超声造影定量参数联合外周血单个核细胞miR-34a、miR-146a对PTC诊断和淋巴结转移的评估价值

目的探讨超声造影定量参数联合外周血单个核细胞(PBMC)miR-34a、miR-146a对乳头状甲状腺癌(PTC)诊断和淋巴结转移的评估价值。方法选取104例PTC患者,根据病理诊断分为甲状腺癌组69例和良性组35例;根据是否发生淋巴结转移,将69例甲状腺癌患者分为未转移组33例和转移组36例。比较各组超声造影定量参数峰值强度(PI)、达峰时间(TTP)、平均通过时间(MTT)、曲线下面积(AUC)和PBMC中miR-34a、miR-146a水平。采用ROC分析超声造影参数联合P BMC miR-34a、miR-146a对PTC诊断和淋巴结转移的评估价值。结果与良性组比较,甲状腺癌组超声造影定量参数及P BMC miR-34a水平均降低(P<0.05),而miR-146a水平升高(P<0.05)。与未转移组比较,淋巴结转移组PI、AUC、miR-146a水平升高(P<0.05),而TTP、MTT、miR-34a水平降低(P<0.05)。超声造影定量参数与PBMC miR-34a、miR-146a对PTC诊断和淋巴结转移的AUC均高于各项指标单独检测值(P<0.05)。结论联合应用超声造影定量参数与PBMC miR-34a、miR-146a指标检测能增强PTC早期诊断与淋巴结转移的评估效能。

ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道发育过程的调控作用

【目的】本研究旨在揭示ame-miR-14在意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道发育过程的调控作用。【方法】通过Stem-loop RT-PCR和Sanger测序分别验证ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中的表达和序列真实性。饲喂ame-miR-14的模拟物(mimic-ame-miR-14)和抑制物(inhibitor-ame-miR-14)及其相应的阴性对照mimic-NC和inhibitor-NC对ame-miR-14分别进行过表达和敲降,利用RT-qPCR检测意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中ame-miR-14的表达量。利用生物信息学软件预测ame-miR-14的靶基因并进行相关分析。利用RT-qPCR检测ame-miR-14的过表达和敲降后其靶基因FoxO和Hedgehog在4-6日龄幼虫肠道中的相对表达量。【结果】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂6日龄幼虫肠道中真实存在和表达。相较于饲喂mimic-NC,饲喂mimic-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中均为显著上调;相较于饲喂inhibitor-NC,饲喂inhibitor-ame-miR-14后ame-miR-14表达量在意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道中皆为显著下调。ame-miR-14共靶向309个基因,可注释到45条KEGG通路和36个GO条目;进一步分析发现ame-miR-14可靶向14个生长发育相关基因,并与FoxO和Hedgehog之间存在潜在的靶向关系。过表达ame-miR-14后,相较于mimic-NC组,mimic-ame-miR-14组的4日龄幼虫肠道内FoxO表达量下调,5和6日龄幼虫肠道内FoxO表达量均为显著下调;敲降ame-miR-14后,相较于inhibitor-NC组,inhibitor-ame-miR-14组4日龄幼虫肠道内FoxO表达量下调,5日龄幼虫肠道内FoxO表达量显著上调,6日龄幼虫肠道内FoxO表达量上调。与mimic-NC组相比,过表达ame-miR-14后mimic-ame-miR-14组的Hedgehog表达量在4-6日龄幼虫肠道内皆显著下调;与inhibitor-NC组相比,敲降ame-miR-14后inhibitor-ame-miR-14组的Hedgehog表达量在4-6日龄幼虫肠道内均为上调。【结论】ame-miR-14在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在和表达;通过饲喂模拟物和抑制物能够分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-14的有效过表达和敲降;ame-miR-14通过负调控FoxO和Hedgehog的表达潜在参与调节幼虫肠道发育。

家蚕miR-14的上调表达与靶基因的预测分析

【目的】了解家蚕细胞中上调miRNA的方法及靶基因预测,为家蚕miRNA的功能研究提供方法参考。【方法】构建家蚕miR-14的真核表达载体pSK-hr3-ie1-EGFP-pri-mir-14并在家蚕BmN细胞中表达,同时通过转染化学合成的miRNA mimics上调BmN细胞中miR-14的水平。首先通过PCR扩增miR-14的前体及其侧翼序列(pri-mir-14)并克隆至真核表达载体pSK-hr3-ie1-EGFP的EGFP基因下游。分别将重组质粒pSK-hr3-ie1-EGFP-pri-mir-14、对照质粒pSK-hr3-ie1-EGFP、bmo-miR-14 mimics和negative control mimcs转染至家蚕BmN细胞,观察EGFP及FAM在细胞中的荧光情况,以检测其转染效率,qRT-PCR方法检测bmo-miR-14在细胞中的水平。分别采用RNAhybrid和miRanda预测bmo-miR-14的靶基因。【结果】重组表达载体pSK-hr3-ie1-EGFP-pri-mir-14与miRNA模拟物bmo-miR-14 mimics都能上调BmN细胞中的miR-14水平,与对照相比分别提高了2.1、984倍。利用生物信息学方法预测bmo-miR-14靶基因,RNAhybrid和miRanda分别预测得到153和171个潜在bmo-miR-14靶基因,其中两者共同预测的靶基因有49个。GO分析结果显示,预测的49个靶基因的分子功能集中于结合和催化;而生物学过程集中于细胞过程和代谢过程。【结论】通过转染重组质粒及化学合成miRNA mimics,使细胞中相应的miRNA上调,可用于bmo-miR-14后续的功能研究。

Circular RNA LPAR3通过miR-143-5p/USP14通路调控食管癌细胞糖酵解的研究

目的探究调控食管癌细胞糖酵解的机制。方法逆转录实时定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)法分别检测环状RNA溶血磷脂酸受体(circular RNA lysophosphatidic acid receptor 3,CircLPAR3),微小RNA-143-5(microRNA-143-5p,miR-143-5p)和泛素特异性蛋白酶14(ubiquitin-specific protease 14,USP14)的表达水平;使用Seahorse XF 24细胞外通量分析仪测量细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR)和耗氧率(oxygen comsumpition rate,OCR);Western印迹法检测糖酵解途径关键酶HK2的表达水平;使用Starbase数据库预测CircLPAR3与miR-143-5p以及miR-143-5p与USP14的靶向结合位点,双荧光素酶试验验证CircLPAR3和miR-143-5p以及miR-143-5p与USP14的靶向关系。结果与正常人食管上皮细胞(normal human esophageal epithelial cells,Het-1A)组比较,食管癌细胞系中CircLPAR3高表达,且KYSE450细胞系的表达最高,同时miR-143-5p低表达而USP14高表达。与Het-1A组比较,KYSE450组HK2的蛋白表达水平增加,同时细胞ECAR增加,整体糖酵解OCR减少;敲低CircLPAR3的表达导致细胞HK2的蛋白表达水平减少,ECAR减少,整体糖酵解OCR增加;在抑制CircLPAR3的表达情况下,抑制miR-143-5p的表达能够部分逆转细胞的糖酵解途径;双荧光素酶实验验证了CircLPAR3和miR-143-5p的靶向关系,以及miR-143-5p和USP14的靶向关系。结论CircLPAR3能够通过调控miR-143-5p/USP14通路调节食管癌细胞糖酵解途径。

miR-14对麦冬多糖脂质体调节枯否氏细胞免疫活性的影响

以枯否氏细胞(KCs)为细胞模型,研究miR-14对麦冬多糖脂质体(OPL)调节免疫活性的影响。首先转染miR-14 mimic或miR-14 inhibitor,再用OPL处理,然后采用Griess、流式细胞术、荧光染色以及细胞划痕等方法检测NO和iNOS的分泌、吞噬FITC-dextran和FITC-OVA的活性、表面分子CD14和MHCⅡ的表达、细胞凋亡、ROS分泌。结果显示,转染miR-14 inhibitor后,OPL能够显著促进NO的分泌和MHCⅡ的表达;转染miR-14 mimic和miR-14 inhibitor后,OPL能够显著提高KCs的吞噬活性,促进iNOS和CD14的表达,并能够降低细胞凋亡水平和ROS的分泌。结果表明,OPL能够通过调控miR-14的表达来提高KCs的免疫活性。

miR-143在肌细胞中的表达及其影响

本试验旨在研究microRNA-143(miR-143)对小鼠肌细胞增殖和分化的影响。利用Real-time PCR方法对细胞不同分化时期进行检测,并且在小鼠肌细胞C2C12中通过转染miR-143mimics和Inhibitor对标志基因myogenin(MyoG)进行检测,然后利用免疫荧光和Western blotting方法对组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)基因表达水平进行检测。结果表明,miR-143与肌细胞的增殖和分化密切相关,过表达miR-143后,肌细胞标志基因MyoG出现下调,敲低后结果相反,且在分化细胞中过表达miR-143,免疫荧光和Western blotting结果显示,标志基因MHC的表达水平下降。因此,miR-143是一个潜在的影响肌肉生长发育的microRNA,为以后肌肉发育和功能的研究提供了一个新的资料。

青藤碱通过MALAT1靶向miR-141调控胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究以及临床意义

背景胃癌(gastric cancer, GC)是常见的消化系统恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率都很高.据报道,青藤碱在GC细胞中有抗肿瘤活性.但其机制有待进一步研究.目的研究青藤碱通过肺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1, MALAT1)靶向miR-141调控GC细胞增殖、侵袭和迁移的机制及其临床意义.方法分别用浓度为100μmol/L, 200μmol/L和400μmol/L的青藤碱处理体外培养的GCAGS细胞(分别记为L-SIN组, M-SIN组和H-SIN组),分别用MTT法和Transwell小室实验检测细胞的增殖和迁移、侵袭能力的变化, RT-qPCR检测MALAT1与miR-141的表达情况.利用Lipofectamine^(TM)2000转染构建下调MALAT1或上调miR-141的AGS细胞, RT-qPCR检测转染效果及miR-141的表达情况,检测细胞的增殖率和迁移、侵袭情况.预测miR-141靶标基因结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141和MALAT1的靶向关系,检测各处理组miR-141相对表达量.用400μmol/L的青藤碱处理仅上调MALAT1或与miR-141同时上调的GC细胞,检测细胞的增殖率和迁移、侵袭情况.结果与人正常胃粘膜上皮细胞GES-1相比, Control组AGS细胞活力和迁移、侵袭能力均明显增强(P <0.05),MALAT1 mRNA表达量明显升高(P <0.05),而miR-141mRNA表达量明显降低(P <0.05);与Control组相比,L-SIN组,M-SIN组和L-SIN组细胞活力和迁移、侵袭能力均明显下降(P<0.05), MALAT1表达量明显降低(P <0.05),而miR-141表达量明显升高(P <0.05),均呈浓度依赖性.转染si-MALAT1后, MALAT1表达量明显降低(P<0.05),而miR-141表达量明显升高(P<0.05);AGS细胞活力和迁移、侵袭能力均明显降低.转染miR-141mimics对AGS细胞有同样的影响(P <0.05),并上调miR-141表达水平(P<0.05).经Starbase预测miR-141和MALAT13’UTR存在靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证了miR-141是MALAT1的靶基因.仅上调MALAT1可以逆转青藤碱对GC细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用;同时上调MALAT1和miR-141可部分恢复青藤碱对GC细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用(P<0.05).结论青藤碱能够抑制GC细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制与通过MALAT1靶向调控miR-141有关.

miR-148b-3p通过靶向自噬相关基因14(ATG14)抑制急性髓系白血病细胞增殖与自噬

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)对急性髓系白血病(AML)细胞增殖和自噬的影响及其机制。方法基于基因表达数据集(GEO)和癌症基因组图谱(TCGA),采用生物信息学软件分析miR-148b-3p在AML细胞中的表达及其与患者临床预后的关系;实时荧光定量PCR检测AML细胞中miR-148b-3p表达。用脂质体法将miR-148b-3p模拟物(miR-148b-3p mimic)和miR-148b-3p抑制物(miR-148b-3p inhibitor)分别瞬时转入THP-1和NB4细胞,采用CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞增殖,Western blot法检测B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62和自噬相关基因14(ATG14)蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-148b-3p对ATG14的靶向结合,回复实验观察miR-148b-3p/ATG14轴对AML细胞表型的影响。结果AML患者细胞低表达miR-148b-3p,miR-148b-3p低表达的AML患者总体生存率较对照组显著降低;过表达miR-148b-3p可抑制THP-1细胞增殖和促进凋亡、并下调LC3Ⅱ、ATG14及上调P62蛋白水平,而抑制NB4细胞中miR-148b-3p表达则观察到相反的作用;此外,miR-148b-3p能显著降低野生型ATG14表达载体的荧光素酶活性,回复实验结果显示过表达ATG14可逆转miR-148b-3p上调对细胞增殖和自噬的抑制作用,而抑制ATG14表达则能减弱miR-148b-3p下调对细胞表型的促进作用。结论miR-148b-3p通过靶向结合ATG14抑制AML细胞的体外增殖和自噬。

miR-144/451通过干扰14-3-3ζ/AKT/ROS正反馈通路抑制ROS的产生

利用miR-144/451小分子RNA基因敲除小鼠分离骨髓有核红细胞,使用流式细胞术、定量PCR和Western blot等方法证明miR-144/451是否通过干扰14-3-3ζ/AKT/ROS正反馈通路抑制超氧化活性氧簇(ROS)的产生。结果表明:miR-144/451敲除小鼠呈现小细胞性溶血性贫血,可能是miR-144/451敲后除引起14-3-3ζ增高,而14-3-3ζ增高可引起轻度AKT磷酸化,从而引起Foxo3入核障碍;ROS水平增高,进而激活AKT磷酸化,且ROS促AKT磷酸化程度比14-3-3ζ更强,从而加强14-3-3ζ与Foxo3的结合,引起Foxo3进一步出核,形成正反馈调节机制;ROS水平进一步增高,导致红细胞凋亡加速,小鼠呈现贫血症状。

miR-133a靶向MMP-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制研究

目的研究微小RNA(microRNA,miR)-133a靶向基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制。方法培养正常成骨细胞株hFOB1.19及骨肉瘤细胞株MG63、U2OS、SAOS2,采用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测miR-133a的表达;MG63细胞分为miR-阴性对照(negative control,NC)组、miR-133a组、pcDNA3.1+miR-NC组、pcDNA3.1+miR-133a组、pcDNA3.1-MMP-14+miR-133a组,转染NC mimic、miR-133amimic、pcDNA3.1质粒、过表达MMP-14的pcDNA3.1质粒,采用Transwell检测细胞侵袭数目、western blot检测MMP-14表达水平、荧光素酶报告基因实验验证miR-133a靶向结合MMP-14基因mRNA 3’UTR。结果MG63、U2OS、SAOS2细胞中miR-133a的表达水平均低于hFOB1.19细胞且MG63细胞中miR-133a表达水平降低最显著;miR-133a组MG63细胞的侵袭数目少于miR-NC组,MMP-14的表达水平、含有MMP-14野生型3’UTR双荧光素酶报告基因的荧光活力低于miR-NC组;pcDNA3.1-MMP-14+miR-133a组MG63细胞的侵袭数目多于pcDNA3.1+miR-133a组。结论miR-133a能够抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭,靶向抑制MMP-14基因是可能的分子机制之一。

miR-9和MMP-14在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的检测微小RNA-9(miR-9)和基质金属蛋白酶-14(MMP-14)在晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清和组织中的表达情况,以及与患者临床特征及预后的关系。方法收集76例晚期(Ⅲb~Ⅳ期)NSCLC患者的血液样本和肿瘤组织样本,另收集气管肺部良性疾病患者50例。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法检测血清和组织中miR-9表达。采用ELISA法和免疫组化法检测血清和组织中MMP-14表达。随访12个月患者生存情况。采用受试者工作特征(ROC)曲线计算血清miR-9、MMP-14对晚期NSCLC患者预后的预测价值。结果与良性疾病组患者比较,NSCLC组患者血清miR-9水平降低,MMP-14水平升高(P<0.05)。NSCLC患者血清miR-9和MMP-14水平呈负相关性(r=-0.399,P<0.001)。肿瘤组织中MMP-14蛋白阳性表达率为65.79%(50/76),MMP-14阳性表达者组织miR-9表达量低于MMP-14阴性表达患者(P<0.05)。血清和组织中miR-9、MMP-14表达与肺外转移、TNM分期和ALK基因突变有关。血清miR-9和MMP-14水平预测患者1年内死亡的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.696(95%CI:0.493~0.823)、0.704(95%CI:0.545~0.798),敏感度和特异度分别为93.3%、52.5%和80.3%、58.5%,截断值分别为0.825和44.80 pg/ml。结论晚期NSCLC患者血清和组织中miR-9表达量降低以及MMP-14水平升高与患者Ⅳ期、发生肺外转移和患者死亡有关,血清miR-9和MMP-14水平对于预测晚期NSCLC患者预后不良有一定的临床参考价值。

miR-124-3p靶向调控MAPK 14对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨miR-124-3p通过靶向调控MAPK 14,从而对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞增殖与侵袭产生作用。方法提取正常大鼠及模型大鼠胎盘滋养层组织及原代细胞,分组转染。MTT、流式细胞术、Transwell检测检测细胞活力、凋亡、周期、迁移及侵袭能力,qRT-PCR及Western blot检测因子的表达水平。验证miR-124-3p和MAPK 14的靶向关系。结果过表达miR-124-3p后,细胞增殖、侵袭能力降低,细胞阻滞在G1/G0期,细胞凋亡增加;抑制miR-124-3p表达后,结果相反。双荧光素酶报告实验显示miR-124-3p与MAPK 14存在靶向关系。抑制MAPK 14表达后,与过表达miR-124-3p结果一致,细胞活力及侵袭能力降低,凋亡增加;过表达MAPK 14实验组与抑制miR-124-3p表达结果一致。结论 miR-124-3p可靶向负调控MAPK 14,对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞的增殖与侵袭产生影响。

p53、14-3-3σ、miR-365在UVB致HaCaT细胞G_2/M期阻滞中的作用

目的:研究30mJ/cm2的UVB照射后,HaCaT细胞周期的改变及其可能机制。方法:以人永生化上皮细胞(HaCaT)为研究对象,波长305nm的UVB为干预因子,首先观察了HaCaT细胞在30mJ/cm2的UVB作用后其细胞周期的变化;其次观察了UVB照后不同时间点p53蛋白、14-3-3σ蛋白表达的改变;最后用miR-365高表达的HaCaT细胞分析了miR-365在UVB所致了的周期阻滞中的可能作用。结果:HaCaT细胞在30mJ/cm2的UVB作用后18h出现较明显的G2/M期阻滞;p53、磷酸化的p53以及14-3-3σ蛋白在UVB照射后均有明显升高;miR-365高表达的HaCaT细胞,14-3-3σ蛋白的mRNA表达下降,且在UVB照射后无明显改变。结论:30mJ/cm2的UVB照射可诱导HaCaT细胞发生G2/M期阻滞,p53、14-3-3σ、miR-365可能在其中发挥了重要作用。

miR-217通过靶向14-3-3ν抑制胃癌转移的作用及机制研究

目的探讨miRNA-217(miR-217)抑制胃癌细胞转移的作用及其机制。方法 qRT-PCR法比较胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞系和正常胃上皮细胞中miR-217的表达差异。转染miR-217mimics或Inhibitors后,通过Transwell侵袭实验观察miR-217的胃癌细胞转移能力的影响;建立裸鼠尾静脉转移模型,观察稳定表达miR-217在体内对胃癌转移能力的影响;生物信息学分析miR-217的候选靶基因为14-3-3ν,荧光素酶报告基因实验检测SGC7901细胞中miR-217过表达对野生型和突变型14-3-3ν荧光素酶活性的影响。Western blot检测miR-217对14-3-3ν野生型和突变体蛋白表达的影响。结果 miR-217在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.01);在各胃癌细胞中的表达量较正常胃上皮细胞GES显著降低(P<0.01)。miR-217mimics抑制SGC7901细胞的侵袭能力,与阴性对照的差异有统计学意义(P<0.01)。而miR-217inhibitors明显促进SGC7901细胞的侵袭能力(P<0.01);体内实验发现稳定过表达miR-217的SGC7901细胞转移能力明显降低。荧光素酶报告基因结果证实miR-217能够抑制14-3-3ν的3′-UTR区荧光素酶活性;Western blot结果显示转染miR-217后,SGC7901细胞中的14-3-3ν蛋白水平明显低于对照组;Western blotting结果显示miR-217过表达显著抑制14-3-3ν-wt,而不能抑制14-3-3ν-mut的蛋白表达。结论 miR-217能够通过靶向14-3-3ν抑制胃癌转移,促进miR-217的表达或抑制14-3-3ν的表达可能是抑制胃癌转移的有效手段。

miR-1-3p对乾华肉用美利奴羊次级毛囊发育相关基因的调控研究

为了探讨miR-1-3p及其靶基因与乾华肉用美利奴羊次级毛囊发生发育关系,该研究采集2周岁乾华肉用美利奴羊皮肤样品,利用生物信息学方法预测miR-1-3p的靶基因,荧光定量PCR检测miR-1-3p及其靶基因相对表达量,通过Western blot对miR-1-3p的靶基因成纤维细胞生长因子14(fibroblast growth factor 14,FGF 14)进行蛋白定量检测,并利用双荧光素酶报告基因试验验证miR-1-3p与候选靶基因的靶向关系。结果表明:通过Targetscan v7.0、miRanda和RNA223个靶基因预测软件确定FGF 14为miR-1-3p的候选靶基因;miR-1-3p在毛囊生长期低表达,在休止期高表达;FGF 14基因mRNA在毛囊生长期高表达,休止期低表达,与FGF 14蛋白表达规律一致。双荧光素酶报告基因试验结果表明miR-1-3p的靶基因为FGF 14。可见,乾华肉用美利奴羊次级毛囊miR-1-3p与FGF 14存在靶向调控关系,miR-1-3p可能是通过负调控FGF 14实现对乾华肉用美利奴羊次级毛囊发生发育进行调控。

LncRNA SNHG14调控miR-656-3p/SIRT5通路加重肝癌侵袭和迁移

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因14(SNHG14)对肝细胞癌(HCC)细胞侵袭和迁移的影响及机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肝癌细胞SNHG14和miR-656-3p的表达。与sh-SNHG14,miR-656-3p抑制剂,miR-656-3p模拟物,pcDNA3.1-SIRT5共转染后,检测HepG2和MHCC97H细胞增殖、侵袭和迁移。然后用qRT-PCR测定SNHG14、miR-656-3p和SIRT5的表达水平,荧光素酶报告基因检测和RNA下调SNHG14与miR-656-3p之间的关系,以及miR-656-3p与SIRT5之间的关系。结果:HCC细胞中SNHG14表达上调,miR-656-3p表达下调。抑制SNHG14和miR-656-3p过表达,可抑制HepG2和MHCC97H细胞增殖,侵袭和迁移。SNHG14直接作用于miR-656-3p,SIRT5是miR-656-3p的靶基因。miR-656-3p抑制剂或pcDNA3.1-SIRT5可逆转sh-SN HG14对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论:SNHG14通过调节miR-656-3p/SIRT5轴促进肝癌细胞的侵袭和迁移。

MiR-373-3p促进肺腺癌细胞的侵袭转移

背景与目的肺癌位居全球癌症相关死亡率的首位,其中肿瘤转移是导致肺癌患者死亡的主要原因,研究表明mi R-373与多种肿瘤细胞的侵袭转移有密切关系。本研究旨在探讨mi R-373-3p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其对肺腺癌细胞侵袭转移能力的影响。方法利用q RTPCR法检测mi R-373-3p在NSCLC组织和肺腺癌细胞株中的表达。瞬时转染hsa-mi R-373-3p的mimics和inhibitor至肺腺癌H1299和A549细胞株中,利用Transwell小室检测转染后肺腺癌细胞侵袭转移能力的改变,Western blot检测转染后肺腺癌细胞中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及MMP-14蛋白水平的改变。结果mi R-373-3p在51例NSCLC组织和5种肺腺癌细胞株中均明显高表达。在mi R-373-3p低表达的H1299细胞中过表达mi R-373-3p,细胞的侵袭转移能力明显提高,同时MMP-9及MMP-14的表达上调;在mi R-373-3p高表达的A549细胞中抑制mi R-373-3p表达,细胞的侵袭转移能力下降,并且下调MMP-9和MMP-14的表达。结论 mi R-373-3p可能通过正向调节MMP-9、MMP-14的表达而促进肺腺癌细胞的侵袭转移能力。

低氧下miR-451a对K562细胞向红系分化过程的影响

目的:探讨低氧下K562细胞向红系分化过程中GATA-1蛋白的表达变化及GATA-1如何通过上调miR-451a表达抑制14-3-3ζ的表达调控红系分化。方法:将K562细胞分为常氧组及低氧组,经氯化血红素(hemin)诱导96 h后,检测联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA表达以及CD235a的表达等相应红系分化指标,验证模型是否复制成功;采用Western blot及qRT-PCR检测GATA-1蛋白和miR-451a在上述2组中的表达变化及过表达GATA-1后miR-451a的表达变化;将常氧组和低氧组细胞分别分为阴性对照组(NC组)及miR-451a过表达组,结合相应红系分化指标共同判断4组细胞红系分化程度;过表达miR-451a后通过Western blot检测14-3-3ζ的表达变化。结果:低氧下K562细胞诱导96 h后联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA表达及CD235a的表达均显著高于0 h(P<0.05),这提示,低氧下K562细胞红系分化模型复制成功。低氧组GATA-1蛋白及miR-451a的表达水平均显著高于常氧组(P<0.05)。低氧下过表达GATA-1后,miR-451a的表达水平较NC组明显升高(P<0.05)。低氧下过表达miR-451a后,联苯胺染色阳性细胞率、γ-globin的mRNA表达水平及CD235a的表达均明显高于NC组(P<0.05)。14-3-3ζ的蛋白表达水平检测结果显示,低氧下miR-451a过表达组14-3-3ζ的表达水平低于NC组(P<0.05)。结论:低氧条件可显著提高GATA-1蛋白的表达水平,GATA-1表达的升高可上调miR-451a,进而抑制14-3-3ζ的蛋白表达,阻碍K562细胞红系分化模型中的细胞增殖过程,发挥促红系分化的作用。

长链非编码RNA-LncRNA小核仁RNA宿主基因14对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non coding RNAs,LncRNAs) LncRNA小核仁RNA宿主基因14(small nucleolar RNA host gene 14,SNHG14)在乳腺癌组织中的表达水平,及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响和潜在机制。方法收集于2018年1月至2019年1月于我院行手术治疗的乳腺癌组织和癌旁组织共40例,对比乳腺癌组织和癌旁组织LncRNA SNHG14的表达水平,分析不同乳腺癌细胞系的LncRNA SNHG14表达水平。敲低SNHG14的表达水平后,采用CCK 8检测CAL51细胞的活力,采用Transwell实验检测细胞侵袭和迁移,进一步预测和验证SNHG14的结合miRNA和潜在机制。结果乳腺癌组织和细胞系的SNHG14表达水平显著增高,敲低SNHG14后抑制CAL51细胞的增殖、侵袭和迁移能力,SNHG14潜在与miR 144靶向结合,miR 144低表达与乳腺癌预后不良相关。抑制SNHG14后CAL51细胞的miR 144表达显著下降,而中心体蛋白55(centrosomal protein 55,CEP55)的表达显著升高。结论LncRNA SNHG14在乳腺癌组织和细胞中高表达,LncRNA SNHG14可通过miR 144/CEP55信号轴从而促进乳腺癌细胞的增殖和迁移。

miR-186-5p靶向驱动蛋白分子14诱导髓母细胞瘤Daoy细胞凋亡的机制研究

目的 研究miR-186-5p靶向驱动蛋白分子14(KIF14)诱导髓母细胞瘤Daoy细胞凋亡的机制。方法 以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常星形胶质NHA细胞和髓母细胞瘤D283、Daoy、D341细胞中miR-186-5p的表达水平。将髓母细胞瘤Daoy细胞分成对照组、miR-NC组(转染mimics control)、miR-186-5p组(转染miR-186-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、anti-miR-186-5p组(转染miR-186-5p inhibitor)、miR-186-5p+Vector组(共转染miR-186-5p mimics和阴性对照载体)、miR-186-5p+KIF14组(共转染miR-186-5p mimics和KIF14过表达载体)、Vector组(转染阴性对照载体)、KIF14组(转染KIF14过表达载体)。以细胞计数法-8(CCK-8)法检测增殖情况,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹(Western blot)法检测KIF14、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。荧光素酶报告系统鉴定miR-186-5p和KIF14的靶向关系。结果 对照组、miR-NC组、miR-186-5p组、miR-186-5p+Vector组、miR-186-5p+KIF14组的细胞增殖活性(OD值)分别为0.68±0.07,0.65±0.08,0.36±0.04,0.35±0.05和0.46±0.03,凋亡率分别为(3.26±0.54)%,(3.18±0.36)%,(11.54±1.47)%,(10.95±1.28)%和(5.63±0.62)%,Bax蛋白表达量分别为0.57±0.05,0.56±0.09,0.88±0.08,0.90±0.11和0.70±0.08,Bcl-2蛋白表达量分别为0.66±0.07,0.64±0.06,0.45±0.04,0.42±0.05和0.53±0.03,对照组、miR-NC组的上述指标与miR-186-5p组比,miR-186-5p+Vector组的上述指标与miR-186-5p+KIF14组比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-NC组、miR-186-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-186-5p组细胞中KIF14蛋白表达量为0.75±0.08,0.26±0.05,0.78±0.09和1.25±0.13,miR-NC组与miR-186-5p组比,anti-miR-NC组与anti-miR-186-5p组比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-186-5p和KIF14为靶向关系。结论 miR-186-5p靶向抑制KIF14表达诱导髓母细胞瘤Daoy细胞凋亡。