miR-139-5p靶向调控DNMT1抑制胶质母细胞瘤的生长和转移

目的考察miR-139-5p在胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)中的表达及生物学作用,以及miR-139-5p对DNA甲基转移酶1(DNMT1)的调控作用。方法通过qRT-PCR检测GBM肿瘤组织、配对癌旁组织、人正常神经胶质细胞系HEB和人神经胶质瘤细胞系U251中miR-139-5p的表达。通过转染miR-139-5p模拟物来上调U251细胞中miR-139-5p的表达,通过转染靶向DNMT1的siRNA(DNMT1-siRNA)来下调DNMT1的表达。qRT-PCR、Western blotting、免疫组织化学和免疫荧光检测组织和细胞中DNMT1和2型神经纤维瘤病(NF2)的表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术和Matrigel Transwell评估U251细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。结果与癌旁组织或HEB细胞相比,GBM组织和U251细胞中的miR-139-5p表达被抑制(P<0.05)。与对照细胞相比,转染miR-139-5p模拟物明显下调了DNMT1的表达并上调了NF2的表达(P<0.05)。与对照细胞相比,转染DNMT1-siRNA明显促进了NF2的表达(P<0.05)。转染miR-139-5p模拟物或DNMT1-siRNA均可诱导U251细胞凋亡并抑制细胞侵袭(P<0.05)。结论 miR-139-5p在GBM中发挥抗癌作用,miR-139-5p通过靶向负调控DNMT1来抑制肿瘤的增殖和转移。

MicroRNA-139-5p靶向Bcl-2调控棕榈酸诱导的胰岛β细胞凋亡

目的 探索miR-139-5p在棕榈酸(palmitate,PA)诱导胰岛β细胞凋亡中的作用及机制。方法 PA孵育Min6细胞,RT-PCR检测miR-139-5p表达,Western blot检测cleaved caspase 3和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Bcl-2之间的相互作用,GreenNuc^(TM)检测凋亡细胞。高脂饲料喂养联合STZ注射建立T2DM小鼠模型,TUNEL检测胰腺组织miR-139-5p表达。结果 过表达miR-139-5p增加cleaved caspase 3表达和Min6细胞凋亡(P<0.05)。在PA孵育的Min6细胞中miR-139-5p表达上调,而抑制miR-139-5p表达降低了cleaved caspase 3蛋白水平和Min6细胞凋亡(P <0.05)。荧光素酶报告分析表明miR-139-5p与Bcl-2相互作用,miR-139-5p过表达降低了Bcl-2表达(P <0.05),而PA诱导的Bcl-2表达下调可通过抑制miR-139-5p来恢复(P <0.05)。此外,过表达Bcl-2可拮抗miR-139-5p诱导的cleaved caspase 3蛋白上调(P <0.05),并减少凋亡的Min6细胞数量。T2DM小鼠胰腺中miR-139-5p表达增加(P <0.05),胰岛细胞凋亡增多(P <0.05)。结论 miR-139-5p抑制Bcl-2表达促进PA诱导的胰岛β细胞凋亡。

CircTMOD3调节miR-139-5p/ROCK2轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

该文旨在探讨CircTMOD3调节miR-139-5p/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK2)轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。该研究采用体外培养人肺泡上皮细胞A549,将A549细胞分为control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-CircTMOD3组、LPS+si-CircTMOD3+inhibitor NC组、LPS+si-CircTMOD3+miR-139-5p inhibitor组;用qRT-PCR检测各组细胞CircTMOD3、miR-139-5p和ROCK2表达水平;CCK-8和EdU法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6和IL-1β水平;相关试剂盒检测MDA、SOD、CAT水平;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、ROCK2蛋白表达量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CircTMOD3和ROCK2的关系。结果显示,与control组相比,LPS组A549细胞中CircTMOD3水平、ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、凋亡率、Bax表达水平、ROCK2蛋白表达水平显著升高,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与LPS组和LPS+si-NC组比较,LPS+si-CircTMOD3组A549细胞中CircTMOD3表达水平、ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平、ROCK2蛋白水平显著降低,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与LPS+si-CircTMOD3+inhibitor NC组相比,LPS+siCircTMOD3+miR-139-5p inhibitor组A549细胞中ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、ROCK2蛋白表达水平显著升高,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-139-5p与CircTMOD3和ROCK2存在靶向调控关系。该研究得出,干扰CircTMOD3表达可以上调miR-139-5p表达抑制ROCK2表达,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。

人环状RNA_0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制

目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^(-1) LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ_0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、LPS+circ_0114428沉默(LPS+si-circ_0114428)组、LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ_0114428+in-NC)组和LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p)组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中circ_0114428、miR-139-5p和TGFBR2 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中TGFBR2、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL^(-1)β)水平。结果:双荧光素酶报告基因实验,miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2存在靶向调控关系(t=10.171,P<0.05;t=7.682,P<0.05)。CCK-8法检测LPS干预的最佳浓度为10 mg·L^(-1),最佳干预时间为12 h。与对照组比较,LPS组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ_0114428组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显降低(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与LPS+si-circ_0114428+in-NC组比较,LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:circ_0114428能减轻LPS诱导的HK-2细胞损伤,其作用机制可能与调节miR-139-5p/TGFBR2轴有关。

EZH2-miR-139-5p通路在大肠癌中的表达及对化疗耐药性的影响

[目的]探讨EZH2-miR-139-5p通路在大肠癌中的表达及对化疗耐药性的影响。[方法]选取54例大肠癌患者癌组织及癌旁组织,比较癌组织和癌旁组织EZH2及miR-139-5p mRNA水平,并分析大肠癌组织中EZH2 mRNA与miR-139-5p mRNA水平的相关性。选取6种大肠癌细胞株(LOVO、RKO、HCT116、LS174t、HT29、SW480),采用Western blot法及RT-PCR法分析各细胞株EZH2蛋白及miR-139-5p mRNA相对表达量。向LOVO细胞株转染siRNA-EZH2后检测miR-139-5p相对表达量,再向SW480细胞株转染EZH2质粒后检测miR-139-5p相对表达量。通过在HCT116细胞内转染miR-139-5p类似物及阴性对照物24h后,加入不同浓度(0、0.465、3.720、29.800、238.000、1904.000μM)奥沙利铂,加药48h后采用CCK8法检测细胞活性。[结果]相较于癌旁组织,大肠癌组织EZH2 mRNA水平更高(P<0.05),而miR-139-5p mRNA水平更低(P<0.05),且大肠癌组织中,EZH2 mRNA与miR-139-5p mRNA水平呈负相关(r=-0.334,P<0.05)。在高侵袭力细胞株(LOVO、RKO、HCT116)中,EZH2蛋白相对表达量较低,而miR-139-5p mRNA水平较高;在低侵袭力细胞株(LS174t、HT29、SW480)中EZH2蛋白相对表达量较高,而miR-139-5p mRNA水平较低。转染siRNA-EZH2的细胞中,miR-139-5p mRNA相对表达量有所上升;转染EZH2质粒的细胞中,miR-139-5p mRNA相对表达量有所下降。在HCT116细胞中转染miR-139-5p类似物48h后,细胞活性随药物浓度有所降低,且降低程度比阴性对照显著。[结论]MiR-139-5p参与大肠癌化疗药物的耐药机制,并可能通过调控靶基因EZH2从而抑制大肠癌细胞的增殖。