多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用研究

目的探讨多囊卵巢综合征患者(polycystic ovary syndrome,PCOS)卵巢颗粒细胞miR-144-3p及其靶基因PTEN的表达及作用。方法选取2020年10月至2022年3月在淮安市妇幼保健院生殖医学科行IVF/ICSI治疗的20例PCOS患者作为研究对象即为PCOS组,选取行IVF/ICSI治疗的输卵管因素或男方因素患者20例作为对照组。收集两组患者颗粒细胞,并分析颗粒细胞miR-144-3p的表达情况。利用Tar-getScan数据库预测miR-144-3p的靶基因,并采用双荧光素酶活性检测验证靶基因。复苏人卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,KGN),转染并建立miR-144-3p模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-144-3p抑制物组、抑制物阴性对照组、si-PTEN和siRNA-NC组。采用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况,RT-PCR及蛋白质印迹技术检测颗粒细胞中miR-144-3p、PTEN mRNA及蛋白的表达情况。结果RT-PCR结果显示P-COS组miR-144-3p表达水平显著低于对照组(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示miR-144-3p mimic组的颗粒细胞凋亡百分比显著低于mimic-NC组(P<0.05),miR-144-3p inhibitor组颗粒细胞凋亡水平显著高于inhibitor-NC组(P<0.05)。生物信息学预测miR-144-3p的靶基因为PTEN,荧光素酶结合实验证实miR-144-3p能特异结合PTEN-3′UTR并下调PTEN基因表达。RT-PCR测定结果显示PCOS组PTEN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05),且与miR-144-3p表达水平呈负相关(r=-0.91,P<0.001)。qRT-PCR及蛋白质印迹检测结果显示与mimic NC组相比,miR-144-3p mimic组中PTEN mRNA及蛋白表达量显著低于mimic NC组(P<0.05)。miR-144-3p inhibitor组PTEN mRNA及蛋白表达量显著高于inhibitor NC组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示si-PTEN组颗粒细胞凋亡水平显著低于siRNA-NC组(P<0.05),而miR-144-3p inhibitor+si-PTEN组的颗粒细胞凋亡比例显著低于miR-144-3p inhibitor组(P<0.05)。结论PCOS患者卵巢颗粒细胞miR-144-3p表达水平显著降低,而PTEN基因表达水平显著增高,进而促进PCOS患者卵巢颗粒细胞凋亡。

miR-144-3p参与高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠的肝细胞自噬

背景:高蛋氨酸饮食可导致Cbs^(+/-)小鼠发生肝损伤,高同型半胱氨酸血症与肝脂肪变性、自身免疫性肝炎、酒精性脂肪肝等多种肝脏相关疾病的发生和进展有关。微小RNA(miRNAs)参与细胞存活、分化和细胞自噬等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-144-3p在高蛋氨酸饮食诱导Cbs^(+/-)小鼠肝细胞自噬中的关键作用。方法:①选取4周龄体质量相近的雄性胱硫醚β-合成酶基因正常(Cbs^(+/+))小鼠和单基因敲除(Cbs^(+/-))小鼠各10只,均饲以高蛋氨酸饮食,12周后处死,留取肝脏组织。②体外培养人源肝细胞(HL-7702),分为对照组(0μmol/L同型半胱氨酸)、同型半胱氨酸组(100μmol/L同型半胱氨酸)、mimic-NC组(转染mimic-NC)、mimic-NC+同型半胱氨酸组(转染mimic-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p mimic组(转染miR-144-3p mimic)、miR-144-3p mimic+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p mimic+100μmol/L同型半胱氨酸)、inhibitor-NC组(转染inhibitor-NC)、inhibitor-NC+同型半胱氨酸组(转染inhibitor-NC+100μmol/L同型半胱氨酸)、miR-144-3p inhibitor组(转染miR-144-3p inhibitor)、miR-144-3p inhibitor+同型半胱氨酸组(转染miR-144-3p inhibitor+100μmol/L同型半胱氨酸)。采用荧光定量PCR检测肝组织和肝细胞中miR-144-3p的表达水平;转染miR-144-3p模拟物或抑制剂后,采用荧光定量PCR和Western blot分别检测miR-144-3p的转染效率及其对LC3B和p62蛋白表达的影响;酶联免疫法检测肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的表达情况;Pearson相关性分析肝细胞miR-144-3p表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶含量的相关性。结果与结论:①与Cbs^(+/+)组比较,Cbs^(+/-)组小鼠肝组织和同型半胱氨酸组肝细胞中miR-144-3p的表达水平降低(P<0.01);②转染miR-144-3p模拟物后,与mimic-NC比较,miR-144-3p mimic组中LC3B-Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平降低,p62蛋白的表达水平升高(P<0.01);转染miR-144-3p inhibitor后,得到相反的结果(P<0.01);③与mimic-NC组相比,miR-144-3p mimic组肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶和门冬氨酸氨基转移酶的含量降低(P<0.01);与inhibitor-NC组比较,得到相反的结果(P<0.01);④肝细胞中miR-144-3p的表达与肝细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8876)和门冬氨酸氨基转移酶(P<0.01,r=-0.8299)的含量呈负相关;⑤结果表明,同型半胱氨酸通过抑制miR-144-3p的表达促进肝细胞的自噬,进而加重肝损伤。

lncRNA DSCAM-AS1通过miR-144-5p/IRS2轴对甲状腺乳头状癌细胞的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)唐氏综合征细胞黏附分子反义1(DSCAM-AS1)通过微小RNA(miR)-144-5p/胰岛素受体底物2(IRS2)轴促进甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生长和侵袭的作用。方法:将PTC细胞株TPC-1随机分为对照组(Control组,完全培养基正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染si-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+inhibitor NC组(si-DSCAM-AS1与inhibitor NC共转染)、si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组(si-DSCAM-AS1与miR-144-5p inhibitor共转染)。RT-qPCR法检测DSCAM-AS1、miR-144-5p和IRS2 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;Western blot检测IRS2蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。结果:与Control组相比,si-DSCAM-AS1组TPC-1细胞DSCAM-AS1表达、吸光度(A450)值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著降低(P<0.05),miR-144-5p表达显著升高(P<0.05)。与si-DSCAM-AS1组相比,si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组A450值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著升高(P<0.05),miR-144-5p表达显著降低(P<0.05)。DSCAM-AS1靶向负调控miR-144-5p表达,miR-144-5p靶向负调控IRS2表达。结论:沉默DSCAM-AS1可能通过上调miR-144-5p来抑制IRS2蛋白的表达,从而抑制PTC细胞生长和侵袭。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

miR-144/451的体外红系发生示踪揭示LINC01569的潜在红系发生调控影响

目的用已构建的miR-144-GFP-H1人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)示踪细胞株,以GFP荧光信号报告miR-144表达描述红系发生的进展程度,探究在红系发生过程中lncRNA的潜在功能并初步验证其功能影响。方法利用已构建的miR-144/451-GFP-H1细胞株(下文简称144-H1)进行体外红细胞诱导培养。以CD71,GPA表面分子描述进入红系发生阶段的细胞亚群。以miR-144的GFP报告基因为关键区分,对GFP阳性(高红系发生倾向)和阴性细胞群(低红系发生倾向)分别进行转录组测序,获取差异性表达的lncRNA。选取具备验证价值的lncRNA条目进行初步功能验证。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术设计对应lncRNA的功能干扰方案并获取对应lncRNA功能敲除的144-H1细胞株。使用该敲除细胞株与非敲除的144-H1细胞株进行红细胞的平行诱导培养,寻找差异节点,初步验证其对在体外发育模型下对红系发生的影响效应。结果1)构建的144-H1细胞株能够在进入体外红细胞诱导阶段后表达GFP荧光蛋白,提示miR-144的启动。2)在CD71,GPA双阳群中,GFP阳性亚群和GFP阴性亚群存在显著的lncRNA表达差异。3)对多个lncRNA条目设计了能够有效干扰其功能的序列区段删除基因编辑方案。验证编辑成功。在敲除细胞株中,lncRNA的一部分序列被直接删除。4)在红细胞诱导培养的平行验证试验中,LINC01569的功能敲除株对比非敲除株表现出明显的流式亚群差异和细胞增殖能力差异:①敲除株的GFP荧光持续高表达;②敲除株CD71-GPA双阳群在红细胞成熟过中比例持续降低;③敲除株未观察到显著的血红蛋白表达,无明显红色;④敲除株细胞增殖能力远低于非敲除株(P<0.05)。结论成功利用144-H1细胞株对lncRNA在红系发育中的潜在功能进行了探究,可设计更精密的体外发育实验来提高lncRNA功能的抓取精度。在差异性表达的lncRNA条目中,LINC01569经初步验证,对红系发生过程存在调控作用。LINC01569的功能缺失严重影响红细胞的正常分化与增殖。LINC01569在红系发生过程中的具体调控机制有待进一步探索与研究。

miR-144-5p靶向WNT5a对山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响

旨在探究miR-144-5p靶向WNT5a对山羊颗粒细胞增殖和凋亡的影响。本研究选用2岁健康雷州母山羊的卵巢颗粒细胞来过表达和抑制表达miR-144-5p及WNT5a,通过荧光定量PCR(real-time qPCR, RT-qPCR)、Western blot、双荧光素酶报告基因、CCK-8等技术来探究miR-144-5p与WNT5a对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。结果表明,miR-144-5p在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著高于小卵泡颗粒细胞(P<0.01),WNT5a在大卵泡颗粒细胞中的表达量极显著低于小卵泡颗粒细胞(P<0.01);CCK-8检测发现,miR-144-5p抑制了GCs增殖,过表达miR-144-5p后,抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达极显著下调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA和蛋白表达极显著上调(P<0.01);Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著降低(P<0.01);另外,miR-144-5p能靶向WNT5a抑制其表达。同时,CCK-8检测结果表明,WNT5a可促进GCs增殖,过表达WNT5a后,抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白水平极显著上调(P<0.01),促凋亡基因BAX的mRNA显著下调(P<0.05)、蛋白水平极显著下调(P<0.01),Wnt/β-Catenin通路CTNNB1 mRNA和β-Catenin蛋白水平极显著提高(P<0.01)。综上所述,在GCs中,miR-144-5p靶向负调控WNT5a的表达,调控Wnt/β-Catenin通路,进而上调BAX/BCL-2的比值来抑制颗粒细胞增殖并促进其凋亡,这可能对山羊的排卵数和产羔数产生一定的影响。

膀胱癌组织中miR-144、肺癌转移相关转录本1及睾丸蛋白聚糖表达及其诊断价值

目的分析膀胱癌组织中miR-144、肺癌转移相关转录本1(MALA T1)及睾丸蛋白聚糖(SPOCK1)表达及其诊断价值。方法2018年1月~2021年1月本院收治的膀胱尿路上皮癌病人96例,膀胱电切或膀胱根治性切除留取膀胱癌病人新鲜肿瘤组织(肿瘤组)及距离肿瘤边缘>2cm癌旁正常组织(癌旁组)标本,各5mg。使用聚合酶链式反应(PCR)检测不同组织中miR-144、MALAT1及SPOCK1相对表达量,分析miR-144、MALAT1及SPOCK1在不同膀胱癌病理特征中表达情况,绘制ROC曲线,检验miR-144、MALAT1、SPOCK1对膀胱癌的诊断价值。96例病人均在本院进行外科手术+术后辅助化疗,通过电话和门诊随访等方式对病人进行随访,随访截止至2022年1月30日,比较不同预后者miR-144、MALAT1及SPOCK1的表达。结果肿瘤组中MALAT1及SPOCK1相对表达量高于癌旁组,而miR-144相对表达量则低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移者miR-144表达低于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ~Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移者MALAT1、SPOCK表达高于Ⅰ~Ⅱ期、中高分化与无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-144、MALAT1及SPOCK1对膀胱癌诊断AUC值分别为0.643、0.557,SPOCK1诊断AUC值为0.717(95%Cl:0.688~0.845),以SPOCK1诊断AUC值最高(P<0.05)。96例病人预后良好85例,预后不良11例。预后不良组miR-144低于预后良好组,MALAT1及SPOCK1高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论膀胱癌组织中miR-144、MALAT1及SPOCK1表达异常,与病人病理特征存在一定联系,或可作为膀胱癌潜在诊断标志物。

人参皂苷Rg1调节miR-144-3p/FPR2/p38信号通路对实验性脑出血大鼠血脑屏障损伤和神经炎症的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1调节miR-144-3p对实验性脑出血大鼠神经炎症和血脑屏障损伤的影响,以及对甲酰基肽受体2(FPR2)/p38通路的调控作用。方法:90只SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量+ago-miR-144-3p组(40 mg/kg人参皂苷Rg1+ago-miR-144-3p),每组18只,除对照组外均通过右侧尾状核注射胶原酶Ⅱ法构建实验性脑出血大鼠模型,按照各组要求腹腔注射给药以及脑内注射给药。对大鼠神经功能损伤进行评分;干湿比重法测定大鼠脑含水量;ELISA检测大鼠脑组织匀浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平;电镜观察脑水肿周围超微结构;伊文思蓝(EB)法测定大鼠血脑屏障通透性;qRT-PCR与Western blot测定miR-144-3p/FPR2/p38通路表达。结果:与对照组相比,脑出血组大鼠血脑屏障损伤加重,大鼠神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达增加(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与脑出血组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组大鼠血脑屏障损伤减轻,神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达降低(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);ago-miR-144-3p可逆转人参皂苷Rg1对大鼠血脑屏障、神经炎症的保护作用(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可能通过调控miR-144-3p/FPR2/p38轴抑制大鼠血脑屏障损伤及神经炎症。

EGFR/ALK野生型晚期NSCLC患者血清miR-499 miR-144-3p变化及对预后的预测价值

目的:分析表皮生长因子受体(EGFR)/间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA(miR)-499、miR-144-3p变化,并评估其对预后的预测价值。方法:收集2018年1月至2020年我院收治的107例EGFR/ALK野生型晚期NSCLC患者临床资料(NSCLC组),另取同期健康体检者107例作为对照组,采用实时荧光RCR技术检测血清miR-499、miR-144-3p表达,比较其在两组中的差异,并评估不同临床病理特征晚期NSCLC患者血清miR-499、miR-144-3p表达的变化;以出院时为随访起点,2023年1月为截止时间,死亡为终点事件,以大于等于平均值作为高表达的标准,分别比较miR-499、miR-144-3p高表达与低表达的晚期NSCLC患者预后生存率。结果:NSCLC组血清miR-499[(0.74±0.18)vs(1.05±0.20)]、miR-144-3p相对表达量[(0.82±0.19)vs(1.22±0.21)]均低于对照组(P<0.05)。晚期NSCLC患者中,Ⅳ期患者血清miR-499[(0.64±0.17)vs(0.86±0.21)]、miR-144-3p相对表达量[(0.71±0.16)vs(0.95±0.22)]低于ⅢB及ⅢC期者(P<0.05),低分化者则低于中高分化者[(0.63±0.16)vs(0.85±0.21),(0.70±0.15)vs(0.94±0.22),P<0.05]。晚期NSCLC患者随访时间为4~56个月,中位随访时间34个月,血清miR-499高表达者生存率明显高于低表达者(P<0.05),血清miR-144-3p高表达者生存率明显高于低表达者(P<0.05)。结论:miR-499、miR-144-3p在EGFR/ALK野生型晚期NSCLC患者血清中呈低表达,Ⅳ期及低分化者表达更低,且表达水平对预后生存率有一定预测价值。

lncRNA UASR1和miR-144在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)UASR1和miR-144在胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法选择2018年3月至2019年3月中国人民解放军联勤保障部队第九四一医院收治的95例胰腺癌患者作为研究组,并选择同期在该院治疗的56例胰腺良性病变患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测病变组织中lncRNA UASR1和miR-144的表达水平,并分析其与胰腺癌患者临床病理特征的关系。采用ROC曲线评估lncRNA UASR1和miR-144的表达水平对胰腺癌的诊断价值。采用Kaplan-Meier法分析lncRNA UASR1和miR-144的表达水平与胰腺癌患者术后生存期的关系。结果研究组组织中miR-144的相对表达量为0.68±0.28,显著低于对照组(1.35±0.36),差异有统计学意义(t=-7.594,P<0.001)。研究组组织中lncRNA UASR1的相对表达量为2.38±0.32,显著高于对照组(1.21±0.57),差异有统计学意义(t=8.326,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,miR-144、lncRNA UASR1单独及联合检测诊断胰腺癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.850、0.831和0.945。胰腺癌组织中lncRNA UASR1的表达水平与淋巴结转移、血管侵犯、TNM分期有关(P均<0.05),miR-144的表达水平与肿瘤直径、淋巴结转移、血管侵犯、分化程度、TNM分期有关(P均<0.05)。lncRNA UASR1高表达组的平均生存期短于lncRNA UASR1低表达组(χ2=12.887,P<0.001),miR-144高表达组的平均生存期长于miR-144低表达组(χ2=8.003,P=0.005)。结论胰腺癌组织中lncRNA UASR1表达上调,miR-144表达下调,两者对胰腺癌的诊断和预后预测具有一定的价值。

过表达miR-144-3p减轻AngⅡ诱导的HUVEC损伤

目的探讨miR-144-3p对AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、侵袭、凋亡和ROS水平的影响。方法将细胞分为对照组(control)、模型组(AngⅡ)、阴性对照组(AngⅡ+转染miR-144-3p NC)和实验组(AngⅡ+转染miR-144-3p mimic)。PCR验证转染效率;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞侵袭;凋亡试剂盒和流式细胞测量术检测细胞凋亡;流式细胞测量术检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与对照组相比,模型组细胞的增殖和侵袭能力显著下降,而凋亡率和细胞内ROS水平显著上升(P<0.05);而实验组细胞上述指标均可得到一定程度的缓解(P<0.05)。结论过表达miR-144-3p能够有效减轻由AngⅡ诱导的HUVEC增殖、侵袭能力,以及降低AngⅡ诱导的HUVEC细胞凋亡率和ROS水平。

miR-144-3p通过调控ABCG2信号通路对膀胱癌细胞的影响

目的探究miR-144-3p通过调控ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette superfamily G member 2,ABCG2)信号通路对膀胱癌细胞影响。方法选取2023年5月黑龙江省医院泌尿科实验室1株人膀胱癌T24细胞株为研究对象,细胞培养后接种6孔板中,将其随机分为A组、B组、C组,每组细胞均设置3个平行样本,每个样本细胞检测均设置3个复孔(每组共计12个样本量)。A组转染miR-144-3p模拟物,B组转染miR-144-3p抑制剂,C组转染无意义序列,另选正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞株为D组,以实时定量联合酶链式反应(quantification real-time polymerase chian reaction,qRT-PCR)法检测4组细胞中miR-144-3p表达情况,以CCK-8法检测4组细胞增殖活力,以Transwell检测细胞迁移数量,检测ABCG2通路蛋白表达情况;以双荧光素酶报告基因实验预测miR-144-3p与ABCG2靶向结合关系。结果转染前,T24细胞中miR-144-3p表达水平较SV-HUC-1细胞低,ABCG2水平较SV-HUC-1细胞高,差异有统计学意义(t=8.145、13.928,P<0.05);转染48 h时,miR-144-3p水平由低至高依次为B组、C组、A组,差异有统计学意义(P<0.05),ABCG2表达水平由低至高依次为A组、C组、B组,差异有统计学意义(P<0.05);转染48 h后,细胞增殖能力(A值)由低至高依次为A组、C组、B组,细胞凋亡率由低至高依次为B组、C组、A组,细胞迁移能力(个数)由低至高依次为A组、C组、B组,ABCG2表达水平由低至高依次为A组、C组、B组,差异有统计学意义(P<0.05);经在线数据库TargetScan预测,测得ABCG23’UTR与miR-144-3p存在结合靶点;共转染48 h时检测,3’-UTR-WT miR-144-3p组荧光素酶活性较3’-UTR-Wut miR-144-3p组低,差异有统计学意义(P<0.05);3’-UTA-WT NC组、3’-UTR-Mut NC组荧光素酶活性相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ABCG23’UTR与miR-144-3p存在结合靶点,miR-144-3p表达上调可抑制ABCG2表达,并抑制细胞迁移、增殖,促进细胞凋亡。

先天性巨结肠患儿30例结肠组织中miR-144-3p的表达及意义

目的探讨miRNA在先天性巨结肠(HSCR)患儿结肠组织中的表达及意义。方法通过qPCR技术检测miR-144-3p在HSCR患儿结肠组织中的表达情况,分析该表达与疾病的关系。通过TargetScan数据库对miR-144-3p进行互作基因预测,对关联基因TFAP 4在结肠组织的表达情况进行测定,且分析与miR-144-3p的关联性,双荧光素酶报告基因系统鉴定miR-144-3p和TFAP4的靶向关系。结果HSCR狭窄段基本无神经节段,移行段有少量神经节段,扩张段可见明显的神经节段。对应的组织样本qPCR检测中,miR-144-3p的相对表达量在狭窄段最低,扩张段最高,且差异有统计学意义。同时,miR-144-3p对巨结肠的ROC曲线AUC高达0.8844,暗示其可作为HSCR的检测指标。双荧光素酶报告基因系统表明miR-144和TFAP4存在靶向关系,且TFAP4的相对表达量在狭窄段最高,扩张段最低。相关性分析发现两者存在负相关(P<0.001)。结论miR-144-3p表达在HSCR患儿结肠组织狭窄段中下调,而TFAP4表达量升高,且两者存在靶向关系,提示miR-144-3p可能通过影响TFAP4转录因子的方式参与HSCR的发生发展。

miR-144在慢性阻塞性肺疾病患者外周血血清和单核细胞中的表达及其临床意义

目的探究miR-144在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者外周血血清和单核细胞中的表达及其临床意义.方法选取2020年3月至2021年6月内江市第二人民医院收治的58例COPD稳定期患者为观察组,另选取同期45例健康体检者为对照组.收集所有患者的一般临床资料.采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测所有患者外周血血清和单核细胞中miR-144的表达水平.分析COPD患者外周血血清及单核细胞中miR-144表达水平与肺功能的关系.Pearson相关性分析COPD患者外周血血清及单核细胞miR-144表达水平与一秒用力呼气容积(forced expiratory volume in first second,FEV1)的相关关系.ROC曲线分析患者外周血血清和单核细胞miR-144水平对COPD的诊断价值.结果与对照组相比,COPD患者外周血血清及单核细胞中miR-144的表达水平均明显升高,其差异具有统计学意义(P<0.05).COPD患者外周血血清及单核细胞中miR-144的表达水平均随着肺功能严重程度的加重而依次升高,其差异具有统计学意义(P<0.05).Pearson相关性分析结果显示,COPD患者外周血血清及单核细胞miR-144表达水平与FEV1均呈负相关关系(r=-0.517,r=-0.463,P<0.05).ROC曲线分析结果显示,外周血血清和单核细胞miR-144水平对COPD诊断价值的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.857、0.849,截断值为1.371、1.890,敏感度为84.50%、84.50%,特异性为80.00%、88.90%.结论COPD患者外周血血清和单核细胞miR-144水平显著上调,且参与调节疾病的发展程度,对发生COPD具有一定的诊断价值.

miR-144-3p相关的研究进展

miRNA是一类由21~25个核苷酸组成的小分子非编码RNA,主要通过靶向mRNA,抑制其转录后翻译或降解mRNA使基因沉默发挥调控作用。也有少部分miRNA能够诱导转录或上调蛋白的表达。miRNA的特点是高稳定性、强特异性、具有简单的化学结构,且无需进行转录后修饰,可反复冻融和长期保存,易于快速检测,尤其在疾病诊断领域,被视作多种疾病的潜在理想生物标志物。miRNA以囊泡转运或蛋白载体机制被细胞输出或输入,介导不同组织间的通讯,通过不同的信号通路,调节远端细胞功能,参与了疾病的过程。LncRNA (长链非编码RNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA,其组织表达谱广泛,物种间序列保守性低,LncRNA多数位于细胞核,作用机制多样,参与表观遗传修饰、转录、调控,而胞质中lncRNA的功能局限于转录后的调节,通过影响mRNA稳定性和蛋白质状态发挥作用。近年来,随着分子生物学技术的不断发展,越来越多的研究发现,miRNA参与了多种疾病的生理、病理过程。本文主要就近几年有关miR-144-3p的研究进展做如下综述,主要内容包括上下游的LncRNA (长链非编码RNA)和可能的信号通路,为疾病的诊断、治疗提供参考意见。

MiR-144-3p调控E2F8对肾透明细胞癌增殖、凋亡的影响

目的研究miR-144-3p对肾透明细胞癌(KIRC)增殖、凋亡的影响并探究其分子机制.方法检测肾小管上皮细胞HK2和KIRC细胞系786-O、ACHN、OS-RC-2中miR-144-3p、E2F8 mRNA和E2F8蛋白的表达差异;检测KIRC组织和癌旁组织中miR-144-3p和E2F8 mRNA的表达差异.采用荧光素酶报告实验验证E2F8 mRNA和miR-144-3p的互作关系.分别在786-O细胞中过表达miR-144-3p和沉默E2F8,采用WB检测增殖、凋亡相关蛋白的表达;同时在786-O细胞中过表达miR-144-3p和过表达E2F8,并检测增殖、凋亡相关蛋白的表达;分别采用CCK8法和流式细胞术检测上述转染细胞的增殖和凋亡.结果与HK2细胞相比,KIRC细胞系786-O、ACHN、OS-RC-2中miR-144-3p表达水平较低(P<0.001),与E2F8表达水平呈负相关;与癌旁组织相比,KIRC组织中miR-144-3p表达水平较低(P<0.001),E2F8表达水平较高(P<0.01).过表达miR-144-3p可以抑制786-O细胞增殖并促进其细胞凋亡,沉默E2F8也可以达到相同性质的效果.过表达E2 F8可以逆转过表达miR-144-3p对786-O细胞增殖和凋亡的影响.荧光素酶报告实验证实miR-144-3p靶向调控基因E2F8.结论miR-144-3p可以通过调控基因E2F8抑制KIRC肿瘤细胞786-O的增殖和促进其细胞凋亡.

miR-144-3p对大鼠脊髓损伤后巨噬细胞炎症反应和功能恢复的影响

目的 探究miR-144-3p对脊髓损伤大鼠的巨噬细胞炎症反应和运动功能恢复的影响。方法 分析脊髓损伤大鼠miRNA表达数据集GSE19890中miR-144的表达情况;在ENCORI网站中预测miR-144-3p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-144-3p与靶基因的结合情况;构建脊髓损伤大鼠模型,采用RT-qPCR和Western blot实验验证损伤区域miR-144-3p和Notch1的变化情况;用miR-144-3p mimics或miR-144-3p NC转染LPS诱导的巨噬细胞或经鞘内注射脊髓损伤的大鼠,探究miR-144-3p对体内外巨噬细胞炎症反应和大鼠运动功能恢复的影响。结果 数据集GSE19890中miR-144在大鼠脊髓损伤7 d时明显下调。Notch1作为miR-144-3p的靶基因被其负调控。miR-144-3p在脊髓损伤大鼠模型损伤7 d时明显下调,而Notch1的表达则明显上调。miR-144-3p能够明显抑制LPS体外诱导的M1型巨噬细胞炎症反应和脊髓损伤导致的体内巨噬细胞炎症反应,并且促进脊髓损伤大鼠的运动功能恢复。结论 miR-144-3p靶向调控Notch1的表达,并且通过抑制巨噬细胞炎症反应来促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。

miR-144-3p对K562细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的:研究mi R-144-3p对慢性髓性白血病急变期K562细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:体外培养K562细胞,通过转染试剂分别将模拟物阴性对照、mi R-144-3p模拟物、抑制物阴性对照、mi R-144-3p抑制物转染入K562细胞。将细胞分为空白对照、模拟物阴性对照、mi R-144-3p模拟物、抑制物阴性对照和mi R-144-3p抑制物共5组。采用CCK-8法检测细胞增殖,使用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果:与空白对照、模拟物阴性对照组比较,mi R-144-3p模拟物组细胞增殖率明显减低(P<0.05),S期细胞明显增加(P<0.05),G1期细胞明显减少(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与空白对照、抑制物阴性对照组比较,mi R-144-3p抑制物组细胞增殖率明显升高(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.05),G1期细胞明显增加(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05)。结论:mi R-144-3p能够抑制K562细胞增殖、促进凋亡,影响细胞周期,将K562细胞阻滞在S期,表明mi R-144-3p参与了慢性髓性白血病急变期细胞周期活动。

miR-144-5p通过靶向ACTG1和STAT1调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-144-5p在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)细胞中的表达趋势及对PTC细胞系增殖、侵袭及迁移能力的影响及相关分子机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人PTC细胞系TPC-1、 BCPAP及人正常甲状腺滤泡细胞系Nthy-ori 3-1中miR-144-5p的表达情况。将miR-144-5p-mimics、miR-144-5p-inhibitor及inhibitor-NC和mimics-NC分别以Lipofectamin^(TM)2000转染至TPC-1细胞。分为4组:阴性对照组(mimics-NC组)和过表达组(mimics-144-5p组)。阴性对照组(inhibitor-NC组)和抑制组(inhibitor-144-5p组)。以CCK-8生长曲线、小室侵袭实验和划痕实验检测4组细胞增殖、侵袭和迁移能力。ENCORI数据库验证miR-144-5p在TCGA中的表达趋势。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为Top10的基因。GEPIA数据库检测ACTG1和STAT1在TCGA数据库中的表达趋势。HPA数据库验证ACTG1和STAT1蛋白表达水平。qRT-PCR和TaretScan在线数据库验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间的调控关系。结果:PTC细胞系中miR-144-5p表达趋势明显低于Nthy-ori 3-1人正常甲状腺滤泡上皮细胞。上调miR-144-5p后TPC-1细胞的增殖活性、侵袭和迁移能力明显下降,而抑制miR-144-5p则起到相反的作用。在线数据库预测miR-144-5p下游靶基因为584个。通过STING得到靶基因蛋白互作网络图。通过Cytascap插件CytoHubba得Degree值为Top10的基因。在线数据库ENCORI验证ACTG1和STAT1可能是miR-144-5p的下游靶基因。qRT-PCR验证miR-144-5p与ACTG1和STAT1之间存在负调控关系。结论:miR-144-5p在PTC细胞中低表达,过表达或敲低miR-144-5p可能是通过调控ACTG1和STAT1影响PTC细胞的增殖、侵袭及迁移。

miR-144-3p靶向E2F8抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭并阻滞细胞周期

为了探究miR-144-3p在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)中的作用机制,本研究基于多个数据库对miR-144-3p和其下游靶基因在肺腺癌组织中的表达水平进行了预测;通过生物信息学方法和文献调研,确定了E2F转录因子8(E2F transcription factor 8,E2F8)为miR-144-3p的下游靶基因,并通过双荧光素酶实验对miR-144-3p和E2F8的靶向结合关系进行了验证;然后,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)、免疫印迹分析(Western-blot)、细胞毒性检测(Cell Counting Kit-8 assay,CCK-8 assay)、克隆形成、侵袭能力测定和流式细胞术等实验,对miR-144-3p和E2F8在肺腺癌中的调控机制进行了探究。结果显示,miR-144-3p在肺腺癌组织和细胞中呈显著低表达,而E2F8则显著高表达,两者存在靶向关系;过表达miR-144-3p或敲低E2F8能抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭并阻滞细胞周期于G1期。上述结果表明,miR-144-3p通过负调控E2F8抑制肺腺癌细胞的增殖和侵袭能力,并阻滞细胞周期于G1期,从而抑制肺腺癌细胞的恶性进展。这为肺癌新检测、治疗手段的开发提供了参考依据。