miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTPBP2基因靶向调控的研究

目的探讨miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTP结合蛋白2(GTPBP2)的调控作用。方法选择2022年1月至12月在新乡医学院附属商丘市第一人民医院行结直肠癌根治性切除术的44例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织。选择人正常结直肠黏膜细胞FHC、结直肠癌细胞HCT116进行基础实验。采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测癌组织、癌旁组织及细胞的miR-145-5p和GTPBP2 mRNA的表达水平。采用Western blot法检测细胞GTPBP2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与GTPBP2基因的靶向关系。分析结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与患者临床病理特征的关联性。结果与癌旁组织相比,癌组织中miR-145-5p表达水平显著降低(t=8.189,P<0.001),GTPBP2 mRNA表达水平显著升高(t=11.230,P<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与GTPBP2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.503,P<0.001)。miR-145-5p表达水平与结直肠癌远处转移、淋巴结转移以及TNM分期存在显著关联(P<0.05),但与患者性别、年龄、病灶部位、临床T分期、肿瘤直径的关联性不显著(P>0.05)。与FHC细胞相比,HCT116细胞miR-145-5p表达水平显著降低(P<0.001),GTPBP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.001)。过表达miR-145-5p可下调HCT116细胞GTPBP2 mRNA和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-145-5p和GTPBP2基因之间存在靶向关系。结论miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达,并与远处转移、淋巴结转移和TNM分期存在显著关联,其可能通过靶向调控GTPBP2表达而影响结直肠癌的发生、发展。

血浆miR-145在结直肠癌中的表达及临床意义

目的研究miR145在结直肠癌患者和健康者血浆中的表达差异，并探讨其与临床特征之间的关系。方法收集53例初治结直肠癌患者和26例健康者外周血浆，提取总RNA，用反转录及real—timePCR检测miR145的表达情况，分析其与临床特征之间的关系，评估其对结直肠癌的诊断效能。结果miR145在结直肠癌患者血浆中的表达较健康者显著降低（P〈001），miR145的AUC为0859，鉴别结直肠癌患者的敏感性868％、特异性885％，但miR145的表达水平与临床特征（性别、年龄、肿瘤位置、淋巴结状态、TNM分期、局部浸润深度及CEA水平）之间均无相关性（均P〉0．05）。结论血浆miR145有望作为结直肠癌的新型标记物，但可能只参与了结直肠癌发生的起始过程。

miR-145-5p通过靶向RAD18调控结直肠癌细胞的增殖与NK细胞的细胞毒作用

目的:探索RAD18影响结直肠癌细胞增殖及调节NK细胞对结直肠细胞的杀伤作用及其可能的机制。方法:采用生物信息学技术分析结直肠癌组织中RAD18和miR-145-5p的表达及两者之间的调控关系、分析RAD18富集通路。采用qPCR法验证RAD18和miR-145-5p在结直肠癌细胞中的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与RAD18的调控关系。按转染物的不同将SW480、HCT-15细胞分为将si-RAD18组、si-NC组,另向SW480细胞分别转染inhibitor-NC+si-NC、miR-145-5p inhibitor+si-NC或miR-145-5p inhibitor+si-RAD18,采用CCK-8法、克隆形成实验分别检测敲降miR-145-5p和/或RAD18对细胞增殖、克隆形成的影响;将各组细胞分别与经IL-2激活的NK92细胞共培养,采用乳酸脱氢酶释放法、ELISA和免疫荧光染色法分别检测NK细胞的细胞毒性、细胞因子分泌及细胞表面穿孔素和颗粒酶B表达的影响。结果:RAD18在结直肠癌组织和细胞中呈高表达(均P<0.01)。敲降RAD18可以抑制结直肠癌细胞增殖能力(P<0.05)和促进NK细胞活力、细胞毒性、IFN-γ、TNF-α、GM-CSF分泌及穿孔素和颗粒酶B的表达(均P<0.05)。双荧光素酶报告实验验证了RAD18-3’UTR与miR-145-5p的结合关系,miR-145-5p在结直肠癌组织和细胞中低表达(P<0.05或P<0.01)。miR-145-5p可以靶向下调RAD18的表达(P<0.05),过表达RAD18可以逆转miR-145-5p过表达对NK细胞杀伤效应的促进作用(均P<0.05)。结论:miR-145-5p可靶向下调RAD18的表达,miR-145-5p/RAD18轴能够影响结直肠癌细胞的增殖和NK细胞对其的细胞毒作用。

LncRNA KCNQ1OT1调节miR-145/PAK4轴对结直肠癌SW480细胞恶性发展的影响

目的:探究LncRNA KCNQ1OT1在结直肠癌SW480细胞中的作用及其潜在的分子机制。方法:miRanda与TargetScan分别分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-145的作用靶点。通过双荧光素酶报告基因实验验证相关的分子间靶标关系。qRT-PCR实验分析KCNQ1OT1、miR-145和PAK4在结直肠癌组织、癌旁组织、SW480细胞和CCC-HIE-2细胞中的基因表达量。将SW480细胞分为siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组、PAK4 siRNA组、inhibitor NC组、miR-145 inhibitor组、pcDNA-3.1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、pcDNA-3.1(+)+miR-145 mimics组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-145 mimics组,分别敲低KCNQ1OT1、miR-145和PAK4表达,MTT实验分析细胞活力,细胞克隆形成实验分析细胞克隆数目,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测SW480细胞EMT能力。结果:与癌旁组织相比(1.37±0.27),结直肠癌组织中LncRNA KCNQ1OT1表达上调(2.32±0.89)(t=23.84,P<0.01);与癌旁组织相比(1.21±0.09),结直肠癌组织中PAK4表达上调(2.03±0.54)(t=20.75,P<0.01);与癌旁组织相比(1.26±0.35),结直肠癌组织中miR-145表达显著下调(0.45±0.13)(t=18.76,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.05±0.21),SW480细胞中LncRNA KCNQ1OT1表达上调(2.09±0.27)(t=18.79,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.18±0.62),SW480细胞中PAK4表达上调(2.58±0.82)(t=22.17,P<0.01);与CCC-HIE-2细胞相比(1.46±0.28),SW480细胞中miR-145表达显著下调(0.58±0.23)(t=17.86,P<0.01)。LncRNA KCNQ1OT1靶向miR-145,miR-145靶向PAK4。KCNQ1OT1或PAK4表达降低后,SW480细胞活力,克隆数目与EMT能力显著降低,上调了细胞凋亡率;上调KCNQ1OT1靶向miR-145促进了SW480细胞增殖和EMT,下调了细胞凋亡率。结论:下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-145/PAK4轴抑制了SW480细胞增殖和EMT,促进了癌细胞凋亡。

血浆miR-1183在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨miR-1183在结直肠癌组织和血浆中的表达及临床意义。方法实时荧光定量PCR检测16对结直肠癌组织和癌旁组织样本及68例结直肠癌患者、15例上皮内瘤变患者和25例健康体检者血浆样本中miR-1183的表达水平;统计学方法分析血浆miR-1183的表达与临床病理特征的相关性。结果 miR-1183的表达水平在结直肠癌组织中高于癌旁组织(P=0.002 5),在结直肠癌患者和瘤变者血浆中均高于健康者,且在结直肠癌患者血浆中高于瘤变者(均P <0.001)。结直肠癌患者血浆miR-1183表达量与临床分期、淋巴结转移、远处转移、CEA表达显著相关(均P <0.05)。血浆miR-1183作为诊断标记物,鉴别结直肠癌的曲线下面积(AUC)为0.89(95%CI:0.823 1~0.956 9,P <0.000 1),鉴别瘤变的AUC为0.845 3(95%CI:0.713 4~0.977 3,P=0.000 3)。血浆miR-1183高表达的患者总生存期明显短于低表达者(P=0.031 0),血浆miR-1183表达水平可作为结直肠癌患者预后判断的独立影响因素(P <0.05)。结论 miR-1183高表达与结直肠癌发生发展密切相关,其血浆表达水平有望成为结直肠癌辅助诊断及预后判断指标。

实时荧光定量PCR检测结直肠癌与癌旁正常组织中miR-145的表达

目的:比较结直肠癌组织与正常癌旁组织中microRNA-145(miR-145)的表达变化。方法:收集30例手术切除的结直肠癌组织和远离癌组织的正常结直肠黏膜组织。提取总RNA,microRNA的引物反转录后,用miR-145特异性引物做荧光定量PCR反应。结果:荧光定量PCR显示结直肠癌组织miR-145的表达量明显降低,癌组织中的表达量为正常癌旁组织的0.353倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:结直肠癌组织中miR-145的表达低于正常组织,在结直肠癌中发挥抑癌基因的作用。

血浆miR-1290在结直肠癌中的表达及临床意义

目的:研究miR-1290在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者及健康体检者血浆中的表达差异,并探讨其与临床特征之间的关系.方法:采用实时荧光定量PCR检测检测219例CRC患者及年龄、性别相匹配的45例健康体检者血浆中miR-1290的表达情况,分析其与临床特点之间的关系.结果:在健康体检者与CRC患者两组中,CRC组血浆中miR-1290表达量增高,有统计学意义(P<0.05);以年龄分组(≥60岁,<60岁),高龄组人群中血浆miR-1290的表达水平较低龄组增高,有统计学意义(P<0.05);以性别(男、女)分组,血浆miR-1290的表达水平变化无统计学意义(P>0.05).结论:miR-1290在CRC患者血浆中表达上调,其高表达与CRC的分期相关,有望成为CRC诊断及治疗的指标之一.

B7-H4、miR-145和β-连环素在结直肠癌组织中的表达及相关性研究

目的研究T细胞共刺激分子B7(T cells co-stimulate the molecule B7,B7-H4)、microRNA-145(miR-145)、β-连环素在结直肠癌组织中的表达及相关性。方法选取2019年1月至2020年12月手术后结直肠癌组织标本和癌旁组织标本各48例,对2组组织中B7-H4、miR-145、β-连环素表达进行检测,并按照WHO(1999)大肠肿瘤组织学分型标准进行划分,分析B7-H4、miR-145、β-连环素与不同分化之间的关系;根据国际抗癌联盟(UICC)1997年修订的大肠癌Dukes分期标准进行划分,分析B7-H4、miR-145、β-连环素与不同分期之间的关系,采用Pearson分析B7-H4、miR-145、β-连环素之间的相关性。采用免疫组化染色对B7-H4、miR-145、β-连环素表达进行检测。结果与癌旁正常组织比较,结直肠癌组B7-H4、β-连环素表达显著升高,miR-145表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与无淋巴结转移比较,有淋巴结转移B7-H4、β-连环素表达显著升高,miR-145表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与高分化比较,中分化、低分化B7-H4、β-连环素表达显著升高,miR-145表达显著降低(P<0.05);与中分化比较,低分化B7-H4、β-连环素表达显著升高,miR-145表达显著降低(P<0.05);与Ⅰ期比较,Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期B7-H4、β-连环素表达显著升高,miR-145表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与Ⅱ期比较,Ⅲ~Ⅳ期B7-H4、β-连环素表达显著升高,miR-145表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。B7-H4、miR-145、β-连环素之间进行相关性分析,B7-H4、miR-145之间均呈负相关(r=-0.481,P=0.001);miR-145、β-连环素之间均呈负相关(r=-0.672,P=0.001);B7-H4、β-连环素之间均呈正相关(r=0.609,P=0.001)。结论B7-H4、β-连环素在结肠癌组织中高表达,miR-145低表达,与癌细胞的分化程度、分期密切相关,三项联合检测可成为检测结直肠癌的有效指标。

结直肠癌中miR-145和桩蛋白Paxillin的表达及其临床意义

探讨miR-145和桩蛋白(Paxillin)在结直肠癌组织表达及临床意义。方法 采用实时定量PCR检测人结直肠癌组织中miR-145表达水平,采用蛋白免疫印迹检测结直肠癌组织中桩蛋白的表达,分析结直肠癌组织与癌旁组织中miR-145 和桩蛋白表达情况,及其与各临床病理特征的相关性。结果 与癌旁组织相比,结直肠癌组织中 miR-145 的表达显著降低 (P<0. 05),而桩蛋白的表达水平显著增加 (P<0. 05),miR-145和桩蛋白在结直肠癌组织中的表达与有无淋巴结转移、TNM分期和肿瘤浸润深度显著相关( P <0.05 ),而与病人性别、年龄和肿瘤组织学分级无关( P >0.05)。结论 在结直肠癌组织中,miR-145低表达,桩蛋白呈高表达,且桩蛋白的表达与miR-145的表达呈负相关。表明mir-145与Paxillin在结直肠癌中起着关键作用,miR-145 可能通过调控Paxillin表达而在结直肠癌的发生发展及病情演变过程中起作用,为结直肠癌病人的诊疗和管理提供参考。

miR-145在结直肠癌中的表达及临床病理意义

目的进一步明确miR-145在结直肠癌中的表达变化并分析其和临床病理指标之间的关系。方法采用RT—PCR方法分析miR-145在98例结直肠癌肿瘤和对应非肿瘤黏膜之间的表达变化，并分析其和患者年龄、性别、肿瘤分期、脉管浸润等临床病理指标之间的关系。结果miR-145在结直肠癌中表达下调，是对应的非肿瘤黏膜的0．42倍（P：0．001）。按照肿瘤部位分别分析，miR-145在结肠癌的表达是对照黏膜的0．17倍（P=0．001），miR-145在直肠癌的表达是对照黏膜的0．50倍（P=0．012）。miR-145表达下调同肿瘤部位相关，结肠癌中的表达低于直肠癌（P=0．030），和患者性别、年龄、TNM分期、脉管浸润等指标无相关性。结论miR-145在结直肠癌中表达降低，且在结肠癌中降低较直肠癌中更加明显。提示其参与了结直肠癌的发生。可作为肿瘤诊断的潜在标志物之一，值得进一步深入研究。

薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究薯蓣皂甙元对结直肠癌细胞的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人结直肠癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,对数期生长的SW480细胞分组进行转染和慢病毒感染;RT-PCR检测SW480细胞中miR-145-5p表达、KLF5和HIF-1αmRNA表达;Western blotting检测细胞中KLF5和HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验检测miR-145-5p对KLF5表达的调控作用。结果与正常组相比,癌细胞组中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P<0.05),miR-145-5p表达显著下调(P<0.05);与常氧组相比,缺氧组细胞中KLF5、HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P<0.05);薯蓣皂甙元(10、20、40、80、160μmol/L)可抑制SW480细胞活力(P<0.05);与对照组相比,薯蓣皂甙元组SW480细胞中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达、细胞克隆数、迁移和侵袭细胞数均显著下调(P<0.05),上调KLF5可逆转薯蓣皂甙元对SW480细胞的作用,上调HIF-1α的表达(P<0.05);miR-145-5p靶向调控KLF5;与对照组相比,薯蓣皂甙元组miR-145-5p表达显著上调(P<0.05),KLF5蛋白表达下调(P<0.05);与薯蓣皂甙元组相比,薯蓣皂甙元组+miR-145-5p抑制物组miR-145-5p表达显著下调(P<0.05),KLF5蛋白表达上调(P<0.05)。结论薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。

干扰长链非编码RNAMALAT1对结肠癌SW480细胞生长、侵袭和裸鼠成瘤的影响

目的探讨干扰肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对结肠癌SW480细胞生长、侵袭及裸鼠成瘤的影响及其作用机制。方法构建shRNA-MALAT1质粒载体,并与miR-145 inhibitor单独或联合转染人结肠癌SW480细胞,以转染空载体的细胞作为Control组。采用双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1与miR-145靶向关系;qRT-PCR检测转染效率;分别使用Brdu法、Transwell实验检测SW480细胞增殖、侵袭;Western blot及免疫荧光检测细胞侵袭相关蛋白表达。取10只裸鼠,分别于皮下注射转染空载体(Control组)和shRNA-MALAT1(shRNA-MALAT1组)的SW480细胞构建结直肠癌移植瘤模型,测量肿瘤体积变化并于30 d后取瘤,采用免疫组化法检测肿瘤组织中Ki67、VEGF表达。结果共转染miR-145 mimic和野生型MALAT1报告基因载体后,SW480细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与Control组比较,shRNA-MALAT1组Brdu阳性细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin、Vimentin、JAK2、p-STAT3/STAT3均显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05);miR-145 inhibitor组Brdu阳性细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin、Vimentin、JAK2、p-STAT3/STAT3均显著增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-145 inhibitor组比较,shRNA-MALAT1+miR-145 inhibitor组Brdu阳性细胞数、侵袭细胞数、N-cadherin、Vimentin、JAK2、p-STAT3/STAT3均显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05)。体内实验中,与Control组比较,shRNA-MALAT1组裸鼠成瘤体积显著降低(P<0.05),肿瘤组织中Ki67、VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论敲低MALAT1可通过负调控miR-145抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、侵袭及体内成瘤能力。

microRNA与结直肠癌肿瘤发生的关系

目的:探讨miR-145表达水平与结直肠癌肿瘤发生的关系。方法:收集73例癌旁正常结直肠组织及73例手术切除的结直肠癌组织作为研究标本,分别将其作为对照组和观察组,应用荧光定量PCR法检测并比较两组标本中miR-145的表达水平。结果:观察组组织中miR-145表达水平明显低于对照组组织,且表达水平在不同肿瘤分化及是否有远处转移或浸润邻近器官患者组织中存在明显差异(P<0.05)。结论:miR-145在结直肠癌组织中呈低表达,且其表达水平与肿瘤细胞分化程度和是否出现远处转移或呈现浸润生长有关,可能具有抑癌因子作用。

miR-145通过靶向抑制ZEB2的表达影响结肠癌细胞增殖和侵袭能力

目的 分析miR-145在结直肠癌组织中的表达,探讨高表达miR-145对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能机制。方法 采用qRT-PCR检测miR-145在结直肠癌组织中的表达。将miR-145 mimics及其对照序列转染结肠癌HCT116细胞,采用MTT法检测各组HCT116细胞增殖能力,Transwell实验检测各组HCT116细胞侵袭能力。通过靶基因预测网站Targetscan7.2预测ZEB2是否为miR-145的靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证,Western blot检测各组HCT116细胞中ZEB2蛋白表达。结果 qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,结直肠组织miR-145低表达(P<0.05)。转染miR-145模拟物后,miR-145表达升高,ZEB2蛋白的表达下降(P<0.05),HCT116细胞的增殖能力和侵袭能力下降(P<0.05)。TargetScan7.2网站分析及双荧光素酶实验证实ZEB2为miR-145的靶基因。结论 miR-145在结直肠癌组织中的表达下降,高表达miR-145可以抑制结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与下调ZEB2的表达有关。