安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其可能作用机制。方法采用β淀粉样蛋白_(25-35)诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型,将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组),采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达,Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果与空白组比较,模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低,凋亡率明显增加,LDH活性和MDA含量明显增加,SOD和GSH-Px活性明显降低,miR-103a-3p mRNA表达明显升高,p-Tau蛋白表达明显升高,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,安神定志方组和联合组PC12细胞各时点细胞活力明显升高,凋亡率明显降低,LDH活性和MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显增加,miR-103a-3p mRNA表达明显降低,p-Tau蛋白表达明显降低,BDNF、p-TrkB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论安神定志方能通过下调miR-103a-3p表达激活BDNF/TrkB信号通路,从而抑制Tau蛋白磷酸化,发挥对PC12细胞的保护作用。

LncRNA NEAT1通过靶向miR-103a-3p/SDF2轴调节滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭

目的:探讨lncRNA NEAT1在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达及对滋养层细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测lncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中的表达,将人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo随机分为对照(control)组、pcDNA-NC组、pcDNA-NEAT1组、si-NC组、si-NEAT1组、si-NEAT1+inhibitor NC组、si-NEAT1+miR-103a-3p inhibitor组,分别检测各组HTR-8/SVneo细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,Western blot检测SDF2蛋白表达。双荧光素酶报告基因验证LncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p的靶向关系。结果:LncRNA NEAT1在PE患者胎盘组织中表达水平升高。与pcDNA-NC组比较,pcDNA-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著升高,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-NEAT1组lncRNA NEAT1表达、SDF2蛋白表达、细胞凋亡率显著降低,miR-103a-3p表达及细胞增殖活性、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05)。下调miR-103a-3p表达可明显减弱沉默lncRNA NEAT1表达对HTR-8/SVneo细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用,并增加细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示,lncRNA NEAT1、SDF2与miR-103a-3p有靶向关系。结论:LncRNA NEAT1在PE胎盘组织中高表达,沉默lncRNA NEAT1表达可通过上调miR-103a-3p,抑制SDF2表达,促进滋养层细胞增殖与侵袭。

MiR-103a通过TAK1介导的NF-κB信号通路保护炎症诱导的心肌细胞损伤的研究

目的研究miR-103a表达对炎症诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响,并探讨其分子机制与转化生长因子β活化激酶1(TAK1)及其介导的NF-κB信号通路的关系。方法通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理H9C2细胞建立炎症诱导的H9C2心肌细胞凋亡体外模型。将不同处理的H9C2细胞分为对照组、TNF-α组、TNF-α+miR-nc组、TNF-α+miR-103a组、TNF-α+si-nc组、TNF-α+si-TAK1组、miR-nc+AAV-nc组和miR-103a+AAV-TAK1组。对照组不进行任何处理,其他各组(除TNF-α组外)细胞均进行转染,并经20μg/mL TNF-α处理24 h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡和CCK-8试剂盒检测细胞活性。通过caspase 3、8和9试剂盒测定凋亡相关蛋白caspase 3、8和9蛋白表达。qRT-PCR检测miR-103a表达,免疫印迹检测TAK1、NF-κB和p-NF-κB蛋白表达。结果与对照组比较,TNF-α组H9C2细胞中miR-103a表达显著降低,TAK1蛋白表达显著升高。过表达miR-103a或敲低TAK1均可显著下调TNF-α诱导的H9C2细胞凋亡(P<0.05),并显著下调caspase 3、8和9蛋白表达(P<0.05)。双荧光素酶基因报告系统检测结果显示:miR-103a靶向抑制H9C2细胞中TAK1表达。过表达miR-103a或下调TAK1均显著降低NF-κB的磷酸化(P<0.05),而过表达TAK1显著降低miR-103a过表达对TNF-α诱导的H9C2细胞凋亡的抑制作用和对NF-κB的磷酸化的抑制作用。结论TNF-α处理H9C2心肌细胞下调miR-103a和上调TAK1蛋白表达,miR-103a可通过靶向抑制TAK1而抑制NF-κB信号通路的激活,最终抑制TNF-α诱导的H9C2心肌细胞凋亡。

MiR-103a通过靶向SMAD7调控炎症因子对小鼠类风湿关节炎的影响

目的 分析miR-103a在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)中发挥的作用及相关机制,并探讨其成为RA治疗靶点的可能性。方法 首先,利用RT-qPCR观察miR-103a在30例RA患者和30例健康人群中的表达水平。然后,将40只小鼠随机分为对照组、骨胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis, CIA)模型组、CIA+miR-103a敲低组及空载体组,每组各10只。建模成功后,RT-qPCR检测各组小鼠血清中miR-103a的表达水平,并在miR-103a敲低组小鼠双后肢骨关节处注射含10μl miRNA-103a抑制载体的慢病毒悬液。评价各组小鼠关节组织评分,并检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、IL-6和IL-1β表达水平。最后,使用生物信息学软件预测miR-103a的下游靶mRNA,并通过双荧光素酶报告系统进行验证。结果 MiR-103a在RA患者血清中呈异常高表达状态。MiR-103a在小鼠CIA模型中的表达水平显著高于对照组,且沉默miR-103a能够显著降低CIA模型小鼠的足趾肿胀程度、关节组织评分以及血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平;双荧光素酶报告结果证实SMAD7是miR-103a下游靶基因。此外,与CIA模型组相比,miR-103a沉默组CIA小鼠中SMAD7的表达水平显著上调。结论 MiR-103a通过靶向抑制SMAD7的表达促进小鼠类风湿关节炎的发生发展,有望成为RA的临床治疗靶点。

血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平联合检测诊断精神分裂症的效能

目的:分析血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平联合检测诊断精神分裂症的效能。方法:回顾性分析2021年3月至2023年3月该院收治的120例首发精神分裂症患者的临床资料作为研究组,另选取同期该院60名健康体检者作为对照组,根据研究组阳性和阴性症状量表(PANSS)评分中位数(58分)将其分为高分组(>58分)58例、低分组(≤58分)62例。比较两组及高分组与低分组miR-30b、miR-103a、miR-181c水平,采用Pearson相关性分析血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平与PANSS评分的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平单项及联合检测诊断精神分裂症的效能。结果:研究组miR-30b、miR-103a水平均低于对照组,miR-181c水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);高分组miR-30b、miR-103a水平均低于低分组,miR-181c水平高于低分组,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,miR-30b、miR-103a水平与PANSS评分均呈负相关(r<0,P<0.05),miR-181c水平与PANSS评分呈正相关(r>0,P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平单项及联合检测诊断精神分裂症的曲线下面积分别为0.776、0.687、0.736、0.897,均具有诊断价值,且联合检测诊断价值高于三者单项检测。结论:血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平联合检测诊断精神分裂症的效能高于三者单项检测,血清miR-30b、miR-103a水平与PANSS评分均呈负相关,血清miR-181c水平与PANSS评分呈正相关。

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨mi R-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,q RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中mi R-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM3000将mi R-103a-3p mimic、mimic NC、mi R-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,q RT-PCR检测mi R-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。结果 mi R-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01);q RT-PCR结果显示,转染mi R-103a-3p mimic组细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染mi R-103a-3p inhibitor组细胞中mi R-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。结论 mi R-103a-3p在肺癌组织中低表达,mi R-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

lncRNA NEAT1/miR-103a/STAMBPL1轴对胃癌细胞增殖和侵袭的调控作用

目的探讨长链非编码RNA NEAT1(lncRNA NEAT1)在胃癌组织和细胞中的表达,以及其通过调控miR-103a/STAMBPL1轴对胃癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用qRT-PCR法检测胃癌组织及癌旁组织中lncRNA NEAT1的表达水平;采用qRT-PCR法检测人正常胃上皮GES-1细胞及胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中lncRNA NEAT1的表达水平。胃癌细胞SGC-7901和BGC-823中分别转染si-NEAT1(si-NEAT1组)和si-NC(si-NC组)。采用CCK-8法和Transwell检测细胞增殖和侵袭;采用qRT-PCR和Western blot法分别测定胃癌细胞中miR-103a mRNA和STAMBPL1蛋白的表达变化。结果与癌旁正常组织或正常细胞GES-1相比,lncRNA NEAT1在胃癌组织及胃癌SGC-7901和BGC-823细胞中表达水平明显增加(P<0.05)。与si-NC组相比,si-NEAT1组中胃癌SGC-7901和BGC-823细胞增殖和侵袭能力明显减少(P<0.05),miR-103a mRNA水平增高以及STAMBPL1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1在胃癌中可能通过调控miR-103a/STAMBPL1信号途径改变胃癌细胞增殖及侵袭的能力。

安神定志方对阿尔茨海默病大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响

目的观察安神定志方对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响,探讨其相关作用机制。方法通过GEO数据库筛选AD海马组织差异表达miRNA。50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、miR-103a-3p mimic组、安神定志方组和miR-103a-3p mimic+安神定志方组,每组10只,采用Aβ1-42侧脑室注射制备AD大鼠模型。造模后各给药组给予相应药物干预4周。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马组织形态,RT-PCR检测海马组织miR-103a-3p基因的表达,Western blot和免疫组化检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)及Tau蛋白的表达。结果通过GEO数据库共筛选出34个差异miRNA,其中17个上调、17个下调。与模型组比较,安神定志方显著增加AD大鼠跨越平台次数和有效停留时间,减少逃避潜伏期,改善海马CA1区组织形态,上调BDNF的表达,抑制miR-103a-3p、p-TauSer396和p-TauThr231的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论安神定志方可能通过抑制海马组织miR-103a-3p的表达进而促进BDNF的表达,调控Tau蛋白的磷酸化水平,从而促进AD大鼠学习记忆能力。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞凋亡的机制研究

目的探讨LncRNA FGD5-AS1靶向miR-103a-3p对IL-1β诱导的关节软骨细胞损伤及细胞凋亡的影响与分子机制。方法体外培养大鼠关节软骨细胞,分为NC组、IL-1β组(IL-1β浓度为10 ng/mL)。采用qRT-PCR检测细胞中FGD5-AS1、miR-103a-3p的表达水平。分别将pcDNA-FGD5-AS1、miR-103a-3p mimics转染至软骨细胞,随后使用IL-1β处理48 h。采用ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-8水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-103a-3p的靶向关系;Western blot检测Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达量。结果与NC组相比,IL-1β组软骨细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),miR-103a-3p、Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),IL-6、TNF-α、IL-8水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05);FGD5-AS1过表达后可明显降低IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、p-IκBα水平(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),抑制Bax、Cyt C、Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实FGD5-AS1靶向结合miR-103a-3p并可负向调控miR-103a-3p的表达(P<0.05);miR-103a-3p过表达可明显逆转FGD5-AS1过表达对细胞凋亡及炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论LncRNA FGD5-AS1可通过靶向负调控miR-103a-3p的表达从而抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞炎症反应及细胞凋亡,其作用机制可能通过抑制NF-κB信号通路激活有关。

miR-103a-3p在胰腺癌细胞中的表达及意义

目的:观察mi R-103a-3p抑制表达的慢病毒载体对高表达mi R-103a-3p的PANC-1胰腺癌细胞株的表达抑制作用,为阐明胰腺癌的发病机制及筛选治疗靶基因提供理论依据。方法:采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测不同侵袭能力的胰腺癌细胞株(PANC-1、Bx PC-3)和永生化正常胰腺细胞(H6C7)中mi R-103a-3p表达情况;构建慢病毒载体mi R-103a-3p-inhibitor,包装后感染高表达mi R-103a-3p的PANC-1细胞株,荧光显微镜观察其转染效率,q RT-PCR检测其表达情况。结果:q RT-PCR检测显示,mi R-103a-3p在PANC-1、Bx PC-3细胞及正常胰腺细胞H6C7细胞中相对表达量分别为(4.949±0.130)、(1.417±0.120)和(1.010±0.151),PANC-1表达水平最高(P<0.05)。mi R-103a-3p-inhibitor慢病毒感染PANC-1细胞第4天,荧光显微镜下可见报告基因绿色荧光蛋白(GFP)高强度表达。q RT-PCR结果显示:mi R-103a-3p相对表达量在未感染mi R-103a-3p-inhibitor慢病毒的PANC-1组(1.002±0.160)与阴性病毒感染的PANC-1组(0.956±0.250)间差异无显著性,但慢病毒感染的PANC-1组的相对表达量(0.317±0.320)显著下降(P<0.05)。结论:mi R-103a-3p在侵袭能力较强的胰腺癌细胞株中表达增高,mi R-103a-3p-inhibitor能稳定转染PANC-1细胞系并抑制其mi R-103a-3p表达。

Linc00152靶向miR-103a-3p对膀胱癌细胞放射敏感性和增殖、凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA Linc00152(LncRNA Linc00152)影响膀胱癌细胞放射敏感性、增殖及凋亡的分子机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌组织中Linc00152的表达;采用RNA干扰技术抑制膀胱癌BIU-87细胞中Linc00152的表达,利用脂质体转染技术上调miR-103a-3p的表达。应用双荧光素酶报告实验验证Linc00152与miR-103a-3p是否存在靶向作用。噻唑蓝(MTT)法检测转染后各组细胞增殖活性;流式细胞术检测转染后各组细胞凋亡情况;克隆形成实验检测放射照射后细胞存活分数及放射敏感性;Western印迹检测细胞中Cyclin D1、Bcl-2、P21、Bax表达。结果膀胱癌组织中Linc00152的相对表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。与si-NC组比较,si-Linc00152组膀胱癌BIU-87细胞活性显著降低,而细胞凋亡率显著升高,并可促进P21、Bax表达,而抑制Cyclin D1、Bcl-2表达(均P<0.05),miR-103a-3p过表达对膀胱癌BIU-87细胞具有相同作用。克隆形成试验结果显示,与阴性对照组比较,在膀胱癌BIU-87细胞中miR-103a-3p组与si-Linc00152组的放射增敏比分别为1.879、1.740,细胞存活分数均显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示Linc00152可竞争性结合miR-103a-3p并可负向调控其表达。抑制miR-103a-3p表达并抑制Linc00152表达可促进BIU-87细胞增殖及存活,而抑制细胞凋亡。结论抑制Linc00152表达可通过上调miR-103a-3p表达进而抑制膀胱癌细胞增殖及促进其凋亡,并可增强细胞放射敏感性。

血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量对帕金森病的诊断效能

目的评价血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量在帕金森病中的诊断效能。方法采用RTPCR法检测90例帕金森病患者(观察组)及24例健康人(对照组)外周血清中miR-103a、miR-30b、miR-29a。采用受试者工作曲线法观察血清miR-103a、miR-30b、miR-29a用于诊断帕金森病的效能。结果观察组外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量分别为1.12±0.10、1.57±0.37、1.23±0.09,对照组分别为0.43±0.03、0.97±0.07、0.51±0.04,观察组外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量均高于对照组,P均<0.05。外周血清miR-103a诊断帕金森病的AUC为0.816,选择0.715为诊断阈值时约登指数最大,此时外周血清miR-103a诊断帕金森病的灵敏度为71.3%,特异度为83.9%。外周血清miR-30b诊断帕金森病的AUC为0.789,选择1.120为诊断阈值时约登指数最大,此时外周血清miR-30b诊断帕金森病的灵敏度为70.5%,特异度为84.6%。外周血清miR-29a诊断帕金森病的AUC为0.756,选择1.001为诊断阈值时约登指数最大,此时外周血清miR-29a诊断帕金森病的灵敏度为72.1%,特异度为80.8%。结论帕金森病患者外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量升高。外周血清miR-103a、miR-30b、miR-29a相对表达量在帕金森疾病中的诊断效能好。

血清循环miR-103a-2在非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义

目的探讨miR-103作为非侵袭性生物学标志物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)代谢异常的筛查意义。方法以健康人群和NAFLD患者为研究对象,采集血清样本进行生化指标检测。采用Nucleo ZOL法分离血清miRNA,SYBR Green法对miR-103a-2进行相对定量分析。Speraman法对miR-103a-2和生化指标进行相关性分析。结果血清学分析结果显示,与健康人对照组相比,NAFLD组TC(P<0.01)、TG(P<0.01)、ALT(P<0.01)和γ-GGT(P<0.01)水平均明显升高。与血脂正常NAFLD组相比,高脂血症NAFLD组中TC(P<0.01)、TG(P<0.01)和LDL-C(P<0.05)水平均明显升高,与健康人对照组相比,血脂正常NAFLD患者(P<0.05)和伴有高血脂症NAFLD患者(P<0.01)血清miR-103a-2表达水平均升高。血清miR-103a-2水平与血清TC水平呈正相关(r=0.495,P=0.001)。结论血清miR-103a-2较血脂更为敏感,可能成为NAFLD无创性筛查指标。

鸢尾苷元调控miR-103a-3p/SHC3通路对帕金森病模型细胞损伤的影响

目的探讨鸢尾苷元对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型细胞损伤的影响,分析其是否与调控miR-103a-3p/含有Src同源结构域2的衔接蛋白3(SHC adaptor protein 3,SHC3)通路有关。方法用250 mmol/L的1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP^(+))诱导PC12建立PD细胞模型。PC12细胞分为对照组、PD组、PD+鸢尾苷元50μmol/L组、PD+鸢尾苷元100μmol/L组、PD+鸢尾苷元200μmol/L组、PD+anti-miR-NC组、PD+miR-103a-3p Inhibitor组、PD+鸢尾苷元+miR-103a-3p mimic组。CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术分析各组细胞凋亡率,试剂盒检测各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量,RT-qPCR检测miR-103a-3p表达,Werstern blot检测SHC3蛋白水平。双荧光素酶报告实验分析miR-103a-3p和SHC3靶向关系。结果与对照组比较,PD组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量、miR-103a-3p表达显著升高(P<0.05)。与PD组比较,PD+鸢尾苷元50μmol/L组、PD+鸢尾苷元100μmol/L组、PD+鸢尾苷元200μmol/L组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著升高(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量、miR-103a-3p表达显著降低(P<0.05)。与PD+anti-miR-NC组比较,PD+miR-103a-3p Inhibitor组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著升高(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量显著降低(P<0.05)。与PD+鸢尾苷元组比较,PD+鸢尾苷元+miR-103a-3p mimic组PC12细胞活力、SOD活性、SHC3蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率、MDA水平、LDH释放量显著升高(P<0.05)。miR-103a-3p与SHC3直接结合。结论鸢尾苷元可保护PD模型细胞凋亡和氧化损伤,其机制与抑制miR-103a-3p/SHC3通路有关。

circMAT2B靶向miR-103a-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的探讨环状RNA MAT2B(circular RNA MAT2B,circMAT2B)靶向微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,采用高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型(HG组),正常培养的HK-2细胞记为Con组;si-NC、si-circMAT2B、miR-NC、miR-103a-3p mimics、si-circMAT2B与anti-miR-NC、si-circMAT2B与anti-miR-103a-3p分别转染入HK-2细胞后加入25 mmol/L葡萄糖处理细胞(HG+si-NC组、HG+si-circMAT2B组、HG+miR-NC组、HG+miR-103a-3p组、HG+si-circMAT2B+anti-miR-NC组、HG+si-circMAT2B+anti-miR-103a-3p组);采用定量反转录聚合酶链式反应法检测circMAT2B与miR-103a-3p的表达量;采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测circMAT2B与miR-103a-3p的靶向关系。结果与Con组比较,HG组circMAT2B的表达水平与凋亡率升高(P<0.05),IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),miR-103a-3p的表达水平降低(P<0.05);与HG+si-NC组比较,HG+si-circMAT2B组IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);circMAT2B能够吸附miR-103a-3p而靶向调控其表达;与HG+miR-NC组比较,HG+miR-103a-3p组IL-6、TNF-α的水平与Bax蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);与HG+si-circMAT2B+anti-miR-NC组比较,HG+si-circMAT2B+anti-miR-103a-3p组IL-6、TNF-α的水平升高(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05)。结论抑制circMAT2B表达可通过负向调控miR-103a-3p的表达而抑制细胞炎症因子的分泌及凋亡从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

首发精神分裂症患者血清miR-103a和BDNF的表达及临床意义

目的检测首发精神分裂症(FES)患者血清中miR-103a、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达情况,探讨二者在FES中的作用及关系。方法选取2016-08~2017-09本院69例FES患者作为研究对象,同期选取70例健康体检者作为对照组。应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测血清中miR-103a表达水平,应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中BDNF表达水平,获得阳性与阴性症状量表(PANSS)、威斯康星卡片分类测验(WCST)评分,并分析FESF患者血清中miR-103a与BDNF相关性及两者与PANSS评分、WCST评分的相关性。结果两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),FES组患者血清中miR-103a水平比对照组高,BDNF水平比对照组低(P<0.05),两者呈负相关(P<0.05)。FES患者miR-103a水平与PANSS评分中攻击危险性、WCST评分中错误应答数、非持续性错误数呈正相关(P<0.05),BDNF水平与PANSS评分中PANSS阴性、WCST评分中错误应答数、持续性错误数、非持续性错误数呈负相关(P<0.05)。结论在两组一般资料无明显差异情况下,FES患者血清中miR-103a高表达、BDNF低表达,两者呈负相关,且两者与认知能力相关指标关系密切。

miR-103a-3p靶向RCAN1对MPP^+诱导的帕金森病细胞模型损伤的影响及机制研究

目的研究miR-103a-3p对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型损伤的影响和机制。方法采用不同浓度MPP+作用于SK-N-SH细胞24 h,细胞计数(CCK-8)试剂盒检测细胞存活情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,确定MPP+浓度,建立PD细胞模型。RT-qPCR检测PD细胞模型miR-103a-3p和钙调蛋白1(RCAN1)表达。将miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)、RCAN1小干扰RNA分别转染SK-N-SH细胞,经MPP+处理24 h,采用CCK-8和流式细胞术分别检测SK-N-SH存活和凋亡情况。Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-103a-3p对RCAN1的靶向调控作用。将miR-103a-3p mimics与RCAN1过表达载体共转染SK-N-SH细胞,经MPP+处理24 h,检测细胞存活和凋亡情况。结果0.1、0.2、0.4 mmol/L的MPP+处理后SK-N-SH细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。选择0.2 mmol/L MPP+建立PD细胞模型。PD细胞模型中miR-103a-3p的表达显著降低,RCAN1 mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.01)。过表达miR-103a-3p或干扰RCAN1表达后,MPP+诱导的SK-N-SH细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1蛋白的表达显著升高,Cleaved-caspase-3蛋白的表达显著降低(P<0.01)。miR-103a-3p mimics和WT-RCAN1共转染组SK-N-SH细胞荧光素酶活性高于miR-NC和WT-RCAN1共转染组(P<0.01)。与过表达miR-103a-3p比较,同时过表达miR-103a-3p和RCAN1后MPP+诱导的SK-N-SH细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1蛋白的表达显著降低,Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论在PD细胞模型中,过表达miR-103a-3p通过靶向RCAN1可减轻MPP+引起的SK-N-SH细胞存活抑制和凋亡。miR-103a-3p和RCAN1是PD的潜在治疗靶点。

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P<0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P<0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P<0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。

MiR-103a-3p靶向FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、 凋亡的分子机制

目的:研究miR-103a-3p对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:运用RT-q PCR法检测甲状腺癌细胞SW579,FTC-133及人甲状腺上皮细胞TEC中miR-103a-3p、脂筏结构蛋白2(FLOT2)的表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-103a-3p mimics(miR-103a-3p组)、anti-miR-NC(anti-miRNC组)、anti-miR-103a-3p(anti-miR-103a-3p组)、si-NC(si-NC组)、si-FLOT2(si-FLOT2组)、miR-103a-3p+pc DNAmimics(miR-103a-3p+pc DNA组)、miR-103a-3pmimics+pc DNA-FLOT2(miR-103a-3p+pc DNA-FLOT2组)用脂质体法转染至SW579细胞。蛋白质印迹法检测细胞中FLOT2、多肿瘤抑制基因(P16)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADPr i bose)poly merase,PA R P]、裂解的PA R P(cleaved-PA R P)、半胱天冬酶-3的前体(pro-caspase-3)、裂解的半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与人甲状腺上皮细胞TEC相比,甲状腺癌细胞中miR-103a-3p的表达明显下调,FLOT2的表达明显上调(P<0.05);过表达miR-103a-3p、敲减FLOT2均可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡;miR-103a-3p明显抑制野生型FLOT2细胞的荧光活性,且负向调控FLOT2的表达;过表达FLOT 2逆转miR-103a-3p对甲状腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:miR-103a-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向FLOT2相关,可为甲状腺癌的治疗提供参考。

miR-103a-3p过表达靶向负调控PDK4抑制胶质瘤生长及侵袭

目的探讨miR-103a-3p过表达对胶质瘤C6细胞恶性生物学行为的影响及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法体外培养鼠源性C6胶质瘤细胞,转染miR-103a-3p mimics质粒过表达miR-103a-3p,转染miR-103a-3p mimics+pcDNA-PDK4质粒分析PDK4过表达对miR-103a-3p过表达的影响;EDU法检测细胞增殖活性;qRT-PCR检测miR-103a-3p、PDK4 mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;免疫印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin蛋白表达水平。取40只裸鼠,其中20只皮下注射未转染质粒的C6细胞、20只皮下注射转染miR-103a-3p mimics质粒的C6细胞构建移植瘤模型,分析miR-103a-3p mimics过表达对移植瘤生长的影响。结果生物信息学及双荧光素酶试验证实PDK4是miR103a-3p的靶点。过表达miR-103a-3p明显降低C6细胞PDK4、Ki67、PCNA、N-cadherin、vimentin表达水平(P<0.05),明显抑制C6细胞增殖活性、侵袭能力(P<0.05),明显增加C6细胞E-cadherin表达水平、细胞凋亡率(P<0.05)。过表达PDK4明显抑制过表达miR-103a-3p对C6胶质瘤细胞的作用(P<0.05)。过表达miR-103a-3p明显抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.05),抑制肿瘤组织PDK4、Ki67、vimentin表达(P<0.05)。结论过表达miR-103a-3p通过靶向抑制PDK4表达,一方面抑制胶质瘤细胞增殖、促进胶质瘤细胞凋亡,从而抑制胶质瘤生长;另一方抑制胶质瘤上皮-间质转化过程,从而抑制胶质瘤细胞侵袭。