中MIR4435-2HG、miR-376a-3p的表达。将si-NC、si-MIR4435-2HG、miR-NC、miR-376a-3p mimics、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-NC、si-MIR4435-2HG联合anti-miR-376a-3p分别转染至RBE细胞,作为si-NC组、si-MIR4435-2HG组、miR-NC组、miR-376a-3p组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组、si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组;采用MTT法、Transwell小室法及流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证MIR4435-2HG与miR-376a-3p的靶向关系。Western blot检测相关蛋白表达。结果 RBE细胞中MIR4435-2HG表达量升高(P<0.05),miR-376a-3p表达量降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MIR4435-2HG组MIR4435-2HG表达、细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率升高(P<0.05)。MIR4435-2HG可靶向调控miR-376a-3p;与si-MIR4435-2HG+anti-miR-NC组比较,si-MIR4435-2HG+anti-miR-376a-3p组细胞活力及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.05),miR-376a-3p表达、细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 敲低MIR4435-2HG可通过靶向调控miR-376a-3p进而抑制RBE细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导其凋亡。

长链非编码RNAMIR22HG和微RNA-9-3p在骨关节炎病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MIR22HG和微RNA-9-3p(miR-9-3p)在骨关节炎(OA)病人血清中的表达及与病情严重程度的相关性。方法 选取2020年10月至2021年10月在南充市中医医院确诊为OA的病人120例,作为OA组,60例体检健康人群作为对照组;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平;Pearson法分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的相关性以及二者与视觉模拟(VAS)评分、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)以及西安大略和麦马斯特大学骨关节炎指数可视化量表(WOMAC)评分的相关性;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析lncRNA MIR22HG和miR-9-3p对OA的诊断价值。结果 OA组的血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著高于对照组(1.48±0.25比1.01±0.22),miR-9-3p的表达水平显著低于对照组(0.72±0.13比1.05±0.12)(P<0.05);相关性分析显示,lncRNA MIR22HG和miR-9-3p的表达水平呈负相关关系(P<0.05);KLⅣ级血清lncRNA MIR22HG的表达水平、VAS评分、WOMAC评分显著高于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著高于KLⅡ级(P<0.05),KLⅣ级血清miR-9-3p的表达水平、HSS评分显著低于KLⅢ级和KLⅡ级,KLⅢ级显著低于KLⅡ级(P<0.05);OA病人lncRNA MIR22HG的表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈正相关,与HSS评分呈负相关(P<0.05);miR-9-3p表达水平与VAS评分、WOMAC评分均呈负相关,与HSS评分呈正相关(P<0.05);二者联合诊断的AUC高于lncRNA MIR22HG、miR-9-3p单独诊断的AUC值(Z=2.22,P=0.012;Z=1.43,P=0.025)。结论OA病人血清中lncRNA MIR22HG表达水平显著升高,miR-9-3p表达水平显著降低,二者与OA病情严重程度密切相关,且对OA具有一定的诊断价值。

LncRNA CRNDE调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨LncRNA结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)调节miR⁃338⁃3p/KLF6轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将人肺泡上皮细胞A549分为CK组、LPS组、LPS+si⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE组、LPS+si⁃CRNDE+inhibitor NC组、LPS+si⁃CRNDE+miR⁃338⁃3p inhibitor组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃NC组、LPS+si⁃CRNDE+oe⁃KLF6组;qRT⁃PCR检测各组细胞CRNDE、miR⁃338⁃3p和KLF6表达水平;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF⁃α、IL⁃10和IL⁃1β水平;商品化试剂盒分析MDA、GSH⁃Px、SOD水平;Western blot检测细胞中KLF6、Cleaved⁃caspase⁃3、Bax、Bcl⁃2蛋白表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃338⁃3p与RNDE和KLF6的关系。结果与CK组相比,LPS组和LPS+si⁃NC组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著升高,miR⁃338⁃3p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著降低(P<0.05);与LPS+si⁃NC组相比,LPS+si⁃CRNDE组A549细胞CRNDE和KLF6 mRNA表达、TNF⁃α、IL⁃1β水平、MDA含量、细胞凋亡率、caspase⁃3、Bax、KLF6蛋白表达显著降低,miR⁃150⁃5p表达、细胞活力、IL⁃10水平、SOD和GSH⁃Px活性、Bcl⁃2蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰miR⁃338⁃3p表达或过表达KLF6均可降低下调CRNDE表达改善LPS诱导A549细胞损伤的作用(P<0.05)。结论下调CRNDE可调控miR⁃338⁃3p/KLF6轴减轻LPS诱导的A549细胞损伤。

沉默HOXA11-AS靶向miR-766-3p对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源异形盒基因A11反义RNA(HOXA11-AS)靶向微小RNA-766-3p(miR-766-3p)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响.方法以100μg/mL的ox-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)24 h建立细胞损伤模型.将HUVEC分为对照(con)组、ox-LDL组、ox-LDL+si-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-766-3p组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组、ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组.RT-qPCR检测HOXA11-AS和miR-766-3p表达.流式细胞术分析细胞凋亡.试剂盒检测LDH释放量、胞内SOD活性.ELISA法检测培养液中TNF-α、IL-1β水平.双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS和miR-766-3p的靶向关系.结果与con组比较,ox-LDL组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量、HOXA11-AS表达量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性、miR-766-3p表达量显著降低(P<0.05).与ox-LDL+si-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).与ox-LDL+miR-NC组比较,ox-LDL+miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05).miR-766-3p是HOXA11-AS的直接靶点.与ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-NC组比较,ox-LDL+si-HOXA11-AS+anti-miR-766-3p组HUVEC细胞凋亡率、LDH释放量以及培养液中TNF-α、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05).结论沉默HOXA11-AS通过靶向上调miR-766-3p表达能够抑制ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡、氧化应激和炎性反应.

CircPTPN22作为miR-766-3p分子海绵促进类风湿关节炎病理进程

目的本研究旨在探索circPTPN22在类风湿关节炎(RA)外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达及参与RA的机制。方法RT-PCR检测circPTPN22在20例RA和20例健康人(HCs)PBMCs中的表达,生物信息学预测能与其结合的microRNA(miRNA),并用功能学实验和双荧光素酶试验进行验证。检测miRNA在RA患者PBMCs中的表达并计算受试者工作特征曲线(ROC)评估miRNA在RA中的临床意义。结果CircPTPN22表达水平在RA PBMCs中显著降低。ROC分析提示circPTPN22是RA患者的潜在诊断生物标志物(AUC=0.7025),相关性分析结果显示cirPTPN22的表达与RA的SJC、anti-CCP呈负相关关系(SJC:r=-0.723;anti-CCP:r=-0.618)。MiR-766-3p在RA PBMCs中显著上调;ROC分析提示miR-766-3p的表达可以将RA患者与HCs区分开来(AUC=0.9125)。生物信息学分析、双荧光素酶试验和功能学实验显示circPTPN22能抑制miR-766-3p的表达,miR-766-3p通过调控下游靶基因SIRT5参与RA。结论CircPTPN22通过与miR-766-3p竞争性结合调控下游靶基因SIRT5参与RA的发生与发展,且circPTPN22是RA的潜在诊断生物标志物。

外周血miR-766-3p的表达对肝癌患者预后的预测价值

目的:为探究外周血miR-766-3p的表达对肝癌患者预后的预测价值。方法:回顾性分析我院于2015年8月至2017年8月收治的124例肝癌患者的病历资料,作为研究组,同时选取同时期124例体检健康人群为对照组,检测外周血miR-766-3p水平。统计肝癌不同病理特点的外周血miR-766-3p水平,并比较124例肝癌患者治疗前后的miR-766-3p的表达水平。结果:外周血miR-766-3p的表达受肿瘤大小、TNM分期及侵袭转移的因素影响,差异具有统计学意义(P<0.05),且水平与TNM分期、肿瘤大小呈显著的负相关;研究组外周血miR-766-3p的水平低于对照组(P<0.05);肝癌患者治疗后的miR-766-3p水平明显高于治疗前水平(P<0.05)。结论:过表达外周血miR-766-3p可抑制肝癌细胞生长,抑制癌症的发展。

MicroRNA-766-3p靶向调控SIRT6抑制肝癌进展的实验研究

目的:探究miR-766-3p是否可通过调节靶基因SIRT6影响肝细胞癌(HCC)的发生与发展进程。方法:RT-PCR及Western blot检测miR-766-3p及SIRT6在HCC组织及癌旁组织中的表达;CCK-8、流式凋亡检测技术、划痕实验及Trans well小室检测miR-766-3p/SIRT6对HCC细胞生长、凋亡、转移及侵袭能力的影响;荧光报告基因实验及western blot技术检测miR-766-3p对SIRT6表达的影响。结果:miR-766-3p在HCC组织中低表达,而SIRT6高表达。过表达miR-766-3p通过与SIRT6的3’UTR区结合降低SIRT6的表达。上调miR-766-3p明显抑制HepG2细胞增殖、转移及侵袭能力,促进细胞凋亡;但SIRT6过表达后终止miR-766-3p的以上作用。结论:miR-766-3p通过靶向负调控SIRT6的表达抑制HCC进展。

黄芩苷通过调节miR⁃223⁃3p/NLRP3通路对脓毒症急性肺损伤大鼠的保护作用

目的研究黄芩苷调节miR⁃223⁃3p/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用。方法构建脓毒症ALI大鼠模型,实验分为假手术组、模型组、地塞米松组、低剂量黄芩苷组、中剂量黄芩苷组、高剂量黄芩苷组。酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组大鼠血清TNF⁃α(肿瘤坏死因子⁃α)、IL⁃1β(白细胞介素1β)、IL⁃10水平;苏木素⁃伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化;测定大鼠肺组织含水量及肺泡液体清除率(AFC);实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定各组大鼠肺组织miR⁃223⁃3p水平;蛋白印迹法测定各组大鼠肺组织NLRP3水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平升高(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平降低(P<0.05);同时模型组大鼠肺泡完整性破坏,肺泡萎陷,肺间质明显水肿,大量炎症细胞浸润,肺组织病理得分升高(P<0.05)。经黄芩苷治疗后,随着给药剂量增高,血清IL⁃1β、TNF⁃α水平和WW/DW比值、肺组织NLRP3水平降低(P<0.05),血清IL⁃10水平和AFC值、肺组织miR⁃223⁃3p水平升高(P<0.05),呈剂量依赖性;同时大鼠肺泡结构恢复,肺间质水肿缓解,炎症细胞浸润减少,肺组织病理评分降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论黄芩苷可通过下调促炎因子IL⁃1β、TNF⁃α水平,上调抑炎因子IL⁃10水平以缓解脓毒症ALI大鼠肺损伤,可能与miR⁃223⁃3p/NLRP3通路有关。

miR-203a-3P通过靶向PRMT5抑制胃癌细胞增殖

目的:探讨miR-203a-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响。方法:收集胃癌组织标本44例,采用Real-time PCR方法检测胃癌组织标本中miR-203a-3p的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系;生物信息学预测miR-203a-3p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证;免疫组化检测胃癌组织标本中PRMT5的表达情况,分析其表达水平与miR-203a-3p表达的相关性;利用脂质体介导的瞬时转染方法过表达miR-203a-3p或同时过表达miR-203a-3p和PRMT5,并通过CCK-8实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:胃癌组织中miR-203a-3p的表达水平与正常组织对照相比显著降低(P<0.01),并且miR-203a-3p的表达水平与肿瘤细胞的分化程度显著相关;荧光素酶报告基因实验证实miR-203a-3p可以直接结合在PRMT5 3'-UTR上,即PRMT5是miR-203a-3p的直接靶基因;在胃癌组织标本中,PRMT5表达水平显著高于正常组织对照(P<0.01),并且其表达水平与miR-203a-3p表达呈显著负相关(r=-0.4124,P<0.01);过表达miR-203a-3p后,胃癌BGC823细胞的增殖能力显著低于miR-NC对照组(P<0.01),并且,"挽救"实验表明在过表达miR-203a-3p的细胞中同时过表达PRMT5后会部分恢复miR-203a-3p对细胞增殖的抑制(P<0.01)。结论:miR-203a-3p可通过下调靶基因PRMT5的表达,进而抑制胃癌细胞增殖。因此,miR-203a-3p可作为胃癌疾病临床治疗的潜在靶点。

miR23b-3p和miRl25b-5p通过Etsl下调载脂蛋白（a）水平

目的探讨miR23b-3p和miRl25b-5p对HepG2细胞中载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响及其作用机制。方法以HepG2细胞为研究对象，EtslsiRNA通过Lipo2000转染HepG2细胞，Westernblot检测细胞内Etsl及Apo（a）蛋白水平；通过Lipo2000分别将miR23b一3pmimic和miRl25b-5pmimic转染HepG2细胞，

miR-129-1-3p在浆液性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:检测miR-129-1-3p在浆液性卵巢癌组织与正常输卵管伞端组织中的表达,并分析miR-129-1-3p与卵巢浆液性上皮性癌临床病理特征之间的关系。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)定量分析100例浆液性卵巢上皮性癌组织、50例正常输卵管伞端组织中miR-129-1-3p的表达,并将检测结果与临床和病理特征资料进行统计学分析。结果:浆液性卵巢癌组织中的miR-129-1-3p表达量显著低于正常输卵管伞端组织(P<0.01)。miR-129-1-3p的表达与FIGO分期、患者年龄、病理分化程度、淋巴结转移、血清CA125值无统计学差异(P>0.05)。结论:miR-129-1-3p可能作为抑癌因子参与了卵巢上皮性癌的发生发展,对卵巢上皮性癌具有潜在的辅助诊断意义,为寻找卵巢上皮性癌的生物靶向治疗提供理论依据。

LncRNA FZD10-AS1通过调控miR-337-3p/GPD1分子轴抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(long⁃chain non⁃coding RNA,lncRNA)FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p上调甘油-3-磷酸脱氢酶1(glycerol⁃3⁃phosphate dehydrogenase 1,GPD1)基因的表达抑制骨肉瘤增殖和迁移的分子机制。方法收集青岛大学附属青岛妇女儿童医院儿童骨科2016年9月至2018年12月47例行骨肉瘤根治术切除的癌组织及相应癌旁组织,qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织及癌旁组织、骨肉瘤细胞株和正常成骨细胞中的表达量。选择FZD10⁃AS1表达量最低的细胞株为研究对象,Lipofectamine 2000转染试剂分别转染表达FZD10⁃AS1的质粒(观察组)和阴性对照质粒(对照组)至骨肉瘤细胞,CCK⁃8法和细胞划痕实验检测分别FZD10⁃AS1过表达对细胞增殖和迁移能力的影响。生物信息学预测FZD10⁃AS1的作用机制。qRT⁃PCR检测FZD10⁃AS1过表达对下游基因表达的影响,Western Blot检测有关蛋白的表达量。结果骨肉瘤组织中FZD10⁃AS1的表达明显少于癌旁组织(P<0.01)。骨肉瘤细胞株中FZD10⁃AS1的表达明显少于正常成骨细胞(P<0.01),在U⁃2OS细胞中表达量最少(P<0.01)。过表达FZD10⁃AS1明显抑制U⁃2OS细胞的增殖能力和迁移能力(P<0.05)。生物信息学显示,FZD10⁃AS1可互补结合miR⁃337⁃3p,miR⁃337⁃3p可进一步互补结合GPD1 mRNA。过表达FZD10⁃AS1后U⁃2OS细胞中miR⁃337⁃3p表达量明显下降(P<0.01),GPD1 mRNA和蛋白的表达量增加(P<0.01)。结论FZD10⁃AS1在骨肉瘤组织和细胞株中表达明显降低,FZD10⁃AS1通过调控miR⁃337⁃3p促进GPD1基因的表达,从而抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移能力,FZD10⁃AS1可能成为骨肉瘤治疗及诊断的靶点。

血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系

目的探讨血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p水平与婴幼儿增殖期面部血管瘤普萘洛尔停药后复发的关系。方法增殖期面部血管瘤患儿93例,均接受普萘洛尔治疗,随访治疗后血管瘤复发情况,并将患儿分为复发组(23例)和无复发组(70例)。治疗前、后采集静脉血,qRT⁃PCR检测血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达,分析血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的关系。结果无复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达较治疗前增高(P<0.05),复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。复发组治疗后血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达低于无复发组(P<0.05)。治疗后瘤体分级Ⅲ~Ⅳ级患儿血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p表达高于Ⅰ~Ⅱ级患儿(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示miR⁃199a⁃5p低表达、miR⁃378a⁃3p低表达、治疗后瘤体分级Ⅰ~Ⅱ级是增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后复发的危险因素(P<0.05)。结论血清miR⁃199a⁃5p、miR⁃378a⁃3p低表达与增殖期面部血管瘤婴幼儿普萘洛尔停药后血管瘤复发有关。

延龄草苷通过上调miR⁃1247⁃3p表达减轻高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤

目的探讨延龄草苷对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(HRVEC)损伤的影响及作用机制。方法5、10、20μmol/L的延龄草苷作用于30 mmol/L葡萄糖诱导的HRVEC细胞,或30 mmol/L葡萄糖诱导转染miR⁃1247⁃3p模拟物的HRVEC细胞,或20μmol/L的延龄草苷作用于30 mmol/L葡萄糖诱导的转染miR⁃1247⁃3p抑制剂的HRVEC细胞,DCFH⁃DA法检测细胞中ROS水平,酶联免疫吸附法检测MDA和SOD水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl⁃2和Bax蛋白表达,RT⁃qPCR法检测miR⁃1247⁃3p表达。结果延龄草苷降低了高糖诱导的HRVEC中ROS和MDA水平、凋亡率及Bax蛋白表达(P<0.05),提高了SOD活性、Bcl⁃2蛋白表达及miR⁃1247⁃3p表达(P<0.05),且呈剂量依赖性。过表达miR⁃1247⁃3p降低了高糖诱导的HRVEC中ROS和MDA水平、凋亡率和Bax蛋白表达(P<0.05),提高了SOD活性和Bcl⁃2蛋白表达(P<0.05)。抑制miR⁃1247⁃3p逆转延龄草苷对高糖诱导的HRVEC细胞氧化应激和凋亡的影响(P<0.05)。结论延龄草苷可能通过上调miR⁃1247⁃3p表达抑制高糖诱导的HRVEC细胞氧化应激和凋亡,减轻细胞损伤。

血清miR127-3P与原发性肝癌的相关性研究

目的探讨原发性肝癌患者血清miR127-3P表达水平。方法回顾性纳入2016年1月1日—2018年6月1日在我院就诊的95例原发性肝癌患者、35例乙肝肝硬化患者、30例慢性乙型肝炎患者及30例健康体检者作为研究对象。于清晨空腹抽取外周静脉血3 mL并采用RT-PCR法检测比较所有研究对象血清中miR127-3P的相对表达量的差异,采用Pearson相关分析原发性肝癌患者血清AFP水平与miR127-3P相对表达量的相关性,同时采用logistic回归分析原发性肝癌患者血清miR127-3P相对表达量的影响因素。利用受试者操作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线分析miR127-3P的相对表达量在鉴别原发性肝癌与乙肝肝硬化、慢性乙型肝炎及健康体检者的临床效能。结果原发性肝癌患者、乙肝肝硬化患者、慢性乙型肝炎患者及健康体检者血清miR127-3P相对表达量分别为0.60(0.50~0.63),0.46(0.41~0.51)、0.29(0.2~0.46)、0.25(0.21~0.31),两两比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析结果显示原发性肝癌患者血清AFP与miR127-3P相对表达量呈显著正相关性(r=0.868,P=0.000),且原发性肝癌患者的分化程度越低(Or=3.236)、TNM分期越高(Or=4.369)、存在远处转移(Or=5.687)是血清miR127-3P的相对表达量升高的危险因素。ROC曲线结果显示,miR127-3P的相对表达量鉴别原发性肝癌与肝硬化、慢性乙型肝炎及健康体检者的曲线下面积分别为0.829(95%CI:0.755~0.903)、0.870(95%CI:0.783~0.957)和0.945(95%CI:0.891~0.999),当截断值分别为0.535、0.445和0.410时,此时敏感度和特异度分别为68.4%和94.3%、91.6%和73.3%、91.6%和90%。结论原发性肝癌患者血清miR127-3P相对表达量显著升高,有可能作为原发性肝癌的一个辅助诊断指标。

Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织和细胞中的表达及相互调控关系

目的:探讨Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织及细胞中的表达水平及相互调控关系。方法:运用RT-PCR检测Bmi-1与miR-221-3P在乳腺癌组织、癌旁组织及MCF-7、MCF-10a细胞中的相对表达水平。运用统计学方法探讨两者的相关性。运用Targetscan软件分析Bmi-1与miR-221-3P存在的结合位点,构建双荧光报告基因载体验证Bmi-1与miR-221-3P的相互结合作用。Western-blotting检测乳腺癌组织及细胞中Bmi-1蛋白的相对表达水平。结果:Bmi-1在乳腺癌组织及MCF-7细胞中呈高表达,而miR-221-3P的表达水平明显下调,两者呈负相关性,相关系数为r=-0.826。在转染克隆有Bmi-1基因3'UTR质粒的实验中,miR-221-3P组与空白组、miR-221-3P抑制剂组、NC组、NC抑制剂相比较,P<0.05,差异极显著。降低Bmi-1的表达水平之后,miR-221-3P的表达水平显著上调。结论:Bmi-1在乳腺癌组织和细胞中呈高表达,miR-221-3P在乳腺癌组织和细胞中呈低表达,miR-221-3P负性调控Bmi-1的表达,为阐明乳腺癌的发病机制指明方向。