miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

孕妇外周血miR-152 miR-210与子痫前期病情程度及妊娠结局的相关性研究

目的:探究孕妇外周血微小RNA-152(miR-152)、miR-210与子痫前期(PE)病情程度及妊娠结局的相关性。方法:选取2018年7月至2022年5月我院200例PE患者,根据病情严重程度分为轻度组(轻度PE患者,n=114)和重度组(重度PE患者,n=86),另选同期、同年龄段健康孕妇作为对照组(n=100)。比较三组血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]、24h尿蛋白定量(24h Upro)、钙离子(Ca^(+))、外周血miR-152、miR-210水平,分析外周血miR-152、miR-210水平与PE病情程度、血压、24h Upro及Ca^(+)相关性。PE患者随访至妊娠结束,比较不同妊娠结局PE患者临床资料、外周血miR-152、miR-210水平,通过Lasso回归和Logistic回归分析预测因素与不良妊娠结局的关联性,通过受试者工作特征曲线(ROC)、临床决策曲线(DCA)评价外周血miR-152、miR-210对预测PE患者发生不良妊娠结局的价值及临床效用。结果:重度组、轻度组、对照组SBP、DBP、24h Upro、外周血miR-152、miR-210水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);外周血miR-152、miR-210水平与PE病情程度、血压、24h Upro呈正相关(P<0.05),与Ca^(+)水平呈负相关(P<0.05);发生不良妊娠结局年龄、流产史、病情程度、SBP、DBP、24h Upro、Ca^(+)、外周血miR-152、miR-210水平与未发生不良妊娠结局患者比较,差异有统计学意义(P<0.05);Lasso回归选出5个预测变量为病情程度、SBP、24h Upro、外周血miR-152、miR-210水平;Logistic回归显示,外周血miR-152、miR-210水平是PE患者发生不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05);ROC、DCA结果显示,外周血miR-152、miR-210联合预测PE患者发生不良妊娠结局具有良好的预测价值和临床效用。结论:外周血miR-152、miR-210在PE患者中表达上调,且与病情程度、妊娠结局显著相关,其联合预测患者发生不良妊娠结局具有一定参考价值和临床效用。

miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血大鼠神经元铁死亡

目的:探讨miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进脑出血(ICH)大鼠神经元铁死亡的机制。方法:使用大鼠神经元细胞为研究对象,采用氧合血红蛋白(oxyHb)刺激神经元细胞构建ICH体外细胞模型,分别将miR-152-3p inhibitor和(或)PIK3CA抑制剂分别处理细胞,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,RT-qPCR、Western blot检测相关基因和蛋白表达情况;并用细胞免疫荧光观察Nrf2蛋白的入核率;用双荧光素酶靶标实验验证miR-152-3p与PIK3CA的关系。结果:将miR-152-3p inhibitor转染的细胞构建ICH细胞模型后,细胞凋亡率明显降低(P<0.01);SLC7A11、GPx4、PIK3CA、Nrf2蛋白表达水平以及p-AKT/AKT比率显著升高而GSK-3β蛋白表达水平显著降低(P<0.01);同时,Nrf2蛋白入核量也显著升高(P<0.01);而此作用在使用PIK3CA抑制剂干预后,miR-152-3p inhibitor的改善效果消失;荧光素酶靶标实验证实,miR-152-3p可靶向调控PIK3CA。结论:miR-152-3p通过AKT/GSK-3β/Nrf2信号通路促进ICH大鼠神经元铁死亡。

miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及分子机制研究

目的:探究miR-152-3p对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的作用及其分子机制。方法:采用顺铂处理体外培养的A549细胞,检测细胞内miR-152-3p、SOS1表达水平的变化;采用荧光素酶活性检测法分析miR-152-3p与SOS1的调控关系。A549细胞转染miR-152-3p慢病毒过表达载体、SOS1慢病毒过表达载体或慢病毒空载体,采用顺铂处理转染的细胞,比较miR-152-3p过表达或SOS1过表达对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡及迁移的影响。结果:与正常培养的A549细胞相比,顺铂处理的A549细胞内miR-152-3p表达水平显著降低,而SOS1表达水平显著升高(P<0.05);生物信息学分析显示SOS1是miR-152-3p的一个潜在靶基因,而荧光素酶活性检测法分析显示miR-152-3p具有负调控SOS1的作用。与转染空载体的A549细胞相比,miR-152-3p过表达显著抑制A549细胞增殖及迁移、阻滞细胞周期、促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-152-3p过表达的A549细胞内SOS1表达水平显著低于转染空载体的细胞(P<0.05);与单独转染miR-152-3p过表达载体的细胞相比,同时转染miR-152-3p过表达载体和SOS1慢病毒过表达载体的A549细胞增殖、迁移增强,且细胞凋亡受到显著抑制(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过抑制SOS1表达增强A549细胞对顺铂的敏感性,继而抑制A549细胞增殖、迁移,阻滞细胞周期以及促进A549细胞凋亡。

MiR-152-3p靶向调控KLF4促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨微小RNA-152-3p(miR-152-3p)在结肠癌(CC)中的表达情况及靶向Krüppel样因子4(KLF4)对CC细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过starBase及TCGA数据库分析预测miR-152-3p与KLF4之间的靶向关系,以及各自在正常组织和CC组织中的表达情况差异;双荧光素酶和RIP实验验证miR-152-3p与KLF4之间的靶向关系;RT-q PCR检测miR-152-3p与KLF4在CC细胞系中的mRNA表达量;Western blot实验检测KLF4在CC细胞系中的蛋白表达水平;MTT实验检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;细胞周期实验和凋亡实验检测细胞的周期分布情况和凋亡百分率。结果:miR-152-3p在CC组织和细胞系中高表达(P<0.001),而KLF4低表达(P<0.01),且miR-152-3p能够靶向下调KLF4的表达(P<0.01)。miR-152-3p过表达能增高CC细胞系的增殖、迁移和侵袭能力,降低细胞周期在G0/G1期的分布,并抑制其凋亡(P<0.05);KLF4过表达可以抑制miR-152-3p对CC细胞增殖、迁移和侵袭能力的促进作用(P<0.05),使G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),并促进细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-152-3p通过靶向下调KLF4的表达促进CC细胞的增殖、迁移和侵袭。

基于生物信息学分析miR-152在子痫前期发病机制中的作用

目的分析子痫前期(preeclampsia,PE)相关差异表达miRNAs,选择miR-152预测其靶基因并进行生物信息学分析,探讨其参与子痫前期发病的分子机制。方法于GEO数据库中选择子痫前期胎盘组织miRNA差异表达数据集GSE103542,选择上调最显著的miR-152作为研究对象,应用miRDB、TargetScan及miRTarBase软件预测其靶基因并取交集;利用DAVID网络在线富集工具对交集靶基因进行GO功能注释及KEGG通路富集分析,并利用STRING网站对其进行蛋白质互作分析。结果获得的418个交集靶基因在生物过程(biological process,BP)上主要涉及生物黏附、细胞黏附及细胞发育调控等;在细胞组成(cellular component,CC)上主要涉及质膜组成部分、网格蛋白囊泡等;在分子功能(molecular function,MF)上主要涉及钙离子结合、离子结合等。KEGG信号通路富集分析显示其主要参与了调控干细胞多能性的信号通路及TGF-信号通路。蛋白互作分析显示IGF1R、SMAD3、RPS6KB1及PPP2CA是蛋白互作网络的关键节点。结论miR-152可能通过TGF-信号通路多方面影响滋养细胞增殖、侵袭及凋亡参与子痫前期的发生发展,本研究可为后续的靶基因验证及机制探索提供理论基础及研究思路。

circNT5E靶向调控miR-152-3p对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨circNT5E对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织与人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌细胞HGC27中circNT5E、miR-152-3p的表达量。双荧光素酶报告基因实验检测miR-152-3p过表达对野生型载体wt-circNT5E、突变型载体mut-circNT5E荧光素酶活性的影响。以HGC27细胞为研究对象进行体外细胞实验,实验分组为si-NC组、si-circNT5E组、si-circNT5E-NC组、si-circNT5E-152-3p组。CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭能力。Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与癌旁组织和GES-1细胞相比,circNT5E在胃癌组织和细胞中表达量升高(均P<0.05),miR-152-3p的表达量降低(均P<0.05);进一步机制分析提示miR-152-3p是circNT5E的靶基因。功能实验表明敲除circNT5E抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭的能力,诱导细胞凋亡(均P<0.05)。敲除miR-152-3p可逆转circNT5E表达降低对细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用和对凋亡的促进作用(均P<0.05)。结论circNT5E可通过调控miR-152-3p介导胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平;CCK8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达;ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平;双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较,肝癌细胞HepG2、SNU-398、Hep3B内SNHG4表达水平增加(P<0.05),miR-152-3p表达水平降低(P<0.05);沉默SNHG4或过表达miR-152-3p可降低HepG2细胞活性,降低HepG2细胞中PCNA蛋白、Bcl-2蛋白、TNF-α、IL-6表达水平(P<0.05),增加细胞凋亡率,上调Bax蛋白表达(P<0.05)。SNHG4靶向负调控miR-152-3p的表达,抑制miR-152-3p可逆转沉默SNHG4对HepG2细胞增殖、凋亡和免疫因子表达的影响。结论:lncRNA SNHG4可靶向负调控miR-152-3p抑制HepG2细胞增殖和免疫因子表达,促进细胞凋亡。

早发型子痫前期患者血清miR-152,miR-375水平与妊娠结局关系

目的:探讨早发型子痫前期患者血清miR-152、miR-375水平与妊娠结局关系。方法:回顾性收集2017年8月-2019年8月在本院住院分娩的早发型子痫前期患者88例(病例组)和规律产前检查健康孕妇78例(对照组),比较两组一般资料,通过随访妊娠结局将病例组分为不良组和良好组;采用实时荧光定量PCR检测两组血清miR-152、miR-375相对表达水平;多因素Cox回归分析早发型子痫前期患者发生不良妊娠结局的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-152、miR-375对早发型子痫前期患者发生不良妊娠结局的预测价值。结果:病例组血清miR-152(7.56±2.42)、miR-375(4.72±1.02)表达高于对照组(1.00±0.26、1.10±0.25)(均P<0.05),病例组中发生不良妊娠结局26例(29.6%),妊娠结局不良患者血清miR-152、miR-375(9.39±2.78、5.98±1.53)表达高于良好患者(6.79±2.06、4.19±0.51)(均P<0.05)。病例组收缩压、舒张压、血清miR-152,miR-375是患者发生不良妊娠结局的独立危险因素;血清miR-152、miR-375评估早发型子痫前期患者发生不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.829,截断值分别为7.88、4.99,灵敏度分别为73.1%、69.2%,特异度分别为72.6%、98.4%,且miR-152、miR-375联合评估的AUC为0.921,灵敏度为80.8%,特异度为96.8%。结论:早发型子痫前期患者血清miR-152、miR-375升高,是发生不良妊娠结局的危险因素,且可作为评估不良妊娠结局的参考指标。

肺超声评分联合血浆miR-152-3p对急性肺损伤患者预后的价值分析

目的 分析研究肺超声(Lung ultrasound, LUS)评分联合血浆miR-152-3p表达对急性肺损伤(acute lung injury, ALI)患者预后的价值。方法 以2019年4月-2021年5月海南医学院第二附属医院重症监护室收治的100例ALI患者为研究对象,根据患者生存情况将患者分为死亡组(28例)与生存组(72例),采用急性生理与慢性健康评估Ⅱ(Acute Physiology and Chronic Health EvaluationⅡ,APACHEⅡ)评分系统评估患者发病当天APACHEⅡ值,根据得分情况将患者分为高危组(39例)与低中危组(61例)。qRT-PCR检测miR-152-3p在患者血浆中的表达水平,并检测LUS评分。Logistic回归分析评价LUS评分与miR-152-3p水平是否作为ALI患者死亡的独立预测因素。受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve,ROC)分析LUS评分、miR-152-3p水平及联合预测ALI患者死亡的价值。结果 与死亡组相比,生存组患者的LUS评分与miR-152-3p表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高危组相比,低中危组患者的LUS评分miR-152-3p表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示LUS评分联合miR-152-3p表达的AUC值大于二者单独诊断。LUS评分与血浆miR-152-3p表达水平可以作为ALI患者预后的独立危险因子。死亡组中LUS评分与血浆miR-152-3p表达水平呈正相关(r=0.571,P=0.002),生存组中LUS评分与血浆miR-152-3p表达水平无显著相关性(r=-0.023,P=0.851)。结论 LUS评分联合血浆miR-152-3p表达水平与ALI患者的病情与预后显著相关,二者联合对ALI患者预后评价具有较高预测价值。

miR-152与肿瘤关系的研究进展

肿瘤是全球主要的死亡原因之一,虽然针对肿瘤发生发展的研究不断深入,但其潜在机制仍不明确。微RNA(miRNA/miR)-152是一种重要的抑癌因子,在肝癌、胃癌、胶质瘤、卵巢癌和非小细胞肺癌等癌症组织中表达明显下调。目前已知miR-152可通过调节多条信号通路作用于下游靶基因,从而抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,提示其在肿瘤诊断、治疗和预后等方面具有潜在应用价值。深入分析miR-152与肿瘤的关系,了解miR-152表达在肿瘤调控网络中的地位和作用,将为进一步探索肿瘤发病机制提供新思路。

血清miR-152-3p、CK18联合D-二聚体检测在诊断肝病患者中的临床意义

目的:探讨血清微小RNA-152-3p(miR-152-3p)、细胞角蛋白18(CK18)联合D-二聚体检测在诊断肝病患者中的临床意义。方法:选取我院2019年2月—2022年4月收治的100例肝病患者作为研究组(慢性乙型肝炎39例,肝硬化43例,肝癌18例),另选同期94例健康体检者为对照组。比较两组治疗前肝功能相关指标[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)]、血清miR-152-3p、CK18和D-二聚体水平,分析血清miR-152-3p、CK18和D-二聚体水平与肝功能指标的相关性,偏回归分析影响肝病发生的危险因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-152-3p、CK18、D-二聚体联合检测对肝病的诊断价值。结果:研究组AST、ALT、TBA、TBIL水平、CK18、D-二聚体高于对照组,miR-152-3p水平低于对照组(P<0.05);肝癌患者AST、ALT、TBA、TBIL、CK18、D-二聚体水平显示:肝癌患者>肝硬化患者>慢性乙型肝炎患者(P<0.05),血清miR-152-3p水平显示:肝癌患者<肝硬化患者<慢性乙型肝炎患者(P<0.05);研究组患者血清CK18、D-二聚体水平与AST、ALT、TBA、TBIL指标呈正相关(P<0.05),血清miR-152-3p水平与AST、ALT、TBA、TBIL指标呈负相关(P<0.05);血清miR-152-3p、CK18、D-二聚体联合诊断肝病的AUC为0.915,敏感度87.00%,特异度93.62%,优于三者单一诊断。结论:肝病患者血清miR-152-3p、CK18、D-二聚体呈异常表达,联合检测有助于临床诊断,为后续治疗、病情监测等提供参考。

miR-7-5p和miR-152-3p联合调控Wnt/β-catenin通路对乳腺癌细胞上皮-间质转化及化疗耐药的影响

目的探讨miR-7-5p和miR-152-3p协同抑制乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程及紫杉醇耐药的分子机制。方法采用生物信息学软件预测miR-7-5p和miR-152-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因检测两者与TCF4的靶向关系;Western blot法检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键调控因子β-catenin及TCF4蛋白的表达;在转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics基础上给予Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl处理后,Western blot法检测MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达,Transwell小室实验检测MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力;MTT实验检测激活Wnt/β-catenin信号通路对MCF-7/TAX细胞紫杉醇耐药性的影响。结果TCF43′UTR区域存在能够与miR-7-5p及miR-152-3p互补的结合位点;转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后可使TCF4野生型(TCF4-WT)报告基因载体的荧光素酶活性较NC组明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组相比,转染miR-7-5p mimics和miR-152-3p mimics后各组紫杉醇耐药MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平明显降低(P<0.05),且两者共同转染后MCF-7/TAX细胞中β-catenin和TCF4蛋白的表达水平较miR-7-5p组或miR-152-3p组进一步降低(P<0.05)。Western blot结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞中β-catenin、TCF4和vimentin蛋白表达水平明显升高,而E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。Transwell小室结果显示,LiCl处理后MCF-7/TAX细胞侵袭和迁移能力明显增强(P<0.05)。MTT结果显示,不同浓度紫杉醇作用下,miR-7-5p+LiCl组细胞增殖活力较miR-7-5p组明显升高;同时miR-152-3p+LiCl组和miR-7-5p/152-3p+LiCl组细胞的增殖活力较NC组均明显升高(P<0.05)。结论TCF4是miR-7-5p和miR-152-3p的共同靶标。miR-7-5p和miR-152-3p可共同抑制MCF-7/TAX细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化。

miR-152在IL-6诱导宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭中的作用及其机制

目的:探讨miR-152在IL-6诱导宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭中的作用及其机制。方法:以0、0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后,分别采用CCK-8法、Transwell法检测细胞的增殖和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-152的表达,Western blot检测WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和WNT1的靶向关系。脂质体介导转染miR-152模拟物后,RT-PCR检测miR-152的表达,CCK-8、Transwell和Western blot检测miR-152对IL-6处理的Hela细胞增殖、侵袭和WNT/β-catenin信号通路的影响。结果:与对照(0 ng/ml)相比,0.5、5和50 ng/ml IL-6处理Hela细胞后增殖和侵袭能力增强以及WNT/β-catenin信号通路相关蛋白WNT1、β-catenin、CyclinD1和MMP-9蛋白的表达水平均明显升高,而miR-152表达明显降低(P<0.05),且呈IL-6浓度依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实WNT1是miR-152的靶基因。成功上调miR-152表达可逆转IL-6对Hela细胞增殖和侵袭的促进及对WNT/β-catenin信号通路的调控作用。结论:miR-152参与IL-6诱导的宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与靶向调控WNT/β-catenin信号通路有关。

前列腺癌患者血清miR-146a与miR-152的表达水平及临床意义

目的:分析前列腺癌患者血清miR-146a与miR-152的表达水平及临床意义。方法:以2009年1月至2013年4月在我院泌尿外科诊治的前列腺癌、良性前列腺增生患者及健康体检志愿者各46例为研究对象,分析各组患者血清miR-146a与miR-152的表达水平及与临床病理参数之间的关系。结果:miR-146a在前列腺癌患者血清中的表达水平显著高于良性前列腺增生及正常组血清,且前列腺良性增生组血清中miR-146a的表达量亦较正常组高,差异均具有统计学意义(P<0.05);miR-152在前列腺癌患者较良性前列腺增生及正常组血清显著偏低(P<0.05),但在良性前列腺增生和正常组之间无统计学差异(P>0.05);血清miR-146a在不同病理分期、临床分期、有无骨转移及血清t PSA有关(P<0.05),与年龄无关(P>0.05);而miR-152与不同病理分期、临床分期、有无骨转移有关(P<0.05),与血清t PSA水平无相关性(P>0.05),与年龄无显著相关性(P>0.05)。结论:miR-146a与miR-152在前列腺癌患者血清中的表达水平发生了显著改变,为用于前列腺癌的早期诊断及病程的判断提供了相关实验依据。

姜黄素通过调控miR-152对甲状腺癌细胞TPC-1增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨姜黄素对甲状腺癌细胞TPC-1增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:将体外培养的TPC-1细胞,分为NC组(细胞常规培养)、低剂量组(25μmol/L姜黄素作用细胞24 h)、高剂量组(50μmol/L姜黄素作用细胞24 h)、antimiR-152组(转染miR-152抑制剂)、anti-miR-NC组(转染抑制剂阴性对照)、高剂量+anti-miR-NC组(50μmol/L姜黄素作用于转染抑制剂阴性对照的细胞24 h)和高剂量+anti-miR-152组(50μmol/L姜黄素作用于转染miR-152抑制剂的细胞24 h),细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;Western blotting检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-caspases-3)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-152表达。结果:与NC组比较,低剂量组和高剂量组TPC-1细胞OD值、迁移和侵袭数及CyclinD1、MMP2和MMP9的蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、p21、Cleaved-caspase-3和Bax的蛋白及miR-152表达升高(P<0.05)。与anti-miR-NC组比较,anti-miR-152组TPC-1细胞OD值、迁移和侵袭数及CyclinD1、MMP2和MMP9的蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率及p21、Cleaved-caspase-3和Bax的蛋白表达降低(P<0.05)。与高剂量+anti-miR-NC组比较,高剂量+anti-miR-152组TPC-1细胞OD值、迁移和侵袭数及CyclinD1、MMP2和MMP9的蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率及p21、Cleaved-caspase-3和Bax的蛋白表达降低(P<0.05)。结论:姜黄素可上调miR-152表达抑制甲状腺癌细胞TPC-1增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。

miR-152靶向Mirk/Dyrk1B调控人卵巢癌干细胞紫杉醇敏感性的研究

目的探讨miR-152对人卵巢癌干细胞球紫杉醇敏感性的影响及可能的机制。方法分离培养人卵巢癌干细胞球,构建miR-152的差异表达体系,用CCK-8法检测紫杉醇作用下卵巢癌干细胞存活率;用荧光素酶报告基因系统鉴定miR-152与Mirk/Dyrk1B的靶向调控关系;蛋白印迹检测改变miR-152表达水平对Mirk/Dyrk1B及耐药相关蛋白的影响。结果过表达miR-152或降低Mirk/Dyrk1B表达水平可增强人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。miR-152能够特异性结合Mirk/Dyrk1B 3’-UTR区域。miR-152与Mirk/Dyrk1B差异表达影响人卵巢癌干细胞球耐药相关蛋白的表达水平。结论 miR-152可能通过靶向调节Mirk/Dyrk1B影响人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。

miR-152-3p靶向IGF1基因对高糖诱导的ARPE-19细胞活性和凋亡的影响

目的:探究microRNA-152-3p(miR-152-3p)靶向胰岛素样生长因子1(IGF1)基因对高糖诱导的视网膜色素上皮ARPE-19细胞活性和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:高糖诱导ARPE-19细胞并转染miR-152-3p mimics,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中miR-152-3p水平,蛋白印迹(Western blot)法检测细胞中IGF1和VEGF表达水平,双荧光素酶报告基因检测IGF1和miR-152-3p靶向结合关系。结果:高糖能够降低ARPE-19细胞活性,提高细胞凋亡率,抑制细胞中miR-152-3p的表达,提高IGF1和VEGF的表达;而过表达miR-152-3p能够回调高糖诱导的细胞活性抑制及凋亡增加,抑制IGF1和VEGF的表达。双荧光素酶报告基因实验验证了IGF1是miR-152-3p的靶基因。结论:miR-152-3p可通过靶向IGF1基因调节VEGF的表达抑制高糖诱导的ARPE-19细胞活性抑制和凋亡增加。

SLE患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和靶基因dnmt1的表达及其临床意义

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞中miR-148b、miR-152和其靶基因dnmt1的表达水平在发病机制中的作用以及与SLE实验室相关指标、临床疾病活动度的之间的关系。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)方法检测74例SLE患者和44例健康者的PBMCs中miR-148b、miR-152、dnmt1的表达水平,统计学分析其与SLE疾病活动度及SLE相关检验指标的关系。结果 miR-148b、miR-152在SLE患者PBMCs中的表达水平显著高于健康对照(P<0.05),dnmt1在SLE患者PBMCs中的表达水平显著低于健康对照(P<0.05)。除miR-148b在低活动组与健康对照组差异无统计学意义(P>0.05)外,miR-148b、miR-152和dnmt1在其他各组中的表达差异均有统计学意义。miR-152与ESR正相关(r=0.443,P=0.027);dnmt1与ANA抗体(r=-0.576,P=0.001)及SLEDAI评分均为负相关(r=-0.408,P=0.038)。结论 miR-148b、miR-152和dnmt1在SLE的发病机制中扮演着重要角色,可能作为疾病活动的参考指标,有助于指导疾病治疗和预后评估,并为SLE的治疗带来更多靶点。

miR-152通过靶向下调AGTR1抑制人肝癌细胞上皮间质转化及肾素-血管紧张素系统

目的探讨微小RNA-152(miR-152)靶向血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1)对肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)及肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响。方法将培养的HCCLM3细胞分为未转染组(未处理)、阴性对照组(转染阴性对照序列)和miR-152组(转染miR-152模拟物)。采用实时荧光定量PCR检测miR-152和血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、AGTR1 mRNA表达,Transwell^(TM)小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot法检测细胞波形蛋白(vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和AGTR1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和AGTR1的靶向关系。结果与未转染组或阴性对照组相比,miR-152组细胞miR-152表达水平和E-cadherin蛋白表达水平明显升高,而ACE、AngⅡ、AGTR1 mRNA表达水平和侵袭细胞数、迁移细胞数以及vimentin、N-cadherin、AGTR1蛋白表达水平均明显降低;双荧光素酶报告基因实验检测结果证实miR-152可与AGTR1靶向结合。结论miR-152可能通过靶向下调AGTR1表达抑制肝癌HCCLM3细胞的EMT及RAS。