hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a影响PCOS患者颗粒细胞凋亡的研究

目的探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-1260a靶向CASP8对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞凋亡的影响。方法取健康足月胎儿的脐带进行组织块贴壁法分离培养获得hUC-MSCs,采用流式细胞仪检测其标志性蛋白CD73和CD90的表达。收集hUC-MSCs培养上清液,提取hUC-MSCs外泌体,透射电镜观察其形态,Western blot检测外泌体膜表面标志物热休克蛋白70(HSP70)和肿瘤易感基因101(TSG101)的表达。PKH67标记外泌体,采用激光共聚焦显微镜观察PCOS颗粒细胞对外泌体的内化作用。Western blot检测hUCMSCs外泌体对PCOS颗粒细胞凋亡的影响。利用GSE69909临床样本进行生物信息学分析,得到hUC-MSCs外泌体中异常高表达的miRNAs,并通过实时荧光定量PCR进行验证。合成miR-1260a模拟物及其对照转染至KGN细胞中,流式细胞术检测颗粒细胞凋亡率。利用Target Scan Human 7.2数据库进行miR-1260a靶基因的预测,采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-1260a对靶基因的调控作用。qPCR检测PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体前后miR-1260a及CASP8的表达情况。结果经鉴定所培养的细胞符合hUC-MSCs的特征,hUC-MSCs外泌体为直径30~150 nm的圆形或椭圆形囊泡状结构,表达标志物蛋白HSP70和TSG101,并且可被PCOS颗粒细胞摄取。与对照组相比,hUC-MSCs上清液处理组及hUC-MSCs外泌体处理组Cleaved-Caspase-8、Cleaved-Caspase-3和Bax蛋白表达显著下调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著上调(P<0.05)。经GSE69909数据库筛选及qPCR验证发现miR-1260a在hUC-MSCs外泌体中富集,miR-1260a过表达可显著抑制颗粒细胞的凋亡(P<0.05),经验证miR-1260a可直接靶向CASP8且PCOS颗粒细胞摄取hUC-MSCs外泌体后,颗粒细胞中miR-1260a的表达升高,CASP8的表达降低(P<0.05)。结论hUC-MSCs来源的外泌体miR-1260a通过靶向CASP8抑制PCOS颗粒细胞凋亡。

miR-1260a调控FEZ1对前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探究微小RNA-1260a(miR-1260a)调控亮氨酸拉链蛋白(FEZ1)对前列腺癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测前列腺癌组织及癌旁组织中miR-1260a的表达。体外培养前列腺癌DU145细胞,实验分成4组:anti-miR-NC组、anti-miR-1260a组、anti-miR-1260a+si-NC组、anti-miR-1260a+si-FEZ1组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测4组DU145细胞活力;流式细胞术检测4组DU145细胞凋亡率;Transwell实验检测4组DU145细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告系统确认miR-1260a直接调控的靶基因。蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、上皮钙黏附素(E-cadherin)、FEZ1蛋白表达。结果与癌旁组织比较,前列腺癌组织中miR-1260a的表达水平显著升高(P<0.01);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-1260a组DU145细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),P21、Bax蛋白表达量显著升高(P<0.01),迁移与侵袭细胞数显著减少(P<0.01),MMP-2蛋白表表达量显著降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.01);FEZ1是miR-1260a的靶基因;抑制FEZ1的表达可逆转抑制miR-1260a的表达对DU145细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。结论miR-1260a靶向抑制FEZ1的表达调控前列腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭。

自拟健脾养肾补血汤辅助治疗再生障碍性贫血的疗效及对免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b的的影响

目的:探究自拟健脾养肾补血汤辅助治疗再生障碍性贫血(AA)的疗效及对免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b的影响。方法:选取我院2017年6月至2022年1月收治的104例无移植指征的AA患者。按照随机数字表法分为对照组[n=52,免疫抑制(IST)治疗]和观察组[n=52,自拟健脾养肾补血汤辅助IST治疗]。对比两组患者临床疗效,治疗前后中医证候积分、外周血象、免疫功能、血清miR-155-5p、miR-1260b水平及治疗期间不良反应情况。结果:观察组治疗总体有效率96.15%高于对照组84.62%(P<0.05);两组患者治疗后中医证候积分均明显下降,且观察组低于对照组(P<0.05);两组治疗后血红蛋白(Hb)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、铁蛋白(SF)及网织红细胞计数(ReT)水平均升高,且观察组高于对照组(P<0.05);两组治疗后NK细胞、CD4+百分比及CD4+/CD8+值均升高,CD8+百分比均下降,且观察组NK细胞、CD4+百分比及CD4+/CD8+值高于对照组,CD8+百分比低于对照组(P<0.05);两组治疗后清miR-155-5p及miR-1260b mRNA均下降,且观察组低于对照组(P<0.05);两组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾养肾补血汤辅助IST治疗AA可明显提升患者免疫功能,促进骨髓造血功能恢复,下调血清miR-155-5p和miR-1260b水平,且药物毒性较小,具有一定安全性。

再生障碍性贫血患者外周血miR-155-5p、miR-1260b水平及临床意义

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血微小核糖核酸miR-155-5p、miR-1260b水平及临床意义。方法将该院2014年1月至2019年8月收治的初诊AA患者108例纳入研究作为观察组。另外,选取同期于该院体检的健康志愿者102例作为健康组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测外周血miR-155-5p、miR-1260b水平。比较2组外周血miR-155-5p、miR-1260b水平,观察组中的重型AA与非重型AA患者二者的表达水平。采用Cox回归分析AA患者死亡的影响因素。结果观察组外周血miR-155-5p、miR-1260b水平均高于健康组(P<0.05),重型AA患者二者水平均高于非重型AA患者(P<0.05)。临床分型为重型AA,并发感染、出血,正细胞正色素性贫血、白细胞计数、网织红细胞均值、淋巴细胞与非造血细胞比值、基线血小板计数,外周血miR-155-5p、miR-1260b水平,治疗无效均是AA患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论AA患者外周血miR-155-5p、miR-1260b水平升高,与疾病严重程度、预后均相关。

M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。