miR-1299通过靶向调控CCND1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移和凋亡的影响

目的探讨miR-1299通过靶向调控细胞周期蛋白D1(CCND1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、转移和凋亡的影响。方法回顾性收集2021年1月至2022年1月入青岛大学附属青岛市中心医院胸外科行原发性NSCLC手术的患者29例,取癌组织和癌旁正常肺组织,培养人正常肺上皮细胞16HBE和NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1,RT-qPCR法检测组织和细胞中miR-1299和CCND1的表达,取生长良好的H1299细胞,将其分为对照组(转染miR-control)、miR-1299 NC组(转染miR-1299 NC)、miR-1299 mimic组(转染miR-1299 mimic)、miR-1299 inhibitor组(转染miR-1299 inhibitor)、PCDNA组(转染pcDNA3.1-NC)、PCDNA-CCND1组(转染pcDNA3.1-CCND1真核表达载体)、miR-1299 mimic+PCDNA组(共同转染miR-1299 mimic和pcDNA3.1-NC)和miR-1299 mimic+PCDNA-CCND1组(共同转染miR-1299 mimic和pcDNA3.1-CCND1真核表达载体)。检测各组细胞增殖、迁移、凋亡、CCND1蛋白的表达及miR-1299与CCND1的靶向关系。结果癌组织中miR-1299的相对表达明显低于癌旁正常肺组织,癌组织中CCND1的相对表达明显高于癌旁正常肺组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1中miR-1299的相对表达明显低于人正常肺上皮细胞16HBE,NSCLC细胞系H1299、A549、PC-9、H1975、SPC-A1中CCND1的相对表达明显高于人正常肺上皮细胞16HBE,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,miR-1299 mimic组H1299细胞增殖和迁移能力明显降低,凋亡能力明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);而miR-1299 inhibitor组H1299细胞增殖和迁移能力明显升高,凋亡能力明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-1299 mimic组的CCND1-WT的荧光素酶活性明显低于miR-1299 NC组,与miR-1299 NC组相比,miR-1299 mimic组中CCND1蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-1299和CCND1呈负相关(r=-0.535,P=0.003)。与PCDNA组相比,PCDNA-CCND1组H1299细胞增殖和迁移能力明显升高,凋亡能力显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与miR-1299 mimic+PCDNA组相比,miR-1299 mimic+PCDNA-CCND1组H1299细胞增殖和迁移能力明显升高,凋亡能力明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在NSCLC组织和细胞中,miR-1299表达降低,CCND1表达升高,过表达miR-1299可能通过靶向抑制CCND1表达,抑制NSCLC细胞的增殖、转移和促进其凋亡。

lncRNA FOXD2-AS1靶向miR-1299抑制口腔鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究

目的探讨lncRNAFOXD2-AS1靶向miR-1299抑制口腔鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究。方法实验分为si-NC组、si-FOXD2-AS1组、pcDNA-NC组、pcDNA-FOXD2-AS1组、miR-NC组、miR-1299组、anti-miR-NC+si-FOXD2-AS1组、anti-miR-1299+si-FOXD2-AS1组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测lncRNAFOXD2-AS1和miR-1299的表达水平。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告实验检测lncRNAFOXD2-AS1与miR-1299的靶向作用。Western blot法检测CyclinD1、Cleaved-caspase-3、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果口腔鳞癌细胞CAL27、SCC-090、HSC-3中lncRNAFOXD2-AS1表达水平显著升高,miR-1299表达水平显著降低(P<0.05)。lncRNAFOXD2-AS1低表达或miR-1299高表达均可抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。lncRNAFOXD2-AS1靶向调控miR-1299,低表达miR-1299可以逆转lncRNAFOXD2-AS1低表达对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。lncRNAFOXD2-AS1低表达抑制β-catenin蛋白表达,而低表达miR-1299逆转了lncRNAFOXD2-AS1低表达对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论干扰lncRNAFOXD2-AS1表达可能通过上调miR-1299抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

miR-1299在食管癌中的表达及其对食管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨微RNA(microRNA,miR)-1299在食管癌组织中的表达水平及其对食管癌TE1细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:选取河北医科大学第四医院2017年6月—2018年6月收治的58例食管癌患者病理组织标本及配对癌旁组织。采用实时荧光定量PCR法检测癌及其相应癌旁组织中miR-1299的表达水平,并分析miR-1299表达与食管癌患者临床病理特征之间的关系。在食管癌TE1细胞中转入miR-1299模拟物(miR-1299-mimics)使miR-1299过表达。采用CCK-8法检测TE1细胞的增殖情况,Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力。最后,通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测miR-1299过表达的TE1细胞中侵袭转移标志物基质金属蛋白酶11(matrix metalloproteinase11,MMP11)和MMP16 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:miR-1299在食管癌组织中的表达水平明显低于相应的癌旁组织(P <0.001),而且miR-1299的表达水平与食管癌患者的临床分期具有相关性(P <0.05)。TE1细胞转入miR-1299-mimics后,miR-1299的表达水平明显升高(P <0.01),细胞的增殖能力无明显变化(P> 0.05),而细胞的迁移(P <0.001)和侵袭(P <0.01)能力明显降低,细胞侵袭转移相关标志物MMP11和MMP16 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.01)。结论:miR-1299在食管癌组织中表达下调,而且可能抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力。

circ_0000337通过靶向作用miR-1299影响胶质瘤细胞增殖及凋亡

目的:探讨环状RNA_0000337(circ_0000337)对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及其对微小RNA-1299(miR-1299)的调控作用。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常脑组织、胶质瘤组织中circ_0000337和miR-1299的表达量;体外培养人胶质瘤细胞U251,si-NC(si-NC组)、si-circ_0000337(si-circ_0000337组)、miR-NC(miR-NC组)、miR-1299 mimics(miR-1299组)、si-circ_0000337和anti-miR-NC(si-circ_0000337+anti-miR-NC组)、si-circ_0000337和anti-miR-1299(si-circ_0000337+anti-miR-1299组)转染入U251细胞;采用CCK-8实验及流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000337与miR-1299的靶向关系。结果:与正常脑组织比较,胶质瘤组织中circ_0000337的表达水平升高(P<0.05),miR-1299的表达水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ_0000337组细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-1299组细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);circ_0000337可靶向调控miR-1299;与si-circ_0000337+anti-miR-NC组比较,si-circ_0000337+anti-miR-1299组细胞活力升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。结论:抑制circ_0000337表达可通过靶向调控miR-1299的表达而抑制胶质瘤细胞增殖及促进细胞凋亡。

miR-1299在肿瘤发病中的作用及潜在机制

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类广泛存在于真核生物中进化保守的非编码小的内源性单链的RNA,可以作为重要的调控分子参与生命活动的不同过程,其中miRNA-1299的研究主要集中在癌症中,被认为通过靶向关键致癌基因或抗癌基因而充当一种肿瘤抑制因子,调节其下游靶基因的表达,从而激活或抑制其转录,调控细胞增殖,迁移,存活,程序性细胞死亡等相关生命活动,近年来日益成为疾病机理和生物标志物研究的热点。因此阐明miR-1299在肿瘤发生,增殖,凋亡,侵袭,迁移和血管生成发展中的重要调控作用,将为miR-1299用作肿瘤早期诊断的新型的生物标志物提供新的视角。

纳米氧化钕诱导大鼠多器官炎症中miR⁃4326和miR⁃1299的表达及意义

探讨稀土纳米氧化钕(NPs⁃Nd_(2)O_(3))致雄性SD大鼠多器官炎症反应中miR⁃4326、miR⁃1299的表达及意义。将42只健康雄性SD大鼠随机分为对照组和NPs⁃Nd_(2)O_(3)(100 mg/kg)染毒组,采用非暴露式气管内一次性滴注法对大鼠染毒,分别在染毒第7、14和28天后处死大鼠。提取大鼠肺、肝、肾、脾、脑、睾丸组织中的总RNA,利用实时荧光定量PCR检测大鼠各脏器中IL⁃6和TNF⁃α的水平以及MiR⁃4326、MiR⁃1299的水平;Pearson相关分析探讨miR⁃4326、miR⁃1299与TNF⁃α、IL⁃6的相关性;TargetScan、miReap、miRanda网站预测与miR⁃4326和miR⁃1299相互作用的下游靶基因。结果显示NPs⁃Nd_(2)O_(3)染毒7、14、28天后,大鼠肺组织中TNF⁃α、IL⁃6的表达均升高(P<0.05);脑、肝、脾、肾、睾丸组织中TNF⁃α的表达水平均显著上升(P<0.05);大鼠各脏器中的miR⁃4326、miR⁃1299表达水平均明显上调(P<0.05),且与IL⁃6或TNF⁃α的表达呈相关性。KEGG通路富集分析发现,与miR⁃4326作用的mR⁃NAs中有20个mRNAs参与JAK⁃STAT通路,20个mRNAs参与NF⁃κB通路;与miR⁃1299作用的mRNAs中有39个mRNAs参与JAK⁃STAT通路,33个mRNAs参与NF⁃κB通路,1个mRNA同时参与以上两条通路。表明NPs⁃Nd_(2)O_(3)经呼吸道进入大鼠体内可引起大鼠肺、脑、肝、脾、肾、睾丸炎症反应;NPs⁃Nd_(2)O_(3)染毒组大鼠各脏器中miR⁃4326、miR⁃1299表达水平显著上升,并与IL⁃6或TNF⁃α的表达具有相关性;miR⁃4326、miR⁃1299可能通过JAK⁃STAT通路和NF⁃κB通路参与NPs⁃Nd_(2)O_(3)诱导的大鼠多器官炎症反应。

微RNA-1299在三阴性乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨微RNA-1299(mircoRNA-1299,miR-1299)在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)组织中的表达及其对TNBC细胞系MDA-MB-231和BT-549迁移和侵袭的影响。方法:选取河北医科大学第四医院2016年8月—2017年9月收治的126例乳腺癌患者的肿瘤组织标本及对应的癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测Luminal型、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,HER-2)过表达型、TNBC型乳腺癌组织以及TNBC组织与其癌旁正常组织中miR-1299的表达水平;分析miR-1299表达与乳腺癌患者临床病理特征之间的关系。选用TNBC型MDA-MB-231和BT-549细胞并转染miR-1299-mimics,使miR-1299在MDA-MB-231和BT-549细胞中过表达;采用划痕愈合实验和Transwell小室实验检测miR-1299过表达对MDA-MB-231和BT-549细胞迁移和侵袭能力的影响;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1299过表达的MDA-MB-231和BT-549细胞中迁移和侵袭标志物基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP17 mRNA及蛋白的表达水平。结果:miR-1299在TNBC型乳腺癌组织中呈低表达,而在Luminal型和HER-2过表达型中表达较高(P值均<0.01);与癌旁正常组织相比,TNBC组织中miR-1299的表达水平明显下调(P <0.01)。miR-1299的表达水平与乳腺癌患者的肿瘤浸润和淋巴结转移相关(P值均<0.05)。MDA-MB-231和BT-549细胞转染miR-1299-mimics后,2株细胞中miR-1299的表达水平明显升高(P值均<0.01)。miR-1299过表达后,MDAMB-231和BT-549细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(P值均<0.001),侵袭和迁移标志物MMP2和MMP17 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P值均<0.01)。结论:miR-1299在TNBC组织中表达下调,并可能抑制TNBC型乳腺癌细胞的侵袭和迁移。

circ_0079593对儿童急性淋巴细胞白血病KOCL44细胞增殖和凋亡的影响及分子机制研究

目的探讨circ_0079593对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)KOCL44细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法收集27例急性淋巴细胞白血病患儿和健康志愿者的外周血,RT-qPCR检测circ_0079593和miR-1299的表达水平;将KOCL44细胞随机分为si-NC组、si-circ_0079593组、miR-NC组、miR-1299组、si-circ_0079593+anti-miR-NC组、si-circ_0079593+anti-miR-1299组;CCK-8检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测circ_0079593和miR-1299的靶向关系。结果与健康志愿者比较,ALL患者外周血中circ_0079593表达水平升高,miR-1299表达水平降低(P<0.05)。抑制circ_0079593表达或过表达miR-1299,KOCL44细胞活性降低,细胞凋亡率升高(P<0.05)。干扰miR-1299表达逆转了抑制circ_0079593表达对急性淋巴细胞白血病KOCL44细胞增殖和凋亡的作用。circ_0079593靶向调控miR-1299。结论抑制circ_0079593表达通过靶向上调miR-1299抑制儿童急性淋巴细胞白血病KOCL44细胞生长和诱导其凋亡。