miR-133b基因转染对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭的影响

目的观察miR-133b基因转染对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭的影响。方法取对数期生长AGS细胞株,采用脂质体转染法将pc DNA3. 1-pri-miR-133b质粒、pc DNA3. 1空载质粒转染至AGS细胞,分别设为过表达组和空载组,另取不做处理为空白组,每组设置5个复孔。倒置荧光显微镜观察转染效率,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染后miR-133b基因表达情况; MTT法检测并对比各组细胞增殖情况;采用划痕试验及Transwell试验检测并对比各组细胞迁移及侵袭情况;采用Western blot法检测并对比各组纤维生长因子受体1(FGFR1)、钠氯依赖γ-氨基丁酸转运体(SLC6A1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达情况。结果过表达组和空载组质粒转染效率均大于80%;过表达组miR-133b相对表达量与空白组和空载组相比显著较高(P <0. 05),空白组和空载组相比差异无统计学意义(P> 0. 05);过表达组与空白组和空载组不同时刻MTT实验OD值相比,差异均有统计学意义(P <0. 05),其中过表达组低于空白组和空载组,空白组与空载组比较差异无统计学意义(P> 0. 05);三组MTT实验OD值均随时间延长呈显著升高趋势(P <0. 05);过表达组与空白组和空载组迁移率、穿膜细胞数相比,差异均有统计学意义(P <0. 05),其中过表达组低于空白组和空载组,空白组与空载组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05);过表达组与空白组和空载组FGFR1、SLC6A1、HIF-1α蛋白相对表达量相比,差异均有统计学意义(P <0. 05),其中过表达组高于空白组和空载组,空白组与空载组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 miR-133b过表达可显著抑制人胃癌细胞株AGS的增殖、迁移及侵袭能力,可能与下调FGFR1、SLC6A1、HIF-1α蛋白表达有关。

RohA信号通路介导miR-133b调控脑缺血再灌注后血脑屏障通透性

目的:探究miR-133b在脑缺血再灌注后血脑屏障通透性调控中的作用及其机制。方法:采用大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)小鼠模型,小鼠脑内注射miR-133b agomir进行miR-133b过表达,TTC染色检测miR-133b过表达对小鼠脑梗死体积的影响;实时定量PCR检测MCAOR小鼠缺血侧脑组织及外周血miR-133b表达水平;采用悬挂实验评估miR-133b过表达对MCAO/R模型小鼠神经功能改善的影响;Western blot及ELISA检测miR-133b过表达对MCAO/R模型小鼠脑内RohA、claudin-5、ZO-1表达水平的影响;采用伊文思蓝渗透法评估小鼠血脑屏障通透性。结果:在MCAO/R模型小鼠缺血侧脑皮层组织与血浆中的miR-133b表达水平均降低,miR-133b过表达可显著减少MCAO/R小鼠脑梗死的体积,改善小鼠神经功能损害;miR-133b过表达可使MCAO/R小鼠脑内缺血区RohA、claudin-5、ZO-1蛋白表达显著降低。结论:小鼠脑缺血再灌注后体内miR-133b表达水平下降,miR-133b过表达具有降低脑缺血再灌注后脑血屏障通透性,发挥抗脑缺血作用,其机制可能是通过RohA信号通路介导的。

鸡miR-133a靶向调控BIRC5基因的表达

【目的】研究miR-133a在鸡不同组织中的表达情况,对baculoviral IAP repeat containing 5(BIRC5)进行靶基因的试验验证,探讨鸡miR-133a对BIRC5的靶向调控作用。【方法】采用生物信息学方法对miR-133a靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告系统及点突变试验对BIRC5进行靶基因验证,同时运用实时荧光定量PCR检测miR-133a在鸡不同组织中的表达量。【结果】在鸡3′UTR数据库的11 891个基因中预测到287个miR-133a的靶基因;miR-133a在鸡的组织表达谱中显示其在肌肉中的表达量较高,尤其是在骨骼肌中表达量最高;报告基因试验显示BIRC5是miR-133a的靶基因,点突变试验证实了miR-133a在BIRC5上结合的靶位点。【结论】miR-133a是与鸡骨骼肌发育高度相关的miRNA,且鸡BIRC5基因是miR-133a的靶基因。

miR-133b靶向PKM2基因对肺癌A549干细胞增殖及药物敏感性的影响

背景与目的已有研究表明miR-133b可抑制肺癌细胞生长,miR-133b表达水平在肺癌组织及患者血清中显著降低,miR-133b通过靶向丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)基因提高鳞癌细胞的放疗敏感性,但其机制尚未明了。本研究通过提取非小细胞肺癌细胞株A549的CD133^+/CD34^+干细胞,研究miR-133b对其增殖及顺铂类药物(cisplatin,DDP)敏感性的影响,探讨miR-133b与PKM2基因的关系,以及它们在肺癌干细胞中的作用。方法使用miRBase和miRNAMap数据库进行miR-133b与PKM2基因的序列比对。应用免疫磁珠分选法从A549细胞中分选出CD133^+/CD34^+肺癌干细胞,流式细胞仪检测纯度。转染miR-133b进入CD133^+/CD34^+细胞,qRT-PCR检测验证miR-133b表达情况,CCK8法检测细胞增殖情况;15μg/mL DDP处理转染miR-133b细胞,检测0 h、12 h、24 h、72 h的细胞凋亡情况;采用Western blot检测PKM2蛋白水平的表达。结果PKM2基因可能为miR-133b的靶基因;流式结果显示CD133^+/CD34^+细胞的纯度为(92.15+4.27)%。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,过表达miR-133b后,miR-133b明显上调,miR-133b抑制表达后,miR-133b明显下调(P<0.05)。细胞增殖实验及Western blot结果显示,与对照组相比,miR-133b mimics组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),PKM2蛋白水平明显降低(P<0.05);而抑制miR-133b表达则明显增加细胞的增殖能力及PKM2蛋白水平(P<0.05)。DDP处理12 h后miR-133b mimics组细胞的凋亡持续明显高于对照组(P<0.05)。miR-133b mimics+DDP组PKM2蛋白的表达明显低于对照组及miR-133b inhibitor组(P<0.05)。结论过表达miR-133b能够通过下调PKM2而抑制肺癌干细胞的生长和增殖,并且可以增强肺癌干细胞对DDP的敏感性。

miR-208b-3p通过抑制线粒体基因表达加重心力衰竭小鼠能量代谢障碍

目的探究miR-208b-3p对主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的心力衰竭小鼠能量代谢的作用及机制。方法将24只小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组,n=6)和手术组(n=18)。手术组采用TAC建立心力衰竭模型;假手术组采用TAC相同手术方式,但不结扎主动脉弓。于TAC术后第2周再随机分为Antagomir组(n=6)、Antagomir-NC组(n=6)及TAC组(n=6),Antagomir组、Antagomir-NC组尾静脉分别注射miR-208b-3p antagomir(800μg)及miR-208b-3p antagomir阴性对照(800μg)试剂,每周2次,连续4周。术后第6周行超声心动图评估各组小鼠心功能。HE染色及天狼星红染色观察小鼠心肌组织病理学形态。ATP检测试剂盒检测各组小鼠心肌组织ATP水平。RT-qPCR检测小鼠心肌组织miR-208b-3p、线粒体基因(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5、ND6、CO1、CO2、CO3、CYTB、ATP6、ATP8)及POLRMT、12SrRNA的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因POLRMT的相互结合作用。Western blot检测心肌组织POLRMT及ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白表达水平。结果与Sham组相比,TAC组小鼠心肌miR-208b-3p表达显著增加(P<0.05)。超声检测结果显示,Antagomir组小鼠心脏的射血分数、收缩与舒张功能较TAC组明显改善(P<0.05)。组织切片染色提示,Antagomir组小鼠的心肌细胞肥大、排列紊乱、心肌间质炎细胞浸润等有明显改善(P<0.05)。与TAC组相比,Antagomir组ATP水平明显升高(P<0.05);POLRMT及线粒体基因转录产物(12SrRNA和13个线粒体基因编码多肽)表达量均显著升高(P<0.05),但SDHA、SDHB无变化。双荧光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与POLRMT的CDS区有结合作用。Antagomir组小鼠心肌组织POLRMT、ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白水平表达较TAC组显著增加(P<0.05)。结论miR-208b-3p可通过靶向POLRMT抑制线粒体基因的表达,加剧线粒体能量代谢障碍,并加重心力衰竭小鼠心功能不全及心室重塑。

血浆lncRNA SNHG12、miR-133b预测乳腺癌新辅助治疗效果的价值

目的探讨血浆长非编码RNA小核仁宿主基因12(lncRNA SNHG12)、微小RNA(miR)-133b预测乳腺癌新辅助治疗效果的价值。方法选取2022年1月至2023年1月在该院进行新辅助治疗的86例乳腺癌患者作为乳腺癌组,依据新辅助治疗效果分为病理学完全缓解(pCR)组和non-pCR组。另选取同期在该院进行健康体检的50例健康女性作为对照组。检测并比较所有研究对象lncRNA SNHG12、miR-133b表达水平。采用多因素Logistic逐步回归模型分析影响乳腺癌新辅助治疗效果的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆lncRNA SNHG12、miR-133b单独及联合检测对乳腺癌新辅助治疗效果的预测价值。结果乳腺组血浆lncRNA SNHG12表达水平高于对照组,miR-133b表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。pCR组纳入34例患者,non-pCR组纳入52例患者。pCR组与non-pCR组雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体-2(HER-2)、细胞增殖核抗原、分子分型比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。pCR组lncRNA SNHG12表达水平低于non-pCR组,miR-133b表达水平高于non-pCR组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic逐步回归分析结果显示,分子分型为HER-2过表达型、lncRNA SNHG12表达水平升高、miR-133b表达水平降低是乳腺癌新辅助治疗效果的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆lncRNA SNHG12、miR-133b单独检测预测乳腺癌患者新辅助治疗效果的曲线下面积(AUC)分别为0.850、0.951,均低于二者联合检测的0.963。86例乳腺癌中Luminal A型11例(pCR 1例、non-pCR 10例)、Luminal B型43例(pCR 12例、non-pCR 31例)、HER-2过表达型16例(pCR 14例、non-pCR 2例)、三阴型16例(pCR 7例、non-pCR 9例)。ROC曲线分析lncRNA SNHG12、miR-133b对4种不同亚型乳腺癌新辅助治疗效果的预测效能结果显示,血浆lncRNA SNHG12、miR-133b单独及联合检测预测Luminal B型乳腺癌患者新辅助治疗效果的AUC分别为0.753、0.974、0.981,预测HER-2过表达型乳腺癌患者新辅助治疗效果的AUC分别为0.804、0.857、0.893。预测三阴型乳腺癌患者新辅助治疗效果的AUC分别为0.849、1.000、1.000。结论乳腺癌患者血浆lncRNA SNHG12表达增高,miR-133b表达降低,二者联合检测对乳腺癌新辅助治疗效果具有较好的预测价值。

地红方通过miR-133b/DUSP1/JNK通路干预糖尿病肾病氧化应激损伤

目的研究地红方对糖尿病肾病细胞模型氧化应激损伤的影响。方法地红方含药血清制备,小鼠肾小球系膜细胞常规培养、传代。按以下分组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖+正常血清)、高糖组(30mmol/L葡萄糖+正常血清)、地红方低剂量组(30mmol/L葡萄糖+5%地红方含药血清)、地红方中剂量组(30mmol/L葡萄糖+10%地红方含药血清)、地红方高剂量组(30mmol/L葡萄糖+20%地红方含药血清)。采用实时荧光定量PCR检测miR-133b、DUSP1 mRNA表达。Western blotting检测DUSP1、p-JNK、Drp1、Fis1蛋白表达。Elisa检测SOD、MDA表达。结果与高糖组比较,地红方组miR-133b、MDA、p-JNK、Drp1、Fis1表达明显下降(P<0.05),而DUSP1、SOD表达显著升高(P<0.05)。结论地红方可通过miR-133b/DUSP1/JNK通路调控线粒体分裂改善糖尿病肾病氧化应激损伤。

急性心肌梗死患者循环血浆中miR-133a、miR-133b表达的研究

目的分析miR-133a、miR-133b在急性心肌梗死(AMI)患者血浆中的表达,并探讨miR-133a、miR-133b在诊断AMI中的应用价值。方法选取2017年1月至2017年12月于西安交通大学第一附属医院胸痛中心就诊的AMI患者为观察组(n=89),同期就诊于西安交通大学第一附属医院体检中心的既往无心脏病史,心电图正常的对照人群37例为正常对照组(n=37)。收集所有受试者的临床资料并提取血浆标本,实时定量PCR法检测循环血浆中miR-133a及miR-133b的表达水平。应用受试者工作特征曲线ROC评估对AMI的辅助诊断价值。结果AMI患者血浆中miR-133a及miR-133b的含量较正常对照组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);受试者工作特征曲线(ROC)分析表明:miR-133a的ROC曲线下面积AUC值为0.845(P<0.01),敏感度为84.5%,特异性为69.0%,漏诊率为15.5%,误诊率31.0%;miR-133b的ROC曲线下面积AUC值为0.702(P<0.01),敏感度为70.2%,特异性为51.7%,漏诊率为29.8%,误诊率为48.3%。结论循环miR-133a及miR-133b在诊断AMI方面具有较好的特异性和敏感性,可作为AMI诊断的生物学标志物。

参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响

目的探究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响。方法选取2017年1月至2020年10月于江阴市中医院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察组各45例。对照组采用缬沙坦分散片口服治疗,观察组在对照组治疗基础上加服参麦地黄汤。2组疗程均为3个月,治疗前后评估2组患者中医证候积分变化,检测2组患者空腹血糖(FPG)和血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)]、血管内皮功能指标[可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及内皮素-1(ET-1)]及miR-133b、miR-135b变化。结果治疗后,2组患者中医症候积分、FPG、SCr、BUN、UACR及MDA、sICAM-1、ET-1、miR-133b、miR-135b表达水平均显著下降,SOD活性明显升高(P<0.01),观察组优于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.01)。结论参麦地黄汤联合缬沙坦可有效改善糖尿病肾病临床症状,可能与其调控机体氧化应激、血管内皮功能、血清miR-133b、miR-135b水平有关。

miR-133b通过靶向调控EGFR影响食管鳞癌的侵袭、转移

目的探讨miR-133b在食管鳞癌侵袭、转移过程中的作用及机制。方法使用生物信息学工具预测miR-133b的靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-133b对靶基因表皮生长因子受体(EGFR)的直接靶向调控作用;细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测miR-133b的不同表达对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;qRT-PCR验证miR-133b与EGFR在食管鳞癌组织中的表达,并分析miR-133b与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。结果生物信息学工具预测EGFR为miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实miR-133b可与EGFR 3'UTR片段结合;体外实验通过上调食管鳞癌细胞中miR-133b的表达使细胞的增殖受阻(ECA109:P<0.05,KYSE150:P<0.01);细胞的迁移(ECA109:P<0.01,KYSE150:P<0.01)和侵袭能力(EC5A109:P<0.01,KYSE150:P<0.01)显著减弱。在食管鳞癌组织中miR-133b与EGFR的表达呈负相关性(P<0.01),且miR-133b的表达与食管鳞癌的TNM分期、淋巴结转移显著相关(P均<0.05)。结论 miR-133b可能通过下调EGFR的表达,抑制食管鳞癌的增殖、侵袭和转移,在食管鳞癌的演进中起负调控作用。

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高表达。抑制miR-181b的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc下游调节基因2(NDRG2)是miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而抑制miR-181b能够显著提高NDRG2的表达。抑制miR-181b的表达的同时抑制靶基因NDRG2的表达,能够逆转抑制miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论 miR-181b在骨肉瘤中过表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。

miR-92b通过调控EZH2基因的表达抑制食管癌细胞Eca109的增殖和侵袭

目的:探讨食管癌(esophageal carcinoma,EC)细胞中miR-92b对组蛋白甲基转移酶zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016年1月至2017年1月15例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic分别转染人EC细胞Eca109后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2基因的靶向调控作用。同时将EZH2过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs和EZH2表达变化对EC细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01)。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a及miR-25可与EZH2基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b可以调控EZH2基因的表达,且miR-92b表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),对Eca109细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic转染能抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2过表达质粒后,miR-92b mimic对ECa109细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论:miR-92b可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2的表达有关。

山羊骨骼肌中miR-133及其靶基因的表达规律与功能研究

旨在研究miR-133及其靶基因SRF在山羊骨骼肌组织和细胞中的表达情况,并探讨miR-133对SRF基因的靶向调控作用。首先利用qRT-PCR分别检测miR-133及其靶基因在初生、7月龄、18月龄的安徽白山羊和波尔山羊8个组织(心、肝、脾、肺、肾、小肠、脂肪、背最长肌)以及不同代数的山羊骨骼肌卫星细胞(F6、F9、F12)中的表达变化;采用qRT-PCR及Western印迹法检测miR-133对靶基因mRNA及蛋白质表达水平的影响。qRT-PCR检测表明,miR-133在心肌和背最长肌中的表达水平明显高于其它组织,其靶基因SRF的表达水平与其相反;miR-133在山羊骨骼肌卫星细胞中的表达水平随着细胞代数的增多而表达量增加;qRT-PCR及Western印迹法证实,miR-133对SRF蛋白表达的调控发生在转录后水平。综上表明,miR-133有望成为研究山羊骨骼肌生长发育的新型标志物;miR-133通过在转录后水平抑制SRF蛋白的表达参与调控山羊骨骼肌细胞增殖和分化,进而影响山羊骨骼肌的发育。

双氢睾酮体外培养人毛囊中差异表达的miR-133b对人毛乳头细胞的增殖及诱导能力的影响

【目的】探究不同浓度双氢睾酮(DHT)对毛囊生长和毛囊细胞增殖的影响及其与miR-133b表达的关系,然后进一步探究miR-133b对毛乳头细胞的增殖和诱导能力的影响。【方法】体外显微分离人毛囊,选取生长期的毛囊进行培养,显微镜下每日测量并拍摄不同浓度的DHT处理组(10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L)和对照组各组毛囊的生长长度,免疫荧光检测各组毛母质细胞Ki-67表达量评估毛囊增殖能力,qRT-PCR检测各组毛囊中miR-133b的表达量。通过Lipofectamine 2000转染miR-133b mimics及miR-133b NC至人毛乳头细胞中,CCK-8检测各组人毛乳头细胞增殖能力,qRT-PCR及Western Blot检测毛乳头细胞诱导能力指标Versican、ALP、β-catenin的mRNA及蛋白水平的相对表达量。【结果】与对照组相比,DHT 10-5 mol/L实验组对毛囊的生长的抑制作用有统计学意义(P<0.05),DHT 10-5 mol/L实验组进入退行期的时间提前;其他组生长长度与对照组相比无统计学意义。免疫荧光及qRT-PCR显示,与对照组相比,DHT 10-5 mol/L实验组毛母质细胞中Ki-67阳性细胞较少且毛囊中miR-133b的相对表达量明显升高,相当于对照组的(3.17±0.26)倍(P<0.01)。CCK-8显示,miR-133b mimics组OD450低于miR-133b NC组(P<0.05);qRT-PCR显示,在mRNA水平,miR-133b mimics组Versican、ALP、β-catenin的相对表达量均低于miR-133b NC组(P<0.001、P<0.01和P<0.01)。Western blot显示,在蛋白水平,miR-133b mimics组Versican、ALP、β-catenin的相对表达量同样均低于miR-133b NC组(P<0.01、P<0.001和P<0.01)。【结论】高浓度DHT可能通过调控miR-133b的表达抑制人毛乳头细胞的增殖活性及诱导能力,最终抑制人毛囊的生长及增殖。

膀胱尿路上皮癌中miR-133b的表达及其临床意义

目的探讨miR-133b在膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法该研究采用茎环实时荧光逆转录聚合酶链反应(stem-loop real-time,RT-PCR)检测膀胱尿路上皮癌组织和癌旁正常组织中miR-133b的表达丰度,分析miR-133b在不同组织中的表达差异及其与膀胱尿路上皮癌临床病理因素间的关系,探讨miR-133b在膀胱癌发生与进展中的重要作用。结果采用Real-time PCR方法检测41例膀胱尿路上皮癌及配对癌旁正常组织miR-133b的相对表达量,结果显示miR-133b在膀胱尿路上皮癌组织中的表达量较癌旁正常组织明显降低(P<0.001),癌旁正常组织中的表达量是癌组织中的3.02倍。同时发现miR-133b的表达量与肿瘤病理级别存在显著相关(P<0.01),即肿瘤恶性程度越高(高级别组)miR-133b的表达量越低。结论与癌旁正常组织比较,miR-133b在癌组织中呈明显低表达,且与肿瘤病理分级显著相关,提示miR-133b可能在膀胱癌发病过程中发挥重要作用。

神经鞘瘤中miR-10b基因表达和甲基化水平分析

目的分析miR-10b小RNA在神经鞘瘤中的表达水平和该基因上游甲基化水平,并识别miR-10b在神经鞘瘤中的潜在靶基因。方法应用实时定量PCR定量miR-10b及潜在靶基因HOXB3、HOXD10、PTEN、PIK3CA、MAPRE1、HADC4在13例神经鞘瘤和6例正常前庭蜗神经的表达;进一步分析差异表达基因与神经鞘瘤临床特征的相关性;最后应用焦磷酸测序分析两组之间miR-10b基因上游甲基化水平差异。结果与正常神经相比,神经鞘瘤组织中miR-10b分子表达水平显著升高(P=0.000 3),而PTEN表达显著下降(P=0.004 7),两者显著负相关(P=0.001,r=-0.689)。此外,miR-10b基因启动子区内甲基化水平下调,并与该基因表达显著负相关(P=0.011,r=-0.571)。miR-10b高表达组与低表达组比较,肿瘤直径有差异(P=0.016);但发病年龄及1年后肿瘤复发率无差异(P>0.05)。结论神经鞘瘤中miR-10b启动子甲基化水平下降引起该基因持续高表达,而miR-10b可能靶向抑制PTEN表达。

山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤

目的探讨山楂叶总黄酮通过调控miR-133b改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。方法山楂叶总黄酮(10、30、90 mg/L)培养SH-SY5Y细胞24 h后,构建缺氧复氧(H/R)细胞模型;将miR-NC、miR-133b、anti-miR-NC、anti-miR-133b质粒转染至SH-SY5Y细胞6 h,加入90 mg/L山楂叶总黄酮处理24 h,再进行缺氧复氧处理。RT-PCR检测miR-133b、RBMX mRNA表达,Western blot检测RBMX、Bax、Bcl-2蛋白表达,采用试剂盒分别检测LDH、SOD、MDA水平,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因实验检测荧光活性。结果预处理SH-SY5Y细胞,山楂叶总黄酮能上调H/R诱导的神经细胞SOD水平,下调LDH、MDA水平,抑制Bax、RBMX表达及细胞凋亡率,促进Bcl-2、miR-133b表达(P<0.05),与H/R诱导的神经细胞过表达miR-133b结果一致。且miR-133b靶向调控RBMX的表达,抑制miR-133b表达逆转了山楂叶总黄酮对H/R诱导的神经细胞损伤的改善作用。结论山楂叶总黄酮通过调控miR-133b靶向调控RBMX的表达改善缺氧复氧诱导的神经细胞损伤。

非小细胞肺癌患者血清miR-133b的表达水平及其临床意义探讨

目的:探讨非小细胞肺癌患者血清miR-133b的表达水平与临床病理特征及疾病预后的关系。方法:将80例经病理活检证实为非小细胞肺癌患者纳入此次研究的对象,同期选取进行体检的健康人群80例作为正常对照组,采用real-time荧光定量PCR方法检测所有人员血清miR-133b的表达水平,进一步分析非小细胞肺癌患者血清miR-133b的表达水平与患者的临床及病理特征的关系。结果:非小细胞肺癌患者血清miR-133b表达水平(0.86±1.27)显著低于正常对照组的表达水平(1.78±1.36),差异具有统计学意义(t=9.572,P=0.004)。非小细胞肺癌患者血清miR-133b的表达水平与病理分期、肿瘤分化程度、抽烟史及是否发生淋巴结转移等因素密切相关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤直径及病理分型无关(P>0.05);非小细胞肺癌患者术后miR-133b高表达者1年内的生存率(73.8%)明显高于miR-133b低表达者(52.6%),差异具有统计学意义(χ2=8.580,P=0.003)。结论:血清miR-133b的检测有助于早期对非小细胞肺癌进行筛选与诊断,其表达与非小细胞肺癌临床及病理特征、治疗后存活时间具有明显的相关性,对评估非小细胞肺癌的预后具有一定价值。

细胞外信号调节激酶/miR-133b在甲基苯丙胺致PC12细胞神经毒性的作用及机制

目的探讨甲基苯丙胺(MA)致神经细胞毒性过程中细胞外信号调节激酶(ERK)和miR-133b的表达变化及调控机制。方法用MA建立PC12神经细胞损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性及镜下形态观察确定MA最佳损伤浓度;应用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平;通过Western blotting技术测定总ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的表达变化;并应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定miR-133b的表达变化。为进一步分析ERK/miR133b分子通路的作用关系,经U0126特异阻断ERK通路,检测miR-133b的表达变化。结果给予不同浓度的MA,均可导致PC12细胞损伤,其中800μmol/L MA处理后,大部分胞体变圆,神经突起退缩,神经网络消失。MTT结果显示细胞活性明显下降。进一步的细胞毒性机制分析显示,MA处理后,细胞内ROS水平升高,p-ERK表达增高,miR-133b表达降低;并且给予ERK通路抑制剂U0126(10μmol/L)后,miR-133b表达升高,细胞活性增强,胞内ROS水平降低,镜下细胞损伤改善。结论 MA可通过上调ERK磷酸化抑制miR-133b表达,介导神经元毒性损伤。

miR-133b在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义

目的:探讨microRNA-133b(miR-133b)在食管鳞癌组织中表达及其与临床病理特征的关系.方法:应用实时定量聚合酶链式反应(realtime quantitative PCR)技术检测63例食管鳞癌及其癌旁正常组织中miR-133b的表达量,并分析miR-133b在不同组织中的表达差异及其与食管鳞癌临床病理因素间的关系,探讨miR-133b在食管鳞癌发生与进展中的重要作用.结果:食管鳞癌组织中miR-133b的相对表达量明显低于正常食管钻膜组织(P<0.05),病理分级Ⅲ级和TNM分期Ⅲ期的食管鳞癌患者组织中miR-133b的表达水平明显低于Ⅰ-Ⅱ(P<0.001).结论:miR-133b表达水平与食管鳞癌发生发展与恶性程度密切相关,有望成为食管鳞癌诊断的新靶点.