miR-127-3p靶向调节SETD8对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-127-3p对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测150例胃癌患者胃癌组织、癌旁组织及人胃上皮细胞GES1、人胃癌细胞SGC7901、AGS、MKN-45、MGC-803中miR-127-3p表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-127-3p与含SET结构域赖氨酸甲基转移酶(SETD)8的靶向调控关系。将SGC7901细胞分为对照(Control)组、miR-127-3p模拟物(miR-127-3p mimics)组及miR-NC组、沉默SETD8表达(si-SETD8)组、si-NC组、miR-127-3p mimics+SETD8过表达(miR-127-3p mimics+SETD8)组及空载质粒(miR-127-3p mimics+pcDNA)组。噻唑蓝(MTT)法、划痕愈合实验、Transwell小室实验分别检测SGC7901细胞增殖、迁移与侵袭;Western印迹检测SGC7901细胞SETD8、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;裸鼠成瘤实验检测过表达miR-127-3p对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响。结果miR-127-3p在胃癌组织与细胞中较癌旁组织和正常细胞显著下调(P<0.05),SETD8 mRNA在胃癌组织中较癌旁组织显著上调(P<0.05);胃癌组织中miR-127-3p、SETD8 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.553,P<0.05);双荧光素酶实验证实miR-127-3p与SETD8存在靶向调控关系(P<0.05);过表达miR-127-3p或抑制SETD8表达显著抑制SGC7901细胞增殖、迁移与侵袭(P<0.05);过表达SETD8可部分逆转过表达miR-127-3p对SGC7901细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用(P<0.05);裸鼠成瘤实验表明过表达miR-127-3p可显著抑制胃癌移植瘤生长(P<0.05)。结论miR-127-3p在胃癌组织与细胞中表达下调,过表达miR-127-3p可靶向抑制SETD8表达而抑制胃癌肿瘤生长。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

miR-127-3p靶向KIF3B缓解卵巢癌对紫杉醇的耐药性

目的 探究miR-127-3p通过调控KIF3B对卵巢癌SKOV3细胞和紫杉醇(paclitaxel, TAX)敏感性及SKOV3/TAX细胞对紫杉醇耐药性的影响。方法 采用qRT-PCR检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞中miR-127-3p的表达水平;MTT法检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞增殖活力;Transwell检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞中KIF3B的表达水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-127-3p和KIF3B之间的靶向关系。结果 miR-127-3p SKOV3/TAX细胞中表达低于SKOV3细胞,TAX可上调SKOV3和SKOV3/TAX细胞中miR-127-3p的表达,降低SKOV3和SKOV3/TAX细胞中KIF3B的表达;过表达miR-127-3p能显著促进紫杉醇对SKOV3和SKOV3/TAX细胞增殖活力、侵袭和迁移能力的抑制作用;miR-127-3p靶向下调KIF3B表达。进一步研究发现,过表达miR-127-3p能通过下调KIF3B表达,促进紫杉醇对SKOV3和SKOV3/TAX细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论 过表达miR-127-3p通过抑制KIF3B表达,促进SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性,缓解卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性。

子宫动脉栓塞术联合超声引导下清宫术治疗子宫瘢痕妊娠的临床疗效及对血清miR-382-3p和miR-127-3p水平的影响

目的探讨子宫动脉栓塞术(UAE)联合超声引导下清宫术治疗子宫瘢痕妊娠(CSP)的疗效及其对血清miR-382-3p和miR-127-3p水平的影响。方法回顾性分析2020年6月至2021年6月就诊于同济大学附属第一妇婴保健院的CSP患者92例。按照治疗方法不同进行分组,其中UAE联合阴式子宫瘢痕妊娠病灶清除术+瘢痕修补术的患者43例,将其作为UAE+修补术组;经UAE联合超声引导下清宫患者49例,作为UAE+清宫组。比较两组患者的临床资料[CSPⅠ型/Ⅱ型例数、年龄、孕次、产次、剖宫产次数、停经天数、人流次数、子宫下段肌层厚度、孕囊最大径线以及术前血β-绒毛膜促性腺激素(β-hCG)水平]和手术相关指标(手术时间、术中出血量、住院费用、住院时间、血β-HCG水平、血β-HCG转阴时间和月经复潮时间),及比较两组患者血清miR-382-3p和miR-127-3p的相对表达水平,观察两组患者术后的并发症发生情况,比较两组CSP患者输卵管通畅情况、再妊娠活产率和CSP复发情况。结果两组患者的CSPⅠ型/Ⅱ型、年龄、孕次、产次、剖宫产次数、停经天数、人流次数、肌层厚度、术前血β-HCG水平以及孕囊最大径线比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。UAE+清宫组患者的手术时间、术中出血量、住院费用、住院时间、血β-HCG水平均明显低于UAE+修补术组,差异均有统计学意义(P<0.05),两组患者血β-HCG转阴时间和月经复潮时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3 d,UAE+清宫组患者的血清miR-382-3p和miR-127-3p的相对表达水平均明显高于UAE+修补术组,差异均有统计学意义(P<0.05)。UAE+清宫组患者总并发症发生率为8.16%,明显低于UAE+修补术组(20.93%),差异有统计学意义(P<0.05)。术后随访6个月,UAE+清宫组患者的输卵管通畅率为87.76%,明显高于UAE+修补术组(72.09%),差异有统计学意义(P<0.05)。术后随访12~24个月,UAE+清宫组患者的再妊娠活产率为73.47%,与UAE+修补术组(67.44%)相比,差异无统计学意义(P>0.05);UAE+清宫组患者的CSP复发率为4.08%,与UAE+修补术组(4.65%)相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论常规UAE联合超声引导下清宫术治疗CSP有利于降低术中出血量、缩短手术时间,促进恢复,提高输卵管通畅率,提高血清miR-382-3p和miR-127-3p相对表达水平,并减少并发症的发生。

MiR-127-3p靶向MAPK4对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。[方法]通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达;通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞;通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系;通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水平。[结果]在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中,miR-127-3p表达明显下调(P<0.01),而MAPK4表达明显上调(P<0.01);miR-127-3p与MAPK43′UTR区存在结合位点,miR-127-3p高表达明显抑制了含有野生型MAPK4质粒的荧光素酶活性(P<0.01),但对突变型MAPK4质粒的荧光素酶活性无影响;与Control组相比,miR-127-3pmimic组SP6.5细胞和OM431细胞增殖均明显下降(P<0.01),凋亡率均明显增加(P<0.01),划痕闭合率均明显降低(P<0.01),每视野侵袭细胞数目均明显减少(P<0.01),p-AKT(T308)/AKT、p-mTORr(S473)/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.01),共转染pc-MAPK4逆转上述变化。[结论]M iR-127-3p通过靶向下调MAPK4来抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,这可能与抑制AKT/mTOR通路激活有关。

Hsa-miR-127-3p在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:研究hsa-mi R-127-3p(mi R-127)在宫颈癌组织中的表达水平及其与临床病理特征之间的相关性,探讨mi R-127对宫颈癌细胞株Hela及Siha迁移和侵袭的影响。方法:Real-time PCR法检测50对宫颈癌及癌旁组织中mi R-127表达水平,分析mi R-127表达与临床病理特征的相关性。细胞转染mi R-127 mimics及mimics negative control,采用划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:mi R-127在宫颈癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05)。mi R-127表达与淋巴脉管间隙浸润相关(P=0.048),而与年龄、FIGO分期、病理类型、分化程度、病灶大小、浸润深度、有无淋巴结转移无关(P>0.05)。过表达mi R-127可抑制Hela及Siha细胞的迁移和侵袭能力。结论:mi R127在宫颈癌组织中低表达,并且抑制宫颈癌细胞株Hela及Siha的迁移和侵袭,可能与宫颈癌的发生发展密切相关。

miR-127-3p靶向MAPK4对肝癌HepG2细胞株生物学特性的影响

目的:探究miR-127-3p与MAPK4的靶向关系及其对肝癌HepG2细胞生长转移能力的影响。方法:生物信息预测miR-127-3p与MAPK4间靶向关系,荧光素酶实验验证,qRT-PCR检测两者在肝细胞中的基因表达。miR-127-3p mimic及pcDNA-MAPK4(pc-MAPK4)分别或同时转染HepG2细胞,qRT-PCR检测miR-127-3p表达,BrdU及Hoechst检测细胞增殖及凋亡,Transwell及划痕实验检测侵袭及迁移,Western blot(WB)检测Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、MMP-9、VEGF、MAPK4、MAPKAPK5、HSPB1表达。miR-127-3p mimic转染HepG2细胞后,建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录肿瘤体积,免疫组化及Tunel检测其增殖凋亡水平,WB检测MMP-9及MAPKAPK5表达。结果:与HL-7702比较,HepG2中miR-127-3p表达下调而MAPK4上调。HepG2中,miR-127-3p mimic上调miR-127-3p并下调MAPK4表达及MAPK4 wt荧光素酶活性,pc-MAPK4上调MAPK4并减弱miR-127-3p mimic的作用;miR-127-3p mimic减少BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,增加凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,pc-MAPK4增加BrdU阳性细胞及Ki67、Bcl-2表达,减少凋亡细胞及Bax、cleaved Caspase-3表达,减弱miR-127-3p mimic的抑增殖促凋亡作用;miR-127-3p mimic减少侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达,pc-MAPK4增加侵袭细胞数、划痕闭合率及MMP-9、VEGF表达并减弱miR-127-3p mimic的抗侵袭迁移作用;miR-127-3p mimic降低MAPKAPK5及HSPB1磷酸化比值,pc-MAPK4升高其比值并减弱miR-127-3p mimic的影响。miR-127-3p mimic减小HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤体积,减少组织中Ki67阳性细胞、MMP-9表达及MAPKAPK5磷酸化比值并增加凋亡细胞。结论:miR-127-3p靶向MAPK4可抑制肝癌HepG2细胞生长及转移。

circRNA_0031269调控miR-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移

目的 探讨circRNA_0031269调控mi R-127-3p影响宫颈癌细胞的增殖及迁移。方法 选取深圳市南山区前海蛇口自贸区医院2020年3月—2021年4月妇科肿瘤专科收治的40例宫颈癌患者,经手术治疗切除的癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶联反应(quantitativereal-time PCR,q RT-PCR)检测不同组织中circ RNA_0031269和mi R-127-3p的相对表达;双荧光素酶报告基因检测观察circRNA_0031269和miR-127-3p的靶向关系。采用MTT、Transwell细胞实验检测宫颈癌细胞增殖、迁移能力。结果 癌组织中circ RNA_0031269表达高于癌旁组织,mi R-127-3p表达低于癌旁组织(P<0.05);miR-127-3p过表达可降低WT-circ RNA0031269的荧光酶活性,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);anti-miR-127-3p过表达可抑制He La细胞增殖、迁移,与anti-miR-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);抑制circ RNA_0031269表达可抑制He La细胞增殖、迁移,上调miR-127-3p表达,与si-NC组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 circ RNA0031269可通过上调miR-127-3p表达降低宫颈癌He La细胞的增殖和迁移。

miR-127-3p在动脉粥硬化中的表达及干扰miR-127-3p对PDGF-BB处理的HAoSMC增殖迁移的影响

目的探讨miR-127-3p对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的人主动脉平滑肌细胞(HAoSMC)增殖、迁移的影响。方法收集动脉粥硬化患者及正常者血清,将HAoSMC分为对照组(未作任何处理)、模型组(25μg/L PDGF-BB)、anti-miR-NC组(转染miR-127-3p抑制剂对照+25μg/L PDGF-BB)、anti-miR-127-3p组(转染miR-127-3p抑制剂+25μg/L PDGF-BB)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-127-3p和NF-κB mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞周期;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力;Transwell检测细胞迁移;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、神经钙粘蛋白(N-cadherin)、上皮钙粘蛋白(E-cadherin)的表达。结果与正常对照组相比,动脉粥硬化患者血清中miR-127-3p表达水平升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组miR-127-3p表达水平升高,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞OD值升高,迁移细胞数增加,Ki67、N-cadherin表达水平升高,E-cadherin表达水平降低(P<0.05)。与antimiR-NC组相比,anti-miR-127-3p组miR-127-3p表达水平降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,细胞OD值降低,迁移细胞数减少,Ki67、N-cadherin表达水平降低,E-cadherin表达水平升高,NF-κB mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论干扰miR-127-3p表达可抑制PDGF-BB处理的HAoSMC增殖、迁移,其机制可能与NF-κB信号通路有关。

miR-127-3p在肾癌中的表达及生物学意义

目的检测肾癌组织中miR-127-3p的表达量,并探索miR-127-3p与肾细胞癌形成及发展的生物学关系。方法利用RT-PCR技术检测miR-127-3p在肾癌组织和癌旁正常组织的表达量;同时运用细胞迁移划痕试验、MTT和流式细胞仪检测miR-127-3p对肾癌细胞系786-O和ACHN细胞迁移、增殖和凋亡的影响。结果 miR-127-3p在肾癌细胞中的表达量比癌旁正常组织低(P<0.05);在细胞水平,miR-127-3p可抑制786-O和ACHN细胞迁移,抑制细胞增殖,同时具有诱导肾癌细胞凋亡的作用。结论 miR-127-3p可作为肾细胞癌形成、发展的抑制因子,有望成为肾癌生物治疗的靶点。

血浆miR-127-3p及miR-129-5p分子与狼疮性肾炎微观血瘀证的相关性探讨

【目的】探讨狼疮性肾炎(LN)患者miR-127-3p、miR-129-5p分子的表达情况及与微观血瘀证和相关临床指标的相关性。【方法】收集符合微观血瘀证及微观非血瘀证的LN患者各30例,同时选取15例健康志愿者作为健康对照组。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测所有受试者血浆miR-127-3p、miR-129-5p分子表达量,比较2组LN患者肾功能[血尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)、血肌酐(Cr)、血清胱抑素(Cys-C)]和肾病理指数[活动性指数(AI)、慢性化指数(CI)]的差异,分析miR-127-3p、miR-129-5p分子与上述临床指标的相关性。【结果】(1)微观血瘀证组患者miR-127-3p、miR-129-5p及Cr、BUN、UA、Cys-C、AI、CI水平均明显高于非血瘀证组,差异均有统计学意义(P<0.05)。微观血瘀证组miR-127-3p的表达量明显高于健康对照组(P<0.05),而2组LN患者miR-129-5p表达与健康对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)LN患者miR-127-3p表达量与血Cr、BUN、UA、Cys-C、AI水平具有正相关性(P<0.05),miR-129-5p表达量与血Cr、BUN水平具有正相关性(P<0.05)。【结论】LN合并微观血瘀证患者肾功能更差,病理活动、慢性化程度均更高;MiR-127-3p、miR-129-5p分子与微观血瘀证具有一定相关性,有可能作为潜在的生物标志物以指导辨证。

miR-127-3p通过靶向KIF3B抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨miR-127-3p对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其与KIF3B的关系。方法:选取SKOV3、HOSEpiC细胞。SKOV3细胞根据转染不同物质分为NC组、miR-NC组(miR-NC)、miR-127-3p组(miR-127-3p-mimics)、si-NC组(si-NC)和si-KIF3B组(si-KIF3B)。MTT评估增殖;Transwell分析迁移、侵袭;实时荧光定量PCR分析miR-127-3p、KIF3B mRNA含量;Western blot分析KIF3B蛋白表达。生物学、荧光素酶报告评估miR-127-3p与KIF3B的作用。结果:SKOV3细胞miR-127-3p水平低于HOSEpiC细胞(P<0.01),SKOV3细胞KIF3B蛋白、基因mRNA含量高于HOSEpiC细胞(P<0.01)。与NC组、miR-NC组相比,48和72 h时miR-127-3p组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.05),与NC组、si-NC组相比,48和72 h时si-KIF3B组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。与NC、miR-NC组比较,miR-127-3p组KIF3B蛋白表达水平下降(P<0.01)。与WT-KIF3B组相比,miR-127-3p+WT-KIF3B组细胞荧光素酶活性下降(P<0.01)。结论:卵巢癌细胞低表达miR-127-3p,高表达KIF3B,miR-127-3p上调可能通过KIF3B抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

miR-127-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及Zwint-1基因表达的影响

目的探讨miR-127-3p调控Zeste white 10(ZW10)相互作用着丝粒蛋白1(Zwint-1)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法体外培养OSCC细胞系PE/CA-PJ15、CAL27,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(NC组)、过表达miR-127-3p组(miR-127-3p-mimics组)。倒置荧光显微镜下观察转染效果;采用实时荧光定量PCR法检测miR-127-3p、Zwint-1 mRNA水平;MTT法检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测PE/CA-PJ15、CAL27细胞迁移能力;Transwell实验检测PE/CA-PJ15、CAL27细胞侵袭能力;免疫印迹法检测人增殖细胞核抗原(Ki-67),凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,侵袭及迁移相关蛋白E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及Zwint-1蛋白表达情况;应用TargetScan数据库预测miR-127-3p与Zwint-1靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果细胞转染成功;与NG组、NC组比较,miR-127-3p-mimics组PE/CA-PJ15、CAL27细胞miR-127-3p、增殖抑制率、E-cadherin、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),划痕治愈率、细胞侵袭数、Zwint-1 mRNA及其蛋白、Ki-67、N-cadherin、Vimentin、Bcl-2蛋白表达显著减少或降低(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示Zwint-1是miR-127-3p的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系,且miR-127-3p可负向调控Zwint-1表达。结论上调miR-127-3p表达可靶向下调Zwint-1表达,并抑制OSCC细胞增殖、侵袭及迁移。

血清miR-127-3p表达水平对原发性肝癌的诊断价值

目的研究原发性肝癌患者血清微小RNA-127-3P(miR-127-3p)表达水平及其诊断价值。方法选取2018年6月—2019年5月四川省巴中市中心医院(以下简称“我院”)诊治的93例患者为原发性肝癌组,另选取我院同期体检的健康志愿者60名为对照组。采用实时定量PCR检测血清miR-127-3p的相对表达量,并分析其在原发性肝癌诊断中的价值。结果原发性肝癌患者血清miR-127-3p相对表达量低于对照组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。不同细胞分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移的原发性肝癌患者血清miR-127-3p相对表达量比较,差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。血清miR-127-3p相对表达量诊断原发性肝癌的截断值为0.420,AUC为0.793(95%CI:0.758~0.816,P<0.01),敏感度和特异性分别为0.860、0.850。结论原发性肝癌患者血清中miR-127-3p呈低表达,在不同肿瘤TNM分期、细胞分化程度及有无淋巴结转移存在差异,可作为诊断原发性肝癌的分子标志物。

外周血miR-299-5p和miR-127-3p的表达水平与非综合征型唇腭裂相关性研究

目的:研究外周血中miR-299-5p和miR-127-3p的表达水平与非综合征型唇腭裂(NSOC)的相关性。方法:选取于哈尔滨医科大学附属第一医院就诊的唇裂伴或不伴腭裂(CL/P)患儿、单纯腭裂(CPO)患儿和健康儿童各10例,采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测各组外周血中miR-299-5p和miR-127-3p的表达水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线和曲线下面积(AUC)分析其对NSOC的诊断效能。结果:与健康对照组相比,CL/P组和CPO组miR-299-5p和miR-127-3p的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-299-5p、miR-127-3p及其联合诊断NSOC的AUC分别为0.770(95%CI:0.558~0.982)、0.810(95%CI:0.651~0.969)、0.915(95%CI:0.754~0.985)。结论:NSOC患儿外周血miR-299-5p和miR-127-3p表达下调,可能与NSOC的发生有关,其可能成为诊断NSOC的潜在生物标记物,且二者联合诊断效能更优。

血浆miR-127-3p对原发性乳腺癌患者的检测效果

目的探讨血浆miR-127-3p在原发性乳腺癌患者检测中的应用效果。方法选取2012年6月至2015年8月在该院接受治疗的乳腺癌患者125例组成观察组、良性乳腺肿瘤患者97例组成对照组、健康体检者82例组成健康组,收集以上患者的血浆标本。运用实时荧光定量反转录PCR法对患者血浆中的miR-127-3p表达进行统计,并对乳腺癌患者血浆miR-127-3p水平与癌胚抗原（CEA）、血清癌抗原153（CA153）表达进行相关性分析。Mann-Whitney检验分析血浆miR-127-3p的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果乳腺癌患者血浆中miR-127-3p的相对表达量15.376（6.103~17.254）显著高于乳腺良性肿瘤患者3.213（2.015~5.108）和健康对照者2.410（1.185~4.369）,差异具有统计学意义（P〈0.05）。而对照组患者与健康体检者之间,差异无统计学意义（P〉0.05）。miR-127-3p表达水平与CA153表达水平呈正相关（r=0.680,P〈0.05）,与CEA无明显相关性（r=0.246,P=0.061）。乳腺癌患者血浆miR-127-3p的表达水平与不同病理特征组间的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论血浆miR-127-3p在乳腺癌患者检测中的高表达可作为一个诊断乳腺癌的重要指标。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。