CircTMOD3调节miR-139-5p/ROCK2轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

该文旨在探讨CircTMOD3调节miR-139-5p/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK2)轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。该研究采用体外培养人肺泡上皮细胞A549,将A549细胞分为control组、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-CircTMOD3组、LPS+si-CircTMOD3+inhibitor NC组、LPS+si-CircTMOD3+miR-139-5p inhibitor组;用qRT-PCR检测各组细胞CircTMOD3、miR-139-5p和ROCK2表达水平;CCK-8和EdU法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6和IL-1β水平;相关试剂盒检测MDA、SOD、CAT水平;Western blot检测细胞中Bax、Bcl-2、ROCK2蛋白表达量;双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与CircTMOD3和ROCK2的关系。结果显示,与control组相比,LPS组A549细胞中CircTMOD3水平、ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、凋亡率、Bax表达水平、ROCK2蛋白表达水平显著升高,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与LPS组和LPS+si-NC组比较,LPS+si-CircTMOD3组A549细胞中CircTMOD3表达水平、ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平、ROCK2蛋白水平显著降低,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与LPS+si-CircTMOD3+inhibitor NC组相比,LPS+siCircTMOD3+miR-139-5p inhibitor组A549细胞中ROCK2 mRNA表达水平、TNF-α水平、IL-6水平、IL-1β水平、MDA水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平、ROCK2蛋白表达水平显著升高,miR-139-5p表达水平、增殖活力、CAT水平、SOD水平、Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-139-5p与CircTMOD3和ROCK2存在靶向调控关系。该研究得出,干扰CircTMOD3表达可以上调miR-139-5p表达抑制ROCK2表达,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。

沉默lncRNA MCF2L-AS1通过miR-138-5p/AnxA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探究lncRNA MCF2L-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法:qRT-PCR检测正常人乳腺上皮细胞系MCF-10A、乳腺癌细胞系(MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231)中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p水平;将si-NC、si-MCF2L-AS1、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor分别转染至MDA-MB-415细胞并命名为si-NC组、si-MCF2L-AS1组、si-MCF2L-AS1+inhibitor NC组、si-MCF2L-AS1+miR-138-5p inhibitor组,未做任何处理的MDA-MB-415细胞记为NC组。qRT-PCR检测MDA-MB-415细胞中lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p表达;MTT法检测MDA-MB-415细胞增殖情况;流式细胞术检测MDA-MB-415细胞凋亡率;Transwell检测MDA-MB-415细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测MDA-MB-415细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、AnxA2蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p、AnxA2的关系;小鼠异种移植实验检测肿瘤生长。结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-415、MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞中lncRNA MCF2L-AS1、AnxA2水平显著上调(P<0.05),miR-138-5p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-MCF2L-AS1组MDA-MB-415细胞OD 560 nm值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA MCF2L-AS1表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平、小鼠肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05),MDA-MB-415细胞凋亡率、miR-138-5p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-138-5p表达减弱了沉默lncRNA MCF2L-AS1抑制MDA-MB-415细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的效果;lncRNA MCF2L-AS1负向调控miR-138-5p/AnxA2轴。结论:沉默lncRNA MCF2L-AS1可能通过上调miR-138-5p来下调AnxA2的表达,进而抑制乳腺癌MDA-MB-415细胞增殖、迁移和侵袭。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

CircFOXK2调节miR-330-5p/SLC1A5轴对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircFOXK2对卵巢癌(ovarian cancer, OC)细胞恶性生物学行为的影响以及在此过程中对miR-330-5p/SLC1A5轴的调节机制。方法:将人OC细胞系的SKOV3细胞分为NC组(未转染)、 si-CircFOXK2-NC组(转染si-CircFOXK2-NC)、si-CircFOXK2组(转染si-CircFOXK2)、 si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p-NC组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p-NC)、si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p)。qRT-PCR检测细胞中CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5 mRNA的表达;Western blot检测细胞中SLC1A5蛋白表达水平;CCK-8检测SKOV3细胞增殖;克隆形成实验检测SKOV3细胞克隆数量;流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡情况;Transwell小室实验测定SKOV3细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5三者的靶向关系。结果:与NC组和si-CircFOXK2-NC组相比,转染si-CircFOXK2组OC细胞中CircFOXK2、SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05),miR-330-5p的表达、细胞凋亡率均升高(P<0.05);anti-miR-330-5p回补实验结果显示,si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组细胞中SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达升高,细胞增殖活性及迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。结论:敲低CircFOXK2能够上调miR-330-5p表达,下调SLC1A5的表达,抑制OC细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

环状RNA hsa_circ_0003221靶向miR-139-3p/IGF2BP3轴调控口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的分子机制

目的:探讨环状RNA hsa_circ_0003221(circPTK2)靶向微小RNA(miR)-139-3p/胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)轴调控口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡。方法:qRT-PCR检测组织及细胞中circPTK2、miR-139-3p、IGF2BP3 mRNA表达水平;将CAL-27细胞分为5组:sh circPTK2、sh NC、sh circPTK2+miR-139-3p inhibitor、sh circPTK2+inhibitor NC、空白组。分别检测细胞增殖率、凋亡率及相关蛋白、IGF2BP3的表达,并验证miR-139-3p与circPTK2、IGF2BP3的靶向关系。结果:miR-139-3p表达在OSCC组织及细胞中降低,circPTK2、IGF2BP3 mRNA表达增加(P<0.05);沉默circPTK2可抑制细胞增殖及circPTK2、IGF2BP3 mRNA及蛋白表达,促进细胞凋亡及miR-139-3p表达(P<0.05);miR-139-3p inhibitor逆转了沉默circPTK2对CAL-27细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。miR-139-3p分别与circPTK2、IGF 2BP3存在靶向关系。结论:沉默circPTK2可通过miR-139-3p/IGF2BP3轴调控OSCC细胞增殖、凋亡。

CircBACH1调节miR-140-5p/MDM2轴对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

目的探讨CircBACH1对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响以及在此过程中对miR-140-5p/MDM2轴的调节机制。方法收集MM组和正常对照组骨髓浆细胞,将人MM细胞系U266细胞分为未转染(Control)组、si-NC组、si1-CircBACH1组、si2-CircBACH1组、si-CircBACH1+anti-miR-NC组、si-CircBACH1+anti-miR-140-5p组。实时荧光定量PCR检测细胞中CircBACH1、miR-140-5p、鼠双微体2(MDM2)mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡及对硼替佐米的敏感性;Western blot检测细胞中B细胞淋巴因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3蛋白的表达;双萤光素酶报告基因实验验证CircBACH1、miR-140-5p、MDM2三者的靶向关系。结果与正常对照组相比,MM组的骨髓浆细胞及U266细胞中CircBACH1、MDM2 m RNA表达升高,miR-140-5p表达降低(P<0.05);与Control组和si-NC组相比,siCircBACH1组细胞中CircBACH1、MDM2的mRNA表达、细胞增殖活性、Bcl-2蛋白表达均降低,miR-140-5p的表达、细胞凋亡率、化疗敏感性及cleaved caspase-3、Bax表达均升高(P<0.05);而回补实验中,si-CircBACH1对MM细胞的影响被anti-miR-140-5p逆转,且MDM2的表达也升高(P<0.05)。双萤光素酶基因报告实验验证了CircBACH1、MDM2均与miR-140-5p存在靶向关系。结论敲低CircBACH1能够上调miR-140-5p表达,下调MDM2的表达,抑制MM细胞的增殖,促进MM细胞凋亡,提高化疗敏感性。

CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞CNE1恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic组、si-CircMATR3+inhibitor NC组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor组、si-SOX2组。RT-qPCR检测细胞中CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭和细胞周期转变,促进细胞凋亡和凋亡小体的形成;抑制miR-129-5p表达一定程度可以逆转沉默CircMATR3对于CNE1细胞的抑制作用。结论:沉默CircMATR3可以上调miR-129-5p表达,抑制SOX2表达,进而抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭,促进细胞凋亡。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

lncRNASOX2-OT调节miR-215-5p/ZEB2轴抑制人前列腺癌细胞系增殖和上皮间质转化研究

目的探讨长非编码RNA SRY盒转录因子2重叠转录本(lncRNA SOX2-OT)调节miR-215-5p/E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)轴对前列腺癌细胞增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法将PC-3细胞分为对照组、si-SOX2-OT组、si-NC组、si-SOX2-OT+anti-miR-215-5p组,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中SOX2-OT、miR-215-5p与ZEB2表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)及5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖;流式细胞术检测PC-3细胞凋亡率;Transwell检测PC-3细胞迁移、侵袭;qRT-PCR检测PC-3细胞miR-215-5p、ZEB2 mRNA、凋亡蛋白与EMT标志蛋白转录表达;Western blot检测PC-3细胞ZEB2、凋亡蛋白与EMT标志蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证PC-3细胞中SOX2-OT对miR-215-5p及miR-215-5p对ZEB2的靶向调节作用。结果与人前列腺上皮细胞相比,人前列腺癌组织源细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、22RV1中SOX2-OT、ZEB2 mRNA表达升高,miR-215-5p表达降低(P<0.05)。与对照组相比,si-SOX2-OT组细胞活力、EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、细胞ZEB2、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及Vimentin mRNA和蛋白表达均降低,细胞凋亡率、miR-215-5p及Bcl-2相关X基因(Bax)、E-cadherin mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达可减弱敲低SOX2-OT对PC-3细胞的影响。结论敲低SOX2-OT可通过促进miR-215-5p表达而下调ZEB2的表达,从而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡。

miR-139-5p靶向调控DNMT1抑制胶质母细胞瘤的生长和转移

目的考察miR-139-5p在胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)中的表达及生物学作用,以及miR-139-5p对DNA甲基转移酶1(DNMT1)的调控作用。方法通过qRT-PCR检测GBM肿瘤组织、配对癌旁组织、人正常神经胶质细胞系HEB和人神经胶质瘤细胞系U251中miR-139-5p的表达。通过转染miR-139-5p模拟物来上调U251细胞中miR-139-5p的表达,通过转染靶向DNMT1的siRNA(DNMT1-siRNA)来下调DNMT1的表达。qRT-PCR、Western blotting、免疫组织化学和免疫荧光检测组织和细胞中DNMT1和2型神经纤维瘤病(NF2)的表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、流式细胞术和Matrigel Transwell评估U251细胞的增殖、凋亡和侵袭能力。结果与癌旁组织或HEB细胞相比,GBM组织和U251细胞中的miR-139-5p表达被抑制(P<0.05)。与对照细胞相比,转染miR-139-5p模拟物明显下调了DNMT1的表达并上调了NF2的表达(P<0.05)。与对照细胞相比,转染DNMT1-siRNA明显促进了NF2的表达(P<0.05)。转染miR-139-5p模拟物或DNMT1-siRNA均可诱导U251细胞凋亡并抑制细胞侵袭(P<0.05)。结论 miR-139-5p在GBM中发挥抗癌作用,miR-139-5p通过靶向负调控DNMT1来抑制肿瘤的增殖和转移。

MicroRNA-139-5p靶向Bcl-2调控棕榈酸诱导的胰岛β细胞凋亡

目的 探索miR-139-5p在棕榈酸(palmitate,PA)诱导胰岛β细胞凋亡中的作用及机制。方法 PA孵育Min6细胞,RT-PCR检测miR-139-5p表达,Western blot检测cleaved caspase 3和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Bcl-2之间的相互作用,GreenNuc^(TM)检测凋亡细胞。高脂饲料喂养联合STZ注射建立T2DM小鼠模型,TUNEL检测胰腺组织miR-139-5p表达。结果 过表达miR-139-5p增加cleaved caspase 3表达和Min6细胞凋亡(P<0.05)。在PA孵育的Min6细胞中miR-139-5p表达上调,而抑制miR-139-5p表达降低了cleaved caspase 3蛋白水平和Min6细胞凋亡(P <0.05)。荧光素酶报告分析表明miR-139-5p与Bcl-2相互作用,miR-139-5p过表达降低了Bcl-2表达(P <0.05),而PA诱导的Bcl-2表达下调可通过抑制miR-139-5p来恢复(P <0.05)。此外,过表达Bcl-2可拮抗miR-139-5p诱导的cleaved caspase 3蛋白上调(P <0.05),并减少凋亡的Min6细胞数量。T2DM小鼠胰腺中miR-139-5p表达增加(P <0.05),胰岛细胞凋亡增多(P <0.05)。结论 miR-139-5p抑制Bcl-2表达促进PA诱导的胰岛β细胞凋亡。

人环状RNA_0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制

目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^(-1) LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ_0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、LPS+circ_0114428沉默(LPS+si-circ_0114428)组、LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ_0114428+in-NC)组和LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p)组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中circ_0114428、miR-139-5p和TGFBR2 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中TGFBR2、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL^(-1)β)水平。结果:双荧光素酶报告基因实验,miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2存在靶向调控关系(t=10.171,P<0.05;t=7.682,P<0.05)。CCK-8法检测LPS干预的最佳浓度为10 mg·L^(-1),最佳干预时间为12 h。与对照组比较,LPS组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ_0114428组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显降低(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与LPS+si-circ_0114428+in-NC组比较,LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:circ_0114428能减轻LPS诱导的HK-2细胞损伤,其作用机制可能与调节miR-139-5p/TGFBR2轴有关。

EZH2-miR-139-5p通路在大肠癌中的表达及对化疗耐药性的影响

[目的]探讨EZH2-miR-139-5p通路在大肠癌中的表达及对化疗耐药性的影响。[方法]选取54例大肠癌患者癌组织及癌旁组织,比较癌组织和癌旁组织EZH2及miR-139-5p mRNA水平,并分析大肠癌组织中EZH2 mRNA与miR-139-5p mRNA水平的相关性。选取6种大肠癌细胞株(LOVO、RKO、HCT116、LS174t、HT29、SW480),采用Western blot法及RT-PCR法分析各细胞株EZH2蛋白及miR-139-5p mRNA相对表达量。向LOVO细胞株转染siRNA-EZH2后检测miR-139-5p相对表达量,再向SW480细胞株转染EZH2质粒后检测miR-139-5p相对表达量。通过在HCT116细胞内转染miR-139-5p类似物及阴性对照物24h后,加入不同浓度(0、0.465、3.720、29.800、238.000、1904.000μM)奥沙利铂,加药48h后采用CCK8法检测细胞活性。[结果]相较于癌旁组织,大肠癌组织EZH2 mRNA水平更高(P<0.05),而miR-139-5p mRNA水平更低(P<0.05),且大肠癌组织中,EZH2 mRNA与miR-139-5p mRNA水平呈负相关(r=-0.334,P<0.05)。在高侵袭力细胞株(LOVO、RKO、HCT116)中,EZH2蛋白相对表达量较低,而miR-139-5p mRNA水平较高;在低侵袭力细胞株(LS174t、HT29、SW480)中EZH2蛋白相对表达量较高,而miR-139-5p mRNA水平较低。转染siRNA-EZH2的细胞中,miR-139-5p mRNA相对表达量有所上升;转染EZH2质粒的细胞中,miR-139-5p mRNA相对表达量有所下降。在HCT116细胞中转染miR-139-5p类似物48h后,细胞活性随药物浓度有所降低,且降低程度比阴性对照显著。[结论]MiR-139-5p参与大肠癌化疗药物的耐药机制,并可能通过调控靶基因EZH2从而抑制大肠癌细胞的增殖。