circ-0030042通过miR-145/PTEN轴调控对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨circ-0030042与人第10号染色体缺失的磷酸酶(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的相互作用关系,并分析其在增生性瘢痕(Hypertrophic scar,HS)患者中对成纤维细胞增殖与迁移的影响及作用机制。方法:通过circRNA序列和定量聚合酶链反应(PCR技术)检测正常皮肤成纤维细胞(NSFBs)和增生性瘢痕患者成纤维细胞(HSFBs)中circ-0030042的表达。用CCK8检测法检测转染48 h后的HSFBs细胞增殖情况。利用stubRFP-sensGFP-LC3基因转染、流式细胞仪及电子显微镜观察circ-0030042对miR-145/PTEN轴调控VEGF水平的表达。利用生物信息学分析、RNA免疫沉淀、免疫荧光检测等方法,揭示circ-0030042介导HS患者成纤维细胞增殖与迁移的作用机制。结果:circ-0030042在增生性瘢痕中显著上调,过表达时作为VEGF海绵抑制miR-145诱导的成纤维细胞,维持体内稳定性。此外,circ-0030042通过海绵化VEGF水平并阻断其miR-145捕获转录因子(FOXO1)mRNA来影响自噬,而circ-0030042诱导FOXO1的抑制被VEGF水平过表达或circ-0030042结合减少所抵消。过表达circ-0030042对成纤维细胞的增殖抑制与VEGF表达的抑制作用被过表达miR-145部分抵消。结论:干扰circ-0030042通过靶向下调miR-145/PTEN轴进而抑制HSFBs细胞的增殖与迁移,进一步诱导恶性细胞凋亡。

lncRNA MEG3通过调控miR-543/PTEN分子轴抑制胰腺癌细胞增殖及转移的机制

目的探讨lncRNA MEG3(MEG3)通过调控miR-543/PTEN分子轴介导胰腺癌细胞增殖和转移的分子机制。方法采用qRT-PCR检测胰腺癌组织及细胞系中MEG3的表达水平;采用CCK-8、Transwell和Westernblot探讨过表达MEG3对PANC-1细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响;采用双荧光素酶报告基因检测MEG3、miR-543及PTEN的靶向调控关系。进一步探讨MEG3通过调控mi R-543/PTEN分子轴对PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT的作用机制。结果 MEG3在胰腺癌组织和细胞系中低表达。同时,过表达MEG3抑制PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT。双荧光素酶报告基因和体外实验证实MEG3通过靶向下调miR-543对PTEN的抑制作用,进而抑制PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT。结论 MEG3通过调控miR-543/PTEN分子轴抑制PANC-1细胞增殖、侵袭和EMT,并可能为胰腺癌临床早期诊断和治疗提供潜在的分子靶点。

柚皮素对溃疡性结肠炎小鼠肠组织中miR-30a-3pPTEN信号轴表达的影响

目的 探讨柚皮素对溃疡性结肠炎小鼠肠组织中miR-30a-3p/PTEN信号轴表达的影响。方法 选取60只健康雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法均分为阴性对照组、模型组、阳性对照组、柚皮素低剂量组、柚皮素中剂量组和柚皮素高剂量组,每组各10只。用DSS灌胃法制备BALB/c小鼠溃疡性结肠炎模型,阴性对照组和模型组灌胃给予生理盐水(0.2 mL/10g),阳性对照组灌胃给予泼尼松龙(2 mg/kg),柚皮素低、中、高剂量组分别灌胃给予柚皮素(剂量依次为50、100、200 mg/kg),持续给予7 d。计算疾病活动度评分(DAI),对BALB/c小鼠肠组织进行形态学检查,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肠组织中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法及Elisa法分别检测肠组织miR-30a-3p、PTEN、PI3K、Akt和Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果 模型组小鼠结肠有部分肠壁凹陷,形成溃疡,周围组织水肿明显,部分细胞坏死、脱落,炎性细胞浸润;与模型组比较,阳性对照组和各柚皮素剂量组小鼠结肠组织病理损伤明显改善。与阴性对照组比较,其余各组小鼠肠组织DAI、IL-4、TNF-α、PTEN和Caspase-3 mRNA及蛋白升高,IL-10、miR-30a-3p、PI3K和Akt mRNA及蛋白降低(均P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和各柚皮素剂量组小鼠肠组织DAI、IL-4、TNF-α、PTEN和Caspase-3 mRNA及蛋白降低,IL-10、miR-30a-3p、PI3K和Akt mRNA及蛋白升高,各柚皮素剂量组效应呈剂量反应关系(均P<0.05);柚皮素高剂量组与阳性对照组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 柚皮素可以降低溃疡性结肠炎小鼠的结肠炎性,减轻病理损伤,其机制可能与调控miR-30a-3p/PTEN信号轴有关。

circRNA_001569通过miR-145/HBXIP轴影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探讨circRNA001569通过miR-145/HBXIP轴在乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移中发挥的作用。方法:收集2016年1月至2019年1月期间衡水市人民医院收治的30例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织。qPCR检测circRNA001569在乳腺癌组织、癌旁组织以及细胞系中的表达。生物信息学工具预测miR-145的靶基因,RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)和双荧光素酶报告基因实验检测miR-145或靶基因之间的相互作用;向乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞中转染si-circRNA001569、miR-145 mimics或miR-145 inhibitor,建立基因过表达或沉默的细胞模型,qPCR和Western blotting分别检测转染对相关基因和蛋白表达的影响,CCK-8法、Transwell实验检测转染对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中,circRNA001569和HBXIP均呈高表达、miR-145呈低表达。RIP分析和双荧光素酶实验证实了miR-145与circRNA001569和HBXIP之间的靶向关系;circRNA001569或HBXIP过表达促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移(均P<0.01),而miR-145过表达起相反的作用(均P<0.01)。结论:circRNA001569可能通过下调miR-145的表达、上调HBXIP的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

CircPTPRA通过miR-145-5p/KLF5轴调节ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡的机制研究

该文旨在探讨CircPTPRA通过mi R-145-5p/KLF5轴调节氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的机制。将血管内皮细胞(EVC-304)分为control组、ox-LDL组、oxLDL+si-NC组、ox-LDL+si-CircPTPRA组、ox-LDL+miR-NC组、ox-LDL+miR-145-5pmimic组、ox-LDL+si-CircPTPRA+inhibitor NC组、ox-LDL+si-CircPTPRA+miR-145-5p inhibitor组。qRT-PCR检测各组细胞中CircPTPRA、miR-145-5p和KLF5 mRNA的表达情况;MTT法、EdU染色检测细胞增殖情况;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA、SOD、GSH-Px水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白质免疫印记法检测Ki-67、cleaved caspase-3、KLF5蛋白表达量;荧光素酶实验验证miR-145-5p与CircPTPRA、KLF5的关系。与control组相比,ox-LDL组EVC-304细胞CircPTPRA和KLF5mRNA表达量,TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平,细胞凋亡率,cleaved caspase-3和KLF5蛋白水平显著升高,miR-145-5p表达量,细胞D490值(24、48 h)、增殖率,GSH-Px、SOD水平,Ki-67蛋白表达量显著降低。敲除CircPTPRA或过表达miR-145-5p都可降低细胞炎症反应程度、氧化应激水平和细胞凋亡水平。与ox-LDL+si-CircPTPRA+inhibitor NC组相比,敲低miR-145-5p可促进细胞炎症反应、氧化应激和细胞凋亡。干扰CircPTPRA可调控miR-145-5p/KLF5轴,进而减少ox-LDL诱导的血管内皮细胞凋亡。