circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

宫颈癌组织中MiR-1287-5p、HOXA7表达及临床意义

目的:探究miR-1287-5p、同源盒基因A7(HOXA7)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法:收集2013年6月-2017年1月本院收治的宫颈癌患者92例临床资料,qRT-PCR法检测宫颈癌组织和癌旁组织中MiR-1287-5p和HOXA7mRNA表达,Pearson分析MiR-1287-5p与HOXA7表达相关性;Kaplan-Meier生存曲线分析MiR-1287-5p和HOXA7表达水平与宫颈癌患者预后关系;COX回归分析影响宫颈癌患者预后的危险因素。结果:宫颈癌组织中miR-1287-5p(0.71±0.16)低于癌旁组织(1.03±0.05),HOXA7 mRNA(1.51±0.24)高于癌旁组织(1.02±0.03)(均P<0.05)宫颈癌组织中MiR-1287-5p与HOXA7表达呈负相关(r=-0.484,P<0.05);MiR-1287-5p和HOXA7表达水平与患者人乳头瘤病毒(HPV)感染、淋巴结转移、分化状态和FIGO分期有关(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示,MiR-1287-5p高表达组生存率高于低表达组(logrank=12.471,P=0.000),HOXA7低表达组生存率高于高表达组(logrank=5.180,P=0.023);多因素COX回归分析,HPV感染阳性、组织低分化状态、FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、miR-1287-5p低表达和HOXA7高表达是影响宫颈癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中miR-1287-5p表达降低,HOXA7表达升高,二者异常表达影响宫颈癌患者预后。

hsa_circ_0140180通过调控miR-1287-5p影响食管鳞状细胞癌细胞的迁移及侵袭能力

目的:探讨hsa_circ_0140180在食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞中的表达水平及对其细胞恶性生物学行为的影响与分子机制。方法:收集2018年11月至2019年3月间在南充市中心医院胸心外科手术切除的6对ESCC组织和对应癌旁组织并进行全转录组测序,筛选出在ESCC组织中低表达的hsa_circ_0140180;建立过表达hsa_circ_0140180的TE-1和KYSE30细胞,qPCR法检测hsa_circ_0140180在人正常食管上皮细胞、ESCC细胞中的表达,以及过表达hsa_circ_0140180后TE-1和KYSE30细胞中miR-1287-5p的表达;CCK-8法和FCM检测过表达hsa_circ_0140180对TE-1和KYSE30细胞增殖和周期的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达hsa_circ_0140180对TE-1和KYSE30细胞迁移和侵袭能力的影响,双荧光素酶报告实验验证hsa_circ_0140180与miR-1287-5p的靶向关系。WB法检测过表达hsa_circ_0140180对TE-1和KYSE30细胞中EMT相关蛋白的表达及PI3K-Akt通路的磷酸化水平的影响。结果:转录组测序和qPCR结果显示,hsa_circ_0140180在ESCC组织和细胞中呈低表达(P<0.05或P<0.01),并确认其闭合环状分子特征且定位于细胞质。过表达hsa_circ_0140180能明显抑制ESCC细胞的迁移及侵袭能力(P<0.05),但不影响其增殖和周期。双荧光素酶报告基因实验证实hsa_circ_0140180靶向结合miR-1287-5并负调控其表达(P<0.01)。过表达hsa_circ_0140180能显著上调TE-1和KYSE30细胞中E-cadherin的表达(P<0.05),而显著下调Snail的表达(P<0.05)和PI3K-Akt通路的磷酸化水平(P<0.01或P<0.001)。结论:hsa_circ_0140180在ESCC细胞及组织中呈低表达,其可能通过调控miR-1287-5p表达来降低PI3K-Akt通路的磷酸化水平和抑制EMT进程,从而影响ESCC细胞的迁移及侵袭能力。

miR-1287通过干扰GPX4的表达调控乳腺癌细胞的增殖

目的:探讨miRNA-1287(miR-1287)通过靶向结合并负向调控谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达在乳腺癌增殖中的作用及相关分子机制。方法:收集2018年01月至2019年01月期间来我院就诊的50位乳腺癌患者肿瘤标本及癌旁标本;运用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR),检测乳腺癌患者肿瘤标本及癌旁标本miR-1287、GPX4 mRNA的表达水平;运用Western blot检测乳腺癌患者肿瘤标本及癌旁标本GPX4蛋白表达水平;运用Starbase 2.0软件预测miR-1287与GPX4 mRNA的结合位点;构建野生型位点(wt)和突变型位点(mut)GPX4荧光素酶报告基因质粒,探索miR-1287能否靶向结合并影响GPX4的表达;通过MTT实验检测miR-1287对乳腺癌细胞增殖能力的影响;通过谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测乳腺癌细胞GSH水平,运用活性氧(ROS)试剂盒检测乳腺癌细胞活性氧水平。结果:乳腺癌患者肿瘤标本中miR-1287水平显著低于癌旁组织;而乳腺癌患者肿瘤标本中GPX4 mRNA及蛋白表达水平明显高于癌旁组织,其表达水平与miR-1287水平呈负相关关系;Starbase 2.0软件分析结果提示,miR-1287可以直接靶向结合GPX4 mRNA序列中的潜在位点;荧光素酶报告基因实验结果发现,miR-1287 mimic显著降低GPX4(wt)荧光素酶活性,对GPX4(mut)荧光素酶活性无明显影响;过表达miR-1287明显降低乳腺癌细胞GSH水平,增加ROS水平并显著抑制乳腺癌细胞增殖能力,而铁死亡抑制剂Fer-1预处理可以逆转miR-1287对乳腺癌细胞的上述作用,提示miR-1287通过促进铁死亡来执行其抑癌功能。结论:miR-1287通过抑制GPX4表达,进而促进肿瘤细胞铁死亡过程,最终抑制乳腺癌细胞增殖能力。

SBF2-AS1通过调控miR-1287-5p/FSCN1轴影响胶质瘤细胞的增殖凋亡和放射敏感性

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA 1(SBF2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、凋亡和放射敏感性的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测正常人脑神经胶质细胞HEB和胶质瘤细胞LN18、SW1088、Hs683中SBF2-AS1、miR-1287-5p和肌成束蛋白1(FSCN1)mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中FSCN1蛋白表达水平。以胶质瘤细胞LN18和SW1088为研究对象,分别转染SBF2-AS1小干扰RNA(siRNA)、miR-1287-5p模拟物或FSCN1 siRNA,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,Western blot检测cyclin D1、cleaved-caspase 3和磷酸化组蛋白2A变异体(γ-H2AX)蛋白的表达情况。采用双荧光素酶报告基因实验验证SBF2-AS1与miR-1287-5p、miR-1287-5p与FSCN1的调控关系。结果与HEB细胞比较,胶质瘤细胞LN18、SW1088和Hs683中SBF2-AS1、FSCN1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05),miR-1287-5p表达水平显著降低(P<0.05)。下调SBF2-AS1、上调miR-1287-5p或下调FSCN1表达后,LN18和SW1088细胞增殖活性和cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.001),凋亡率和cleaved-caspase 3蛋白表达升高(均P<0.001),存活分数降低(均P<0.001),γ-H2AX蛋白表达升高(均P<0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果显示,共转染miR-1287-5p模拟物与SBF2-AS1-WT或FSCN1-WT的LN18和SW1088细胞荧光素酶活性低于共转染miR-NC与SBF2-AS1-WT或FSCN1-WT的LN18和SW1088细胞(均P<0.001),而共转染miR-1287-5p模拟物与SBF2-AS1-MUT或FSCN1-MUT的LN18和SW1088细胞与共转染miR-NC与SBF2-AS1-MUT或FSCN1-MUT的LN18和SW1088细胞荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。si-SBF2-AS1组LN18和SW1088细胞中miR-1287-5p mRNA的表达水平高于si-NC组(均P<0.05),pcDNA-SBF2-AS1组LN18和SW1088细胞中miR-1287-5p mRNA的表达水平低于pcDNA-NC组(均P<0.05)。miR-1287-5p组LN18和SW1088细胞中FSCN1蛋白表达水平低于miR-NC组(均P<0.05),anti-miR-1287-5p组LN18和SW1088细胞中FSCN1蛋白表达水平高于anti-miR-NC组(均P<0.05)。同时下调miR-1287-5p和SBF2-AS1或同时上调FSCN1和下调SBF2-AS1时,LN18和SW1088细胞增殖活性和cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.001),凋亡率和cleaved-caspase 3蛋白表达降低(均P<0.001),存活分数升高(均P<0.001),γ-H2AX蛋白表达降低(均P<0.001)。结论SBF2-AS1在胶质瘤细胞中呈高表达,下调SBF2-AS1表达通过调控miR-1287-5p/FSCN1轴抑制胶质瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,并增强细胞的放射敏感性。

九香虫水提液通过miR-1287-5p/泛素特异性肽酶22通路调控非小细胞肺癌增殖、侵袭和迁移的分子机制

将九香虫水提液用于非小细胞肺癌的治疗,探讨九香虫水提液对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。用九香虫水提取液(44、66、99 mg/L)处理A549细胞,筛选最适浓度99 mg/L。用脂质体法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-1287-5p组(转染miR-1287-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、antimiR-1287-5p组(转染anti-miR-1287-5p)、Jiuxiang aqueous extract+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC用99 mg/L九香虫水提取液处理)、Jiuxiang aqueous extract+anti-miR-1287-5p组(转染anti-miR-1287-5p用99 mg/L九香虫水提取液处理)转染至A549细胞;噻唑蓝(MTT)法、迁移实验(Transwell)小室、免疫印迹(Western blot)实验、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞的抑制率、迁移侵袭、细胞周期蛋白依赖激酶(Cyclin D1)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)、基质金属蛋白酶(MMP) 2、MMP-9、干扰泛素特异肽酶(USP22)、miR-1287-5p的表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。九香虫水提取液呈浓度依赖性显著提高A549细胞的抑制率,抑制细胞的迁移和侵袭,下调Cyclin D1、MMP-2、MMP-9,上调p21(P<0.05)。九香虫水提取液呈浓度依赖性显著上调miR-1287-5p的表达,下调USP22表达,并且过表达miR-1287-5p能够抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,下调Cyclin D1、MMP-2、MMP-9,上调p21,而抑制miR-1287-5p可逆转九香虫水提取液对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用,并上调Cyclin D1、MMP-2、MMP-9,下调p21。此外,miR-1287-5p明显的抑制野生型USP22的A549细胞荧光活性。九香虫水提取液可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制与上调miR-1287-5p进而靶向抑制USP22相关,可为九香虫水提取液治疗非小细胞肺癌提供支持。

circ_0008039调控乳腺癌细胞自噬、增殖及细胞周期机制研究

目的分析circ_0008039对乳腺癌细胞自噬、增殖、细胞周期的影响及其机制。方法选取2018年1月至2019年10月西北妇女儿童医院诊治的30例乳腺癌患者作为研究对象,收集其乳腺癌组织和癌旁组织进行检测。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌组织、癌旁组织中circ_0008039及微小RNA(miR)-1287-5p表达水平。体外培养健康人乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞系(SKBR3、BT474、MCF-7、BT-20),分别将si-NC、si-circ_0008039、si-circ_0008039、anti-miR-NC、si-circ_0008039与anti-miR-1287-5p转染至BT-20细胞,按照转染方式的不同分为si-NC组、si-circ_0008039组、si-circ_0008039+anti-miR-NC组及si-circ_0008039+anti-miR-1287-5p组。采用qRT-PCR检测各组细胞中circ_0008039、miR-1287-5p表达水平;采用CCK-8法检测细胞增殖、吸光度(A),采用流式细胞仪检测细胞周期,采用双荧光素酶报告实验检测circ_0008039与miR-1287-5p的靶向关系,采用Western blotting法检测微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、Beclin-1、p21、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达水平。结果乳腺癌组织的circ_0008039表达水平高于癌旁组织,miR-1287-5p表达水平低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌SKBR3、BT474、MCF-7、BT-20细胞中circ_0008039的表达水平高于MCF-10A细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲低circ_0008039后,si-circ_0008039组A、CyclinD1蛋白表达水平低于si-NC组,LC3B、Beclin-1、p21蛋白表达水平高于si-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。si-circ_0008039组G0/G1期细胞比值大于si-NC组(P<0.05)。miR-1287-5p组WT-circ_0008039载体的荧光素酶活性低于miR-NC组(P<0.05)。下调miR-1287-5p表达水平后,si-circ_0008039+anti-miR-1287-5p组的miR-1287-5p水平、G0/G1期细胞比值、LC3B、Beclin-1、p21蛋白水平低于si-circ_0008039+anti-miR-NC组,si-circ_0008039+anti-miR-1287-5p组的A、S期细胞比例、CyclinD1蛋白水平高于si-circ_0008039+anti-miR-NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论敲低circ_0008039可通过上调miR-1287-5p诱导乳腺癌细胞周期阻滞,抑制细胞增殖并促进细胞自噬。