METTL3调控miR-126介导TGF-β/Smad信号通路影响糖尿病肾病的机制研究

目的:建立糖尿病肾病(Diabetes Kidney Disease,DKD)大鼠模型,探讨METTL3调控糖尿病肾病的作用机制。方法:将SD大鼠适应性喂养7d后,按照随机数字法分为4组,正常对照组(Control组)、糖尿病肾病模型组(DKD组)、糖尿病肾病模型+METTL3干扰对照组(DKD+NC组)和糖尿病肾病模型+METTL3干扰组(DKD+siMETTL3组),每组8只。造模结束后收集大鼠血液标本及肾脏组织,采用全自动生化分析仪分析空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白(Uridine triphosphate,UTP)的表达水平,RT-qPCR法检测miR-126的基因表达,ELISA检测TGF-β1的表达,Western blotting检测METTL3、smad2、smad3、smad7的蛋白水平。结果:与Control组相比,DKD组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著升高(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著降低(P<0.05);与DKD组比较,DKD+siMETTL3组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著降低(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著升高(P<0.05)。结论:METTL3可以通过调控miR-126及TGF-β/smad通路,介导DKD的进展。

METTL3调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞焦亡的影响及机制研究

目的:研究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞(HRMC)焦亡的影响并探讨潜在机制。方法:将HRMC分为7组,即对照组、高糖处理组、pcD-null组、pcD-METTL3组、pcD-METTL3+miR-126-5p抑制剂(inhibitor)组、pcD-METTL3+inhibitor-NC组、pcD-METTL3+inhibitor+AKT抑制剂(AZD5363)组。用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126-5p表达,western blotting检测METTL3、Gasdermin D、NLRP3、磷酸化(p-)AKT、p-NF-κB表达。用RNA甲基化免疫沉淀技术(Me-RIP)测定miR-126-5p前体的m6A修饰水平。结果:与对照组比较较,高糖处理组细胞焦亡增多,miR-126-5p前体N6-甲基腺苷(m6A)修饰增加,p-AKT和p-NF-κB表达水平升高,METTL3和miR-126-5p表达水平降低(均P<0.05)。转染METTL3过表达载体后,高糖处理的细胞上述指标发生了显著逆转(均P<0.05)。而在过表达METTL3的基础上加入miR-126-5p inhibitor后,miR-126-5p表达下调,细胞焦亡增多,p-AKT、p-NF-κB表达上调(均P<0.05),但METTL3表达水平和miR-126-5p前体m6A修饰无显著变化(P>0.05)。在过表达METTL3的基础上加入AZD5363后,细胞焦亡减少(P<0.05),p-AKT、p-NF-κB表达下调,METTL3和miR-126-5p表达及miR-126-5p前体m6A修饰无显著改变(P>0.05)。结论:METTL3促进miR-126-5p的m6A甲基化,并通过抑制AKT/NF-κB信号通路减少高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

缺氧诱导因子-1α通过miR-126/JAK2-STAT3轴调控慢性肾病小鼠肾纤维化

目的:探究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过miR-126/JAK2-STAT3轴促进慢性肾病小鼠肾纤维化的分子机制。方法:选取8周龄雄性C57/BL6小鼠,分为假手术组、模型组、HIF-1αmimic组、miR-126 mimic组、HIF-1α+miR mimic组、WP1066组、miR-126 mimic+WP1066组;用全自动生化仪检测小鼠肾24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,qRT-PCR检测肾组织内miR-126相对表达量,免疫印迹检测肾组织内HIF-α,肾纤维化关键蛋白fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA,JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达;Masson染色分析小鼠肾病理形态及间质纤维化程度。结果:模型组模型建立后miR-126表达受到抑制,差异有统计学意义。与假手术组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、BUN、SCr水平均上调,肾组织肾小管、间质结构紊乱,肾纤维化明显,fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达上调;HIF-1α过表达进一步上调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;miR-126过表达下调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;HIF-1α过表达可以逆转miR-126过表达抑制肾纤维化的趋势,差异有统计学意义。与模型组相比,JAK2/STAT3信号通路被阻断后,p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达明显下调,miR-126的过表达可以进一步下调小鼠肾组织内p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达,差异有统计学意义。结论:小鼠肾纤维化促进肾组织内HIF-1α高表达,HIF-1α通过抑制miR-126提升JAK2-STAT3信号通路活性,最终促进肾纤维化进展。

急性心肌梗死患者外周血内皮细胞微粒miR-126和线粒体成分及黏附分子表达水平及其临床意义研究

背景急性心肌梗死(AMI)是常见的心血管疾病之一,尽管目前心肌坏死的生物标志物被广泛应用,但AMI的发病率和死亡率仍然居高不下。目的探究内皮细胞微粒(EMPs)内含miR-126、线粒体成分、黏附分子的表达水平及临床意义。方法纳入2021年9月—2022年9月于新疆维吾尔自治区人民医院就诊的AMI患者50例(AMI组)、稳定性冠心病(SCAD)患者50例(SCAD组)、健康者50例(Control组),AMI患者和SCAD患者均在本院住院并接受冠状动脉介入治疗(PCI),健康者均经过本院体检中心的评估。收集三组外周血标本及一般资料,利用透射电镜观察微粒的形态,流式细胞术鉴定EMPs水平,荧光定量PCR检测EMPs中miR-126的表达,ELISA检测EMPs中线粒体活性氧(ROS)及内含黏附分子[血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、E-选择素、P-选择素]的水平。结果通过透射电镜观察到,分离的微粒膜结构完整,直径在100~400 nm。与Control组相比,AMI组血浆EMPs中miR-126表达水平下降(P<0.001),ROS表达水平升高(P<0.001),VCAM-1表达水平升高(P=0.019),ICAM-1表达水平升高(P<0.001),E-选择素表达水平升高(P=0.019),P-选择素表达水平升高(P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-126表达水平降低(OR=0.026,95%CI=0.003~0.210,P=0.001)是AMI的保护因素,ROS(OR=1.009,95%CI=1.005~1.013,P<0.001)、P-选择素表达水平升高(OR=1.063,95%CI=1.022~1.105,P=0.002)是AMI的危险因素。受试者工作特征(ROC)曲线显示,miR-126诊断AMI的ROC曲线下面积(AUC)为0.816,ROS诊断AMI的AUC为0.892,P-选择素诊断AMI的AUC为0.728,miR-126、ROS、P-选择素联合诊断AMI的AUC为0.950。结论EMPs中miR-126、ROS、P-选择素以及三者联合指标均对AMI有诊断价值,并且三者联合指标诊断价值最高,这表明其可能为AMI患者的潜在诊断指标。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

LEASO患者血清miR-21、miR-126水平与HMGB1/TLR4信号通路活性和术后复发的关系

目的 探讨股腘型下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者血清微小核糖核酸(miR)-21、miR-126水平与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路活性和术后复发的关系。方法 选取行介入手术的股腘型LEASO患者120例,根据术后是否复发将股腘型LEASO患者分为复发组和未复发组。RF-qPCR剂检测血清miR-21、miR-126表达和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达。采用Pearson相关性分析法分析股腘型LEASO患者血清miR-21、miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达的相关性。多因素Logistic回归分析股腘型LEASO患者介入术后复发的影响因素。结果 120例股腘型LEASO患者随访2年,术后复发率为34.17%。与未复发组比较,复发组血清miR-21和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达升高,血清miR-126表达降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,股腘型LEASO患者血清miR-21与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(r分别为0.660、0.649,P均<0.05),miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.632、-0.641,P均<0.05),外周血单个核细胞HMGB1mRNA与TLR4 mRNA表达呈正相关(r=0.742,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病和miR-21、HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA升高为股腘型LEASO患者介入术后复发的独立危险因素,miR-126升高为独立保护因素(P均<0.05)。结论 股腘型LEASO患者血清miR-21高表达和miR-126低表达与HMGB1/TLR4信号通路激活有关,是股腘型LEASO患者术后复发的独立影响因素。

血清和玻璃体中miR-126和miR-325与增生性玻璃体视网膜病变严重程度的关系

目的:探讨血清和玻璃体中miR-126和miR-325与增生性玻璃体视网膜病变(PVR)严重程度的关系。方法:回顾性研究。选取2019-10/2022-10在本院治疗的PVR患者100例100眼。按照视网膜病变程度分为轻度组42眼和重度组58眼。选取同期因眼外伤在本院进行玻璃体切除术无视网膜病变的患者30例30眼为对照组。采用荧光定量PCR检测血清和玻璃体中miR-126和miR-325表达水平;ELISA检测血清、玻璃体中转化生长因子-β(TGF-β)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Pearson法分析血清和玻璃体中miR-126和miR-325水平与TGF-β、PDGF、VEGF、TNF-α水平的相关性;采用Logistic多因素分析影响发生重度PVR的因素。结果:PVR患者血清和玻璃体中miR-126水平较对照组降低,且重度组低于轻度组(均P<0.05);miR-325水平较对照组升高,且重度组高于轻度组(均P<0.05)。重度组患者血清和玻璃体中TGF-β、PDGF、VEGF、TNF-α水平较轻度组均上升(均P<0.05)。PVR患者血清和玻璃体中miR-126水平与miR-325、TGF-β、VEGF、TNF-α、PDGF水平均呈负相关(均P<0.05),miR-325与TGF-β、VEGF、TNF-α、PDGF水平均呈正相关(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清和玻璃体中miR-325、TGF-β、PDGF、TNF-α均是发生重度PVR的危险因素,miR-126是保护因素(P<0.05)。结论:随PVR疾病的加重,患者血清和玻璃体中miR-126表达降低,miR-325表达升高,且与TGF-β、TNF-α、VEGF、PDGF具有相关性。

miRNA-126及免疫功能指标对ICU重症肺部感染患者预后的预测价值

目的探究血液与肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中微小RNA-126(miR-126)及免疫功能指标对重症监护病房(intensive care unit,ICU)重症肺部感染患者预后转归的预测价值。方法选取2019年3月至2021年3月锦州医科大学附属第一医院ICU治疗的重症肺部感染患者96例为重症组,并募集同期非重症肺部感染患者88例为非重症组,根据重症组患者28 d预后分为存活组和病死组,比较各组血清与肺泡灌洗液中miR-126水平、细胞免疫指标CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞比例、体液免疫指标免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)。结果重症组患者血液及BALF中miR-126、外周血CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、血清IgG、IgM水平均低于非重症组,APACHEⅡ评分高于非重症组(P<0.05);Pearson相关分析显示,血液及BALF中miR-126、免疫功能指标CD4^(+)/CD8^(+)水平分别与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.432、-0.459、-0.538,P<0.05);存活组患者血液及BALF中miR-126、外周血CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、血清IgG水平均高于病死组(P<0.05);受试者工作特征曲线(ROC)显示,血液及BALF中miR-126、免疫功能指标联合预测患者预后曲线下面积(AUC)为0.894,95%CI为0.814~0.947,均高于各单一指标。结论血液与BALF中miR-126、免疫功能指标与重症肺部感染病情密切相关,是预测患者预后的重要指标。

急性心肌梗死患者外周血内皮细胞微粒中miR-126和P-选择素及E-选择素水平特点及其临床意义

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者外周血内皮细胞微粒(EMPs)中miR-126、P-选择素、E-选择素的表达水平,探究其与AMI的关系及临床意义。方法选择2021年9月至2022年9月新疆维吾尔自治区人民医院收治的45例AMI患者作为研究组,45例同期健康体检者作为对照组。冠状动脉狭窄的评估基于冠状动脉病变数量和Genisi评分。利用流式细胞仪检测外周血中的EMPs,用PCR法检测EMPs中的miR-126表达水平,通过ELISA法测定EMPs中的P-选择素、E-选择素表达。结果AMI组外周血EMPs中miR-126水平低于健康组,P-选择素和E-选择素水平显著高于健康组。外周血EMPs中miR-126水平在三支血管病变组中的表达水平明显低于双支病变组和单支病变组,且外周血EMPs中miR-126水平与Genisi评分呈负相关。外周血EMPs中P-选择素水平在三支血管病变组中的表达水平明显高于双支病变组和单支病变组,且P-选择素与Genisi评分呈正相关。多因素logistic回归显示,外周血EMPs中P-选择素、E-选择是AMI的危险因素。受试者工作曲线(ROC)分析结果显示,外周血EMPs中miR-126、P-选择素及E-选择素单独诊断AMI的效能较低,外周血EMPs中miR-126、P-选择素及E-选择素联合诊断AMI具有良好的诊断效能。结论外周血EMPs中P-选择素和E-选择素是AMI的危险因素。外周血EMPs中miR-126、P-选择素及E-选择素联合对AMI有诊断价值,可作为AMI诊断的生物学标志物。

miR-126-3p.1通过SLC7A5调控间变性甲状腺癌细胞糖酵解的作用机制

目的 探讨miR-126-3p.1对间变性甲状腺癌(ATC)细胞糖酵解的作用,并分析其潜在的机制。方法 通过TCGA数据库检索miR-126-3p.1在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌诊断、预后的关系。运用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测人正常甲状腺细胞Htori-3、人间变性甲状腺癌细胞SW1736、人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1中miR-126-3p.1、溶质运载家族7成员5(SLC7A5)的表达;将TPC-1细胞分为agomiRNA(转染agomiRNA)组、agomiR-126-3p.1(转染agomiR-126-3p.1)组、si-NC(转染si-NC)组、si-SLC7A5(转染si-SLC7A5)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA-SLC7A5(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA-SLC7A5)组,各组细胞用脂质体法转染至SW1736细胞。细胞计数试剂(CCK8)、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测细胞增殖能力;ELISA法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成能力;蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞SLC7A5蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 TCGA显示miR-126-3p.1在甲状腺癌中低表达。与Htori-3相比,SW1736、TPC-1细胞miR-126-3p.1低表达,SLC7A5表达显著升高(均P<0.05)。与agomiRNA组相比,agomiR-126-3p.1组细胞miR-126-3p.1表达显著升高,TPC-1细胞增殖率、EdU阳性率、相对葡萄糖消耗率、相对乳酸生成率、TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量均降低(P<0.05)。与antagomiRNA组相比,antagomiR126-3p.1组TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量显著升高(P<0.05)。敲减SLC7A5对TPC-1细胞具有相似作用。miR-126-3p.1靶向负调控SLC7A5,并且二者在甲状腺癌中呈负相关(R=-0.266,P<0.05)。过表达SLC7A5降低miR-126-3p.1表达,减弱miR-126-3p.1对SW1736细胞增殖、糖酵解的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-126-3p.1可能通过调控SLC7A5参与癌细胞的增殖、糖酵解,具有潜在的治疗价值。

miR-126在脑梗死取栓术预后的临床意义

目的通过检测血清微小RNA-126(miR-126)在急性脑梗死介入取栓术治疗前的改变,探讨其与患者预后的相关性。方法回顾性分析2019年1月至2021年12月在湖州市第一人民医院行介入取栓术的脑梗死患者101例,随访2个月,根据改良Rankin评分(modified Rankin scale,mRS)分为预后良好组(mRS≤2分,56例)和预后不良组(mRS>2分,45例),比较两组患者的临床资料及miR-126在取栓术前的差异,分析血清miR-126改变对脑梗死患者预后的影响。结果取栓术前血清miR-126水平在预后良好组明显高于预后不良组[(9.31±2.14)vs.(1.36±0.28),P<0.01],且miR-126与美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)评分呈负相关(r=–0.737,P<0.01),与侧支循环良好呈正相关(r=0.645,P<0.01),创建miR-126预测脑梗死取栓术预后的受试者操作特征曲线下面积为0.818,最佳截断值敏感度78.9%、特异性86.0%。结论血清miR-126水平在脑梗死取栓术前的改变与患者预后可能相关,可作为早期预测脑梗死介入治疗预后的标志物。

艾迪注射液治疗晚期胃癌的预后及与外周血lncRNA ZNF667⁃AS1及miR⁃126表达与的关系

目的探讨艾迪注射液治疗晚期胃癌的预后及与外周血lncRNA ZNF667⁃AS1及miR⁃126表达的关系。方法收集2022年1月至2023年3月间于安徽省颍上县人民医院接受治疗的晚期胃癌患者60例,所有患者接受放化疗配合艾迪注射液治疗,随访1年,存活病例纳入预后良好组(n=44),死亡病例纳入预后不良组(n=16)。比较两组患者一般资料及外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平,分析外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平与晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后的关系,评估外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平对晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后的预测价值。结果经随访发现,预后不良16例、占26.67%;预后良好44例、占73.33%。预后不良组外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126表达水平均低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126异常低表达均是晚期胃癌患者预后不良的独立危险因素(OR>1,P<0.05);ROC曲线图显示,外周血lncRNA ZNF667⁃AS1+miR⁃126预测晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后的AUC为0.924,灵敏度、特异度分别为90.20%、83.60%。结论外周血lncRNA ZNF667⁃AS1、miR⁃126低表达与晚期胃癌患者艾迪注射液治疗预后不良有关。

子痫前期孕妇血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平变化及其临床意义

目的探讨子痫前期(PE)孕妇血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平变化及其临床意义。方法采用回顾性研究,选取2020年2月至2022年2月陕西中医药大学第二附属医院收治的89例PE孕妇作为研究组[年龄(27.28±2.94)岁,体重指数(22.72±2.45)kg/m^(2)],另选取同期健康孕妇89例作为对照组[年龄(26.49±2.76)岁,体重指数(22.84±2.12)kg/m^(2)]。89例PE孕妇根据病情严重程度分为轻度组58例、重度组31例;根据是否发生宫内窘迫、早产、新生儿窒息、胎儿死亡、低体重儿、巨大儿等不良妊娠结局,分为良好组(52例)和不良组(37例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测研究对象的血清miR-135b-5p、miR-126-3p表达水平;采用t检验、χ^(2)检验进行统计比较;Pearson相关性分析PE患者血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平与收缩压、舒张压和蛋白尿的相关性;多因素logistic回归分析影响PE程度的因素;重度PE孕妇诊断及不良妊娠结局预测价值采用受试者操作特征曲线(ROC)进行分析。结果研究组血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平分别为0.69±0.14、0.65±0.13,对照组分别为1.07±0.23、1.08±0.25,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);重度组血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平分别为0.49±0.11、0.53±0.12,轻度组分别为0.79±0.15、0.71±0.14,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);妊娠结局不良组血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平分别为0.53±0.12、0.52±0.11,良好组分别为0.81±0.18、0.75±0.15,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-135b-5p与收缩压、舒张压和蛋白尿呈负相关(r=-0.492、-0.612、-0.522,均P<0.05),miR-126-3p与收缩压、舒张压和蛋白尿呈负相关(r=-0.519、-0.481、-0.626,均P<0.05);多因素logistic回归分析得知,低水平miR-135b-5p、miR-126-3p是重度PE的危险因素(均P<0.05);根据ROC分析得知,miR-135b-5p、miR-126-3p联合检测对重度PE孕妇诊断及不良妊娠结局预测的AUC分别为0.948、0.952,均高于单一指标检测(均P<0.05)。结论PE孕妇血清miR-135b-5p、miR-126-3p表达水平下降,与病情发展、不良妊娠结局有关,联合检测对重度PE孕妇诊断及不良妊娠结局预测的价值较高。

丹参通络解毒汤含药血清调控miR-126表达对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞自噬的影响

目的探究丹参通络解毒汤含药血清调控miR-126对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬的影响。方法体外培养CMECs构建缺氧/复氧损伤细胞模型,通过慢病毒转染miR-126抑制基因,将细胞分为空白组、模型组、药物组、沉默组、空载组、沉默+药物组,试剂盒检测CMECs上清液乳酸脱氢酶(LDH)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测细胞miR-126 mRNA表达,Western blot检测自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、p62表达。结果与空白组比较,模型组细胞上清液LDH含量显著升高,细胞凋亡率显著升高,miR-126 mRNA表达显著降低,Atg5、Beclin1蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,药物组、沉默+药物组细胞上清液LDH含量显著降低,细胞凋亡率显著降低,miR-126 mRNA表达显著升高,Atg5、Beclin1蛋白表达显著降低,药物组p62蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);沉默组细胞上清液LDH含量、细胞凋亡率及Atg5、Beclin1蛋白表达显著升高,miR-126 mRNA表达显著降低(P<0.01)。与药物组比较,沉默组、沉默+药物组细胞上清液LDH含量和细胞凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01),miR-126 mRNA表达显著降低(P<0.01),沉默组Atg5、Beclin1蛋白表达显著升高(P<0.01),p62蛋白表达显著降低(P<0.01)。与沉默组比较,空载组、沉默+药物组细胞上清液LDH含量、细胞凋亡率及Atg5、Beclin1蛋白表达显著降低(P<0.01),miR-126 mRNA和p62蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论丹参通络解毒汤含药血清能抑制缺氧/复氧损伤引起的CMECs自噬,抑制细胞凋亡,进而保护CMECs,其机制可能与促进miR-126表达有关。

miR-126-5p靶向MAPK1对甲状腺癌顺铂耐药细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究miR-126-5p对甲状腺癌细胞顺铂耐药性和耐药细胞增殖侵袭的影响及机制。方法:RT-qPCR检测细胞miR-126-5p和MAPK1 mRNA表达水平。将细胞分为对照组、miR-126-5p mimic组、miR-NC组、miR-126-5pmimic+pc-MAPK1组和miR-126-5pmimic+pc-NC组。CCK-8法测定细胞顺铂抗性和增殖情况,Transwell测定细胞侵袭,双荧光素酶报告验证靶向关系,免疫印迹检测MAPK1蛋白表达水平。结果:与正常组织和细胞相比,甲状腺癌组织和细胞中miR-126-5p水平显著下调;与甲状腺癌细胞系TPC-1相比,甲状腺癌顺铂耐药细胞系TPC-1/CDDP中miR-126-5p mRNA表达显著下调。TPC-1细胞、TPC-1/CDDP细胞中,与对照组相比,miR-126-5pmimic组细胞CDDP的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数目均显著降低,miR-126-5p靶向下调MAPK1。过表达MAPK1逆转miR-126-5p过表达对细胞顺铂抗性的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数。结论:miR-126-5p过表达通过靶向下调MAPK1增强TPC-1和TPC-1/CDDP细胞顺铂敏感性,并抑制细胞增殖和侵袭。

血浆外泌体miR-19b、miR-126检测鉴别肺结节良恶性的临床研究

目的利用液态活检技术,寻找合适的外泌体miRNA肿瘤生物标志物,用于肺结节良恶性鉴别诊断。方法选取2019年1月—12月安徽省第二人民医院初诊肺癌术后的24对肺癌组织及癌旁组织样本,筛选出差异性表达的miRNA标志物miR-19b和miR-126。选取2020年1月—2022年12月初诊肺恶性结节患者58例为观察组,良性结节患者31例为对照组,检测血浆外泌体miR-19b、miR-126在两组的表达量,以miR-16为内参,分析血浆外泌体miR-19b和miR-126表达量差异在肺结节良恶性鉴别中的应用价值。结果肺癌组织中miR-19b表达水平为(45.91±13.73),与癌旁组织(11.61±3.87)相比显著升高(P<0.05);miR-126表达水平为(0.70±0.22),与癌旁组织(2.56±0.75)相比显著降低(P<0.05)。miR-19b和miR-126在观察组血浆外泌体表达水平分别为(1.83±0.49)和(0.83±0.26),显著高于对照组[(0.93±0.31)和(0.40±0.12)](P<0.05);血浆外泌体miR-19b在观察组和对照组鉴别的曲线下面积[AUC:0.808(95%CI:0.718~0.898,P<0.001)],取cutoff值为0.936,灵敏度为82.8%,特异性为64.5%,高于miR-126的检测。对miR-19b和miR-126相对定量值进行秩和检验,按肿瘤大小和肿瘤浸润性分组,miR-19b表达水平有显著性差异(P<0.05),按肿瘤浸润性分组,miR-126表达水平有显著性差异(P<0.05)。结论血浆外泌体miR-19b、miR-126的表达量值可辅助鉴别肺结节良恶性。

血浆miR-320c、miR-126及miR-34c联合检测对慢性阻塞性肺疾病严重程度的预测价值

目的探讨血浆miRNA水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)严重程度的相关性。方法利用荧光定量PCR(qPCR)检测健康人群(10例)及COPD患者(10例)血浆miRNA的表达水平,筛选与COPD患者密切相关的miRNA。进一步在健康人群(28例)和COPD慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)Ⅰ级(30例)、Ⅱ级(32例)、Ⅲ级(30例)及Ⅳ级(28例)患者中明确候选miRNA单独及联合检测对COPD严重程度的预测价值。结果COPD患者血浆miR-320c、miR-126及miR-34c水平显著高于健康人群(P<0.01)。随着COPD级别的增加,血浆miR-320c、miR-126及miR-34c的表达水平亦增加。miR-320c、miR-126、miR-34c单独及联合检测预测中重度COPD患者的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.822、0.705、0.783及0.892。结论血浆miR-320c、miR-126及miR-34c可预测COPD严重程度,其联合检测的预测效能显著高于单项miRNA。

脑动脉硬化患者血清miR-181b miR-126与内皮功能和炎症水平的相关性

目的探讨脑动脉硬化患者血清miR-181b、miR-126与内皮功能和炎症水平的相关性。方法选取78例脑动脉硬化患者设为病例组,78名健康志愿者设为对照组。比较两组受试者血清miR-181b、miR-126表达,比较两组受试者血清一氧化氮、血管内皮素、促血管生成素-2、超敏C反应蛋白、白介素-6、白细胞计数水平。分析脑动脉硬化患者miR-181b、miR-126表达与内皮功能及炎症水平的相关性。结果病例组患者血清miR-181b、miR-126相对表达量均低于对照组(P<0.01)。病例组患者血清一氧化氮水平低于对照组,血清血管内皮素、促血管生成素-2、超敏C反应蛋白、白介素-6及白细胞水平均高于对照组(P<0.01)。脑动脉硬化患者miR-181b、miR-126均与血清一氧化氮水平呈正相关(P<0.01),与血清血管内皮素、促血管生成素-2、超敏C反应蛋白、白介素-6及白细胞水平呈负相关(P<0.01)。结论脑动脉硬化患者miR-181b、miR-126存在异常表达,且其与患者炎症水平及内皮功能具有显著相关性,可能通过调控炎症水平及内皮功能参与脑动脉硬化的发生发展。

超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测在肾癌诊断中的价值

目的观察超声造影联合血清微小RNA(miR)-29a、miR-126检测在肾癌诊断中的效能。方法选取陕西省延安市洛川县医院2019年2月至2022年2月86例肾癌患者作为肾癌组,另选取同期24例肾错构瘤患者作为良性组,所有患者均接受超声造影检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测血清miR-29a、miR-126相对表达量,比较两组超声造影参数及血清miR-29a、miR-126相对表达量,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测对肾癌的诊断价值;采用Pearson相关分析超声造影参数与血清miR-29a、miR-126的相关性。结果肾癌组PI高于良性组,TTP、ET均低于良性组,差异有统计学意义(P<0.05);肾癌组血清miR-29a相对表达量高于良性组,miR-126相对表达量低于良性组,差异有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,PI、TTP、ET、血清miR-29a及miR-126联合检测诊断肾癌的曲线下面积(AUC)为0.931,高于5项指标单独检测的AUC(0.795、0.785、0.751、0.777、0.795,P<0.05)。肾癌患者超声造影参数PI与血清miR-29a相对表达量呈正相关(r=0.701,P<0.05),与miR-126相对表达量呈负相关(r=-0.735,P<0.05);TTP、ET均与miR-29a相对表达量呈负相关(r=-0.662、-0.635,P<0.05),与miR-126相对表达量呈正相关(r=0.682、0.647,P<0.05)。结论肾癌患者血清miR-29a水平升高、miR-126水平降低,超声造影联合血清miR-29a、miR-126检测对肾癌具有较高的诊断效能,可为肾癌的临床诊疗提供参考。

超声微泡介导的miR-21和miR-126克服紫杉醇耐药乳腺癌的实验研究

目的miR-21和miR-126对乳腺癌紫杉醇耐药的影响。方法选择乳腺癌耐药细胞建立的乳腺癌皮下移植瘤模型50只作为研究对象,制备载miR-21和miR-126的超声微泡,随机分为对照组、空微泡组、miR-21微泡组、miR-126微泡组以及联合组,每组10只,观察各组小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肿瘤组织miR-21和miR-126水平,采用免疫组织化学检测肿瘤组织中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P-糖蛋白(P-gp)及多药耐药相关蛋白1(MRP1)的蛋白表达水平。结果与对照组及空泡组相比较,miR-21微泡组和联合组miR-21mRNA表达水平明显下调(P<0.05),miR-126微泡组和联合miR-126mRNA表达水平明显上调(P<0.05),对照组和空泡组肿瘤体积持续增加,与对照组和空泡组相比,联合组对肿瘤的肿瘤体积和肿瘤质量最小,体积抑瘤率和质量抑瘤率最高(P<0.05),miR-21微泡组和miR-126微泡组的抑制作用次之(P<0.05)。免疫组织化学结果显示,联合组BCRP、P-gp及MRP1阳性率分别为20.00%、10.00%和20.00%,均明显低于miR-126微泡组和miR-21微泡组(P<0.05)。结论miR-21和miR-126联合干预对乳腺癌耐紫杉醇小鼠皮下移植瘤生长具有协同抑制效应,为克服紫杉醇耐药乳腺癌提供了新的治疗途径及靶标。