丁香苷通过调节miR-124-3p/MAPK14轴对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺组织损伤的影响

目的:探讨丁香苷通过调节miR-124-3p/丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)轴对急性呼吸窘迫综合征(ARDS大鼠肺组织损伤的影响。方法:采用气管内滴注LPS(1 mg/kg,500μl)法构建ARDS大鼠模型,并将建模成功的大鼠分为ARDS组、丁香苷-L组(丁香苷17.5 mg/kg)、丁香苷-M组(丁香苷35 mg/kg)、丁香苷-H组(丁香苷70 mg/kg)、mi R NC组(丁香苷70 mg/kg^(+)miR NC)、miR-124-3p inhibitor组(丁香苷70 mg/kg^(+)miR-124-3p inhibitor),每组12只。另取12只大鼠气管滴注500μl生理盐水作为对照组。各给药组分别通过腹腔注射相应剂量的丁香苷,miR NC组和miR-124-3p inhibitor组给药同时分别尾静脉注射miR NC和miR-124-3p inhibitor进行干预,对照组和ARDS组注射相应剂量生理盐水,连续给药3 d。RT-qPCR检测肺组织miR-124-3p和MAPK14 mRNA表达;HE染色观察肺组织病理;血气分析仪检测大鼠动脉血PaO_(2)、FiO_(2),并计算PaO_(2)/FiO_(2);ELISA检测大鼠肺泡灌洗液IL-1β、IL-18和TNF-α水平;Western blot检测MAPK14、高迁移率族蛋白(HMGB1)表达;双荧光素酶报告基因检测分析miR-124-3p和MAPK14的关系。结果:与对照组相比,ARDS组miR-124-3p表达降低(P<0.05),观察到肺组织结构不清,肺间质充血性水肿,并有炎症细胞浸润,肺组织损伤明显,动脉血PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)降低(P<0.05),肺组织损伤评分、MAPK14 mRNA表达、W/D值、肺泡灌洗液IL-1β、IL-18和TNF-α水平以及MAPK14和HMGB1蛋白表达明显升高(P<0.05);与ARDS组相比,丁香苷-L组、丁香苷-M组和丁香苷-H组miR-124-3p表达显著升高,肺组织损伤减轻,动脉血PaO_(2)、PaO_(2)/FiO_(2)升高,肺组织损伤评分、MAPK14 mRNA表达、W/D值、肺泡灌洗液IL-1β、IL-18和TNF-α水平以及MAPK14和HMGB1蛋白表达明显降低(P<0.05);下调miR-124-3p表达会提高MAPK14表达,并减弱丁香苷对ARDS大鼠的炎症抑制作用和肺保护作用。结论:丁香苷可通过调节miR-124-3p/MAPK14轴缓解ARDS大鼠肺损伤。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

PVT1通过调节miR-486-3p/MAPK14轴降低食管癌细胞的化学敏感性

目的:探讨长链非编码RNA PVT1通过调节miR-486-3p/MAPK14轴降低食管癌细胞化学敏感性的相关机制。方法:qRT-PCR检测永生化人食管上皮细胞系和食管癌细胞系中PVT1、miR-486-3p、MAPK14的相对表达水平;生物信息学预测PVT1、miR-486-3p的靶向关系,并以荧光素酶报告实验验证靶向关系;构建PVT1、miR-486-3p、MAPK14过表达和PVT1敲除耐顺铂食管癌细胞系Eca-109/DDP,DDP处理后,比较各组Eca-109/DDP中的半抑制浓度(IC50)、细胞存活率、细胞凋亡率,并检测细胞凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)、耐药蛋白(MRP1、P-gp)表达情况。结果:PVT1、MAPK14在食管癌细胞中高表达,miR-486-3p低表达(P<0.05);PVT1靶向抑制miR-486-3p表达,过表达PVT1后Eca-109/DDP细胞的IC50、细胞增殖率,MRP1、P-gp、Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、Bax表达水平显著降低(P<0.05),过表达miR-486-3p能够恢复上述表型;敲除PVT1后Eca-109/DDP细胞的IC50、细胞增殖率、MAPK14表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),过表达MAPK14后能够恢复上述表型。结论:PVT1可能通过靶向抑制miR-486-3p表达,促进MAPK14表达诱导耐药蛋白上调表达,降低食管癌细胞的化学敏感性。

miR-124-3p靶向调控MAPK 14对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨miR-124-3p通过靶向调控MAPK 14,从而对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞增殖与侵袭产生作用。方法提取正常大鼠及模型大鼠胎盘滋养层组织及原代细胞,分组转染。MTT、流式细胞术、Transwell检测检测细胞活力、凋亡、周期、迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot检测因子的表达水平。验证miR-124-3p和MAPK 14的靶向关系。结果过表达miR-124-3p后,细胞增殖、侵袭能力降低,细胞阻滞在G1/G0期,细胞凋亡增加;抑制miR-124-3p表达后,结果相反。双荧光素酶报告实验显示miR-124-3p与MAPK 14存在靶向关系。抑制MAPK 14表达后,与过表达miR-124-3p结果一致,细胞活力及侵袭能力降低,凋亡增加;过表达MAPK 14实验组与抑制miR-124-3p表达结果一致。结论 miR-124-3p可靶向负调控MAPK 14,对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞的增殖与侵袭产生影响。

LncRNA SNHG14调控miR-656-3p/SIRT5通路加重肝癌侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)对肝细胞癌(HCC)细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞SNHG14和miR-656-3p的表达。与sh-SNHG14,miR-656-3p抑制剂,miR-656-3p模拟物,pcDNA3.1-SIRT5共转染后,检测HepG2和MHCC97H细胞增殖、侵袭和迁移。然后用qRT-PCR测定SNHG14、miR-656-3p和SIRT5的表达水平,荧光素酶报告基因检测和RNA下调SNHG14与miR-656-3p之间的关系,以及miR-656-3p与SIRT5之间的关系。结果:HCC细胞中SNHG14表达上调,miR-656-3p表达下调。抑制SNHG14和miR-656-3p过表达,可抑制HepG2和MHCC97H细胞增殖,侵袭和迁移。SNHG14直接作用于miR-656-3p,SIRT5是miR-656-3p的靶基因。miR-656-3p抑制剂或pcDNA3.1-SIRT5可逆转sh-SN HG14对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:SNHG14通过调节miR-656-3p/SIRT5轴促进肝癌细胞的侵袭和迁移。

CircCDC14A沉默保护星形胶质细胞免受OGD/R诱导的损伤作用机制分析

目的探讨CirCDC14A沉默通过调节miR-153-3p/JAK1轴保护星形胶质细胞免受氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的损伤机制。方法体外培养新生大鼠脑皮质星形胶质细胞,采用CCK-8法法检测各组细胞活力;采用Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测各组p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验分析CirCDC14A与miR-153-3p、miR-153-3p与JAK1的关系。结果随着时间的延长,细胞活性呈上升趋势;pcDNA3.0 CirCDC14A+si JAK1组48 h及72 h细胞活力低于si-NC组、OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组(P<0.05);与si-NC组相比,OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组、pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组细胞凋亡明显增加,且pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组细胞凋亡高于GD/R+Si+Con mimcs组(P<0.05);Western blot结果表明:pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平低于OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组和si-NC组(P<0.05);miR-153-3p mimic能降低CirCDC14A WT、JAK1-WT的荧光素酶活性(P<0.05);pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组miR-153-3p水平低于于其余3组(P<0.05),JAK1蛋白水平高于其余3组(P<0.05)。结论CirCDC14A基因沉默可能通过调控miR-153-3p/JAK1轴抑制OGD/R诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡,引起细胞活力及p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平降低。