目的探讨LncRNA MIR4435-2HG对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法培养正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、SGC7901、BGC823和BGC803,AGS细胞分为对照组(正常培养细胞)、si-con组(转染乱序无意义阴性序列)、si-MIR...目的探讨LncRNA MIR4435-2HG对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法培养正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、SGC7901、BGC823和BGC803,AGS细胞分为对照组(正常培养细胞)、si-con组(转染乱序无意义阴性序列)、si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG小干扰RNA)、miR-con组(转染模拟物对照序列)、miR-138-5p组(转染miR-138-5p模拟物)、si-HMGA1组(转染HMGA1小干扰RNA)、si-MIR4435-2HG+pcDNA组(共转染MIR4435-2HG小干扰RNA与空载体)和si-MIR4435-2HG+pcDNA-HMGA1组(共转染MIR4435-2HG小干扰RNA与HMGA1过表达载体)。qRT-PCR检测细胞中MIR4435-2HG和高迁移率族蛋白A1(HMGA1)mRNA表达,Western blot检测细胞中HMGA1蛋白表达。双荧光素酶实验验证AGS细胞中MIR4435-2HG与miR-138-5p以及miR-138-5p与HMGA1之间关系。MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。裸鼠分为对照组(接种正常培养的AGS细胞)、sh-MIR4435-2HG组(接种转染携带MIR4435-2HG基因短发夹RNA慢病毒的AGS细胞)和sh-con组(接种转染携带无关序列片段shRNA慢病毒的AGS细胞),接种21 d后测量肿瘤重量,观察MIR4435-2HG对裸鼠移植瘤生长的影响。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与GES-1细胞比较,胃癌细胞AGS、SGC7901、BGC823、BGC803中MIR4435-2HG表达水平升高,HMGA1 mRNA和蛋白表达水平升高(P均<0.05),选择AGS细胞进行后续实验。MIR4435-2HG靶向负调控miR-138-5p表达,miR-138-5p靶向负调控HMGA1表达。与si-con组比较,si-MIR4435-2HG组AGS细胞48 h OD值(1.13±0.12比0.86±0.09)、迁移数量[(179.23±18.01)个比(60.15±6.05)个]、侵袭数量[(81.26±8.16)个比(25.64±2.59)个]、Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。与miR-con组比较,miR-138-5p组AGS细胞48 h OD值(1.28±0.13比0.85±0.09)、迁移数量[(178.26±17.59)个比(69.35±6.34)个]、侵袭数量[(81.02±8.06)个比(36.76±2.49)个]、Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。与si-con组比较,si-HMGA1组AGS细胞48 h OD值(1.28±0.13比0.83±0.09)、迁移数量[(175.62±17.59)个比(63.26±6.34)个]、侵袭数量[(80.16±8.06)个比(24.56±2.49)个]、Ki67蛋白表达水平(0.84±0.09比0.30±0.03),CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。与si-MIR4435-2HG+pcDNA组比较,si-MIR4435-2HG+pcDNA-HMGA1组AGS细胞48 h OD值(0.80±0.09比1.01±0.11)、迁移数量[(60.45±5.79)个比(119.25±12.46)个]、侵袭数量[(23.46±2.34)个比(59.46±6.29)个]、Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均升高(P均<0.05)。与sh-con组比较,sh-MIR4435-2HG组裸鼠体内移植瘤重量[(0.40±0.03)g比(0.13±0.03)g]降低(P<0.05)。结论MIR4435-2HG在胃癌细胞系中高表达,沉默MIR4435-2HG表达可能通过调控miR-138-5p/HMGA1轴抑制胃癌细胞体外增殖、迁移和侵袭,并抑制体内肿瘤生长。展开更多
文摘目的探讨LncRNA MIR4435-2HG对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法培养正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、SGC7901、BGC823和BGC803,AGS细胞分为对照组(正常培养细胞)、si-con组(转染乱序无意义阴性序列)、si-MIR4435-2HG组(转染MIR4435-2HG小干扰RNA)、miR-con组(转染模拟物对照序列)、miR-138-5p组(转染miR-138-5p模拟物)、si-HMGA1组(转染HMGA1小干扰RNA)、si-MIR4435-2HG+pcDNA组(共转染MIR4435-2HG小干扰RNA与空载体)和si-MIR4435-2HG+pcDNA-HMGA1组(共转染MIR4435-2HG小干扰RNA与HMGA1过表达载体)。qRT-PCR检测细胞中MIR4435-2HG和高迁移率族蛋白A1(HMGA1)mRNA表达,Western blot检测细胞中HMGA1蛋白表达。双荧光素酶实验验证AGS细胞中MIR4435-2HG与miR-138-5p以及miR-138-5p与HMGA1之间关系。MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。裸鼠分为对照组(接种正常培养的AGS细胞)、sh-MIR4435-2HG组(接种转染携带MIR4435-2HG基因短发夹RNA慢病毒的AGS细胞)和sh-con组(接种转染携带无关序列片段shRNA慢病毒的AGS细胞),接种21 d后测量肿瘤重量,观察MIR4435-2HG对裸鼠移植瘤生长的影响。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与GES-1细胞比较,胃癌细胞AGS、SGC7901、BGC823、BGC803中MIR4435-2HG表达水平升高,HMGA1 mRNA和蛋白表达水平升高(P均<0.05),选择AGS细胞进行后续实验。MIR4435-2HG靶向负调控miR-138-5p表达,miR-138-5p靶向负调控HMGA1表达。与si-con组比较,si-MIR4435-2HG组AGS细胞48 h OD值(1.13±0.12比0.86±0.09)、迁移数量[(179.23±18.01)个比(60.15±6.05)个]、侵袭数量[(81.26±8.16)个比(25.64±2.59)个]、Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。与miR-con组比较,miR-138-5p组AGS细胞48 h OD值(1.28±0.13比0.85±0.09)、迁移数量[(178.26±17.59)个比(69.35±6.34)个]、侵袭数量[(81.02±8.06)个比(36.76±2.49)个]、Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。与si-con组比较,si-HMGA1组AGS细胞48 h OD值(1.28±0.13比0.83±0.09)、迁移数量[(175.62±17.59)个比(63.26±6.34)个]、侵袭数量[(80.16±8.06)个比(24.56±2.49)个]、Ki67蛋白表达水平(0.84±0.09比0.30±0.03),CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均降低(P均<0.05)。与si-MIR4435-2HG+pcDNA组比较,si-MIR4435-2HG+pcDNA-HMGA1组AGS细胞48 h OD值(0.80±0.09比1.01±0.11)、迁移数量[(60.45±5.79)个比(119.25±12.46)个]、侵袭数量[(23.46±2.34)个比(59.46±6.29)个]、Ki67、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达水平均升高(P均<0.05)。与sh-con组比较,sh-MIR4435-2HG组裸鼠体内移植瘤重量[(0.40±0.03)g比(0.13±0.03)g]降低(P<0.05)。结论MIR4435-2HG在胃癌细胞系中高表达,沉默MIR4435-2HG表达可能通过调控miR-138-5p/HMGA1轴抑制胃癌细胞体外增殖、迁移和侵袭,并抑制体内肿瘤生长。
