miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

miR-135b基因对HCT116结肠癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨miR-135b基因对HCT116结肠癌细胞增殖及侵袭的影响。方法用Realtime PCR法检测HCT116、Caco-2、HT-29、SW480结肠癌细胞及HCoEpiC人正常结肠上皮细胞中miR-135b表达。细胞分为正常组、miR-135b NC组及miR-135b抑制组,噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,Realtime PCR法检测miR-135b表达,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot法检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9蛋白表达量。结果 miR-135b基因在结肠癌细胞HCT116(2.49±0.23)、HT-29(1.89±0.19)、SW480(1.76±0.18)和Caco-2(1.59±0.13)中的表达量,高于HCoEpiC正常结肠上皮细胞(1.00±0.12);与正常组及miR-135b NC组比较,miR-135b抑制组中miR-135b表达量下降,细胞活力降低,细胞侵袭数减少,Bcl-2、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达量降低。结论 miR-135b基因表达量下调,可抑制HCT116结肠癌细胞的增殖及侵袭。

miR-208b-3p通过抑制线粒体基因表达加重心力衰竭小鼠能量代谢障碍

目的探究miR-208b-3p对主动脉弓缩窄(transverse aortic constriction,TAC)诱导的心力衰竭小鼠能量代谢的作用及机制。方法将24只小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组,n=6)和手术组(n=18)。手术组采用TAC建立心力衰竭模型;假手术组采用TAC相同手术方式,但不结扎主动脉弓。于TAC术后第2周再随机分为Antagomir组(n=6)、Antagomir-NC组(n=6)及TAC组(n=6),Antagomir组、Antagomir-NC组尾静脉分别注射miR-208b-3p antagomir(800μg)及miR-208b-3p antagomir阴性对照(800μg)试剂,每周2次,连续4周。术后第6周行超声心动图评估各组小鼠心功能。HE染色及天狼星红染色观察小鼠心肌组织病理学形态。ATP检测试剂盒检测各组小鼠心肌组织ATP水平。RT-qPCR检测小鼠心肌组织miR-208b-3p、线粒体基因(ND1、ND2、ND3、ND4、ND4L、ND5、ND6、CO1、CO2、CO3、CYTB、ATP6、ATP8)及POLRMT、12SrRNA的表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因POLRMT的相互结合作用。Western blot检测心肌组织POLRMT及ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白表达水平。结果与Sham组相比,TAC组小鼠心肌miR-208b-3p表达显著增加(P<0.05)。超声检测结果显示,Antagomir组小鼠心脏的射血分数、收缩与舒张功能较TAC组明显改善(P<0.05)。组织切片染色提示,Antagomir组小鼠的心肌细胞肥大、排列紊乱、心肌间质炎细胞浸润等有明显改善(P<0.05)。与TAC组相比,Antagomir组ATP水平明显升高(P<0.05);POLRMT及线粒体基因转录产物(12SrRNA和13个线粒体基因编码多肽)表达量均显著升高(P<0.05),但SDHA、SDHB无变化。双荧光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与POLRMT的CDS区有结合作用。Antagomir组小鼠心肌组织POLRMT、ND1、CO2、CYTB、ATP8蛋白水平表达较TAC组显著增加(P<0.05)。结论miR-208b-3p可通过靶向POLRMT抑制线粒体基因的表达,加剧线粒体能量代谢障碍,并加重心力衰竭小鼠心功能不全及心室重塑。

血清miR-135b、LZST1表达水平与晚期非小细胞肺癌患者预后的相关性

目的探究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-135b(miR-135b)、亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZST1)表达水平及与其预后的相关性。方法收集62例晚期NSCLC患者作为观察组。另外收集同时期94例良性肺部病变患者作为对照组。比较观察组与对照组血清miR-135b、LZST1表达水平差异,比较不同预后患者血清miR-135b、LZST1表达水平差异,分析晚期NSCLC患者血清miR-135b、LZST1表达水平与其预后的关系,miR-135b、LZST1对晚期NSCLC患者预后不良的预测价值。结果两组性别、年龄、体质量指数比较差异不显著,P>0.05。观察组血清miR-135b表达水平高于对照组,LZST1低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡患者血清miR-135b表达水平高于存活患者,LZST1水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-135b与晚期NSCLC患者死亡呈显著正相关关系,LZST1与晚期NSCLC患者死亡呈负相关关系,miR-135b与LZST1表达呈负相关关系,P<0.05。计算约登指数,获取最大约登指数相对应的临界值。4.065为miR-135b预测晚期NSCLC患者死亡的阈值,灵敏度84.00%,特异度81.10%,0.670为LZST1预测晚期NSCLC患者死亡的阈值,灵敏度68.00%,特异度78.40%。miR-135b、LZST1以及两者联合的AUC面积分别为0.792、0.742以及0.850,两者联合的AUC面积最大,灵敏度为88.00%,特异度为70.30%,预测效能较好。结论晚期NSCLC患者血清miR-135b表达水平异常升高,LZST1显著降低,miR-135b高表达、LZST1低表达与患者预后不良相关,miR-135b与LZST1呈负相关关系。miR-135b联合LZST1对晚期NSCLC患者死亡的预测效能较高。

miR-135b对子宫内膜癌HOXA10基因表达的调控作用

目的探讨miR-135b对子宫内膜癌中HOXA10基因表达的调控作用。方法 RT-PCR方法检测28例子宫内膜癌组织及相应癌旁组织中miR-135b及HOXA10的表达;用miR-135b模拟物及抑制物转染RL-952子宫内膜癌细胞株,RT-PCR检测转染效果并检测FOXO1 mRNA的变化,划痕实验检测转染后对细胞迁移的影响,流式细胞技术检测转染对细胞增殖的影响,Western blot检测HOXA10蛋白的变化。结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达升高(P<0.05),HOXA10则降低(P<0.05),经miR-135b模拟物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05);经miR-135b抑制物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.05);miR-135b能促进子宫内膜癌细胞的增殖(P<0.05)。结论 miR-135b在子宫内膜癌发生发展中有一定作用,子宫内膜中HOXA10的异常表达受miR-135b的调控。

miR-135b促进肝癌细胞侵袭和转移

目的探讨miR-135b对肝癌细胞浸润转移的影响及其分子机制。方法分别在肝癌细胞系中过表达和下调miR-135b,通过Transwell^(TM)实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,利用肝癌移植瘤模型检测肝癌细胞的体内增殖能力和成瘤能力;采用Western blot法结合双荧光素酶基因报告系统预测miR-135b的下游靶基因。结果 miR-135b在高侵袭性的MHCC97肝癌细胞系中高表达;过表达miR-135b能够增强HepG2和Bel-7402肝癌细胞的体外侵袭和转移能力,促进肝癌细胞的体内转移能力;通过靶向miR-135b的干扰载体pcDNA-miR-135b-Sponge下调miR-135b的表达,MHCC97肝癌细胞的体外侵袭转移能力及移植瘤的转移能力明显受到抑制;双荧光素酶基因报告系统和Western blot实验结果显示miR-135b能够靶向Hippo信号通路中的关键分子,包括大型肿瘤抑制因子同源蛋白2(LATS2)、含β转导素重复序列蛋白(β-TrCP)、N-myc下游调节基因2(NDR2)和亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)等。结论 miR-135b可能通过靶向Hippo信号通路相关基因促进肝癌细胞的侵袭和转移。

参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响

目的探究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响。方法选取2017年1月至2020年10月于江阴市中医院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察组各45例。对照组采用缬沙坦分散片口服治疗,观察组在对照组治疗基础上加服参麦地黄汤。2组疗程均为3个月,治疗前后评估2组患者中医证候积分变化,检测2组患者空腹血糖(FPG)和血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)]、血管内皮功能指标[可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及内皮素-1(ET-1)]及miR-133b、miR-135b变化。结果治疗后,2组患者中医症候积分、FPG、SCr、BUN、UACR及MDA、sICAM-1、ET-1、miR-133b、miR-135b表达水平均显著下降,SOD活性明显升高(P<0.01),观察组优于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.01)。结论参麦地黄汤联合缬沙坦可有效改善糖尿病肾病临床症状,可能与其调控机体氧化应激、血管内皮功能、血清miR-133b、miR-135b水平有关。

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高表达。抑制miR-181b的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc下游调节基因2(NDRG2)是miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而抑制miR-181b能够显著提高NDRG2的表达。抑制miR-181b的表达的同时抑制靶基因NDRG2的表达,能够逆转抑制miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论 miR-181b在骨肉瘤中过表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。

miR-92b通过调控EZH2基因的表达抑制食管癌细胞Eca109的增殖和侵袭

目的:探讨食管癌(esophageal carcinoma,EC)细胞中miR-92b对组蛋白甲基转移酶zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因表达的调控作用,以及对EC细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:选取河北医科大学第四医院科研中心保存的2016年1月至2017年1月15例EC患者手术癌组织标本,通过生物信息学软件预测分析对EZH2可能调控的miRNAs,将预测的miRNAs mimic分别转染人EC细胞Eca109后,采用实时荧光定量PCR、Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证miRNAs对EZH2基因的靶向调控作用。同时将EZH2过表达质粒共转染至Eca109,然后采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell细胞侵袭及迁移实验分别检测miRNAs和EZH2表达变化对EC细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2 mRNA与mimic-NC相比明显降低(P<0.01),转染miR-92b的Eca109细胞中EZH2蛋白表达水平明显低于转染mimic-NC组(0.525±0.052 vs 0.689±0.026,P<0.01)。生物信息学软件分析显示,miR-92b、let-7a及miR-25可与EZH2基因3’端非翻译区的结合位点相结合,但仅有miR-92b可以调控EZH2基因的表达,且miR-92b表达与EZH2 mRNA表达成负相关(P<0.01)。miR-92b mimic转染后EZH2 mRNA、蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),对Eca109细胞凋亡无明显影响(P>0.05);miR-92b mimic转染能抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力(P<0.01)。而EC细胞转染EZH2过表达质粒后,miR-92b mimic对ECa109细胞增殖和侵袭及迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01)。结论:miR-92b可抑制ECa109细胞的增殖和侵袭及迁移能力,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因EZH2的表达有关。

神经鞘瘤中miR-10b基因表达和甲基化水平分析

目的分析miR-10b小RNA在神经鞘瘤中的表达水平和该基因上游甲基化水平,并识别miR-10b在神经鞘瘤中的潜在靶基因。方法应用实时定量PCR定量miR-10b及潜在靶基因HOXB3、HOXD10、PTEN、PIK3CA、MAPRE1、HADC4在13例神经鞘瘤和6例正常前庭蜗神经的表达;进一步分析差异表达基因与神经鞘瘤临床特征的相关性;最后应用焦磷酸测序分析两组之间miR-10b基因上游甲基化水平差异。结果与正常神经相比,神经鞘瘤组织中miR-10b分子表达水平显著升高(P=0.000 3),而PTEN表达显著下降(P=0.004 7),两者显著负相关(P=0.001,r=-0.689)。此外,miR-10b基因启动子区内甲基化水平下调,并与该基因表达显著负相关(P=0.011,r=-0.571)。miR-10b高表达组与低表达组比较,肿瘤直径有差异(P=0.016);但发病年龄及1年后肿瘤复发率无差异(P>0.05)。结论神经鞘瘤中miR-10b启动子甲基化水平下降引起该基因持续高表达,而miR-10b可能靶向抑制PTEN表达。

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响。方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响。结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡。结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡。

miR-148b基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及免疫抑制因子的影响研究

目的:探讨miR-148b基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡及免疫抑制因子TGF-β1表达的影响。方法:小鼠肾小球系膜细胞(MMCs)分三组处理,即低糖+miR-148b scramble组(LG组)、高糖+miR-148b scramble组(HG组)和高糖+miR-148b inhibitor组(HG+miR-148b inhibitor组),其中miR-148b scramble和miR-148b inhibitor的转染参照脂质体LipofectamineTM2000转染说明进行瞬时转染,收集转染48 h的细胞,通过qRT-PCR检测各组细胞中miR-148b的mRNA表达;CCK8及流式细胞仪分别检测细胞活力及凋亡率;Western blot检测免疫抑制因子TGF-β1及NF-κB信号通路p-IκBα及下游相关基因cyclin D1和Bax的蛋白表达。结果:高糖可上调miR-148b的表达,转染miR-148b inhibitor后miR-148b的表达明显降低;与LG组比较,HG组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著升高,TGF-β1、p-IκBα、cyclin D1和Bax的蛋白表达均明显升高,与HG组比较,HG+miR-148b inhibitor组细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著降低,TGF-β1、p-IκBα、cyclin D1和Bax的蛋白表达均明显降低(P<0. 05)。结论:抑制肾小球系膜细胞miR-148b基因表达可抑制高糖诱导的细胞活力、凋亡率及免疫抑制因子TGF-β1表达的增加,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。

miR-155及其靶基因MyD88基因多态性与弥漫大B细胞淋巴瘤临床病理特征的关系

目的:探讨分析miR-155及其靶基因MyD88基因多态性与弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)临床病理特征的关系。方法:选择2015年3月-2017年8月本院收治的DLBCL患者135例,另外选择淋巴结反应性增生标本90例作为对照组。检测2组受试者miR-155相对表达量及MyD88基因多态性,并分析miR-155及MyD88基因多态性与DLBCL临床病理特征的关系。结果:DLBCL患者miR-155相对表达量显著高于对照组(P <0.05)。DLBCL组患者MyD88 L265P位点突变率显著高于对照组(P <0.05)。MyD88 L265P位点突变型DLBCL患者miR-155相对表达量显著高于野生型患者(P <0.05)。DLBCL患者miR-155相对表达量、MyD88 L265P位点基因多态性与患者病变部位、分期、BCL-2蛋白表达以及MyD88蛋白表达有关(t=7.461、8.804、6.487、10.812;χ^(2)=10.681、8.599、7.251、23.008;P <0.05)。miR-155低表达DLBCL患者生存情况显著优于miR-155高表达患者(P <0.05)。MyD88 L265P位点野生型DLBCL患者生存情况显著优于突变型患者(P <0.05)。miR-155相对表达量与MyD88蛋白表达呈显著正相关(r=0.428,P=0.000)。结论:DLBCL患者表现为miR-155表达异常升高以及MyD88基因突变率升高,且miR-155表达与MyD88基因突变影响患者疾病进展及预后,可能成为DLBCL诊断、治疗及预后判断的潜在生物学指标。

血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的相关性

目的分析血清微小核糖核酸(miR)-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。方法回顾性分析2019年1月至2020年2月在该院接受化疗且化疗结束后产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为耐药组,同期选取在该院接受化疗且化疗结束后未产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为敏感组,全部患者均接受6个周期新辅助化疗方案化疗,其患者资料完整,包括一般资料、实验室指标检测结果资料,重点分析化疗前血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。结果耐药组血清miR-671-3p mRNA相对表达量低于敏感组,miR-135b mRNA相对表达量高于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05);组间其他实验室指标比较差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关分析结果显示,老年乳腺癌患者血清miR-671-3p mRNA相对表达量与miR-135b mRNA相对表达量呈负相关(r<0,P<0.05);回归分析结果显示,血清miR-671-3p mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的保护因素(OR<1,P<0.05);miR-135b mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),化疗前血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量预测老年乳腺癌患者化疗耐药性风险的曲线下面积均>0.70,预测价值较理想,且联合预测的价值最好。结论血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量与老年乳腺癌患者化疗耐药性有关。

miR-19b转基因小鼠的构建及表型分析

目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析。方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZRPCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重组酶连接到带有alpha-MHC启动子的载体上。将所得载体线性化后,采用显微注射方法注射到小鼠胚胎干细胞内。再将所得的重组胚胎干细胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宫内,在所得的子代,即Founder小鼠中采用特异的引物鉴定出转基因小鼠,并选出相应的品系,进行表型分析。结果:成功构建miR-19b转基因小鼠,且miR-19b转基因小鼠舒张期室间隔厚度、舒张期左室游离壁厚度以及射血分数均有升高。结论:心肌特异性过表达miR-19b可以导致心脏肥大。

miR-135b在鼻咽癌中的表达及其意义

目的探讨mi R-135b在鼻咽癌(NPC)中的表达情况及与临床病理特征的关系。方法收集鼻咽患者活检组织92例,其中NPC组织67例,鼻咽黏膜慢性炎症(CIONM)组织25例。通过q PCR方法检测mi R-135b在NPC组织和CIONM组织中的相对差异表达,利用SPSS软件统计分析mi R-135b与NPC临床病例特征的相关性。结果 (1)mi R-135b在NPC组织中的表达量明显高于CIONM组织(P<0.01);(2)mi R-135b在不同性别中亦存在明显差异,92例鼻咽患者和67例NPC患者中均存在男性的表达明显高于女性(P<0.01);(3)mi R-135b的表达与年龄有相关性(r=0.213,P<0.05);(4)mi R-135b在淋巴结转移中起重要作用,在淋巴结转移患者中mi R-135b的表达高于无淋巴结肿大的患者(P<0.05)。结论在NPC患者中mi R-135b在年龄分组、性别分组及淋巴结是否转移分组中均存在表达差异。mi R-135b是NPC的危险因素,为后续探索NPC早期诊断的分子标记物提供理论基础。

河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌遗传易感性及预后的关系

目的:探讨河南汉族人群mir-34b/c基因rs4938723多态性与结直肠癌(CRC)遗传易感性及预后的关系。方法:收集180例CRC患者术前及180例体检健康者(对照)空腹静脉血,采用PCR-RFLP法分析mir-34b/c基因启动子区rs4938723多态性;采用Kaplan-Meier法针对不同基因型患者绘制生存曲线并进行log-rank检验,采用Cox回归模型分析rs4938723多态性与CRC预后的关系。结果:CRC组C等位基因频率高于对照组(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,TT基因型与TC+CC基因型患者生存曲线差异有统计学意义(P<0.05),TC+CC基因型患者生存状况差于TT型患者。Cox回归分析结果显示,与TT基因型比较,TC、CC基因型是CRC预后不良的危险因素,HR(95%CI)分别为1.284(1.035~1.593)、2.042(1.415~2.946)。结论:mir-34b/c基因rs4938723多态性与河南汉族人群CRC遗传易感性及预后关系密切。

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

SH2B1基因及miR-276-3p对猪背部脂肪沉积的影响

本试验旨在研究SH2B衔接因子蛋白1(SH2B adaptor protein 1,SH2B1)基因在猪不同组织和生长发育各阶段背部脂肪中的表达情况,预测调控该基因的miR-276-3p对猪背部脂肪表达的影响。应用实时荧光定量PCR技术检测SH2B1基因在猪脂肪、下丘脑等6种组织,以及在30、60、90、120和180 d猪背部脂肪组织中的相对表达量。靶标预测SH2B1基因的调控miRNA,并通过实时荧光定量PCR检测miR-276-3p对该基因的调控作用。结果显示,SH2B1基因在猪的6种组织中均有表达,且在脂肪组织中表达量最高,在肌肉组织中表达量最低。在猪生长发育各阶段背部脂肪中SH2B1基因均有表达,在前期(30和60 d)表达量较低,在中、后期(90、120和180 d)持续高表达,且显著高于前期表达量(P<0.05)。高、低背膘厚组背部脂肪中miR-276-3p与SH2B1基因均呈差异表达,且两者表达呈相反趋势,miR-276-3p在高背膘厚组中的表达量显著低于低背膘厚组(P<0.05),而SH2B1基因在高背膘厚组中的表达量却显著高于低背膘厚组(P<0.05)。miR-276-3p可通过靶向负调控SH2B1基因,影响猪背部脂肪的沉积。本试验结果为进一步深入研究猪背部脂肪沉积和背膘厚差异的分子机制提供参考。

胆管癌miR-551b表达变化的临床意义及其靶基因生物信息学分析

目的研究胆管癌miR-551b表达变化的临床意义,并采用生物信息学方法分析其靶基因。方法选择2014-10至2018-10在武警安徽总队医院行胆管癌根治术的78例患者作为胆管癌组,并选择同期因胆管结石行Roux-en-Y胆肠吻合术的40例患者作为对照组,检测胆管癌组织和正常胆管组织中miR-551及细胞周期素D1(cyclinD1)的表达量,随访胆管癌患者的总生存期(OS)。结果胆管癌组织中miR-551b的表达量低于正常胆管组织且术前血清CA19-9升高、术前血清CEA升高、TNMⅢ期、低未分化、微血管侵犯患者胆囊癌组织中miR-551b的表达量明显低于术前血清CA19-9正常、术前血清CEA正常,TNMⅠ-Ⅱ期、中高分化、无微血管侵犯的患者;与miR-551b高表达的胆管癌患者比较,miR-551b低表达的胆管癌患者的总生存期明显缩短;miR-551b靶向cyclinD1基因mRNA 3’UTR的第1456-1462碱基、1479-1486碱基,胆管癌组织中cyclinD1的表达水平明显高于正常胆管组织且与miR-551b的表达具有负相关关系;术前CA19-9、TNM分期、微血管侵犯、miR-551b及cyclinD1表达是胆管癌患者总生存期的影响因素。结论胆管癌中miR-551表达减少与病理特征恶化、总生存期缩短相关,靶向cyclinD1是miR-551参与胆管癌发生发展的可能机制。