LncRNA MAGI2-AS3通过靶向调控miR-1269a/PTEN/AKT通路增强非小细胞肺癌对顺铂化疗的敏感性

目的研究lncRNA MAGI2-AS3对非小细胞肺癌顺铂耐药的影响及其分子机制。方法采用qRT-PCR检测MAGI2-AS3和miR-1269a在顺铂敏感细胞(A549,H1299)和顺铂耐药细胞(A549/DDP,H1299/DDP)中的表达差异。采用慢病毒敲低A549和H1299中的MAGI2-AS3的表达,过表达A549/DDP和H1299/DDP中的MAGI2-AS3并加入20μmol/L顺铂(DDP)处理。A549/DDP和H1299/DDP细胞实验分组为:OE-NC组,OE-MAGI2-AS3组,OE-NC+DDP组,OE-MAGI2-AS3+DDP组,A549和H1299细胞实验分组为:sh-NC组,sh-MAGI2-AS3组,sh-NC+DDP组,sh-MAGI2-AS3+DDP组。CCK-8和细胞克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞术和Western blotting分别检测细胞凋亡率和蛋白表达量,划痕实验和Transwell检测细胞EMT变化。通过网站GEPIA、StarBase和miRDB预测MAGI2-AS3、miR-1269a和PTEN之间的靶向关系,并采用荧光素酶报告基因实验和RIP实验验证。采用miR-1269a mimic和pcDNA3.1-PTEN进行Rescue实验。结果MAGI2-AS3在肺癌组织中的表达显著低于正常癌旁组织(P<0.05)且与患者不良预后相关(P<0.05)。A549/DDP和H1299/DDP中的MAGI2-AS3表达量显著低于A549和H1299(P<0.01)。干扰MAGI2-AS3可以显著促进顺铂处理前、后A549和H1299细胞的存活及EMT进程(P<0.01),同时降低顺铂诱导的细胞凋亡(P<0.005)。过表达MAGI2-AS3可以显著抑制顺铂处理前、后A549/DDP和H1299/DDP细胞存活与EMT进程(P<0.01),同时提升顺铂诱导的细胞凋亡(P<0.005)。MAGI2-AS3与miR-1269a结合在一起,miR-1269a与PTEN 3'UTR结合。在A549/DDP细胞内MAGI2-AS3通过靶向吸附miR-1269a促进PTEN的表达并下调AKT磷酸化从而抑制顺铂刺激下细胞的EMT进程(P<0.01)、促进顺铂诱导的A549/DDP细胞凋亡(P<0.01)。结论LncRNA MAGI2-AS3通过靶向调控miR-1269a/PTEN/AKT信号轴增强非小细胞肺癌对顺铂化疗的敏感性。

miR-1269a表达对H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响

目的研究miR-1269a表达对非小细胞肺癌H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响。方法选取非小细胞肺癌H460细胞系进行无血清悬浮培养,通过流式细胞仪筛选CD133及CD44阳性的H460干细胞样细胞。通过RT-qPCR检测miR-30a、miR-148a、miR-148b、miR-152、miR-411、miR-497、miR-598、miR-424、miR-761、miR-1269a、miR-1280及CD44、CD133 mRNA在H460干细胞样细胞内的表达水平。采用CCK-8实验、干细胞成球实验、流式细胞术及彗星实验分析miR-1269a表达对H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响。结果H460干细胞样细胞的CD133及CD44 mRNA表达水平较H460细胞明显增加,分别为H460细胞的(1.30±0.03)倍和(1.19±0.02)倍(P<0.05)。miR-1269a在H460干细胞样细胞中的表达量最高,且高于H460细胞中的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-1269a inhibitor后经X线照射处理,H460干细胞样细胞的生长抑制率(72.11%±2.45%)明显增高,其凋亡率达17.70%±0.54%,细胞内DNA双链断裂也明显增加,在2 Gy的X线辐射处理后DNA尾矩为转染前的(1.19±0.02)倍,即转染miR-1269a inhibitor明显增加了H460干细胞样细胞对放疗的敏感性(P<0.05)。转染pcDNA3.1-SOX7后经X线照射处理对H460干细胞样细胞的作用与转染miR-1269a inhibitor相近。转染miR-1269a mimics可逆转pcDNA3.1-SOX7对H460干细胞样细胞恶性生物学行为的抑制作用。结论抑制miR-1269a可能增强非小细胞肺癌的放疗敏感性,其机制可能是通过上调SOX7的表达所致。

miR-1269a在食管癌组织中的表达及其对KYSE30细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269a在食管癌组织中的表达及其对KYSE30细胞恶性生物学行为的影响,并研究其可能的作用机制。方法:选取90例在河北医科大学第四医院通过手术切除的食管癌组织标本,并收集正常食管永生化上皮细胞和食管癌细胞系,应用qPCR实验检测癌组织和细胞系miR-1269a的表达水平。将miR-1269a的mimics和inhibitor分别转染食管癌细胞KYSE30后,用MTS、Transwell和克隆形成实验分别检测miR-1269a对KYSE30细胞增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响。通过生物信息学软件预测miR-1269a的靶基因,并通过WB实验和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a对靶基因的调控作用。转染SOX6质粒后,采用MTS、Transwell和克隆形成实验分别检测SOX6对KYSE30细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力的影响,并利用回复实验进一步验证结果。结果:食管癌组织中miR-1269a的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05);与正常食管上皮细胞相比,食管癌细胞系中miR-1269a的表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。miR-1269a mimics转染组KYSE30细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著高于mimics NC组(P<0.05或P<0.01);inhibitor转染组KYSE30细胞的增殖、侵袭、迁移和克隆形成能力显著低于inhibitor NC组(P<0.05或P<0.01)。miR-1269a可与SOX6的3’UTR区相结合,且过表达miR-1269a后,KYSE30细胞的SOX6表达水平和荧光素酶报告基因的活性均显著降低(P<0.05)。回复实验表明,高表达miR-1269a可以促进食管癌细胞增殖、侵袭和迁移(P<0.05或P<0.01),同时高表达SOX6后,miR-1269a的促进作用出现部分逆转。结论:miR-1269a在食管癌组织和细胞系中表达上调,能够促进KYSE30细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成等恶性生物学行为,其机制可能是通过抑制靶基因SOX6实现的。

不同临床病理特征非小细胞肺癌中miR-1269的表达及其对细胞周期的靶向调控作用

目的研究不同临床病理特征非小细胞肺癌(NSCLC)中miR-1269的表达及其对细胞周期的靶向调控作用。方法收集2015年3月至2018年12月商丘市第一人民医院手术切除的NSCLC病灶和对应的癌旁病灶58例,检测miR-1269及细胞周期蛋白的表达量;培养肺癌A549细胞株,转染miR-1269的模拟物和抑制物后检测细胞周期蛋白的表达量。结果NSCLC病灶中miR-1269的表达量明显高于癌旁病灶(P<0.05)且低未分化、有淋巴结转移、有脉管浸润、有胸膜侵犯的NSCLC病灶中miR-1269的表达量明显高于高中分化、无淋巴结转移、无脉管浸润、无胸膜侵犯的NSCLC病灶(P<0.05);NSCLC病灶中Cy-clinD1、CDK4、CDK6的表达量明显高于癌旁病灶且与miR-1269呈正相关,p21Cip1、p27Kip1的表达量明显低于癌旁病灶且与miR-1269呈负相关(P<0.05)。miR1269模拟物组A549细胞中CyclinD1、CDK4、CDK6的表达量明显高于空白对照组、NC模拟物组,p21Cip1、p27Kip1的表达量明显低于空白对照组、NC模拟物组(P<0.05);miR-1269抑制物组A549细胞中CyclinD1、CDK4、CDK6的表达量明显低于空白对照组、NC抑制物组,p21Cip1、p27Kip1的表达量明显高于空白对照组、NC抑制物组(P<0.05)。结论miR-1269的高表达与NSCLC病理特征的变化有关且miR-1269能够靶向调节细胞周期蛋白的表达。

miR-1269a调控HOXD10基因抑制胆管癌细胞侵袭的作用及其机制

目的探讨miR-1269a对HOXD10基因的调控作用及对胆管癌细胞侵袭能力的影响。方法预测并筛选出调控HOXD10基因的miR-1269a作为研究对象;转染miR-1269a模拟物(mimic)及抑制剂(inhibitor)至胆管癌细胞系后检测HOXD10mRNA及蛋白的表达变化,并观察miR-1269a对胆管癌细胞侵袭能力的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269a与HOXD10之间的靶向作用关系。结果miR-1269a在胆管癌组织中表达显著高于癌旁组织(P=0.0023);miR-1269a模拟物可显著降低胆管癌细胞中HOXD10 mRNA(Mz-CHA-1:P=0.0025; RBE:P=0.0038)及蛋白表达水平,且细胞的侵袭能力较对照组显著增强(Mz-CHA-1:P=0.004; RBE:P=0.004)。miR-1269a抑制剂转染则出现相反的结果(QBC939:P=0.16; HCCC9810:P=0.13)。miR-1269a明显抑制野生型HOXD10-3’UTR的荧光素酶活性,而对突变型质粒转染细胞的荧光素酶活性无影响。结论 miR-1269a靶向负性调控HOXD10基因,在胆管癌细胞侵袭过程中发挥重要作用。

miR-1269在胃癌及胃黏膜癌前病变组织中表达及其临床意义

目的探讨胃癌及胃黏膜癌前病变组织中miR-1269的表达及其临床意义。方法选取2016年1月至2018年2月郑州大学第五附属医院收治的50例胃癌患者、50例胃黏膜癌前病变患者及50例浅表性胃炎患者作为研究对象,采用RT-PCR法分别检测胃癌组织、胃黏膜癌前病变组织及浅表性胃炎组织标本中miR-1269的表达,并分析其表达与胃癌临床病理特征的相关性。结果miR-1269在胃癌组织中的相对表达量明显高于胃黏膜癌前病变组织及浅表性胃炎组织,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1269在不同分化程度、TNM分期、浸润程度、是否发生淋巴结转移的胃癌组织中的表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05),即分化程度越低、TNM分期越高、浸润深度越深、发生淋巴结转移,则胃癌患者癌组织中miR-1269的相对表达量越高;ROC曲线分析结果显示,miR-1269诊断胃癌的AUC为0.807(95%CI:0.614~1.829),诊断灵敏性为88.21%,特异性为79.46%。在完成随访的48例患者中,miR-1269高表达19例,其中死亡8例(42.11%),miR-1269低表达29例,死亡4例(13.79%),两组死亡率比较差异有统计学意义(χ^2=4.907,P=0.027)。由生存曲线可知,高表达组胃癌患者的平均生存时间明显短于低表达组,平均生存时间分别为16.5个月和23.7个月。结论miR-1269在胃癌组织中表达上调,其表达水平与胃癌的发生、发展及预后有关,其可能成为胃癌临床诊疗及预后评估的生物学标志物。

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269对肺癌细胞A549生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达和对人NSCLC A549细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法:选取2017年1月至2018年1月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR检测NSCLC癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269的表达水平。将miR-1269 mimics和mimics NC转染至A549细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269的靶基因,并通过Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269对靶基因的调控作用。采用Western blotting检测已转染的A549细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白ZEB2和E-cadherin的表达情况。结果:NSCLC癌组织中miR-1269的表达水平显著高于对应的癌旁组织(2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05)。miR-1269 mimics转染组A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组(均P<0.01)。转染miR-1269-mimics的A549细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[(46.54±1.57)%vs(23.32±3.15)%,P<0.01]。miR-1269可与FOXO1基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269后,A549细胞中FOXO1的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低(均P<0.01)。miR-1269 mimics转染组A549细胞中p21、E-cadherin蛋白表达水平降低(均P<0.05),而CyclinD2、ZEB2蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论:miR-1269在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1的表达有关。

miR-1269a在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及其在肿瘤发生发展中的作用

目的探讨miR-1269a在卵巢浆液性囊腺癌中的表达与临床病理特征的关系及其在肿瘤发生发展中的作用。方法选择2017年于无锡市妇幼保健院妇科收治的患者,治疗利用荧光定量PCR法检测10例卵巢良性囊肿以及20例卵巢浆液性囊腺癌组织中miR-1269a的表达情况;分析miR-1269a的表达水平和临床病理参数之间的相关性;利用miR-1269a的mimics和inhibitor在卵巢癌细胞HEY中过表达或敲减miR-1269a;通过CCK-8和Transwell实验检测其对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-1269a在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达水平高于卵巢良性囊肿,并且miR-1269a的表达量与肿瘤大小、淋巴结转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期、肿瘤术后复发呈正相关;过表达miR-1269a可促进卵巢癌细胞HEY体外增殖、迁移和侵袭;敲减miR-1269a可抑制HEY细胞体外增殖、迁移和侵袭。结论 miR-1269a在卵巢浆液性囊腺癌组织中呈高表达,并且对卵巢浆液性囊腺癌的发生发展有重要作用,miR-1269a可能成为卵巢浆液性囊腺癌复发预测的指标和术后化疗的潜在靶点。

miR-1269a在肝细胞癌血浆中的表达及靶向TP53对肝癌细胞迁移的影响

目的分析microRNA-1269a(miR-1269a)在肝细胞癌患者血浆中的表达及靶向TP53促进肝癌细胞株迁移的影响。方法收集53例肝细胞癌患者及30例健康体检正常对照者的血浆样本,利用RT-qPCR技术验证miR-1269a在肝细胞癌患者和正常人血浆中的表达;应用miR-1269a mimics和inhibitor转染人肝癌细胞(Huh-7),运用细胞划痕实验检测转染后细胞迁移能力变化;通过Targetscan数据库预测miR-1269a的潜在靶点TP53,并用Western blot检测TP53的表达变化。结果miR-1269a在肝细胞癌患者血浆样本中的表达高于正常对照者(P<0.05),miR-1269a过表达能明显促进Huh-7细胞的迁移能力,反之抑制迁移能力(P<0.05);在肝癌细胞株中miR-1269a和TP53表达水平呈负相关。结论miR-1269a在肝细胞癌患者血浆中表达上调,通过靶向调控TP53促进肝癌细胞的迁移。

miR-1269a、SOX6在食管癌组织中的表达及与临床病理特征的关系

目的分析miR-1269a、SOX6在食管癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2019年1月至2020年6月本院收治的100例食管癌患者为研究对象,收集术后食管癌组织及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-1269a、SOX6在食管癌组织及癌旁正常组织中的表达水平,分析miR-1269a、SOX6的表达水平与临床病理参数的关系。结果miR-1269a在食管癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),SOX6在食管癌组织中的表达水平明显低于癌旁正常组织(P<0.05)。中低分化、Ⅲ与Ⅳ期、T_(3)与T_(4)浸润深度食管癌组织中miR-1269a的表达水平明显高于高分化、Ⅰ期与Ⅱ期、T_(1)与T_(2)浸润深度(P<0.05),中低分化、Ⅲ与Ⅳ期、T_(1)与T_(2)浸润深度食管癌组织中SOX6的表达水平明显高于高分化、Ⅰ期与Ⅱ期、T_(3)与T_(4)浸润深度(P<0.05)。miR-1269a与SOX6在食管癌组织中的表达水平呈明显负相关(r=-0.775,P=0.000)。结论miR-1269a在食管癌组织中的表达增强,SOX6的表达减弱,与肿瘤的组织分化程度、临床分期及浸润深度存在一定关系。

替雷利珠联合白蛋白紫杉醇对晚期肺癌患者血清miR-498、miR-1269、IP-10水平的影响

目的观察与评价替雷利珠联合白蛋白紫杉醇对晚期肺癌患者血清miR-498、miR-1269、IP-10水平与对免疫能力的影响。方法回顾性分析2020年3月—2021年3月于该院进行肺癌治疗的晚期患者100例为研究对象,按不同治疗方案分为对照组和观察组,各50例。对照组采用白蛋白紫杉醇治疗模式,观察组接受替雷利珠联合白蛋白紫杉醇治疗模式。记录二组患者的血清miR-498、miR-1269、IP-10水平的变化,观察临床疗效及分析疗效相关指标。结果治疗后,二组患者的CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均升高,CD8^(+)均降低,且观察组相比对照组差异更为显著(P<0.05)。通过治疗后,观察组患者的血清miR-498、miR-1269、IP-10下降水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。二组并发症发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组疾病控制率(DCR)明显高于对照组(P<0.05)。逻辑回归分析表明血清miR-498、miR-1269、IP-10水平和免疫能力均与临床疗效显著相关,且ROC曲线分析表明各指标均可以准确地评估疗效。结论晚期肺癌患者给予替雷利珠联合白蛋白紫杉醇治疗,血清miR-498、miR-1269、IP-10水平和免疫功能都得到了良好改善,其控制癌症症状效果显著,可有效提高患者临床疗效。

埃克替尼联合TP化疗治疗晚期非小细胞肺癌的疗效及对miR-204-5p、miR-1269表达的影响

目的从miR-204-5p、miR-1269表达变化方面观察埃克替尼联合TP化疗治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的临床有效性和安全性。方法前瞻性选取2019年2月—2020年12月河北北方学院附属第一医院胸外科NSCLC患者82例,计算机随机数字生成法分为对照组(n=41)、试验组(n=41)。对照组给予TP化疗,紫杉醇剂量175 mg·m^(−2),第1天静脉滴注;卡铂剂量300 mg·m^(−2),第2天静脉滴注。4周为1个周期,治疗4个周期。试验组在对照组TP方案治疗基础上加用埃克替尼,TP化疗方案及操作同对照组,同时口服埃克替尼,每次125 mg,每天3次,当患者出现3级及以上不良反应时,可暂停(1~2周)服用,待症状缓解或消失再次恢复每次125 mg,每天3次。4周为1个周期,治疗4个周期后进行效果评价。比较两组临床疗效、不良反应发生情况,分别于治疗前、治疗2个周期、治疗4个周期检测两组患者肺功能[第1秒呼气容积(FEV1)、最大呼气容积(FVC)]、肿瘤标志物[糖类抗原125(CAl25)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]、miR-204-5p、miR-1269水平。结果治疗4个周期后,试验组客观缓解率(ORR)为43.90%,疾病控制率(DCR)为82.93%,分别高于对照组的24.39%、63.41%(P<0.05);治疗前两组患者FEV1、FVC比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗2个周期、4个周期后两组FEV1、FVC均较治疗前升高,且同时间点试验组高于对照组(P<0.05)。治疗前两组患者CA125、CEA、CYFRA21-1比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗2个周期、4个周期后两组CA125、CEA、CYFRA21-1较治疗前降低,且同时间点试验组低于对照组(P<0.05);治疗前两组患者miR-204-5p、miR-1269表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗2个周期、4个周期后两组miR-204-5p较治疗前升高,miR-1269较治疗前降低,且同时间点试验组miR-204-5p高于对照组,miR-1269低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论埃克替尼联合TP化疗治疗晚期NSCLC效果显著,可有效改善患者肺功能,降低肿瘤标志物水平,调节miR-204-5p、miR-1269表达,且安全性高。