血清miR-372、miR-125b、miR-592表达水平对口腔癌的临床诊断价值

目的探讨血清miR-372、miR-125b、miR-592表达水平对口腔癌的临床诊断价值。方法选择2021年7月—2023年10月安徽医科大学第一附属医院和安徽医科大学第二附属医院收治的218例口腔病患者为研究对象,按口腔病是否发生癌病变分为口腔癌组(103例)和癌前病变组(115例)两组,实时荧光定量PCR检测血清miR-372、miR-125b、miR-592;多因素Logistic回归模型分析口腔癌发生的影响因素;ROC曲线分析血清miR-372、miR-125b、miR-592对口腔癌的诊断价值。结果口腔癌组患者的血清miR-372和miR-125b水平高于癌前病变组,而血清miR-592低于癌前病变组,差异有统计学意义(P<0.05);口腔癌组患者血清血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA125)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-8)水平显著高于癌前病变组,差异有统计学意义(P<0.05);口腔癌患者临床分期、分化程度与miR-372表达有关(χ^(2)=7.009、8.786,P<0.05);临床分期、淋巴结转移与miR-125b、miR-592表达有关(χ^(2)=10.310、9.993、5.946、9.062,P<0.05)。多因素分析显示,miR-372(OR=1.316)、miR-125b(OR=1.258)、miR-592(OR=0.907)、CEA(OR=1.792)、CA125(OR=1.854)、TNF-α(OR=1.539)和IL-8(OR=1.445)均为口腔癌发生的影响因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清miR-372、miR-125b、miR-592诊断口腔癌的AUC分别为0.789、0.790、0.808,三者联合诊断口腔癌的敏感度为90.29%,特异度为83.48%,AUC为0.880,显著高于miR-372(Z=2.285,P=0.022)、miR-125b(Z=2.114,P=0.035)、miR-592(Z=1.870,P=0.042)单独诊断的AUC。结论口腔癌患者血清miR-372和miR-125b水平较高,miR-592水平较低,血清miR-372、miR-125b、miR-592对口腔癌诊断价值较高。

多模态MRI联合血清miR-125b对乳腺癌新辅助化疗疗效的预测价值

目的:探讨乳腺癌治疗前多模态MRI联合血清miR-125b水平预测新辅助化疗疗效的价值。方法:研究对象为于我院首次接受全程新辅助化疗并行手术切除治疗的90例女性乳腺癌患者。治疗前对患者进行乳腺MRI检查,记录病灶直径、边缘、形状、平扫T_(2)WI图像上病灶内是否高信号和时间信号强度曲线(TIC)类型、表观扩散系数(ADC)、单纯扩散系数(D)、伪扩散系数(D*)及灌注分数(f)。依据Miller-Payne分级标准对病理学反应进行评估,分为病理反应不佳(NR)组和病理反应良好(R)组。结果:乳腺癌患者新辅助化疗后R组52例(57.78%),NR组38例(42.22%),两组的年龄、临床分期、病理类型、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。R组中Ki-67>14%的比例显著高于NR组(P<0.05)。R组与NR组的肿瘤直径、边缘、形状、T_(2)WI信号、D值和D*值差异均无统计学意义(P>0.05)。R组的TIC类型为Ⅲ型的比例显著高于NR组,ADC值显著低于NR组,f值显著高于NR组(P<0.05)。R组的血清miR-125b相对表达量显著低于NR组(t=-11.007,P<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示,较高的ADC值、血清miR-125b水平和较低的f值是乳腺癌新辅助化疗后疗效为NR的独立危险因素(P<0.05)。ADC值、f值、血清miR-125b水平及三者联合预测乳腺癌新辅助化疗疗效的AUC分别为0.863(95%CI:0.799~0.927,P<0.001)、0.819(95%CI:0.744~0.893,P<0.001)、0.832(95%CI:0.755~0.908,P<0.001)和0.958(95%CI:0.929~0.988,P<0.001)。结论:治疗前多模态MRI联合血清miR-125b水平对乳腺癌患者新辅助化疗疗效具有一定的预测价值。

miR-125b通过Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞上皮间质转化和转移

目的探讨miR-125b促进胃癌细胞侵袭、转移以及上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法应用qRT-PCR检测miR-125b在胃癌组织及其相应的癌旁组织中的表达;胃癌细胞在上调或下调miR-125b时,Western blotting检测DKK3和SERPINA4的蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-125b能否与DKK3、SERPINA4靶向结合,MKN45细胞共转染miR-125b抑制物和靶基因siRNA,用迁移、侵袭实验观察miR-125b能否通过DKK3、SERPINA4调节MKN45细胞的生物学功能,并观察EMT相关转录因子表达;进一步通过慢病毒转染胃癌细胞上调或下调血清反应因子(SRF)表达并经尾静脉注射裸鼠后观察体内实验中肺转移瘤的数目,探讨SRF对胃癌细胞转移的影响。结果qRT-PCR结果显示miR-125b在胃癌组织的表达上调,且与临床分期和淋巴结转移相关。双荧光素酶报告实验显示DKK3和SERPINA4是miR-125b在胃癌细胞中的直接靶点,并激活Wnt/β-catenin信号通路,进而促进EMT相关转录因子Twist1和Slug的转录,诱导EMT的发生,促进胃癌转移。体内体外实验证实转录因子SRF通过正向调节miR-125b的表达促进胃癌细胞的侵袭转移。结论SRF/miR-125b轴促进了胃癌细胞的EMT和转移,这些调节因子有望成为胃癌新的潜在治疗靶点或生物标志物。

急性心肌梗死合并收缩功能障碍患者血清miR-125b与依普利酮抗纤维化反应的关系

目的探讨血清miR-125b对依普利酮抗纤维化治疗反应评估的价值。方法前瞻性纳入2020年8月9日—2021年4月1日在太原市急救中心心内科接受依普利酮治疗的89例急性心肌梗死(AMI)伴或不伴ST段抬高且伴有左心室收缩功能障碍患者。采集受试者依普利酮治疗前和治疗6个月后的外周血浆样本。二维超声心动和多普勒超声心动图评估心脏收缩功能。采用实时荧光定量PCR法检测血浆中循环miR-125b表达水平;采用放射免疫测定法和酶联免疫吸附法分别检测血清Ⅲ型胶原氨基末端前肽(PⅢNP)和Ⅰ型胶原羧基末端前肽(PⅠCP)水平,计算基线至第6个月血清PⅢNP(?PⅢNP)和PⅠCP(?PⅠCP)水平变化。并记录依普利酮治疗6个月期间患者的主要不良心血管事件(MACEs)。结果依普利酮治疗6个月后,AMI患者收缩压与超声心动图参数较基线值显著改善(P<0.05),收缩压、血清PⅢNP和PⅠCP水平降低(P<0.05),但同时血钾和血钠浓度有所升高(P<0.05)。其中50例患者第6个月时血清PⅢNP水平值较基线值绝对减少,纳入PⅢNP降低亚组,其他39例患者?PⅢNP≤0,被纳入PⅢNP稳定/增加亚组。Logistic回归分析显示,女性、经皮冠状动脉介入治疗、血清miR-125b是PⅢNP降低的独立预测因子(P<0.05)。Spearman等级相关系数分析显示,PⅢNP降低的患者基线血清miR-125b与?PⅢNP(rs=-0.566,P<0.001)和?PⅠCP(rs=-0.524,P<0.001)存在负相关关系。进一步校正危险因素后,基线血清miR-125b仍是影响血清PⅢNP和PⅠCP降低程度的独立负相关因素(P<0.05)。此外,在AMI患者中,PⅢNP降低的患者累积MACEs发生率更低(调整后HR=0.431,95%CI:0.129~1.440,P=0.171),同样血清miR-125b水平>2.23患者无MACEs事件累积生存率更低(Log rank=32.568,P<0.001)。结论血清miR-125b高表达水平有助于识别依普利酮抗纤维化作用更显著的AMI患者。

Linc-smad7通过靶向miR-125b/SIRT1轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭

目的探讨长链非编码RNA smad7(long non-coding RNA smad7,Linc-smad7)对胰腺癌(pancreatic cancer,PC)细胞侵袭、迁移的作用及其作用机制。方法qRT-PCR检测PC组织及细胞系中Linc-smad7的表达;Transwell小室观察过表达Linc-smad7对PaCa-2细胞迁移、侵袭能力的影响;荧光素酶报告基因检测Linc-smad7对miR-125b,以及miR-125b对沉默调节蛋白1(Sirtuin1,SIRT1)的结合作用;qRT-PCR检测Linc-smad7在PaCa-2细胞中对miR-125b表达的调控作用,qRT-PCR、Western blotting检测miR-125b对SIRT1表达的调控作用。结果Linc-smad7在PC组织及细胞系中明显升高;Linc-smad7表达上调的PaCa-2细胞迁移、侵袭能力增强,miR-125b表达下降;miR-125b表达上调后,SIRT1表达显著下降;荧光素酶报告基因结果提示Linc-smad7直接靶向结合miR-125b,miR-125b直接结合SIRT1;过表达Linc-smad7或是下调miR-125b表达可逆转SIRT1沉默对PaCa-2细胞侵袭、迁移能力的影响。结论Linc-smad7通过miR-125b/SIRT1轴促进PaCa-2细胞侵袭和迁移。

miR-125b、miR-140联合超声造影在肝脏占位性病变良恶性诊断中的应用

目的:研究miR-125b、miR-140联合超声造影技术在肝占位性病变良恶性诊断中的效能及价值。方法:连续纳入并回顾分析2022年6月至2023年6月本院收治的肝脏占位性病变患者共125例,根据病理活检结果,将患者分为良性组(n=65)及恶性组(n=60),并选取同期的健康体检者作为对照组(n=56),通过qRT-PCR实验检测血清miR-125b,miR-140的相对表达水平,受试者进行超声造影检查。收集并分析受试者临床基本资料,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125b,miR-140联合超声造影技术对肝脏占位性病变患者的诊断价值。结果:与对照组相比,肝占位性病变组患者的血清miR-125b、miR-140水平显著降低(P<0.05),且与良性组相比,恶性组患者的血清miR-125b、miR-140水平也显著降低(P<0.05)。超声造影结果诊断发现良性病变患者68例,恶性病变患者57例,进一步分析超声造影特征发现,恶性病变组患者早增强、高增强和快消退比例显著高于良性病变组(P<0.05)。临床基本资料分析发现:恶性组患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)均显著高于良性组(P<0.05),并且两组患者的肿瘤直径及病理类型具有显著统计学差异(P<0.05),两组患者的年龄、性别无统计学差异(P>0.05)。绘制ROC曲线发现血清miR-125b、miR-140以及两者联合诊断的AUC分别为0.768、0.841、0.903,且血清miR-125b、miR-140与超声造影联合诊断的特异性及预测准确率均高于miR-125b、miR-140、超声造影单独检测。结论:血清miR-125b、miR-140联合超声造影在肝占位性病变良恶性诊断中具有较高的临床价值,可为临床应用提供参考。

肺癌患者miR-125b、miR-145、miR-146a表达与肺部感染的关系探讨

目的:探讨肺癌患者miR-125b、miR-145、miR-146a表达与肺部感染的关系。方法:选取2021年1月-2023年4月于我院进行手术治疗的163例肺癌患者为研究对象,根据术后3d是否发生肺部感染将患者分为感染组(28例)和未感染组(135例)。比较2组术后24h血清miR-125b、miR-145、miR-146a水平,分析术后24h血清各指标水平与临床有差异指标的相关性,Logistic回归分析术后发生肺部感染的危险因素,ROC分析术后24h血清各指标联合检测对术后发生肺部感染的预测价值。结果:2组合并糖尿病、合并慢性阻塞性肺疾病(COPD)、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分比较,差异显著(P<0.05);术后24h感染组血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达水平高于未感染组,且各指标水平与合并糖尿病、合并COPD、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分均呈正相关(P<0.05);合并糖尿病、合并COPD、手术时间、术后24hAPACHEⅡ评分、术后24h血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达水平为肺癌患者术后发生肺部感染的危险因素,且血清各指标联合预测术后发生肺部感染的AUC为0.817,大于各单项指标(P<0.05)。结论:肺癌患者术后并发肺部感染人群血清miR-125b、miR-145、miR-146a表达上调,其联合检测可作为早期预测术后是否发生肺部感染的有效指标。

miR-125b在心肌肥厚中的作用及机制

目的探究microRNA-125b(miR-125b)对心肌肥厚模型小鼠离子通道相关蛋白表达的作用及机制。方法(1)动物实验:制备miR-125b过表达及敲减慢病毒小鼠,将雄性C57BL/6小鼠分为LV-miR-125b组(mmu-miR-125b mimic)、LV-miR-125b抑制组(mmu-miR-125b-inhibitor)以及阴性对照组(LV-NC),正常饲养4周;通过透射电镜观察LV-miR-125b小鼠心肌组织切片超微结构的变化。将雄性C57BL/6小鼠分为4组:假手术组(开胸后不进行主动脉弓结扎)、TAC模型组(主动脉弓缩窄法制备小鼠心肌肥厚模型)、LV-miR-125b抑制+TAC组以及LV-NC+TAC组,通过超声心动图检测小鼠射血分数(EF)以及短轴缩短率(FS),计算小鼠的心重体重比值(HW/BW)、心重胫骨长度比值(HW/TL)以及心肌肥厚标记物β肌球蛋白重链(β-MHC)表达水平,以评价TAC诱导肥厚模型是否构建成功;Western印迹法检测心脏钠离子通道蛋白(Nav1.5)和心脏钙离子通道蛋白(Cav1.2)的蛋白表达水平;RT-q PCR检测miR-125b以及心肌肥厚标记物心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-MHC的mRNA水平。(2)细胞实验:原代培养昆明乳鼠心肌细胞分为4组:细胞对照组(不做任何处理)、miR-125b过表达组(miR-125b mimic)、miR-125b抑制组(miR-125b mimic+miR-125b inhibitor)以及阴性对照组(NC,转染空质粒);RT-q PCR检测miR-125b以及ANP,BNP和β-MHC的mRNA水平;Western印迹法和免疫荧光法检测细胞中的Nav1.5和Cav1.2的表达水平;荧光素酶报告基因技术检测miR-125b对靶蛋白Nav1.5和Cav1.2的直接作用。结果(1)与假手术组相比,TAC模型小鼠的HW/BW和HW/TL显著增加(P<0.05)以及心肌肥厚标记物β-MHC mRNA水平升高(P<0.05),TAC模型制备成功;TAC模型组小鼠miR-125b显著升高(P<0.01)。与LV-NC相比,LV-miR-125b组心肌肥厚标记物ANP,BNP和β-MHC mRNA水平显著升高(P<0.05,P<0.01);小鼠EF和FS值均降低(P<0.01);心肌组织超微结构受损。与LV-NC+TAC组相比,LV-miR-125b抑制+TAC组小鼠EF和FS显著升高(P<0.05);与LV-NC+TAC组相比,LV-miR-125b抑制+TAC组心肌组织中Nav1.5与Cav1.2水平升高(P<0.05)。(2)与NC组相比,miR-125b过表达组细胞的miR-125b表达水平显著升高(P<0.01),且ANP,BNP和β-MHC mRNA水平显著升高(P<0.05,P<0.01),而miR-125b抑制后显著逆转了ANP,BNP和β-MHC的升高(P<0.05,P<0.01)。与NC组相比,miR-125b过表达组细胞的Nav1.5和Cav1.2水平显著降低(P<0.01),而miR-125b抑制使Nav1.5和Cav1.2水平升高。荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-125b与Nav1.5和Cav1.2离子通道蛋白编码基因SCN5A和CACNA1C直接结合。结论miR-125b通过抑制Nav1.5和Cav1.2电压门控离子通道蛋白而促进心肌肥厚发生;抑制miR-125b表达改善心肌肥厚。

脓毒症患者外周血miR-125b、miR-150表达及其临床意义

目的 探讨脓毒症患者外周血微小核糖核酸-125b(miR-125b)、微小核糖核酸-150(miR-150)表达及其临床意义。方法 选取邢台市中心医院收治的103例脓毒症患者为研究组,另选取体检健康者82例为健康组,均测定外周血miR-125b、miR-150表达及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平。对比研究组、健康组各指标水平,采用Pearson相关性分析法分析脓毒症患者miR-125b、miR-150表达与IL-6、CRP、PCT水平的关系;比较不同严重程度脓毒症患者及不同预后患者的miR-125b、miR-150表达;采用多因素Logistic回归分析法分析miR-125b、miR-150表达与预后的关系;通过受试者工作特征曲线分析miR-125b、miR-150表达对脓毒症预后的预测价值。结果 研究组外周血miR-125b表达与IL-6、CRP、PCT水平分别为(2.43±0.35)、(159.42±26.81)pg/mL、(115.47±20.38)mg/L、(10.57±2.03)ng/mL,均高于健康组(t=31.012、52.149、48.978、46.945,均P=0.000),miR-150表达(0.21±0.04)低于健康组(t=52.008,P=0.000);经Pearson相关性分析,脓毒症患者外周血miR-125b表达与IL-6(r=0.706,P=0.016)、CRP(r=0.711,P=0.013)、PCT(r=0.759,P=0.001)水平均呈正相关,miR-150与IL-6(r=-0.702,P=0.018)、CRP(r=-0.709,P=0.015)、PCT(r=-0.728,P=0.006)水平均呈负相关;脓毒症者外周血miR-125b表达(2.16±0.43)低于严重脓毒症者(2.82±0.27)(t=8.815,P=0.000),脓毒症者外周血miR-150表达(0.24±0.02)高于严重脓毒症者(0.16±0.03)(t=16.248,P=0.000);入院28 d生存者外周血miR-125b表达(2.25±0.41)低于死亡者(3.13±0.36)(t=8.982,P=0.000),生存者外周血miR-150表达(0.23±0.04)高于死亡者(0.13±0.02)(t=11.078,P=0.000);年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、疾病严重程度及外周血miR-125b表达均是脓毒症患者预后的危险因素(OR=2.438、2.689、2.866、2.824,P=0.036、0.012、0.000、0.005),miR-150表达是其保护因素(OR=0.390,P=0.003);外周血miR-125b、miR-150表达预测脓毒症预后的最佳截断点分别为2.854、0.179,灵敏度分别为76.19%、80.95%,特异度分别为79.27%、75.61%,曲线下面积分别为0.861、0.843。结论 与健康人群比较,脓毒症患者外周血miR-125b表达升高,而miR-150表达降低,且miR-125b、miR-150表达均与炎症因子水平、疾病严重程度及预后相关,并对预后具有一定的预测价值,可作为临床判断病情严重程度及预后的指标。

miR-125b通过靶向抑制Smad4调控骨髓间充质干细胞成骨分化

目的:研究miR-125b是否通过调控其预测的靶基因Smad4表达而调节骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化。方法:构建Smad4 3'-UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-125b对Smad4 3'-UTR-荧光素酶活性的影响;分离培养人骨髓MSCs,在MSCs中转染miR-125b mimics并进行成骨诱导,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测Smad4表达水平;Smad4 siRNA转染MSCs并进行成骨诱导,通过检测碱性磷酸酶(AKP)活性及RUNX2 mRNA表达水平变化考察Smad4下调对MSCs成骨分化的影响。结果:双荧光素报告检测显示miR-125b能特异性地与Smad4 mRNA的3'-UTR结合,抑制其荧光素酶活性(P<0.05)。过表达miR-125b能抑制MSCs成骨分化过程中Smad4表达水平。干扰Smad4表达能抑制AKP活性及RUNX2 mRNA表达水平,它能部分模拟miR-125b调控MSCs成骨分化的功能。结论:miR-125b通过抑制靶基因Smad4的表达调控MSCs成骨分化。

MiR-125b表达与子宫内膜癌细胞侵袭及迁移的研究

目的:探讨微小RNA分子miR-125b的表达与子宫内膜癌临床特性的关系及其对子宫内膜癌株HEC-1B细胞的侵袭及迁移能力的影响。方法:收集2012年11月至2013年11月期间四川省妇幼保健院30例子宫内膜癌患者组织标本,利用Taqman Quantitative Realtime-PCR技术检测miR-125b在不同临床分期及不同转移状态的子宫内膜癌患者肿瘤组织中的相对表达情况,分析其表达与子宫内膜癌临床分期及远处转移间的关系;恢复HEC-1B细胞内miR-125b的表达,分别运用Transwell体外侵袭及迁移实验检测其对HEC-1B细胞侵袭及迁移能力的影响。结果:Ⅳ期子宫内膜癌组织中miR-125b的表达较Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期肿瘤组织均明显下降,无远处转移患者组织中miR-125b表达较伴有转移患者表达明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验结果表明,miR-125b组穿膜细胞数(184±35个)较未处理组(410±45个)和对照组(398±40个)明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);侵袭实验结果表明,过表达miR-125b组穿膜细胞细胞数(123±32个)同样明显少于未处理组(220±30个)和对照组(215±35个),差异有统计学意义(P<0.01)。进一步的蛋白印迹结果显示,过表达miR-125b后细胞中基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达下降。结论:miR-125b的低表达与子宫内膜癌有无远处转移及临床病理分期有关,恢复其在HEC-1B细胞中的表达能够明显抑制细胞体外侵袭及迁移,这可能与抑制细胞中MMP-13表达有关。

miR-125b靶向抑制BCL2、MCL1表达对胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药性的影响

目的:研究miR-125b在胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药形成中的作用。方法:运用miRNA实时定量PCR方法检测miR-125b在SGC7901/VCR细胞与母代SGC7901细胞中的表达差异,运用Western blot检测SGC7901/VCR细胞与母代SGC7901细胞抗凋亡蛋白BCL2、MCL1的表达差异,分别构建BCL2、MCL1 3’UTR荧光素酶报告质粒验证miR-125b的靶基因,在耐药细胞株中瞬时转染miR-125b模拟物以检测上调miR-125b对SGC7901/VCR细胞BCL2、MCL1蛋白表达及多药耐药性的影响,并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞对长春新碱诱导凋亡的影响。结果:miR-125b在SGC7901/VCR细胞中呈低表达,抗凋亡蛋白BCL2、MCL1在SGC7901/VCR细胞中呈高表达,荧光素酶报告实验证实BCL2、MCL1是直接受miR-125b调控的靶基因,在耐药株中上调miR-125b显著抑制BCL2、MCL1蛋白表达水平,显著增加细胞对长春新碱、顺铂、阿霉素、依托泊苷的敏感性,并显著增加细胞对长春新碱诱导的凋亡。结论:miR-125b靶向抑制BCL2、MCL1表达可增加胃癌SGC7901/VCR细胞对多种化疗药物的敏感性。

miR-125b对人心肌细胞HCM的保护作用及机制

目的探讨微小RNA(miR)125b对人心肌细胞HCM的保护作用及其可能的作用机制。方法选取急性心肌梗死(AMI)患者68例为AMI组、体检健康对照者50例作为正常对照组,采集静脉血检测血清miR-125b表达。取对数生长期人心肌HCM细胞,分别采用瞬时转染法转染miR-125b mimics(浓度分别为200、100、50 nmol/L)及NC mimics(浓度分别为200、100、50 nmol/L),培养24 h及48 h,采用CCK-8法测定细胞相对增殖率。分别转染miR-125b mimics终浓度为50、100 nmol/L,转染NC mimics终浓度为100 nmol/L及空白组,采用流式细胞术测定细胞早期凋亡百分比。采用Western blotting法检测细胞免疫、炎症相关蛋白炎性小体(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、趋化因子2(CCL2)、趋化因子C-X3-C-配体1(CX3CL1)、补体应答基因-32(RGC32)表达。结果AMI组血清miR-125b表达水平低于正常对照组(P<0.01)。24、48 h时,转染各浓度miR-125b后HCM细胞相对增殖率均高于转染NC mimics后(P均<0.05)。转染50、100 nmol/L miR-125b mimics后HCM细胞的早期凋亡百分比均低于转染NC mimics后(P<0.05或0.01)。转染miR-125b mimics 200 nmol/L后HCM细胞内NLRP3、IL-1β、CCL2、CX3CL1、RGC32的表达量均较NC mimics组降低(P均<0.05)。结论miR-125b可促进HCM细胞的增殖、抑制HCM细胞凋亡,其机制可能为下调免疫、炎症调节相关因子NLRP3、IL-1β、CCL2、CX3CL1、RGC32的表达,抑制NLRP3/IL-1β通路激活。

过表达miR-125b对子宫内膜癌HEC-1B细胞周期、增殖和凋亡的影响及其可能的机制

目的:探讨miR-125b过表达对子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)HEC-1B细胞增殖及凋亡的影响及其可能的机制。方法:收集2012年11月至2013年11月间四川省妇幼保健医院收治的30例子宫内膜样腺癌患者肿瘤及其癌旁组织标本,Real-time PCR检测肿瘤组织及培养细胞中miR-125b的表达水平。脂质体转染法分别将miR-125b模拟片段(mimic)与无关序列(scramble mimic)转染入HEC-1B细胞作为miR-125b组和对照组,以野生型HEC-1B细胞为未处理组。流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞周期、凋亡和增殖的影响,Western blotting检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞中PIK3CD、p-AKT以及总AKT表达的影响。结果:人EC组织中miR-125b表达量较癌旁组织显著下调(P<0.05)。HEC-1B细胞转染mimic片段后,其miR-125b的表达上调820倍以上。转染48 h后,miR-125b组细胞的增殖能力显著低于对照组和未处理组(0.53±0.06 vs 0.82±0.07、0.89±0.08,P<0.01)、细胞凋亡率显著升高[(21.5±3.2)%vs(14.2±2.3)%、(13.5±2.1)%,均P<0.01],并且miR-125b组细胞周期阻滞于G1期;miR-125b组HEC-1B细胞中PIK3CD及其下游p-AKT蛋白表达较对照组和未处理组显著降低(均P<0.01),而总AKT表达无明显变化(均P>0.05)。结论:miR-125b在EC组织中普遍低表达,其在HEC-1B细胞中过表达能够明显抑制细胞增殖和周期进程,促进细胞早期凋亡,这可能与miR-125过表达抑制细胞内PI3K/AKT信号通路有关。

miR-125b通过下调己糖激酶2的表达抑制HOS骨肉瘤细胞有氧糖酵解

目的探讨miR-125b对HOS骨肉瘤细胞有氧糖酵解的影响和机制。方法采用实时定量PCR检测HOSB正常成骨细胞和HOS骨肉瘤细胞中miR-125b的表达水平;采用3H标记的2-脱氧葡萄糖(3H-2DG)法检测细胞葡萄糖摄取率、乳酸定量试剂盒检测细胞上清中乳酸含量,以评价miR-125b模拟物(miR-125b-mimics)对HOS骨肉瘤细胞有氧糖酵解的影响。采用双荧光素酶报告基因实验明确己糖激酶2(HK2)是否为mimics-125b的直接靶分子;采用Western blot法检测mimics-125b对HK2蛋白水平的影响。结果 mimics-125b在HOS骨肉瘤细胞中表达水平显著低于HOSB正常成骨细胞;HOS细胞过表达miR-125b后,糖摄取率和乳酸生成明显减少,有氧糖酵解受到显著抑制;HK2蛋白为miR-125b的直接靶分子;HOS细胞过表达miR-125b后,HK2蛋白表达受到抑制。结论 miR-125b在HOS骨肉瘤细胞中低表达,并通过靶向抑制HK2的表达抑制HOS细胞有氧糖酵解。

miR-125b调控ART4蛋白对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-125b对ART4蛋白的调控作用及在肝癌细胞中对其增殖和侵袭能力的影响。方法:q PCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-125b的表达情况;过表达miR-125b后q PCR检测ART4的表达;双荧光素酶实验检测miR-125b和ART4的关系;MTT实验检测过表达miR-125b对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-125b的过表达对肝癌细胞侵袭能力的影响;MTT实验检测过表达ART4后逆转miR-125b对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测过表达ART4后逆转miR-125b对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果:miR-125b在肝癌细胞中表达水平较低,过表达miR-125b可以有效抑制ART4蛋白的表达;过表达miR-125b可以抑制肝癌细胞的增殖侵袭能力;过表达ART4后可以逆转肝癌细胞被miR-125b抑制的增殖侵袭能力。结论:miR-125b在肝癌中表达下调,同时miR-125b可以调控ART4的表达影响肝癌细胞增殖和侵袭能力。

miR-125b在颈动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞中的表达及其对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-125b在颈动脉粥样硬化(AS)患者外周血单个核细胞中的表达及对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法:选取85例颈AS患者(不稳定性斑块39例,稳定性斑块46例)和45例健康者(对照组),采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中miR-125b的表达。培养人主动脉血管平滑肌细胞,分别转染miR-125b模拟物、miR-125b抑制物、miR-125b阴性对照,以不作任何处理的细胞为空白对照组,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中miR-125b的表达,MTT法检测细胞增殖活性,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:与对照组相比,AS患者外周血单个核细胞中miR-125b相对表达量降低,且不稳定性斑块患者低于稳定性斑块患者(P<0.05)。miR-125b模拟物组细胞中miR-125b相对表达量显著高于阴性对照组和空白对照组,且miR-125b抑制物组低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);miR-125b模拟物组细胞增殖抑制率和细胞迁移数显著低于阴性对照组和空白对照组,而miR-125b抑制物组则高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论:miR-125b可能通过抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移而发挥保护动脉的作用。

miR-125b、miR-29a和miR-155-5p作为诊断结核性脑膜炎生物标志的研究

目的探讨结核性脑膜炎患者脑脊液及血浆中micro RNA(mi R)-125b、mi R-29a和mi R-155-5p的表达水平及其临床意义。方法收集20例结核性脑膜炎患者(结脑组)和20例原发性头痛患者(对照组)的脑脊液和血浆,分别提取总RNA,使用实时定量PCR方法分别检测脑脊液和血浆中mi R-125b、mi R-29a及mi R-155-5p的表达水平。结果与对照组相比,结脑组脑脊液、血浆中mi R-29a、mi R-125b表达水平明显上调,结脑组血浆中mi R-155-5p表达水平明显上调,差异均有统计学意义(均P<0.01),而2组脑脊液中mi R-155-5p表达水平比较差异无统计学意义。结论 mi R-125b、mi R-29a和mi R-155-5p可能参与了调节结核性脑膜炎的发生、发展过程,mi R-125b和mi R-29a有可能作为潜在的诊断结核性脑膜炎的生物学标志。

巨噬细胞过表达miR-125b促进其凋亡

目的探讨肺结核患儿外周血单个核细胞(PBMC)中miR-125b和靶基因Raf1原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAF1)表达;观察miR-125b对巨噬细胞凋亡和细胞活力的调节。方法收集和分离肺结核患儿和健康儿童的PBMC,采用荧光定量PCR检测miR-125b和RAF1的mRNA表达水平,Western blot法检测RAF1的蛋白水平。THP-1巨噬细胞分别转染miR-125b模拟物(miR-125b mimic)、阴性对照模拟物(NC-mimic)、miR-125b抑制物(miR-125b inhibitor)以及阴性对照抑制物(NC-inhibitor),共培养48 h;利用Western blot法检测THP-1巨噬细胞中RAF1表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活力。结果在结核患儿PBMC的miR-125b表达下调,RAF1的mRNA和蛋白水平都升高。在THP-1巨噬细胞中过表达miR-125b时,RAF1表达下调,促进巨噬细胞凋亡,降低细胞活力;在THP-1巨噬细胞中miR-125b表达被抑制时,RAF1表达升高,抑制巨噬细胞凋亡,提高细胞活力。结论结核患儿PBMC中miR-125b水平降低,上调THP-1巨噬细胞miR-125b水平促进巨噬细胞凋亡并抑制细胞活力。

湖羊miR-29a、miR-125b、miR-487b不同生长时期组织表达谱初步分析

本研究旨在探究miR-29a、miR-125b、miR-487b在湖羊不同生长时期各组织中的表达情况,以了解它们在湖羊肌肉发育中的作用。通过实时荧光定量PCR检测发现,miR-29a在湖羊不同生长时期中差异表达,并在各组织中有着不同的表达模式,其中在背最长肌中的表达显著高于其他肌肉组织和内脏组织;miR-125b只在胎羊和成年羊心肌和背最长肌中的表达相对容易检测,并且在成年羊中的表达明显低于胎羊。结果表明:mi R-125b在湖羊的生长发育过程中表达量下调;miR-487b在湖羊胎羊的不同组织中都有相应的表达,并且在肌肉组织中的表达明显高于其他组织,而在成年羊的相对应的组织中表达量都呈现下调趋势,且背最长肌、腿肌和胸肌的下调趋势与胎羊相应的组织都有显著差异。