miR-153-3p靶向下调Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)基因抑制乳腺癌细胞增殖及迁移

目的探究miR-153-3p调节乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法利用生物信息学软件检索预测miR-153-3p的候选靶基因;采用双荧光素酶报告实验分析miR-153-3p与候选基因的靶向关系;应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测miR-153-3p对MDA-MB-231细胞mRNA和蛋白质表达水平的影响;通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,并以TranswellTM检测细胞的迁移和侵袭能力。结果软件预测显示miR-153-3p与Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)有连续的结合区域;共转染miR-153-3p模拟物(miR-153-3p mimics)与ROCK1野生型报告载体的细胞相对荧光素酶活性降低;转染hsa-miR-153-3p-mimics后,MDA-MB-231细胞的miR-153-3p表达水平显著增高,且ROCK1蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,转染组MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力均减弱。结论miR-153-3p通过靶向下调ROCK1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-153-3p靶向调控CHI3L1对LPS所致人牙周膜干细胞炎症反应的影响

目的:探索miR-153-3p是否能通过靶向调控几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)改善脂多糖(LPS)所致人牙周膜干细胞(hPDLSCs)炎症反应。方法:分离培养hPDLSCs,采用LPS处理建立炎症细胞模型,并进行miR-NC、miR-153-3p mimics、si-NC、si-CHI3L1以及miR-153-3p mimics+pc-NC、miR-153-3p mimics+pcDNA-CHI3L1转染。转染48h后qRT-PCR法检测各组细胞中miR-153-3p、CHI3L1 mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞中CHI3L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-153-3p与CHI3L1的靶向关系。结果:LPS处理后hPDLSCs中miR-153-3p表达下调(P<0.05),CHI3L1 mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.05);过表达miR-153-3p或抑制CHI3L1表达可降低LPS诱导的hPDLSCs中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,下调CHI3L1 mRNA与蛋白表达,降低细胞凋亡率,差异均具有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-153-3p可靶向调控CHI3L1表达(P<0.05)。此外,过表达CHI3L1可显著逆转过表达miR-153-3p对LPS诱导的hPDLSCs凋亡与炎症反应的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-153-3p可通过靶向调控CHI3L1表达减轻LPS所致hPDLSCs炎症反应,减少细胞凋亡。

lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶验证KTN1-AS1与miR-153-3p、miR-153-3p与NFAT5的关系。结果在NSCLC组织和细胞中,KTN1-AS1、NFAT5蛋白高表达,miR-153-3p低表达,且在A549细胞中KTN1-AS1、NFAT5蛋白表达最高,miR-153-3p表达最低(P<0.05),因此,选择A549细胞为研究对象;与si-NC组比较,si-KTN1-AS1组KTN1-AS1、NFAT5蛋白表达降低,miR-153-3p表达升高(P<0.05);与mimic NC组比较,miR-153-3p mimic组KTN1-AS1表达量变化差异不显著(P>0.05),NFAT5蛋白表达降低,miR-153-3p表达升高(P<0.05);与miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组比较,miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组KTN1-AS1、miR-153-3p表达量变化差异不显著(P>0.05),NFAT5蛋白表达升高(P<0.05);下调KTN1-AS1或上调miR-153-3p均可抑制A549细胞增殖、迁移、侵袭及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达NFAT5减弱了上调miR-153-3p对A549细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用;KTN1-AS1靶向调控miR-153-3p/NFAT5轴。结论沉默KTN1-AS1可能通过上调miR-153-3p来抑制NFAT5表达,进而抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-1-5p修饰脐带间充质干细胞治疗MRL/lpr狼疮小鼠的作用

背景:大量研究表明间充质干细胞能够通过多种免疫调节途径治疗自身免疫性疾病,基因修饰可能提高间充质干细胞的治疗潜力。miR-1-5p在系统性红斑狼疮中呈低表达,过表达miR-1-5p的间充质干细胞可能对系统性红斑狼疮具有治疗作用。目的:探讨miR-1-5p修饰的脐带间充质干细胞是否介导JAK2/STAT3通路对系统性红斑狼疮MRL/lpr模型小鼠存在治疗作用。方法:将20只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为miR-1-5p转染脐带间充质干细胞治疗组(UC-MSCs+miR-1-5p组)、miRNA阴性对照转染脐带间充质干细胞治疗组(UC-MSCs+miR-NC组)、脐带间充质干细胞治疗组(UC-MSCs组)、PBS治疗组(PBS组)、MRL/lpr狼疮小鼠未处理组(对照组)。以尾静脉移植的方式治疗MRL/lpr狼疮小鼠,每周1次,治疗5次。结束治疗后间隔1周处死小鼠,苏木精-伊红染色观察各组MRL/lpr小鼠肝组织和肠组织的病理变化;Western blot法检测各组小鼠肾组织JAK2/STAT3通路蛋白及其磷酸化水平和白细胞介素18的表达水平。结果与结论:(1)与对照组相比,UC-MSCs+miR-1-5p组、UC-MSCs+miR-NC组和UC-MSCs组MRL/lpr小鼠肝组织中炎性细胞浸润明显减少,UCMSCs+miR-NC组可见肝细胞水肿变性;UC-MSCs+miR-1-5p组MRL/lpr小鼠肠组织中杯状细胞明显增多,其余各组差异不显著。(2)与对照组相比,UC-MSCs+miR-1-5p组狼疮小鼠肾组织中p-JAK2(Y1007+Y1008)、p-STAT3(s727)、白细胞介素18的表达水平显著下调(P <0.05);UC-MSCs组狼疮小鼠肾组织中p-STAT3(s727)(P <0.05)、白细胞介素18 (P <0.01)显著下调;UC-MSCs+miR-NC组白细胞介素18的表达水平显著下调(P <0.05);各组狼疮小鼠肾组织中p-STAT3(Y705)的表达差异无显著性意义(P> 0.05)。与PBS组相比,UC-MSCs组白细胞介素18表达明显下调(P <0.05)。(3)结果表明,miR-1-5p修饰的脐带间充质干细胞可能通过抑制JAK2/STAT3通路的激活和白细胞介素18的表达来缓解MRL/lpr小鼠肝肠损害,从而对狼疮小鼠起到一定的治疗作用。

CircCDC14A沉默保护星形胶质细胞免受OGD/R诱导的损伤作用机制分析

目的探讨CirCDC14A沉默通过调节miR-153-3p/JAK1轴保护星形胶质细胞免受氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的损伤机制。方法体外培养新生大鼠脑皮质星形胶质细胞,采用CCK-8法法检测各组细胞活力;采用Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测各组p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,并采用双荧光素酶报告基因实验分析CirCDC14A与miR-153-3p、miR-153-3p与JAK1的关系。结果随着时间的延长,细胞活性呈上升趋势;pcDNA3.0 CirCDC14A+si JAK1组48 h及72 h细胞活力低于si-NC组、OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组(P<0.05);与si-NC组相比,OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组、pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组细胞凋亡明显增加,且pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组细胞凋亡高于GD/R+Si+Con mimcs组(P<0.05);Western blot结果表明:pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平低于OGD/R组、OGD/R+Si+Con mimcs组和si-NC组(P<0.05);miR-153-3p mimic能降低CirCDC14A WT、JAK1-WT的荧光素酶活性(P<0.05);pcDNA3.0-CirCDC14A+si JAK1+miR-153-3p mimcs组miR-153-3p水平低于于其余3组(P<0.05),JAK1蛋白水平高于其余3组(P<0.05)。结论CirCDC14A基因沉默可能通过调控miR-153-3p/JAK1轴抑制OGD/R诱导的大鼠星形胶质细胞凋亡,引起细胞活力及p53、Bax、Bcl-2蛋白表达水平降低。