武定鸡肝脏miR-143基因及其脂类代谢靶基因表达规律研究

为了探究miR-143基因与脂类代谢靶基因的关系及其在脂类代谢过程中的调控作用以及对武定鸡肝脏组织脂类代谢的调控机制,试验通过靶基因预测软件microRNA.org(http://www.microrna.org)预测miR-143基因与脂类代谢靶基因的结合位点;选取胚胎期第15天和出生后第1,7,14,28,56天各时期的武定鸡、AA鸡各6只,公母各半,屠宰取肝脏组织,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-143基因及与脂类代谢相关靶基因的相对表达量,并进行相关性分析。结果表明:脂类代谢基因ACC、FAS、LPL、C/EBPβ、FABP4/ap2、FAT是miR-143基因的调控靶基因,未发现C/EBPβ基因的结合位点,其他靶基因的结合位点为互补配对的CAUCUC序列。武定鸡肝脏组织中miR-143基因的相对表达量在出生后1~7,14~56天呈上升趋势,出生后7~14天呈下降趋势,第7天相对表达量最高,第14天相对表达量最低;AA鸡miR-143基因相对表达量只有出生后第14,56天时高于武定鸡,其他时期均低于武定鸡。武定鸡ACC、FAT基因在各生长发育期的相对表达量均高于AA鸡;除出生后第7天外,武定鸡FAS基因相对表达量均高于AA鸡;武定鸡LPL基因相对表达量只有在出生后第56天时低于AA鸡;除胚胎期第15天外,武定鸡C/EBPβ基因相对表达量均高于AA鸡;除胚胎期第15天和出生后第56天外,武定鸡FABP4/ap2基因相对表达量均高于AA鸡。武定鸡miR-143基因与ACC、FAS、LPL、FABP4/ap2、C/EBPβ、FAT基因的相关系数分别为-0.200,-0.556,-0.620,-0.360,-0.318,-0.375,呈负相关,与LPL基因的负相关性最强,FAS基因次之;脂类代谢相关的各靶基因之间呈正相关关系,其中FAT基因和FAS基因之间的正相关性最强(r=0.937),ACC基因和FABP4/ap2基因之间的正相关性次之(r=0.932),ACC基因和C/EBPβ基因之间的正相关性位列第3(r=0.923)。说明武定鸡miR-143基因通过负调控主效基因LPL和FAS,以及脂类代谢基因之间的相互作用,来调控肝脏脂类代谢,且miR-143基因与脂类代谢靶基因的相互作用具有发育阶段性特点。

miR-143/145基因簇调控小细胞肺癌耐药性的研究

目的探讨miR-143/145基因簇在调控小细胞肺癌耐药性中的作用。方法首先通过RT-PCR检测小细胞肺癌敏感细胞株(H69)和耐药细胞株(H69AR)中miR-143/145簇的差异表达;然后通过转染miR-143/145簇的模拟体(mimics)或抑制物(antagomir)增加或阻断细胞内miR-143/145的水平,通过CCK8和流式细胞技术观察细胞对化疗药物(如ADM、DDP、VP-16)敏感度的变化以及miR-143/145mimic和antagomir对细胞周期和凋亡的影响。结果 miR-143/145簇在H69AR细胞株中表达较H69明显增高;miR-143/145簇mimics能增加miR-143/145的表达,细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡减少,抗凋亡蛋白BCL2的表达增加,从而引起细胞对化疗药物产生耐药;而miR-143/145簇antagomir作用与mimics相反。结论 miR-143/145簇可能通过减少细胞的凋亡从而引起小细胞肺癌耐药。