miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

miR-141-3p靶向调控HMGB1对LPS诱导的A549细胞损伤的影响

目的探讨miR-141-3p通过靶向调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脂多糖(LPS)诱导的A549细胞损伤的影响。方法以Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,将miR-141-3p mimics、mimics NC、HMGB1基因过表达质粒(pcDNA3.1-HMGB1)和空载质粒(Vector)分别或共转染至A549细胞中,再采用10μg/ml LPS处理24 h。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞增殖活性;比色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与HMGB1之间的靶向调控关系。结果LPS干预后,A549细胞增殖活性及细胞中miR-141-3p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及上清液中LDH活性升高(P<0.05)。过表达miR-141-3p可增强LPS处理后的A549细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率及细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和上清液中LDH活性(P<0.05)。然而,HMGB1基因过表达可逆转miR-141-3p对LPS诱导A549细胞损伤的改善作用。双荧光素酶报告基因实验证实,HMGB1是miR-141-3p下游靶基因。结论miR-141-3p可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,降低炎症因子表达水平,改善A549细胞损伤,其作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。

lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴促进肾透明细胞癌细胞的生长和转移的机制研究

目的:探讨lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴对肾透明细胞癌细胞(kidney renal clear cell carcinoma,KIRC)的生长和转移的影响。方法:利用生信分析LUCAT1在KIRC中的表达,并预测下游的miRNA/mRNA调控轴;qRT-PCR用于检测LUCAT1、miR-141-3p和SOX11的表达,Western blot用于检测SOX11的表达;细胞生物学功能实验观察KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭状况;双荧光素酶实验验证LUCAT1和miR-141-3p以及miR-141-3p和SOX11靶向结合关系;RIP实验验证LUCAT1和miR-141-3p的结合关系;裸鼠实验观察LUCAT1对肿瘤体内生长的影响。结果:通过生信分析和细胞实验发现LUCAT1和SOX11在KIRC中高表达,miR-141-3p在KIRC中低表达;MTT、伤口愈合和细胞侵袭实验结果显示LUCAT1促进KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭。随后在双荧光素酶实验中显示LUCAT1可以作为miR-141-3p的分子海绵,同时我们还证实miR-141-3p能回复LUCAT1对KIRC细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。进一步研究发现SOX11是miR-141-3p的直接靶标,并且SOX11能回复miR-141-3p对KIRC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。最后我们还通过体内实验确定了LUCAT1能促进KIRC肿瘤的体内生长。结论:LUCAT1在KIRC中上调,并可以通过吸附miR-141-3p调控SOX11促进KIRC的生长和转移。这表明LUCAT1有望成为KIRC的生物标志物和潜在分子治疗靶点。

miR-141-3p靶向MYT1L促进结肠癌细胞的恶性进展

目的:探究微小RNA-141-3p(miR-141-3p)通过靶向作用髓磷脂转录因子1(MYT1L)蛋白对结肠癌细胞迁移、增殖、凋亡的影响。方法:在结肠癌HCT8细胞中转染miR-141-3p模拟物(miR-141-3p mimic),qRT-PCR检测miR-141-3p的mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测侵袭和迁移,Western blot检测MYT1L的蛋白表达水平。生物信息学软件预测MYT1L可能是miR-141-3p的靶基因后用荧光素酶报告基因鉴定。结果:miR-141-3p在结肠癌组织细胞中显著上调且对患者预后有显著影响,在转染了miR-141-3p的HCT8细胞中,细胞的增殖、迁移能力均显著提高,而细胞凋亡显著下降。双荧光素酶报告基因的结果显示miR-141-3p与MYT1L基因可以靶向结合。共转染MYT1L过表达载体和miR-141-3p mimic的细胞中,相对于只转染了MYT1L过表达载体的细胞来说,细胞表型恶化程度显著升高。结论:miR-141-3p通过靶向调控MYT1L的表达促进结肠癌细胞表型的恶化。

miR-141-3p通过调节Keap1-NRF2/ARE信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺纤维化的影响

目的 探讨miR-141-3p对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺纤维化的影响及作用机制。方法 将大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、agomir-NC组、miR-141-3p agomir组,每组10只;除对照组外,其余大鼠采用脂多糖(LPS)滴注法构建ARDS模型;将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN细胞分为NC组、LPS组、miR-NC组、miR-141-3p mimics组、miR-141-3p mimics+pcDNA组、miR-141-3p mimics+NRF2与Kelch样环相关蛋白1(Keap1)组,除NC组外,其余各组建立LPS细胞模型;qPCR检测肺组织和细胞中miR-141-3p、Keap1 mRNA表达;Western blot检测肺组织和细胞上皮型钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙黏附素(N-cadherin)、微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、自噬相关基因Beclin-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Keap1、核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶1(HO-1)表达;HE和Masson染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分和肺纤维化面积评分;试剂盒检测肺组织羟脯氨酸(Hyp);酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎性因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;双萤光素酶报告实验验证miR-141-3p与Keap1靶向关系。结果ARDS大鼠肺组织和细胞中miR-141-3p表达下调,Keap1表达上调(P<0.05);过表达miR-141-3p可降低大鼠肺组织病理损伤和纤维化程度、Hyp含量,上调肺组织和细胞中SOD、E-cadherin、LC3B、Beclin-1、NRF2、HO-1表达,下调IL-1β、TNF-α、MDA、N-cadherin、α-SMA、Col-Ⅰ、Keap1表达(P<0.05);过表达Keap1可逆转过表达miR-141-3p对ARDS大鼠肺泡上皮细胞损伤的改善作用(P<0.05);双萤光素酶报告基因实验证实miR-141-3p与Keap1可能存在靶向调控关系。结论 过表达miR-141-3p可能激活Keap1-NRF2/ARE信号通路,激活自噬,抑制炎症反应、氧化应激和上皮-间充质转化进展,改善ARDS大鼠肺纤维化。

miR-141-3p、PD-L1及巨噬细胞在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

目的 探讨miR-141-3p、PD-L1及M1、M2型巨噬细胞在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)中的表达及其临床意义。方法 选取2021年10月-2022年7月,因EMs在石河子大学第一附属医院妇科行腹腔镜手术或开腹手术的患者30例为EMs组,同期选取非EMs患者因子宫肌瘤行诊断性刮宫或子宫全切术的子宫内膜组织30例为对照组,术后病理证实均为增生期子宫内膜。通过qRT-PCR检测子宫内膜组织中miR-141-3p以及PD-L1的表达;通过免疫组化检测子宫内膜组织中M1型巨噬细胞表面标志物CD86,M2型巨噬细胞表面标志物CD206的表达,并应用Image J软件对免疫组化结果进行平均光密度(Average Optical Density,AOD)的检测。通过Person或Spearman相关检验分析miR-141-3p、PD-L1、CD86及CD206之间相关性。结果 (1) miR-141-3p在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达低于对照组子宫内膜(P=0.000 5;P<0.000 1),且在异位内膜中表达最低。(2) PD-L1在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达高于对照组子宫内膜(P=0.013 7;P=0.000 3),且在异位内膜中表达最高。(3)在EMs异位内膜中miR-141-3p与PD-L1的表达呈负相关(r=-0.648 9,P=0.000 1)。(4) CD86在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达低于对照组子宫内膜(P=0.047 2;P=0.001 0)。(5) CD206在EMs组在位内膜、异位内膜中的表达高于对照组子宫内膜(P=0.043 4;P<0.000 1),且在异位内膜中表达最高。(6) PD-L1与M1型巨噬细胞标志物CD86在EMs异位内膜中的表达呈负相关(r=-0.440 8,P=0.014 8)。(7) PD-L1与M2型巨噬细胞标志物CD206在EMs异位内膜中的表达呈正相关(r=0.598 1,P=0.000 5)。结论 EMs患者中miR-141-3p表达降低,PD-L1表达升高,巨噬细胞从M1型向M2型极化,且随病情进展而改变。

miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blotting验证miR-141-3p和Keap1的靶向调控关系。结果:H/R处理可明显抑制心肌细胞miR-141-3p表达,促进Keap1 mRNA表达,提高ROS和MDA水平,降低SOD和GSH水平,抑制细胞存活,促进细胞凋亡。上调miR-141-3p表达可明显降低ROS和MDA水平,提高SOD和GSH水平,促进细胞存活,抑制细胞凋亡。miR-141-3p可靶向负性调控Keap1表达、上调Nrf2、HO-1蛋白表达对H/R处理心肌细胞发挥保护作用。结论:miR-141-3p靶向抑制Keap1可减轻H/R诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。

lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1分子轴调控胃癌SGC7901细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化

目的:探究lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1分子轴对胃癌(GC)SGC7901细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT的调控作用。方法:收集2014年4月至2017年5月武汉商职医院普外科手术切除的GC组织(非坏死部分)和配对癌旁组织(距肿瘤组织>5 cm)标本38例,同时选取正常胃上皮细胞GES1及GC细胞系SGC7901、HGC27、BGC823、MKN45和MKN28。qPCR实验检测MALAT1、miR-141-3p在GC组织和细胞系中的表达水平,CCK-8和Transwell实验检测敲降MALAT1对SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB实验检测ZEB1、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。双荧光酶素报告基因验证MALAT1、miR-141-3p和ZEB1的靶向关系,CCK-8和Transwell实验检测MALAT1/miR-141-3p/ZEB1分子轴对SGC7901细胞生物学行为的影响。结果:MALAT1在GC组织和细胞系中高表达(P<0.05或P<0.01)。敲降MALAT1显著抑制了SGC7901细胞增殖、迁移、侵袭及EMT(P<0.05或P<0.01);MALAT1与miR-141-3p、miR-141-3p与ZEB1均具有直接靶向关系;进一步研究表明,同时过表达miR-141-3p和MALAT1或ZEB1能够逆转miR-141-3p对SGC7901细胞生物学行为的抑制作用。结论:MALAT1通过靶向下调miR-141-3p对ZEB1的抑制作用,进而促进SGC7901细胞侵袭、迁移及EMT。

miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-141-3p通过靶向PDCD1抑制人胃癌细胞系AGS的迁移与侵袭

目的探讨miR-141-3p对胃癌(GC)细胞迁移与侵袭的影响,并揭示其潜在的分子机制。方法用RT-qPCR分别检测临床组织样本、正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS中miR-141-3p的表达。在AGS细胞中转染miR-141-3p mimic后,用Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭;荧光素酶报告基因实验检测miR-141-3p是否通过靶向程序性细胞死亡蛋白1(PDCD1)发挥其生物学作用;慢病毒-PDCD1感染已过表达miR-141-3p的AGS细胞,随后检测细胞的迁移和侵袭。结果与癌旁组织和GES-1细胞比较,GC组织和AGS细胞中miR-141-3p的表达明显降低(P<0.01);过表达miR-141-3p可显著抑制AGS细胞的迁移和侵袭(P<0.01);miR-141-3p可通过直接结合PDCD1 mRNA的3′-UTR,从而负调节PDCD1的表达;过表达PDCD1能逆转过表达miR-141-3p对AGS细胞的迁移和侵袭的抑制作用(P<0.01)。结论miR-141-3p通过下调靶基因PDCD1来抑制GC细胞的迁移和侵袭。

姜黄素通过调控miR-141-3p表达对肾癌Caki-1细胞增殖和凋亡的作用

目的研究姜黄素通过调控miR-141-3p表达对肾癌Caki-1细胞增殖和凋亡的影响。方法将人肾癌Caki-1细胞分为对照组、miR-141-3p mimics组(转染miR-141-3p mimics)、mimics-NC组(转染mimics阴性对照序列)、20μmol/L姜黄素组(20μmol/L姜黄素处理)、20μmol/L姜黄素+miR-141-3p mimics组(转染miR-141-3p mimics,并用20μmol/L姜黄素处理)。RT-qPCR法检测各组胃癌细胞miR-141-3p mRNA表达,CCK-8试剂盒检测细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞上皮细胞-间质细胞转化(EMT)标志蛋白E钙粘蛋白(E-cadherin)、N型钙粘蛋白(N-cadherin)和间质标志物波形蛋白(Vimentin)表达。结果与对照组比较,miR-141-3p mimics组和20μmol/L姜黄素组细胞增殖率降低(P<0.01),细胞凋亡率、miR-141-3p mRNA表达、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.01);与20μmol/L姜黄素组比较,20μmol/L姜黄素+miR-141-3p mimics组细胞增殖率降低(P<0.01),细胞凋亡率、miR-141-3p mRNA表达、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01),N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.01)。结论姜黄素可上调miR-141-3p mRNA表达,并与高表达miR-141-3p协同作用抑制肾癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与EMT标志蛋白表达相关。

蔡氏内异Ⅲ方调控miR-141-3p作用人子宫内膜异位症内膜间质细胞的机制

目的:观察蔡氏内异Ⅲ方对人子宫内膜异位症(EMS)内膜间质细胞中miR-141-3p表达的影响,探讨蔡氏内异Ⅲ方治疗EMS的作用机制。方法:原代分离培养EMS患者在位、异位以及正常人子宫内膜间质细胞,分为在位内膜组(Eu组)和异位内膜组(Ec组),每组分别设模型组(Model组)、西药组(DNG组)(50 nmol/L地诺孕素)和中药组(TCM组)(4 mg/L蔡式内异Ⅲ方药液),另外设置正常对照组。各组加入相应药物干预后,采用RT-PCR及Western Blot检测各组中miR-141-3p及TGF-β1、Smad2蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。结果:与Model组比较,Eu组和Ec组中miR-141-3p表达水平显著升高(P<0.01),TGF-β1和Smad2蛋白表达水平降低(P<0.05),同时各给药组均能够显著促进细胞凋亡(P<0.01)。结论:蔡氏内异Ⅲ方通过提高EMS内膜间质细胞中miR-141-3p表达水平,抑制下游TGF-β1/Smad2信号通路的活性,促进细胞凋亡,发挥治疗作用。

LncRNA TUG1靶向miR-141-3p影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的检测LncRNA TUG1在甲状腺癌细胞中的表达,初步探讨LncRNA TUG1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法采用qRT-PCR法检测甲状腺癌B-CPAP、TPC-1细胞株中LncRNA TUG1和miR-141-3p的表达水平,应用生物信息学预测lncRNA TUG1和miR-141-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证。将lncRNA TUG1干扰序列转染TPC-1细胞,应用qRT-PCR法检测lncRNA TUG1和miR-141-3p的表达,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力。结果与正常甲状腺上皮细胞相比,BCPAP、TPC-1中LncRNA TUG1表达水平明显升高(P<0.05),miR-141-3p表达水平明显下降(P<0.05),生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA TUG1可以靶向调控miR-141-3p。转染TUG1干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA TUG1的表达,上调miR-141-3p的表达(P<0.05);沉默lncRNA TUG1表达,TPC-1细胞的增殖与侵袭能力下降(P<0.05)。结论沉默lncRNA TUG1可以抑制甲状腺癌细胞TPC-1的增殖和侵袭,其机制可能与上调miR-141-3p表达有关。