miR-137通过靶向MCL1和谷氨酰胺转运SLC1A5调节肺癌细胞的铁死亡机制

目的 探讨miR-137通过靶向髓系白血病1蛋白(MCL1)和谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族A1成员(SLC1A)5调节肺癌细胞铁死亡的机制。方法 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549从美国典型培养物保藏中心获得。培养基均补充有10%胎牛血清(FBS),在37℃的含5%CO_(2)的潮湿空气中孵育。培养细胞以进行miR-137载体转染,直至细胞融合度达到70%~80%。将培养细胞分为对照组、miR-137转染组和miR-137沉默组。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析细胞MCL1和SLC1A5、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4 mRNA表达。通过双重荧光素酶报告基因测定miR-137与MCL1和SLC1A的靶向作用。通过铁测定试剂盒测量每个细胞系中的Fe2+浓度。通过线粒体超氧化物(MitoSOX)指示剂测量了细胞中MitoSOX的产生。通过相应试剂盒检测活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。通过流式细胞仪检测细胞凋亡。通过Transwell法测定miR-137对细胞迁移、侵袭的影响。结果 miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组MCL1、GPX4和SLC1A5 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组MCL1、SLC1A5和GPX4 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-137转染组显著降低了用Wt-SLC1A5和Wt-MCL1载体共转染的NSCLC细胞中的荧光素酶活性(P<0.05),而Mut-SLC1A5和Mut-MCL1模拟共转染荧光素酶活性酶无显著变化(P>0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著降低,线粒体相对膜电位显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著升高,线粒体相对膜电位显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组ROS和MDA浓度显著降低,GSH浓度显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组ROS和MDA浓度显著升高,GSH浓度显著降低(P<0.05)。24、48和72 h时,miR-137转染组较miR-137沉默组和对照组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),72 h时miR-137沉默组较对照组细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组细胞迁移、侵袭数量显著增多(P<0.05),miR-137转染组较对照组细胞迁移、侵袭数量显著减少(P<0.05)。结论 miR-137可以靶向调控SLC1A5和MCL1,诱导肺癌细胞铁死亡,从而促进细胞凋亡。

甲状腺乳头状癌组织中miR-137水平表达及相关实验研究

目的探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中微小核糖核酸(microRNA,miR)-137表达变化,以及升高人PTC细胞株TPC-1中miR-137表达对细胞生物学功能的影响。方法收集2018年4月~2021年4月黄石市中心医院普爱院区手术切除的121例PTC及配对癌旁组织,培养TPC-1细胞并分为miR-137模拟物组(M组)、阴性对照组(NC组)和空白组(B组),分别转染miR-137模拟序列、转染阴性对照序列和仅加入转染试剂,逆转录定量PCR(qRT-PCR)法检测组织和细胞中miR-137表达,MTT法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移和侵袭力。结果PTC组织中miR-137水平(0.26±0.10)显著低于癌旁组织(0.42±0.18),差异有统计学意义(t=8.320,P<0.001);与无包膜浸润、TNM分期Ⅰ~Ⅱ和未发生淋巴结转移相比,包膜浸润、TNM分期Ⅲ~Ⅳ和发生淋巴结转移PTC组织中miR-137水平降低,差异具有统计学意义(t=3.506,2.210,2.110,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-137水平在诊断PTC时,曲线下面积是0.776(95%CI:0.717~0.835),当miR-137表达量取0.35时,灵敏度和特异度分别为80.99%,65.29%;M组细胞中miR-137水平(2.30±0.19)高于NC组(1.01±0.05)和B组(1.03±0.08),差异具有统计学意义(F=222.632,P<0.05),24,48,72和96h时增殖活性均低于NC组和B组(t=2.520~4.681,均P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数均低于NC组和B组,差异具有统计学意义(t=7.316,5.555;6.118,8.078,均P<0.05)。结论miR-137在PTC组织中表达量降低,升高miR-137水平可明显减少TPC-1细胞增殖活性,抑制细胞迁移和侵袭。

温阳复元方联合miR-137模拟剂调控线粒体铁死亡对脑缺血再灌注损伤大鼠的作用机制

目的:阐明大鼠脑缺血再灌注(I/R)后miR-137对转铁蛋白受体(TFR)和胸腺癌抵抗蛋白(BCRP)表达的调控作用及温阳复元方的干预效应。方法:75只SD大鼠分为五组,假手术组和模型组予0.9%氯化钠溶液灌胃,余组予温阳复元方灌胃,miR-137模拟组和miR-137模拟对照组大鼠使用脑立体定位法分别将miR-137模拟剂和miR-137空载体注射到缺血侧MCA区,成模后再灌注24 h、7 d、14 d大鼠取材;评价各组大鼠的神经功能缺损评分以及TTC染色;分别通过RT-qPCR、Western blot检测各组大鼠脑组织中相关蛋白和mRNA的表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺陷评分较高(P<0.01);成模后大鼠脑组织出现明显的白色梗死灶。与模型组比较,温阳复元方组、miR-137模拟组和miR-137模拟对照组大鼠脑组织中miR-137以及TFR mRNA和蛋白表达量均明显降低,其中miR-137模拟组降低最为显著(P<0.01);同时,大鼠脑组织中BCRP mRNA和蛋白表达均明显升高,其中miR-137模拟组升高最为明显(P<0.01)。结论:miR-137可能通过下调TFR、上调BCRP的表达,从而达到对大鼠神经元的保护作用,温阳复元方能进一步增强其保护作用。

miR-137、Aβ、Tau蛋白与阿尔茨海默病认知功能、炎症因子及预后相关性

目的研究miR-137、β淀粉样蛋白(Aβ)、Tau蛋白与阿尔茨海默病认知功能、炎症因子及预后的相关性。方法前瞻性选取2020年1月至2022年1月南京医科大学第一附属医院诊治的87例阿尔茨海默病患者为研究对象,设为观察组,另选择同期健康体检的45名正常健康人为对照,设为对照组。比较两组研究对象miR-137、Aβ、Tau蛋白、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-17、简易精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、阿尔茨海默病评定量表-认知分量表(ADAS-cog)及日常活动能力量表(ADL)评分的差异。Pearson相关性分析miR-137、Aβ、Tau蛋白与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、MMSE、MoCA、ADAS-cog及ADL评分相关性。受试者工作曲线特征(ROC)分析miR-137、β淀粉样蛋白、Tau蛋白预测观察组患者预后不良的敏感度及特异度。结果观察组患者的miR-137、MMSE、MoCA、ADAS-cog、ADL评分分别为0.5±0.1、(17.3±2.1)分、(19.6±3.4)分、(8.4±1.6)分、(38.6±5.5)分,均显著低于对照组[0.9±0.3、(28.6±1.2)分、(27.9±1.7)分、(31.9±4.3)分、(77.2±8.7)分],Aβ、Tau蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17水平分别为(18.1±3.5)pg/mL、(16.4±2.7)μg/L、(26.4±2.6)pg/mL、(16.7±2.6)pg/mL、(12.5±2.1)pg/mL、(8.4±1.2)pg/mL,均显著高于对照组[(7.3±1.1)pg/mL、(1.1±0.3)μg/L、(3.1±0.4)pg/mL、(2.6±0.4)pg/mL、(2.1±0.5)pg/mL、(1.2±0.3)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组患者miR-137、Tau蛋白与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17均呈负相关(P<0.05),与MMSE、MoCA、ADAS-cog及ADL评分均呈正相关(P<0.05)。Aβ与TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17均呈正相关(P<0.05),与MMSE、MoCA、ADAS-cog及ADL评分均呈负相关(P<0.05)。miR-137预测观察组患者预后不良的截断值为0.4,敏感度为0.802,特异度为0.795;Aβ预测观察组患者预后不良的截断值为21.1 pg/mL,敏感度为0.814,特异度为0.831;Tau蛋白预测观察组患者预后不良的截断值为15.9μg/L,敏感度为0.767,特异度为0.815。结论阿尔茨海默病患者血清miR-137和Tau蛋白水平显著降低,Aβ水平显著升高,与炎症因子、认知功能及预后密切相关,可能在阿尔茨海默病炎症反应、认知功能及预后评估中具有一定价值。

miR-137通过调控血红素铁输出蛋白FLVCR、BCRP对大鼠I/R损伤的保护作用

目的探讨大鼠脑缺血/再灌注(I/R)后血红素铁输出蛋白猫白血病病毒C亚组受体(FLVCR)、乳腺癌抗性蛋白(BCRP)的表达变化及miR-137对其表达的调控作用。方法选取SD大鼠60只,随机分为假手术(SO)组、模型(MCAO/R)组、miR-137模拟物(Mimic)组、miR-137模拟对照(Mimic对照)组、miR-137抑制物(Inhibitor)组、miR-137抑制对照(Inhibitor对照)组,每组10只。采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分别于再灌注后12、24 h取材。通过qRT-PCR测定大鼠脑组织FLVCR、BCRP及miR-137的mRNA表达,免疫组化检测FLVCR、BCRP蛋白的表达水平。结果MCAO/R组大鼠神经功能缺损评分显著升高(P<0.01),Mimic组评分显著下降(P<0.01),Inhibitor组评分显著升高(P<0.05)。MCAO/R组miR-137 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),与Mimic对照组同时间比较,Mimic组miR-137 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),且24 h升高更显著(P<0.05);与Inhibitor对照组同时间比较,Inhibitor组miR-137 mRNA表达水平显著降低(P<0.05),且24 h降低更显著(P<0.05)。与SO组比较,MCAO/R组FLVCR mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组FLVCR mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高(P<0.05),24 h最高(P<0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组FLVCR mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01),在24 h降低更明显(P<0.05)。与SO组比较,MCAO/R组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与Mimic对照组比较,Mimic组BCRP mRNA及蛋白表达水平在12 h显著升高(P<0.01),24 h最高(P<0.05);与Inhibitor对照组比较,Inhibitor组BCRP mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论miR-137过表达可能促进FLVCR和BCRP的表达以保护大鼠脑缺血再灌注损伤。

miR-137-3p靶向MAX基因对前脂肪细胞3T3-L1成脂分化的影响

【目的】研究miR-137-3p在前脂肪细胞(3T3-L1)分化过程中的功能及作用机制。【方法】收集诱导分化第0、2、4、6和8天的3T3-L1细胞,利用实时荧光定量PCR检测miR-137-3p相对表达量;将miR-137-3p的模拟物(mimics)、抑制物(inhibitor)和阴性对照(NC)分别转染3T3-L1细胞并诱导成脂分化,油红O染色观察脂滴形成情况,利用实时荧光定量PCR检测成脂标志基因CAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、C/EBPβ、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)相对表达量,用Western blotting检测C/EBPβ、PPARγ和FABP4蛋白表达水平;利用TargetScan在线网站预测miR-137-3p的靶基因,比对候选靶基因3′-UTR区与miR-137-3p结合位点在不同物种间的序列保守性。分别将miR-137-3p mimics、NC与3′-UTR-WT和3′-UTR-Mut载体共转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验检测miR-137-3p与MYC相关因子X(MAX)基因的靶向关系。将siMAX、siNC转染3T3-L1细胞,利用实时荧光定量PCR检测C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ和FABP 4基因相对表达量,利用Western blotting检测C/EBPβ、PPARγ和FABP4蛋白表达水平。【结果】在3T3-L1细胞的成脂分化过程中,与第0天相比,第2、4、6和8天miR-137-3p相对表达量均极显著降低(P<0.01);与NC组相比,miR-137-3p mimics组脂滴明显减少、变小,C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ和FABP 4基因相对表达量极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),C/EBPβ、PPARγ和FABP4蛋白表达下调,miR-137-3p inhibitor组油红O观察结果、成脂分化标志基因mRNA和蛋白表达情况则与之相反。靶基因预测结果表明,MAX的3′-UTR区序列与miR-137-3p存在预测结合位点,且在不同物种间具有高度保守性。双荧光素酶报告试验显示,miR-137-3p mimics组3′-UTR-WT双荧光素酶活性极显著降低(P<0.01);与NC组相比,mimics组MAX基因表达水平极显著降低(P<0.01)、inhibitor组显著升高(P<0.05)。与siNC组相比,敲低MAX基因表达,脂滴明显减少、变小,C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ和FABP 4基因mRNA表达水平极显著下调(P<0.01),C/EBPβ、PPARγ和FABP4蛋白表达下降。【结论】内源性miR-137-3p在3T3-L1细胞的成脂分化过程中表达水平降低,miR-137-3p可能通过下调MAX基因的表达抑制3T3-L1细胞成脂分化。

血浆miR-137表达水平对奥氮平治疗精神分裂症疗效的预测价值

目的探讨血浆miR-137表达水平对奥氮平治疗精神分裂症(SZ)疗效的预测价值。方法选取杭州市第七人民医院2021年6月至2022年12月收治的SZ患者78例,均予奥氮平单药治疗4周。采用阳性与阴性症状量表(PANSS)评估临床疗效,qRT-PCR法测定治疗前后血浆miR-137表达水平。采用Pearson相关分析治疗4周后血浆miR-137表达水平与PANSS评分的相关性,ROC曲线分析血浆miR-137表达水平对奥氮平治疗SZ疗效的预测效能。结果78例SZ患者奥氮平治疗后PANSS总分及阳性症状、阴性症状、一般精神病理症状评分均明显低于治疗前(均P<0.05)。奥氮平治疗无效(PANSS减分率<50%)30例,有效(PANSS减分率≥50%)48例。有效组患者治疗后血浆miR-137表达水平较治疗前明显降低(P<0.05),而无效组患者治疗前后血浆miR-137表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。奥氮平治疗4周后血浆miR-137表达水平下降差值与PANSS总分、阳性症状评分及一般精神病理症状评分的减分值均呈正相关(r=0.495、0.493、0.373,均P<0.05)。血浆miR-137表达水平下降差值预测奥氮平治疗SZ疗效的AUC为0.875(95%CI:0.801~0.949),灵敏度为0.750,特异度为0.933,截断值为0.332。结论血浆miR-137表达水平能在一定程度上预测奥氮平治疗SZ的临床疗效。

老年腔隙性脑梗死患者血清微小RNA-377和微小RNA-137水平及临床意义

目的分析老年腔隙性脑梗死(LI)患者血清微小RNA(miR)-377、miR-137水平及临床意义。方法选择2021年2月至2022年12月哈励逊国际和平医院收治的老年LI患者248例作为LI组,另选择同期来我院体检的健康者110例作为健康组;根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将老年LI患者248例分为神经缺损组60例(≥2分)和无神经缺损组188例(<2分)。检测血清miR-377、miR-137水平;用Pearson相关性分析和Spearman相关性分析;logistic回归分析老年LI患者神经缺损影响因素;ROC曲线评估血清miR-377、miR-137水平对老年LI及神经缺损诊断的预测价值。结果LI组血清miR-377、miR-137水平低于健康组(P<0.01)。miR-377和miR-137联合评估老年LI的曲线下面积(AUC)为0.782(95%CI:0.735~0.824),高于二者单一检测(P<0.01)。神经缺损组脑动脉硬化、血红蛋白降低、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1、IL-6、IL-17、C反应蛋白(CRP)、改良的Rankin量表(mRS)评分高于无神经缺损组(P<0.05,P<0.01),血清miR-377、miR-137水平低于无神经缺损组(0.61±0.25 vs 0.89±0.28,0.61±0.24 vs 0.85±0.27,P<0.01)。血清miR-377与miR-137水平呈正相关(P<0.01);血清miR-377、miR-137水平与TNF-α、IL-6、CRP、mRS评分均呈负相关(P<0.01)。miR-377、miR-137、TNF-α、IL-6、CRP是老年LI患者神经缺损的影响因素(P<0.01)。miR-377、miR-137联合评估老年LI患者神经缺损的AUC为0.812(95%CI:0.758~0.859),高于二者单一检测(P<0.05,P<0.01)。结论血清miR-377、miR-137水平在老年LI及其神经缺损患者血清中表达较低,检测其水平具有一定临床预测价值。

LncRNAGAS5通过miR-137/SIRT6轴抑制糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其分子机制。方法通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射构建大鼠DCM模型,分为假手术(Sham)组和DCM组。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织的病理变化;Masson染色检测大鼠心肌纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测心肌组织LncRNA GAS5的表达情况。大鼠心肌细胞(H9c2)随机分为对照组、高糖组、高糖+GAS5组、高糖+miR-137 mimics组、高糖+miR-137 mimics+GAS5组、高糖+沉默调节蛋白6(SIRT6)组、高糖+SIRT6+miR-137 mimics组并进行相应处理。qRT-PCR检测LncRNA GAS5、miR-137的表达量;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、SIRT6蛋白表达量;流式细胞术检测细胞凋亡情况;细胞计数试剂盒8检测细胞活力;双荧光素酶报告基因实验验证LncRNAGAS5与miR-137、miR-137与SIRT6的靶向作用。结果HE染色和Masson染色结果显示,与Sham组相比,DCM组心肌细胞肥大,排列紊乱,胶原纤维增多,大量炎性细胞浸润。与Sham组比较,DCM组LncRNAGAS5表达降低(P<0.01)。与对照组比较,高糖组LncRNAGAS5表达水平随高糖培养时间延长逐渐降低(P<0.01)。与高糖组比较,高糖+GAS5组LncRNAGAS5表达量、细胞活力、Bcl-2表达增加(P<0.05);miR-137、细胞凋亡比例、Bax表达降低(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+miR-137 mimics组miR-137、Bax蛋白表达量、细胞凋亡率增加(P<0.05);细胞活力、SIRT6、Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05)。与高糖+miR-137 mimics组相比,高糖+GAS5+miR-137 mimics组细胞活力、Bcl-2表达增加(P<0.01);细胞凋亡比例、Bax表达降低(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+SIRT6组细胞活力、Bcl-2、SIRT6蛋白表达增加(P<0.01);细胞凋亡比例、Bax表达降低(P<0.01)。与高糖+SIRT6组比较,高糖+SIRT6+miR-137 mimics组细胞凋亡率、Bax蛋白表达量升高;细胞活力、Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实LncRNA GAS5和miR-137、miR-137和SIRT6存在靶向关系。结论过表达LncRNAGAS5可通过内源性竞争机制减少miR-137与SIRT6的结合,促进SIRT6表达抑制DCM大鼠心肌细胞凋亡。

miR-137基因与帕金森病的相关性研究进展

帕金森病(parkinson's disease,PD)是一种中老年人常见的神经退行性疾病,其病理特征是多巴胺能神经元的进行性损伤和缺失及神经元中路易氏体的形成,其中关于神经元缺失的理论包括线粒体功能障碍、炎症、蛋白质的异常和氧化应激。微小RNA-137(miR-137)是一种小的非编码调控RNA,在神经、精神系统疾病的发病机制中也发挥着重要作用。有研究表明miR-137在帕金森病患者的表达异常,并且可能与帕金森病的线粒体功能障碍、蛋白质的异常相关。进一步探究miR-137与帕金森病的关系对于帕金森病的发病机制具有重要意义,可能为帕金森病的治疗提供新方向。

黑色素细胞中过量表达miR-137对TYRP-1和TYRP-2的影响

【目的】证明miR-137通过调控MITF而间接影响小鼠黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2的表达,从而影响黑色素的生成。【方法】通过细胞转染技术在细胞水平过量表达miR-137,对黑色素细胞中黑色素含量进行了测定,经RT-PCR以及western blot检测转染后细胞TYRP-1和TYRP-2在mRNA和蛋白水平的变化。【结果】黑色素含量明显减少,在mRNA水平,TYRP1显著降低至0.4倍,TYRP-2显著降低至0.6倍。在蛋白水平,TYRP-1显著降低至0.61倍,TYRP-2显著降低至0.73倍。【结论】过量表达miR-137会通过调控MITF而使黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2的表达量降低,从而揭示了miR-137通过调节TYRP-1和TYRP-2的表达间接调控了黑色素的生成。

miR-137对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应及自噬的作用及机制研究

目的:探究miR-137在IL-1β诱导的软骨细胞炎症中的作用机制。方法:软骨细胞进行分组设置:Ctrl组、scramble组、IL-1β组、mimic组和mimic+IL-1β组进行探究。利用qRT-PCR检测各组软骨细胞中miR-137表达量,ELISA检测各组中BGP、ALP和IL-6、iNOS及TNF-α表达量;Western blot检测各组BMP2、CollagenⅠ和Beclin-1、P62及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达水平;免疫荧光检测细胞自噬相关分子表达和分布。结果:IL-1β组软骨细胞中miR-137表达受到明显抑制,BGP、ALP和BMP2、CollagenⅠ水平显著降低,而炎症因子IL-6、iNOS和TNF-α表达水平明显升高;同时自噬相关的Beclin-1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著上调而P62显著下调(P<0.01)。IL-1β+miR-137组中,BGP、ALP和BMP2、CollagenⅠ水平显著上调,而炎症因子表达水平下调;同时自噬相关分子表达水平得到显著改善(P<0.01)。结论:miR-137处理IL-1β诱导的软骨细胞后,可以有效降低软骨细胞的炎症反应和自噬反应,从而保护受损的软骨细胞免受损害。

血清miR-137在中枢性性早熟女童中的临床检测意义

目的:评价检测中枢性性早熟(CPP)女童血清mi R-137的临床意义。方法:收集2012年12月至2014年12月在我院门诊就诊的68例CPP女童及68例健康女童血清;培养HEK293细胞,荧光素酶活性分析验证mi R-137与KISS1结合情况;q RT-PCR检测mi R-137的表达;化学发光法检测血清黄体生成素、泌乳素、卵泡刺激素、促甲状腺素、游离甲状腺素、雌二醇水平;酶联免疫吸附试验检测血清吻素的表达。结果:mi R-137与KISS13′UTR结合;CPP女童血清中mi R-137降低,吻素水平升高,两者呈负相关;mi R-137与骨龄、骨龄年龄差呈负相关;Gn RH激发试验中,mi R-137与LH峰值、峰值/基础LH比值呈负相关。结论:mi R-137可与KISS13′UTR结合,可作为CPP辅助诊断的潜在生物学标志物。

小檗碱通过上调miR-137抑制APP表达调控阿尔茨海默病的发生发展

目的探讨小檗碱(BBR)调控微小RNA-137(miR-137)/淀粉样蛋白前体蛋白(APP)的表达治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法利用β淀粉样蛋白25~35(Aβ_(25~35))诱导人SK-N-SH神经细胞瘤细胞建立AD细胞损伤模型,用不同浓度(10、20、40、80μmol/L)的BBR处理SK-N-SH细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹检测BBR对miR-137、APP表达的影响;检测miR-137过表达对Aβ_(25~35)诱导的SK-N-SH细胞活力及凋亡的影响;双荧光素酶报告基因检测验证miR-137与APP的靶向调控作用;抑制miR-137的表达验证BBR对Aβ_(25~35)诱导的SK-N-SH细胞活力和凋亡的影响。结果BBR能够明显抑制Aβ_(25~35)诱导的SK-N-SH细胞活力下降(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05);BBR能够上调SK-N-SH细胞miR-137的表达(P<0.05),下调SK-N-SH细胞APP的表达(P<0.05);miR-137过表达可提高SK-N-SH细胞活力(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05);miR-137过表达可抑制含miR-137结合位点荧光报告载体的活性(P<0.05),将结合位点突变后抑制作用消失;抑制miR-137的表达可通过负向调控APP的表达而逆转BBR对SK-N-SH细胞活力及凋亡的影响。结论BBR可通过上调miR-137的表达及下调APP的表达从而对AD模型细胞发挥保护作用,最终达到治疗AD的目的。

AEG-1抑制miR-137对非小细胞肺癌增殖调控作用

目的探讨AEG-1在miR-137抑制非小细胞肺癌（NSCLC）增殖中的作用及机制。方法 收集2013年2月-2014年5月在本院手术治疗的65例NSCLC患者肿瘤标本,提取RNA,qRT-PCR检测NSCLC组织、A549、H460及16HBE细胞中miR-137与AEG-1的表达,统计分析NSCLC组织中miR-137与胶质细胞上调基因1（AEG-1）表达的相关性;将A549细胞根据不同转染试剂分成4组：转染miR-137 mimics及空载体组,转染miR-137mimics及AEG-1表达载体组,转染miR-137 inhibitor及siRNA无关序列组,转染miR-137 inhibitor及AEG-1 siRNA组。用Lipofectamine 2000进行转染,生长曲线实验检测转染后细胞增殖情况。结果 在NSCLC组织中miR-137与AEG-1的表达呈负相关;miR-137表达高的NSCLC细胞中AEG-1表达降低;共同转染miR-137 mimics与AEG-1过表达载体的A549细胞在48 h的细胞数高于对照组,而共同转染miR-137 inhibitor与AEG-1 siRNA的A549细胞在48 h、72 h的细胞数低于对照组。结论 miR-137与AEG-1在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;AEG-1逆转miR-137对NSCLC细胞增殖的作用。

咪达唑仑上调miR-137影响胃癌细胞的增殖、凋亡的机制研究

目的:探讨咪达唑仑(MID)对胃癌细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:以胃癌HGC-27细胞为研究对象,采用不同浓度的MID处理,采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞的凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测微小RNA(miR)-137的表达量;miR-137 mimics转染至HGC-27细胞,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-caspase-3)蛋白表达。结果:MID可降低细胞存活率、增高细胞凋亡率、促进miR-137与C-caspase-3的表达(P<0.05);miR-137过表达可降低细胞存活率、增加细胞凋亡率、抑制CyclinD1表达、促进C-caspase-3表达(P<0.05);抑制miR-137的表达可减弱MID对HGC-27细胞增殖及凋亡的作用。结论:MID可通过上调miR-137的表达从而抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

miR-137靶向下调SETD7表达对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激的影响研究

目的探讨miR 137对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的作用及其机制。方法心肌细胞H9C2分为空白组、缺氧复氧组、缺氧复氧组+miR con、缺氧复氧+miR 137组、缺氧复氧+miR 137+pcDNA组、缺氧复氧+miR 137+pcDNA SETD7组。qPCR检测H9C2细胞中miR 137和SETD7 mRNA表达,Western blot检测SETD7、Cyclin D1、Cleaved Caspase 3蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,比色法检测LDH、MDA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,TargetScan预测结合双荧光素酶报告实验分析miR 137和SETD7的靶向关系。结果缺氧复氧明显降低H9C2细胞中miR 137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),显著提高SETD7 mRNA及蛋白水平、LDH活性、MDA含量、Cleaved Caspase 3蛋白水平和细胞凋亡率(P<0.05)。上调miR 137表达促进缺氧复氧处理H9C2细胞内miR 137、Cyclin D1表达量和细胞存活率(P<0.05),明显降低SETD7蛋白、LDH、MDA、Cleaved Caspase 3水平和细胞凋亡率(P<0.05)。miR 137靶向调控SETD7表达。过表达SETD7部分逆转miR 137保护缺氧复氧处理H9C2细胞的作用。结论miR 137通过靶向下调SETD7表达来促进缺氧复氧处理的心肌细胞增殖并抑制细胞凋亡,保护缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤。

miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的研究miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响。方法采用miR-137模拟物转染至肾癌GRC-1细胞,实验分为未转染组(未进行miR-137模拟物转染)、miR-137对照组(转染随机序列)、miR-137转染组(进行miR-137模拟物转染)。荧光定量PCR检测各组转染后48h细胞中miR-137表达水平,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞检测技术与免疫荧光评价miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响。结果转染miR-137模拟物48h后,荧光定量PCR检测发现未转染组、miR-137对照组及miR-137转染组GRC-1细胞中miR-137的相对表达量依次为(24.43±2.03)%、(26.57±2.55)%、和(73.30±3.29)%,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT细胞增殖实验与流式细胞仪检测结果显示,与未转染组、miR-137对照组相比,miR-137转染组转染48h后肾癌GRC-1细胞的增殖率显著降低,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),而未转染组、miR-137对照组肾癌GRC-1细胞的增殖率、凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.02)。结论 miR-137可明显抑制肾癌GRC-1细胞增殖和促进其凋亡,故有望成为肾癌基因治疗的新靶点。

miR-137基因rs1625579多态性与精神分裂症发病风险的Meta分析

目的系统评价mi R-137 rs1625579位点基因多态性与精神分裂症发病风险的关系。方法计算机检索Pub Med、Embase、Springer Link、Wiley Online Library、High Wire Press、Google Scholar和CNKI数据库以获取2015年8月之前发表的关于mi R-137单核苷酸多态位点rs1625579基因多态性与精神分裂症发病的病例对照研究文献,采用Review Manager5.0和Stata12.0统计软件进行统计分析。结果最终纳入8篇,mi R-137基因rs1625579位点多态性与精神分裂症在显性模型(TT+GT vs GG)、隐性模型(TT vs GT+GG)、加性模型(TT vs GG)和等位基因模型(T vs G)分析中差异有统计学意义(P<0.05)。合并OR值分别为1.47、1.21、1.53、1.17;P值分别为0.03、0.001、0.02、0.003。结论 mi R-137单核苷酸多态性位点rs1625579与精神分裂症的易感性均具显著相关,为mi R-137多态性与精神分裂症关联性的研究提供了理论参考。

MIR-137对细胞自噬的调控作用及机制探讨

目的探讨MIR-137对细胞自噬的调控作用及机制。方法选择U87细胞株作为实验材料,通过细胞培养、MIR-137慢病毒与拮抗剂转染、D-hank’s液饥饿诱导细胞自噬、细胞蛋白提取、western blot检测、RT-PCR检测等实验步骤,检测U87细胞中的MIR表达水平、各组细胞中的GFP-LC3Ⅱ阳性细胞率、自噬标记蛋白LC3Ⅱ与SQSTM1表达量、ATG7基因及蛋白表达量、重组ATG7质粒与MIR-137慢病毒和拮抗剂分别共转染后的U87细胞中的ATG7表达水平及饥饿诱导下的各组细胞中的LC3Ⅱ与SQSTM1表达量。结果MIR-137慢病毒与拮抗剂转染使MIR-137表达量分别有显著的上调与下调(P<0.01);饥饿诱导下U87自噬活动加剧,对MIR-137表达水平无明显影响(P>0.01);MIR分别转染慢病毒与拮抗剂后,LC3Ⅱ蛋白表达量分别有明显的下调与上调现象(P<0.01),SQSTM1蛋白表达量则有显著的上调与下调现象(P<0.01);MIR分别转染慢病毒与拮抗剂后,ATG7基因表达量分别有显著的下调与上调现象(P<0.01);重组ATG7质粒与MIR-137慢病毒共转染显著上调了U87细胞中的ATG7表达水平(P<0.01),ATG7的再表达显著降低了MIR-137在细胞自噬活动中的调控作用(P<0.01)。结论MIR-137对于细胞自噬有重要的调控作用,ATG7是其作用靶点之一,通过调控U87细胞中的ATG7基因及蛋白表达抑制饥饿诱导下的细胞自噬活动。