METTL3调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞焦亡的影响及机制研究

目的:研究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞(HRMC)焦亡的影响并探讨潜在机制。方法:将HRMC分为7组,即对照组、高糖处理组、pcD-null组、pcD-METTL3组、pcD-METTL3+miR-126-5p抑制剂(inhibitor)组、pcD-METTL3+inhibitor-NC组、pcD-METTL3+inhibitor+AKT抑制剂(AZD5363)组。用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126-5p表达,western blotting检测METTL3、Gasdermin D、NLRP3、磷酸化(p-)AKT、p-NF-κB表达。用RNA甲基化免疫沉淀技术(Me-RIP)测定miR-126-5p前体的m6A修饰水平。结果:与对照组比较较,高糖处理组细胞焦亡增多,miR-126-5p前体N6-甲基腺苷(m6A)修饰增加,p-AKT和p-NF-κB表达水平升高,METTL3和miR-126-5p表达水平降低(均P<0.05)。转染METTL3过表达载体后,高糖处理的细胞上述指标发生了显著逆转(均P<0.05)。而在过表达METTL3的基础上加入miR-126-5p inhibitor后,miR-126-5p表达下调,细胞焦亡增多,p-AKT、p-NF-κB表达上调(均P<0.05),但METTL3表达水平和miR-126-5p前体m6A修饰无显著变化(P>0.05)。在过表达METTL3的基础上加入AZD5363后,细胞焦亡减少(P<0.05),p-AKT、p-NF-κB表达下调,METTL3和miR-126-5p表达及miR-126-5p前体m6A修饰无显著改变(P>0.05)。结论:METTL3促进miR-126-5p的m6A甲基化,并通过抑制AKT/NF-κB信号通路减少高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

miR-126-3p.1通过SLC7A5调控间变性甲状腺癌细胞糖酵解的作用机制

目的 探讨miR-126-3p.1对间变性甲状腺癌(ATC)细胞糖酵解的作用,并分析其潜在的机制。方法 通过TCGA数据库检索miR-126-3p.1在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌诊断、预后的关系。运用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测人正常甲状腺细胞Htori-3、人间变性甲状腺癌细胞SW1736、人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1中miR-126-3p.1、溶质运载家族7成员5(SLC7A5)的表达;将TPC-1细胞分为agomiRNA(转染agomiRNA)组、agomiR-126-3p.1(转染agomiR-126-3p.1)组、si-NC(转染si-NC)组、si-SLC7A5(转染si-SLC7A5)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA-SLC7A5(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA-SLC7A5)组,各组细胞用脂质体法转染至SW1736细胞。细胞计数试剂(CCK8)、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测细胞增殖能力;ELISA法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成能力;蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞SLC7A5蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 TCGA显示miR-126-3p.1在甲状腺癌中低表达。与Htori-3相比,SW1736、TPC-1细胞miR-126-3p.1低表达,SLC7A5表达显著升高(均P<0.05)。与agomiRNA组相比,agomiR-126-3p.1组细胞miR-126-3p.1表达显著升高,TPC-1细胞增殖率、EdU阳性率、相对葡萄糖消耗率、相对乳酸生成率、TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量均降低(P<0.05)。与antagomiRNA组相比,antagomiR126-3p.1组TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量显著升高(P<0.05)。敲减SLC7A5对TPC-1细胞具有相似作用。miR-126-3p.1靶向负调控SLC7A5,并且二者在甲状腺癌中呈负相关(R=-0.266,P<0.05)。过表达SLC7A5降低miR-126-3p.1表达,减弱miR-126-3p.1对SW1736细胞增殖、糖酵解的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-126-3p.1可能通过调控SLC7A5参与癌细胞的增殖、糖酵解,具有潜在的治疗价值。

子痫前期孕妇血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平变化及其临床意义

目的探讨子痫前期(PE)孕妇血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平变化及其临床意义。方法采用回顾性研究,选取2020年2月至2022年2月陕西中医药大学第二附属医院收治的89例PE孕妇作为研究组[年龄(27.28±2.94)岁,体重指数(22.72±2.45)kg/m^(2)],另选取同期健康孕妇89例作为对照组[年龄(26.49±2.76)岁,体重指数(22.84±2.12)kg/m^(2)]。89例PE孕妇根据病情严重程度分为轻度组58例、重度组31例;根据是否发生宫内窘迫、早产、新生儿窒息、胎儿死亡、低体重儿、巨大儿等不良妊娠结局,分为良好组(52例)和不良组(37例)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测研究对象的血清miR-135b-5p、miR-126-3p表达水平;采用t检验、χ^(2)检验进行统计比较;Pearson相关性分析PE患者血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平与收缩压、舒张压和蛋白尿的相关性;多因素logistic回归分析影响PE程度的因素;重度PE孕妇诊断及不良妊娠结局预测价值采用受试者操作特征曲线(ROC)进行分析。结果研究组血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平分别为0.69±0.14、0.65±0.13,对照组分别为1.07±0.23、1.08±0.25,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);重度组血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平分别为0.49±0.11、0.53±0.12,轻度组分别为0.79±0.15、0.71±0.14,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);妊娠结局不良组血清miR-135b-5p、miR-126-3p水平分别为0.53±0.12、0.52±0.11,良好组分别为0.81±0.18、0.75±0.15,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-135b-5p与收缩压、舒张压和蛋白尿呈负相关(r=-0.492、-0.612、-0.522,均P<0.05),miR-126-3p与收缩压、舒张压和蛋白尿呈负相关(r=-0.519、-0.481、-0.626,均P<0.05);多因素logistic回归分析得知,低水平miR-135b-5p、miR-126-3p是重度PE的危险因素(均P<0.05);根据ROC分析得知,miR-135b-5p、miR-126-3p联合检测对重度PE孕妇诊断及不良妊娠结局预测的AUC分别为0.948、0.952,均高于单一指标检测(均P<0.05)。结论PE孕妇血清miR-135b-5p、miR-126-3p表达水平下降,与病情发展、不良妊娠结局有关,联合检测对重度PE孕妇诊断及不良妊娠结局预测的价值较高。

miR-126-5p靶向MAPK1对甲状腺癌顺铂耐药细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究miR-126-5p对甲状腺癌细胞顺铂耐药性和耐药细胞增殖侵袭的影响及机制。方法:RT-qPCR检测细胞miR-126-5p和MAPK1 mRNA表达水平。将细胞分为对照组、miR-126-5p mimic组、miR-NC组、miR-126-5pmimic+pc-MAPK1组和miR-126-5pmimic+pc-NC组。CCK-8法测定细胞顺铂抗性和增殖情况,Transwell测定细胞侵袭,双荧光素酶报告验证靶向关系,免疫印迹检测MAPK1蛋白表达水平。结果:与正常组织和细胞相比,甲状腺癌组织和细胞中miR-126-5p水平显著下调;与甲状腺癌细胞系TPC-1相比,甲状腺癌顺铂耐药细胞系TPC-1/CDDP中miR-126-5p mRNA表达显著下调。TPC-1细胞、TPC-1/CDDP细胞中,与对照组相比,miR-126-5pmimic组细胞CDDP的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数目均显著降低,miR-126-5p靶向下调MAPK1。过表达MAPK1逆转miR-126-5p过表达对细胞顺铂抗性的IC50值、细胞增殖和每视野侵袭细胞数。结论:miR-126-5p过表达通过靶向下调MAPK1增强TPC-1和TPC-1/CDDP细胞顺铂敏感性,并抑制细胞增殖和侵袭。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。

GAS6-AS1调节miR-370-3p/SPATA2轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响

目的:探讨长链非编码RNA GAS6反义RNA1(long non-coding RNA GAS6 antisense RNA1, lncRNA GAS6-AS1)调节miR-370-3p/精子发生相关蛋白2 (spermatogenesis-associated protein 2, SPATA2)轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测癌旁组织、卵巢癌组织、人正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780中GAS6-AS1、miR-370-3p及SPATA2蛋白表达。将SKOV3细胞分为:对照组(NC组)、 si-NC组、si-GAS6-AS1组、mimic NC组、miR-370-3p mimic组、si-GAS6-AS1+inhibitor NC组、si-GAS6-AS1+miR-370-3p inhibitor组,qRT-PCR检测细胞中GAS6-AS1、miR-370-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot检测SPATA2、细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验检测GAS6-AS1与miR-370-3p、 miR-370-3p与SPATA2的关系。结果:在卵巢癌组织和细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白高表达,miR-370-3p低表达,且在SKOV3细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白表达量最高,miR-370-3p表达水平最低,因此,选择SKOV3细胞为后续研究对象。与NC组、si-NC组比较,si-GAS6-AS1组GAS6-AS1、OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-370-3p inhibitor减弱了沉默GAS6-AS1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制及对细胞凋亡的促进作用。GAS6-AS1与miR-370-3p、miR-370-3p与SPATA2存在靶向调控关系。结论:沉默GAS6-AS1通过上调miR-370-3p来抑制SPATA2表达,从而抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,并促进细胞凋亡。

款冬花多糖调控miR-889-3p/TLR4对IL-6诱导的乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

[目的]探讨款冬花多糖对白细胞介素-6(IL-6)诱导的乳腺癌细胞恶性行为作用机制。[方法] IL-6诱导人乳腺癌细胞MCF-7后,不同浓度的款冬花多糖处理。转染miR-NC、miR-889-3p mimics的MCF-7细胞经IL-6处理;转染NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors的MCF-7细胞经款冬花多糖与IL-6处理;噻唑蓝(MTT)、平板克隆形成以及TranswellTM实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-889-3p、Toll样受体4(TLR4)的表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TLR4蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-889-3p与TLR4的靶向关系。[结果]款冬花多糖可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖(P<0.05)、迁移及侵袭能力(P<0.05),而提高miR-889-3p的表达(P<0.05),呈剂量依赖性;TLR4是miR-889-3p的靶基因,miR-889-3p可靶向调控TLR4的表达;转染miR-889-3p mimics可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);转染miR-889-3p-inhibitors可恢复款冬花多糖对IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭。[结论]款冬花多糖可通过调节miR-889-3p/TLR4表达而抑制IL-6诱导的乳腺癌细胞恶性行为。

miR-126-3p在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR检测35例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA法和流式细胞术检测,Transwell小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35例癌组织中miR-126-3p相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.028 vs 0.981±0.039,t=10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1细胞中miR-126-3p相对表达量最低;与NC组比较,mimic组甲状腺癌细胞TPC-1增殖受到显著的抑制,第3天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC组比较,mimic组甲状腺癌细胞TPC-1凋亡显著增加[(15.32±3.20)%vs(8.12±1.17)%,t=4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t=8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p表达降低,上调miR-126-3p表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR-126-3p可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。

miR-361-3p通过靶向S100A6抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制

目的探讨miR-361-3p通过靶向S100A6抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制。方法运用逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测甲状腺癌组织、细胞中miR-361-3p表达水平;脂质体法将miR-con组(转染miRcon)、miR-361-3p组(转染miR-361-3p)、si-con组(转染si-con)、si-L型氨基酸转运蛋白(S100A6)组(转染si-S100A6)、miR-361-3p+pcDNA组(共转染miR-361-3p和pcDNA)、miR-361-3p+pcDNA-S100A6组(共转染miR-361-3p和pcDNA-S100A6)转染至CAL-62细胞。细胞计数试剂盒(CCK)8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)法检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力;Western印迹检测S100A6蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果与癌旁组织、Nthy-ori 3-1相比,癌组织、癌细胞(TPC-1、SW579、CAL-62)中miR-361-3p表达均显著降低(P<0.05)。过表达miR-361-3p后,细胞增殖显著降低,EDU阳性率显著降低,划痕抑制率显著升高,迁移侵袭能力显著降低(P<0.05)。miR-361-3p显著抑制野生型S100A6细胞的荧光活性,并负向调控S100A6蛋白,二者在癌组织中表达呈显著负相关(r=-0.627,P<0.05)。敲减S100A6具有与过表达miR-361-3p相似的作用,过表达S100A6部分逆转miR-361-3p增殖、迁移侵袭抑制作用。结论miR-361-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移侵袭,产生这种作用的机制与靶向S100A6有关。

CRNDE调节miR-126-5p减弱患儿脓毒症脑损伤的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA)结直肠肿瘤差异表达(colorectal neoplasia differentially expressed,CRNDE)和微小RNA-126-5p(miR-126-5p)在脓毒症相关性脑损伤中的作用机制。方法选择符合脓毒症诊断标准同时无中枢神经系统疾病30例患者作为研究对象,在体外构建LPS诱导的星形胶质细胞模型。采用RT-PCR检测脓毒症患儿血清和LPS诱导的星形胶质细胞中CRNDE和miR-126-5p的水平;采用生物信息法和荧光素酶法推测和证实二者间的相互关系;MTT法检测细胞的增殖;western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl2)、NF-κB、Keap1、Nrf2的水平;采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平。结果LPS显著降低了星形胶质细胞细胞中CRNDE的表达水平(P<0.05)。在LPS诱导的星形胶质细胞中过表达CRNDE后,星形胶质细胞的增殖水平上调(P<0.05)。上调LPS诱导的星形胶质细胞中CRNDE的水平后,细胞中Bax的水平显著下调,而Bcl2的水平上调。ELISA和western blot结果显示,上调CRNDE后,LPS介导的星形胶质细胞中TNF-α、IL-1β、NF-κB、MDA、Keap1的水平下调,而SOD和Nrf2的水平上调(P<0.05)。双荧光素酶报告试验表明,miR-126-5p模拟物可降低含CRNDE-wt的荧光素酶报告体的荧光素酶活性,而对CRNDE-mut载体的荧光素酶活性没有显著影响。CRNDE与miR-126-5p相互作用且能负向调节其表达。结论CRNDE能够靶向miR-126-5p减弱脓毒症患儿脑损伤。

长链非编码RNA PRNCR1通过靶向miR-126-5p调控非小细胞肺癌增殖、迁移、侵袭的生物学特性

目的研究长链非编码RNA PRNCR1对非小细胞细肺癌增殖、迁移、侵袭的影响。方法将si-con组(转染si-con)、si-PRNCR1组(转染si-PRNCR1)、miR-130b-3p组(转染miR-130b-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-PRNCR1+anti-miR-NC组(共转染si-PRNCR1和anti-miR-NC)、si-PRNCR1+anti-miR-126-5p组(共转染si-PRNCR1和anti-miR-126-5p),用脂质体法转染至H1299细胞;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞和非小细胞肺癌细胞H1299、正常人支气管上皮细胞HBE中前列腺癌非编码RNA(PRNCR)1、miR-126-5p的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果H1299组PRNCR1表达水平显著高于HBE组(P<0.05),H1299组miR-126-5p表达水平显著低于HBE组(P<0.05)。si-PRNCR1组H1299细胞中PRNCR1表达水平显著低于si-NC组(P<0.05),且48 h和72 h时细胞活性显著低于si-NC组(P<0.05)。与si-NC组相比,si-PRNCR1组H1299细胞的迁移细胞数和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05)。miR-126-5p组H1299细胞中miR-126-5p表达水平显著高于miR-NC组(P<0.05),48 h、72 h时细胞活性、迁移细胞数和侵袭细胞数均显著低于miR-NC组(P<0.05)。si-PRNCR1组细胞中miR-126-5p表达是si-NC组的约1.66倍,pcDNA-PRNCR1组细胞中miR-126-5p表达是pcDNA组的约0.47倍(P<0.05)。si-PRNCR1+anti-miR-126-5p组48、72 h时细胞活性、迁移细胞数和侵袭细胞数显著高于si-PRNCR1+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论长链非编码RNA PRNCR1可促进非小细胞细肺癌增殖、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-126-5p有关,将可为非小细胞细肺癌的治疗提供新靶点。

人脐间充质干细胞外泌体通过miR-126-3p抑制前列腺癌生长的相关研究

目的探究人脐间充质干细胞外泌体(hucMSCs exo)miR-126-3p对前列腺癌生长的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RWPE.1､LNCaP､PC-3､C4-2中miR-126-3p表达水平。C4-2细胞中转染miR-126-3p mimic､inhibitor､negative control后检测细胞的增殖水平。提取并鉴定hucMSCs exo,将hucMSCs exo与C4-2细胞共孵育后检测C4-2细胞中miR-126-3p表达水平和细胞的增殖能力,并且将hucMSCs转染miR-126-3p mimic､inhibitor､negative control后提取外泌体,将外泌体与C4-2共孵育后检测miR-126-3p表达水平及细胞的增殖能力。结果miR-126-3p低表达于LNCaP､PC-3､C4-2细胞。miR-126-3p mimic可显著抑制C4-2细胞的增殖能力。与hucMSCs exo共孵育后C4-2 miR-126-3p表达水平显著上调,细胞增殖能力下降,hucMSCs exo可传递miR-126-3p至C4-2细胞,并且外泌体miR-126-3p可显著抑制C4-2细胞的增殖能力。结论hucMSCs exo可通过递送miR-126-3p而抑制前列腺癌细胞的生长。

miR-126-3p靶向AKT2对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-126-3p(miR-126-3p)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常葡萄膜组织及葡萄膜黑色素瘤组织中miR-126-3p的表达。采用葡萄膜黑色素瘤MUM2B细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-126-3p mimics及其阴性对照miR-NC、si-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2及其阴性对照si-NC,分别记为miR-126-3p组、miR-NC组、si-AKT2组、si-NC组。甲基噻唑基四氮唑(MTT)、平板克隆形成实验检测增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;靶基因预测miR-126-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶基因,Western印迹检测AKT2蛋白表达。MUM2B细胞中共转染miR-126-3p mimics与AKT2过表达载体,用以上方法检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果与正常葡萄膜组织相比,miR-126-3p在葡萄膜黑色素瘤组织中表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-126-3p mimics或si-AKT2后MUM2B细胞存活率降低,迁移、侵袭细胞数明显减少(P<0.05);miR-126-3p过表达可抑制野生型载体WT-AKT2细胞的荧光素酶活性,且miR-126-3p可负向调控AKT2表达(P<0.05);miR-126-3p+pcDNA3.1-AKT2组细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数明显高于miR-126-3p+pcDNA3.1组(P<0.05)。结论miR-126-3p可通过抑制靶基因AKT2表达而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭。

miR-126-3p和SLC7A11在肺癌中的研究进展

在我国乃至全世界常见癌症中肺癌是最常见且最致命的,在广西,其发病率和病死率也仅次于肝癌[1~3],严重危害人类健康。肺癌又可根据组织学分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌,所有亚型均与吸烟有关[4],准确的组织学和分子分型对肺癌的治疗和预后判断至关重要。

circEIF6调节miR-129-5p/TRAF6轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡和吉西他滨敏感性的影响

目的:探讨环状RNA真核起始因子6(circEIF6)调节miR-129-5p/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡和吉西他滨(GEM)敏感性的影响。方法:将胰腺癌细胞SW1990分为对照组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-circEIF6组(转染si-circEIF6)、si-circEIF6+inhibitor-NC组(si-circEIF6和inhibitor-NC共转染)、si-circEIF6+miR-129-5p inhibitor组(si-circEIF6和miR-129-5p inhibitor共转染);RT-qPCR检测circEIF6、miR-129-5p的表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测TRAF6、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;MTT法检测不同浓度GEM对细胞增殖抑制率的影响;双荧光素酶报告基因实验分别验证circEIF6和miR-129-5p、miR-129-5p和TRAF6的关系。结果:与对照组、si-NC组比较,si-circEIF6组circEIF6表达、OD490值、TRAF6、PCNA蛋白表达降低,miR-129-5p表达、细胞凋亡率、Bax、caspase-3蛋白表达升高;与si-circEIF6组、si-circEIF6+inhibitor-NC组比较,si-circEIF6+miR-129-5p inhibitor组OD490值、TRAF6、PCNA蛋白表达升高,miR-129-5p表达、细胞凋亡率、Bax、caspase-3蛋白表达降低;细胞增殖抑制率在GEM处理下以剂量依赖性的方式显著增加;与对照组比较,GEM处理下细胞的增殖抑制率、凋亡率显著升高,敲低circEIF6可提高GEM处理下细胞的增殖抑制率、凋亡率,而miR-129-5p inhibitor可减弱敲低circEIF6发挥的上述作用;circEIF6靶向负调控miR-129-5p的表达,miR-129-5p靶向负调控TRAF6的表达;双荧光素酶报告实验证实miR-129-5p与circEIF6和TRAF6存在靶向关系。结论:敲低circEIF6可能通过靶向miR-129-5p下调TRAF6表达,进而抑制胰腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡、提高胰腺癌细胞对GEM的敏感性。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

miR-515-5p通过靶向TPX2-IL-6轴抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究miR-515-5p通过靶向TPX2-IL-6轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。方法:IL-6处理食管癌细胞EC9706,分为Con组、IL-6组、IL-6^(+)miR-NC组、IL-6^(+)miR-515-5p组、IL-6^(+)miR-515-5p^(+)pcDNA组、IL-6^(+)miR-515-5p^(+)TPX2组。qRT-PCR检测miR-515-5p、TPX2 mRNA表达;克隆形成实验及Transwell检测细胞增殖、迁移、侵袭能力;Western blot检测CyclinD1、MMP2、MMP9、TPX2蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-515-5p与TPX2的靶向关系。结果:与Con组相比,IL-6组miR-515-5p表达降低,TPX2 mRNA和蛋白表达增加,克隆、迁移、侵袭细胞数增加,CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达增加。与IL-6^(+)miR-NC组相比,IL-6^(+)miR-515-5p组miR-515-5p表达增加,TPX2 mRNA和蛋白表达降低,克隆、迁移、迁移细胞数降低,CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达降低。miR-515-5p靶向调控TPX2表达,过表达TPX2可逆转上调miR-515-5p对IL-6诱导食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:miR-515-5可靶向抑制TPX2进而抑制IL-6诱导食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

LncRNA HOTAIR靶向miR-126-5p对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOTAIR对人白细胞介素1β(IL-1β)诱导的肾小球系膜细胞HRMC增殖、凋亡的调控机制。方法:将HRMC细胞随机分为NC组(用于IL-1β等量的PBS处理48 h)、IL-1β组(10 ng/mL IL-1β处理48 h)、si-NC+IL-1β组(转染si-NC后再用10 ng/mL IL-1β处理)、si-HOTAIR+IL-1β组(转染si-HOTAIR后用10 ng/mL IL-1β处理)、miRNC+IL-1β组(转染miR-NC后用10 ng/mL IL-1β处理)、miR-126-5p+IL-1β组(转染miR-126-5p mimics后用10 ng/mL IL-1β处理)、si-HOTAIR+anti-miR-NC+IL-1β组(共转染si-HOTAIR和anti-miR-NC后用10 ng/mL IL-1β处理)、si-HOTAIR+anti-miR-126-5p+IL-1β组(共转染si-HOTAIR和anti-miR-126-5p后用10 ng/mL IL-1β处理);运用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测不同处理的HRMC细胞中HOTAIR、miR-126-5p的含量。脂质体法将各个质粒或DNA转染至HRMC。流式细胞术、蛋白质免疫印迹(Western blotting)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的凋亡、增殖率和细胞周期蛋白(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase-3)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞中HOTAIR与miR-126-5p的结合力。结果:与NC组相比,IL-1β组HRMC细胞中HOTAIR表达显著升高,miR-126-5p表达显著降低,细胞增殖率显著升高,细胞凋亡率显著降低,CyclinD1蛋白发生上调,Cleaved-caspase-3蛋白发生下调(P<0.05);si-HOTAIR+IL-1β组或miR-126-5p+IL-1β组细胞增殖率显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1蛋白发生下调,Cleaved-caspase-3蛋白发生上调(P<0.05)。HOTAIR与miR-126-5p之间具有靶向关系,并且低表达miR-126-5p可逆转低表达HOTAIR对IL-1β诱导的HRMC细胞增殖、凋亡的影响。结论:LncRNA HOTAIR可通过靶向miR-126-5p参与IL-1β诱导的HRMC细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。

Circ_DCAF6通过调控miR-485-3p/FOXK1轴影响结直肠癌顺铂耐药细胞增殖、迁移和凋亡

目的:探讨circ_DCAF6对结直肠癌顺铂(DDP)耐药细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能机制。方法:体外培养SW480及DDP耐药细胞SW480/DDP,RT-qPCR法检测细胞中circ_DCAF6和miR-485-3p表达,蛋白质印迹法检测FOXK1蛋白表达。分别转染si-NC、si-circ_DCAF6、miR-NC、miR-485-3p及si-circ_DCAF6与anti-miR-485-3p至SW480/DDP细胞,CCK-8法检测不同浓度(0、0.156、0.625、2.5、10、40、160μg/mL)DDP作用转染后的细胞24 h的存活率,并计算半数抑制浓度(IC50值);检测细胞迁移、凋亡并验证circ_DCAF6、miR-485-3p和FOXK1调控关系。结果:与SW480细胞相比,SW480/DDP细胞中circ_DCAF6和FOXK1蛋白表达升高,miR-485-3p表达降低(P<0.05)。沉默circ_DCAF6或过表达miR-485-3p可抑制SW480/DDP细胞增殖、迁移和FOXK1蛋白表达,升高SW480/DDP细胞对DDP的敏感性,并促进细胞凋亡(P<0.05);敲低miR-485-3p可减弱沉默circ_DCAF6对SW480/DDP细胞恶性表型的影响。circ_DCAF6可靶向结合miR-485-3p;FOXK1是miR-485-3p的靶基因。结论:沉默circ_DCAF6可抑制SW480/DDP细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其作用机制与靶向调控miR-485-3p/FOXK1轴有关。