miR-7抑制剂治疗MRL/lpr小鼠的实验性研究

目的:探讨miR-7抑制剂治疗MRL/lpr小鼠的疗效。方法:选取30只MRL/lpr小鼠,随机分为miR-7抑制剂(miR-7 antagomir)组、环磷酰胺(CTX)组和生理盐水(Saline)对照组,10只/组。MRL/lpr小鼠13周时开始治疗,以上药物分别连续给药5周。每周观察各组小鼠一般状况并称重,留取血清和尿液标本。ELISA检测13~17周三组小鼠血清ANA、抗ds-DNA抗体、C3水平,并检测上述各周三组小鼠尿蛋白水平。流式细胞术检测三组小鼠Tfh细胞比例变化。RT-PCR检测三组小鼠脾脏和淋巴结miR-7和PTEN mRNA表达水平。HE、PAS、PASM染色观察光镜下三组小鼠的肾脏病理情况。结果:治疗5周后,形态学方面:与Saline组相比,miR-7 antagomir组和CTX组小鼠一般状况良好,体质量随周龄增加而增加。血清学方面:miR-7 antagomir组和CTX组血清ANA和抗ds-DNA抗体较Saline组明显下降,补体C3水平明显上升,但两治疗组间上述指标差异均无统计学意义。细胞学方面:miR-7 antagomir组小鼠脾脏Tfh细胞比例明显低于Saline组。与Saline组比较,miR-7 antagomir组小鼠脾B细胞miR-7表达水平降低,PTEN mRNA表达水平升高。此外,miR-7 antagomir组和CTX组小鼠光镜下肾脏病理改变均较Saline组有所好转,但该两组间肾脏病理改变无明显差异。结论:miR-7可作为系统性红斑狼疮的潜在治疗靶点,miR-7 antagomir能够显示出与经典免疫抑制剂CTX相近的治疗效果,有效地改善了MRL/lpr小鼠的狼疮样疾病表现,延缓了病情进展。

贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响研究

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向。本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响。方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率。本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061)。结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%)。观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组。观察组治疗后的CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著。

不同质子泵抑制剂对Hp感染胃溃疡的治疗效果及对白细胞介素-33、miR-26a水平的影响

目的探讨不同质子泵抑制剂对幽门螺杆菌(Hp)感染胃溃疡的治疗效果及对白细胞介素-33(IL-33)、miR-26a水平影响。方法将2022年6月—2023年6月西安市临潼区人民医院收治的86例Hp感染胃溃疡患者作为研究对象,利用随机数表法分成对照组和观察组,每组43例。给予对照组质子泵抑制剂(奥美拉唑肠溶片)+胶体果胶铋胶囊+克拉霉素片+甲硝唑片四联治疗方案,给予观察组质子泵抑制剂(埃索美拉唑镁)+胶体果胶铋胶囊+克拉霉素片+甲硝唑片四联治疗方案,比较两组临床治疗总有效率、Hp根除率、IL-33水平、miR-26a水平、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)。结果观察组治疗总疗效高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组Hp根除率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。经治疗,两组IL-33水平均明显降低,而miR-26a水平均明显提高,且观察组IL-33水平显著低于对照组,miR-26a水平显著高于对照组(P<0.05);经治疗,两组CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均明显改善,且观察组CD4^(+)水平以及CD4^(+)/CD8^(+)比值显著高于对照组,CD8^(+)水平显著低于对照组(P<0.05)。结论相比于奥美拉唑肠溶片,埃索美拉唑镁可提高患者临床治疗效果和Hp根除率,降低患者IL-33水平、提高miR-26a水平,提高患者免疫功能。

miR-155通过SOCS1/STAT3途径调控类风湿性关节炎中炎症反应和Th17/Treg失衡

目的在类风湿性关节炎(RA)中探究miR-155和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)的表达及作用机制。方法采用RT-PCR和流式细胞术检测miR-155和Th17、Treg细胞在RA患者(RA组)和对照组(HC组)外周血中的表达差异;生物信息学和双荧光素酶基因报告实验检测miR-155和SOSC1的调控关系;分离RA患者外周CD4^(+)T细胞,将沉默miR-155与SOCS1表达的miR-155 inhibitor和si-SOCS1及各自的阴性对照序列分别或联合转染入CD4+T细胞中,并将细胞分为:miR-NC组、miR-155 inhibitor组、miR-155 inhibitor+si-NC组和miR-155 inhibitor+si-SOCS1组。使用Th17诱导分化液处理上述细胞后,采用流式细胞术检测各组CD4+T细胞中Th17比率,Western blot实验检测细胞中p-STAT3/STAT3比值。结果与HC组相比,RA患者中miR-155、Th17比率升高(P<0.01),Treg细胞比率降低(P<0.01);miR-155可靶向抑制SOCS1表达。与miR-NC组相比,miR-155 inhibitor组、miR-155 inhibitor+si-NC组和miR-155 inhibitor+si-SOCS1组中Th17比率、p-STAT3/STAT3比值均降低(P<0.01);与miR-155 inhibitor组相比,miR-155 inhibitor+si-SOCS1组CD4^(+)T细胞中Th17比率、p-STAT3/STAT3比值均升高(P<0.05)。结论在RA患者中表达升高的miR-155可能通过SOCS1/STAT3途径来介导CD4^(+)T细胞的Th17分化,从而参与RA患者外周Th17/Treg细胞失衡。

miR-155抑制剂对内毒素血症小鼠肺组织JAK／STATl信号通路的影响

目的探讨microRNA-155（miR．155）抑制剂对内毒素血症小鼠肺脏JAK／STATl信号通路的影响，以及miR-155在内毒素血症诱导肺损伤中的作用。方法120只BALB／c小鼠按随机数字表法分为内毒素血症组（LPS组）、miR-155抑制组（inhibitor＋LPS组）和对照组，每组40只。内毒素血症组腹腔注射LPS20mg／kg；miR-155抑制组尾静脉注射miR-155抑制物80mg／kg24h后，腹腔注射LPS20mg／kg；对照组注射等容量生理盐水。注射LPS6、12、24、48h后，每组各处死10只小鼠，留取肺脏标本。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肺组织中miR-155、SOCSlmRNA、STATlmRNA表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-d（TNF-α）含量；苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理学改变。结果小鼠腹腔注射LPS后，肺组织miR-155表达在24h内呈升高趋势，48h时已下降。LPS组各时间点miR-155表达分别为6h（8．52±1．12）、12h（11．04±0．99）、24h（15．84±0．80）、48h（4．03±2．55）。inhibitor＋LPS组miR-155表达量较LPS组低，12h（t=6．08，P〈0．01）、24h（t=23．64，P〈0．01）差异具有统计学意义。STATlmRNA和SOCSlmRNA表达均在6h最高，后逐渐下降。LPS组STATlmRNA高于inhibitor＋LPS组，6h（t=4．41，P〈0．01）、12h（t=2．69，P〈0．05）、24h（t=5．62，P〈0．01）差异具有统计学意义。inhibitor＋LPS组SOCSlmRNA表达高于LPS组，6h（t=4．55，P〈0．01）、12h（t=4．12，P〈0．01）、24h（t=2．38，P〈0．05）差异具有统计学意义。TNF—α含量于6h最高，IL-10含量于48h最高。LPS组含量高于对照组和inhibitor＋LPS组，6、12、24、48h差异均有统计学意义（P〈0．01）。光镜下观察到inhibitor＋LPS组肺组织病变轻于LPS组。结论miR-155在内毒素血症小鼠肺组织中表达升高，抑制miR-155能下调JAK／STATl信号通路，减轻内毒素血症小鼠肺损伤。

吡嗪类SHP2抑制剂的设计、合成及生物活性评价

SHP2是一个肿瘤治疗的潜在靶点。本文以TNO155为先导化合物,采用基于片段的药物设计策略,设计并合成三个系列共11个新型吡嗪类SHP2变构抑制剂,其结构均经1H-NMR和ESI-MS谱确证。采用荧光分析方法,通过替代底物DiFMUP的去磷酸化程度对目标化合物开展体外活性评价。结果表明,目标化合物对SHP2蛋白显示不同程度的抑制活性。其中2个化合物C-2和C-3的活性较为突出,值得进一步研究。

miR-21抑制剂在5-FU抑制肠癌细胞增殖中的作用

目的观察miR-21抑制剂在5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制肠癌细胞增殖中的作用,并探讨其分子机制。方法采用qRTPCR技术检测肠癌组织中miR-21的表达;应用CCK-8试剂盒检测肠癌细胞的增殖活力;运用Western blot法检测细胞中PTEN和AKT的磷酸化表达水平。结果肠癌组织中,miR-21的表达高于正常大肠组织;利用miR-21抑制剂联合5-FU处理肠癌细胞HT-29和LoVo,细胞增殖活力显著低于单独使用5-FU处理组(P<0.001);Western blot检测结果表明:miR-21抑制剂联合5-FU处理细胞后,抑癌基因PTEN的表达水平升高,AKT的磷酸化水平降低。结论 miR-21抑制剂可显著增强肠癌细胞对5-FU的敏感性。

基质金属蛋白酶1、3,基质金属蛋白酶组织抑制剂1和miR-29在大鼠肺纤维化中及活性维生素D3处理后的表达与作用

目的:探讨大鼠肺纤维化发生发展中基质金属蛋白酶1(MMP1)、MMP3、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)及miR-29的表达和作用以及活性维生素D3[1,25(OH)_2D_3]处理对这些基因表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组。预防组分为对照组Ⅰ、模型组Ⅰ和给药组Ⅰ,治疗组分为对照组Ⅱ、模型组Ⅱ和给药组Ⅱ。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ经气管注入博莱霉素,对照组Ⅰ/Ⅱ经气管注入生理盐水。预防组和治疗组分别于术后第2和14天腹腔注射给药,给药组给予活性维生素D3,模型组给予活性维生素D3溶剂,对照组给予生理盐水。预防组的各组分别于术后第14、21、28天处死大鼠取材,治疗组的各组分别于术后第21和28天处死大鼠取材。实时定量PCR检测大鼠肺组织中miR-29a及TIMP1 mRNA表达水平,免疫组织化学检测组织中MMP1、MMP3和TIMP1的表达水平。结果:模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的MMP1、MMP3和TIMP1的表达均明显高于相同时间点对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达,而miR-29a的表达明显低于相应的对照组Ⅰ/Ⅱ;给药组Ⅰ/Ⅱ中MMP1、MMP3和TIMP1的表达均低于相应时间点的模型组Ⅰ/Ⅱ的表达,而给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达则高于模型组Ⅰ/Ⅱ中的表达。结论:MMP1、MMP3、TIMP1和miR-29在大鼠肺纤维化发生发展中具有重要作用,活性维生素D3可以促进miR-29表达,抑制MMP1、MMP3、TIMP1的表达;可能是通过miR-29调节包括MMP1、MMP3、TIMP1在内的多种靶基因来发挥抑制纤维化的作用。

miR-21抑制剂对海马神经元氧糖剥夺/复氧损伤的影响

目的探讨miR-21抑制剂对海马神经元离体氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的影响及作用机制。方法将小鼠海马神经元HT22细胞接种于达尔伯克改良伊格尔培养基,置于含体积分数95%空气和5%CO2培养箱中培养2 d,然后将细胞分为正常组、OGD/R 6 h组、OGD/R 12 h组和OGD/R 24 h组。正常组细胞置于常氧培养箱培养,OGD/R 6 h组、OGD/R 12 h组和OGD/R 24 h组细胞建立OGD/R模型,然后分别培养6、12、24 h。取培养24 h的HT22细胞分为正常组、OGD/R+miRNA-NC组、OGD/R+miR-21 mimics组和OGD/R+miR-21 inhibitor组;正常组细胞置于常氧培养箱培养;OGD/R+miRNA-NC组细胞转染miRNA阴性对照质粒,OGD/R+miR-21 mimics组细胞转染miR-21 mimics质粒,OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞转染miR-21 inhibitor质粒,转染后置于培养箱孵育2 d。实时荧光定量反转录聚合酶链反应(q RT-PCR)检测正常组、OGD/R 6 h组、OGD/R 12 h组和OGD/R 24 h组细胞中miR-21表达。q RT-PCR检测正常组、OGD/R+miRNA-NC组、OGD/R+miR-21 mimics组和OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中miR-21和脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达,细胞计数试剂盒-8检测各组细胞活性,Hoechst33342/碘化丙啶双染法检测各组细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平。结果OGD/R6 h组、OGD/R 12 h组和OGD/R 24 h组细胞中miR-21相对表达量均显著低于正常组(P<0.05)。OGD/R+miRNANC组和OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中miR-21相对表达量显著低于正常组(P<0.05),OGD/R+miR-21 mimics组细胞中miR-21相对表达量显著高于正常组(P<0.05)。OGD/R+miR-21 mimics组细胞中miR-21相对表达量显著高于OGD/R+miRNA-NC组(P<0.05);OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中miR-21相对表达量显著低于OGD/R+miRNANC组和OGD/R+miR-21 mimics组(P<0.05)。OGD/R+miRNA-NC组和OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中BDNF mRNA相对表达量显著高于正常组(P<0.05);OGD/R+miR-21 mimics组细胞中BDNF mRNA相对表达量与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。OGD/R+miR-21 mimics组细胞中BDNF mRNA相对表达量显著低于OGD/R+miRNA-NC组(P<0.05);OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中BDNF mRNA相对表达量显著高于OGD/R+miRNA-NC组和OGD/R+miR-21 mimics组(P<0.05)。OGD/R+miRNA-NC组和OGD/R+miR-21 mimics组细胞活性显著低于正常组(P<0.05);OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞活性与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。OGD/R+miR-21 mimics组细胞活性显著低于OGD/R+miRNA-NC组(P<0.05),OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞活性显著高于OGD/R+miRNA-NC组和OGD/R+miR-21 mimics组(P<0.05)。OGD/R+miRNA-NC组、OGD/R+miR-21 mimics组和OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞凋亡率均显著高于正常组(P<0.05)。OGD/R+miR-21 mimics组细胞凋亡率显著高于OGD/R+miRNA-NC组(P<0.05);OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞凋亡率显著低于OGD/R+miRNA-NC组和OGD/R+miR-21 mimics组(P<0.05)。OGD/R+miRNA-NC组、OGD/R+miR-21 mimics组和OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中炎症因子TNF-α和IL-1β水平均显著高于正常组(P<0.05)。OGD/R+miR-21 mimics组细胞中TNF-α、IL-1β水平显著高于OGD/R+miRNA-NC组(P<0.05);OGD/R+miR-21 inhibitor组细胞中TNF-α、IL-1β水平显著低于OGD/R+miRNA-NC组和OGD/R+miR-21 mimics组(P<0.05)。结论miR-21抑制剂可改善OGD/R诱导的海马神经元缺血/再灌注损伤,其机制可能与上调BDNF信号通路、抑制炎症因子信号途径有关。

左炔诺孕酮联合miRNA-21-5p抑制剂对子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用及机制

目的利用左炔诺孕酮(LNG)和miRNA-21-5p抑制剂(inhibitor)联合靶向多发性肿瘤抑制基因磷酸酶基因(PTEN)评估对子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用。方法将实验用人子宫内膜癌细胞分为Control组、LNG处理组、LNG处理+miR-21 NC组和LNG处理+miR-21 inhibitor组;免疫组化检测LNG治疗前后子宫内膜癌患者内膜组织中PTEN表达;CCK8和流式细胞仪筛选LNG最佳作用浓度和时间;实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-21-5p inhibitor处理后miR-21-5p mRNA表达水平;LNG联合miR-21-5p inhibitor处理后CCK8检测增殖,流式检测凋亡,Transwell检测侵袭,划线检测迁移,Western印迹检测细胞中PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和p-AKT蛋白表达水平。结果与治疗前比,LNG治疗后子宫内膜组织中PTEN表达水平显著升高(P=0.000)。筛选出LNG最佳浓度为100μmol/L,时间为24 h。miR-21-5p inhibitor处理后miR-21-5p表达显著降低(P<0.05)。与Control组相比,LNG组处理后细胞凋亡及PTEN表达显著升高,细胞迁移、侵袭能力及细胞活力显著下降(P<0.05),miR-21-5p、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K表达也明显下降(P<0.05);与LNG组相比,LNG+miR-21-5p inhibitor组细胞活力、细胞凋亡、迁移、侵袭能力、miR-21-5p表达、p-AKT/AKT、p-PI3K/PI3K明显下降,PTEN表达则明显升高(P<0.05)。结论LNG联合miR-21-5p inhibitor具有协同抑制子宫内膜癌细胞增殖、转移的作用,此过程与靶向上调PTEN并抑制PI3K/AKT通路活化相关。

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中miR-155和细胞因子信号转导抑制分子1相对表达量与肝功能损伤程度的相关性

目的分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis C,CHB)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中miR-155和细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)的表达水平,并探讨其与肝功能损伤程度的相关性.方法连续纳入2016年3月至2018年6月于南京中医药大学附属南京医院就诊的95例CHB患者为研究对象(CHB组),根据患者肝组织病理学检查结果分为轻度CHB组(31例)、中度CHB组(38例)和重度CHB组(26例).另选取同期健康体检者50例作为对照组.采用RT-PCR检测受试者外周血PBMC中miR-155和SOCS1 mRNA相对表达量,ELISA法检测CHB患者血清肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和总胆红素(total bilirubin,TBil)],分析外周血miR-155和SOCS1 mRNA相对表达量与CHB严重程度及肝功能指标的相关性.结果 CHB组患者miR-155相对表达量(0.64±0.15)显著低于对照组(0.86±0.27),SOCS1 mRNA相对表达量(1.25±0.37)显著高于对照组(0.69±0.18),差异均有统计学意义(t=6.314,P<0.001;t=10.081,P<0.001).重度CHB组miR-155相对表达量为0.52±0.13,显著低于中度CHB组(0.65±0.16)和轻度CHB组(0.73±0.20);SOCS1 mRNA相对表达量为1.50±0.25,显著高于中度CHB组(1.21±0.33)和轻度CHB组(1.09±0.31),差异均有统计学意义(P均<0.05).CHB患者miR-155和SOCS1 mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.695,P<0.01).重度CHB组血清ALT、AST、TBil水平分别为(95.97±11.98)U/L、(75.93±10.27)U/L、(22.21±4.09)μmol/L,均显著高于轻度CHB组[(79.73±10.86)U/L、(61.57±9.16)U/L、(18.06±3.14)μmol/L]和中度CHB组[(86.05±12.14)、(66.66±9.38)U/L、(19.73±3.52)μmol/L],差异有统计学意义(P均<0.05),中度CHB组血清ALT、AST、TBil水平与轻度CHB组相比,差异无统计学意义(P均>0.05).CHB患者miR-155相对表达水平与ALT、AST、TBil水平呈负相关(r=-0.457、-0.531、-0.389,P均<0.05),SOCS1 mRNA与ALT、AST、TBil水平呈正相关(r=0.419、0.520、0.371,P均<0.05).结论 CHB患者PBMC中miR-155和SOCS1 mRNA的异常表达与肝功能损伤程度密切相关.

晚期肝癌患者信号转导子和激活子3、微小核糖核苷酸-200表达与程序性细胞死亡配体1关联性及在程序性细胞死亡配体1抑制剂抵抗中的作用

目的:探讨肝癌患者信号转导子和激活子3(STAT3)、微小核糖核苷酸-200(miR-200)表达与程序性细胞死亡配体1(PD-L1)关联性及在PD-L1抑制剂抵抗中的作用。方法:根据入组标准选取2019年2月至2022年1月承德市中心医院收治的108例晚期肝癌患者,根据治疗反应性分为抵抗组75例、非抵抗组33例。比较两组肝癌组织STAT3 mRNA、miR-200、PD-L1表达情况,并比较不同PD-L1表达水平患者肝癌组织STAT3 mRNA、miR-200表达情况。以Pearson法分析STAT3 mRNA、miR-200的关系及与PD-L1关系。以二元Logistic回归分析PD-L1抑制剂抵抗的相关影响因素。使用交互作用系数γ分析STAT3 mRNA、miR-200的交互作用是否存在及其作用类型。结果:抵抗组肝癌组织STAT3 mRNA、PD-L1表达高于非抵抗组,miR-200表达低于非抵抗组,差异均有统计学意义(均P<0.05);PD-L1强表达患者STAT3mRNA高于PD-L1低表达患者,而miR-200低于PD-L1低表达患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。STAT3 mRNA与miR-200呈负相关(P<0.05),与PD-L1呈正相关(P<0.05);miR-200与PD-L1呈负相关(P<0.05)。STAT3 mRNA、PD-L1是PD-L1抑制剂抵抗的相关危险因素,miR-200是PD-L1抑制剂抵抗的相关保护因素(均P<0.05)。单独STAT3 mRNA升高所致OR=21.000,单独miR-200降低所致OR=7.875,两者共存时所致OR=468.00;交互作用OR值大于单独STAT3 mRNA升高所致的OR值与单独miR-200降低所致OR值的乘积。STAT3 mRNA和miR-200对PD-L1抑制剂抵抗影响的模型为超相乘模型,γ=2.019>1,说明两者具有正向交互作用。结论:肝癌患者中STAT3表达升高,与PD-L1呈正相关;miR-200表达降低,与PD-L1呈负相关。STAT3、miR-200表达水平与PD-L1抑制剂抵抗密切相关,具有作为治疗靶点的潜在价值,并能为PD-L1抑制剂的精准化、个性化应用提供参考。

BRD4抑制剂JQ1及miR-141对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨溴结构域蛋白(BRD)4抑制剂JQ1及miR-141对膀胱癌细胞(RT-4)增殖和凋亡的影响和机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测膀胱癌组织、癌旁组织中miR-141表达情况。用CCK-8法检测不同浓度BRD4抑制剂JQ1对RT-4细胞存活率的影响,并计算IC50值。将RT-4细胞分为对照(Control)组(不做处理)、JQ1组(0.8000μmol/L JQ1)、anti-miR-141组(转染anti-miR-141)、JQ1+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC,0.8000μmol/L JQ1)、JQ1+anti-miR-141组(转染anti-miR-141,0.8000μmol/L JQ1)。CCK-8和集落形成实验检测RT-4细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相关蛋白表达。结果与癌旁组织比较,膀胱癌组织中miR-141呈显著高表达(P<0.05)。JQ1对RT-4细胞的IC50值为0.791μmol/L。与对照组比较,JQ1组、anti-miR-141组RT-4细胞活力、克隆形成数及p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。与JQ1+anti-miR-141组比较,anti-miR-141组、JQ1组、JQ1+anti-miR-NC组RT-4细胞活力、克隆形成数及p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。结论BRD4抑制剂JQ1联合下调miR-141可抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

miR-125a靶向基因对肝癌细胞类胰岛素生长因子-1及其受体抑制剂表达的影响

目的探讨miR-125a靶向基因对肝癌细胞类胰岛素生长因子(IGF)-1及其受体抑制剂鬼臼苦素(PPP)表达的影响。方法在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中接种Hep2细胞,当细胞融合度达到90%时,更换为乙二胺四乙酸(EDTA)溶液和胰蛋白酶的消化液消化,使全部细胞完全脱离瓶壁,于培养瓶内,在孵箱中培养。构建为重组质粒p Genesil-miR-125a。转染Hep2细胞。筛选建立稳定转染的Hep2细胞,根据转染质粒的不同分为对照组和实验组,检测miR-125a对肿瘤细胞抑制作用和IGF-1、PPP的水平。结果实验组与对照组相比,活细胞数量明显降低(P<0.05)。随着细胞的增殖,两组细胞的IGF-1阳性率均降低,与实验组相比,对照组下降更为明显(P<0.05)。对照组细胞PPP阳性率未发生明显变化(P>0.05),实验组细胞PPP阳性率明显升高(P<0.05)。结论 miR-125a靶向基因能够降低肝癌细胞类IGF-1水平,升高其受体抑制剂PPP的水平,抑制肝癌细胞的增殖。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对小鼠T淋巴瘤细胞EL4中miR-150表达及增殖的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)SAHA对EL4细胞中miR-150表达及增殖的影响。方法使用HDACi SAHA处理EL4细胞,定量RT-PCR法测定各组细胞中miR-150的表达水平,MTT法测定各组细胞增殖能力。结果经HDACi SAHA处理后, EL4细胞中miR-150的表达随着SAHA剂量的增加而增加。经HDACi SAHA处理后,EL4细胞增殖能力下降。结论 HDACi SAHA能够恢复或提高小鼠T淋巴瘤细胞EL4中miR-150表达并抑制EL4细胞增殖。miR-150在EL4细胞中表达可能受乙酰化修饰的调控,乙酰化修饰调控亦可能通过miR-150下调EL4细胞的增殖能力。

miR-874抑制剂调控caspase-8的表达和心肌细胞的增殖

目的：探讨miR-874抑制剂对大鼠心肌细胞caspase-8表达和细胞增殖的影响。方法：H9C2心肌细胞铺96孔板，24h后用RNAiMAX对细胞进行转染，分为miR-874抑制剂转染组和对照组，16h后用CellTiter-FluorTM细胞活力检测试剂盒检测细胞活力确定活细胞的数目，进而测定miR-874抑制剂对心肌细胞增殖的影响。用Caspase-Glo试剂盒来检测细胞半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）的活性。结果：miR-874抑制剂组的心肌细胞数目显著高于对照组；miR-874抑制剂组的心肌细胞caspase-8的活性显著高于对照组；miR-874抑制剂转染组心肌细胞caspase-8的活性归一化到细胞数目后显著高于对照组。结论：miR-874抑制剂促进大鼠心肌细胞增殖；miR-874抑制剂启动了促进caspase-8表达从而抑制大鼠心肌细胞坏死的途径。miR-874抑制剂有潜力应用于心衰治疗以减少心肌细胞的死亡。

miR-155-5p靶向核因子κB抑制蛋白E在人单核巨噬细胞抗新生隐球菌免疫反应中的机制研究

目的分析新生隐球菌(标准株WM148)干预人单核巨噬细胞(THP-1细胞)中miR-155-5p和核因子κB抑制蛋白E(IKBKE)基因的表达变化,验证其靶向关系,并研究其对肿瘤坏死因子细胞(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的调控作用。方法体外培养THP-1细胞,按照数量5∶1将热灭活新生隐球菌加入培养瓶内,分析0h、3h、6h、9h和12h这5个时间点的miR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化;双荧光素酶报告系统验证miR-155-5p和IKBKE3'UTR的靶向关系;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA,观察在6hmiR-155-5p和IKBKE的表达倍数变化以及TNF-α和IL-6的表达量变化。结果新生隐球菌干预THP-1细胞后,miR-155-5p表达增加,6h达到峰值,随后逐渐下降,而IKBKE在6h表达降低,TNF-α和IL-6的表达量随时间逐渐增加;双荧光素酶报告系统中miR-155-5pmimics作用后IKBKE3'UTR活性下降,将IKBKE3'UTR进行突变后,IKBKE3'UTR活性较野生型增加;分别转染miR-155-5pmimics和IKBKEsiRNA后,在6hTNF-α和IL-6的表达量实验组均较对照组明显增加。结论THP-1细胞中miR-155-5p可通过靶向降解IKBKE信使RNA(mRNA)促进TNF-α和IL-6的表达增加,表明其在THP-1细胞抗新生隐球菌中发挥着促炎作用,可作为将来隐球菌性脑膜炎的潜在治疗靶点。

miR-21抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞增殖及eNOS表达的影响

目的:探讨miR-21抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法:将miR-21抑制剂转染至经AngⅡ诱导的HUVECs,采用MTT法检测细胞的增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,分别采用RT-PCR和western blotting法检测转录因子AP1和eNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果:AngⅡ能促进HUVECs增殖和迁移,并使细胞中AP1、eNOS mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05);miR-21抑制剂转染细胞后,AngⅡ促进HUVECs增殖和迁移的作用发生显著逆转(P<0.05),且AP1、eNOS mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:miR-21抑制剂能够抑制AngⅡ刺激下HUVECs的增殖及eNOS的表达;AP1在AngⅡ诱导细胞eNOS表达中可能起到关键的调控作用。

miR-9-5p靶向TIMP2诱导多发性骨髓瘤细胞自噬和凋亡的机制

目的探究miR-9-5p和组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)相互作用对多发性骨髓瘤(MM)细胞自噬和凋亡的影响机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测初诊MM和复发MM各9例患者骨髓样本中miR-9-5p和TIMP2的表达水平,分析两者表达水平的相关性。U266细胞分为miR-对照组、miR-9-5p组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-TIMP2组、miR-9-5p+pcDNA3.1组、miR-9-5p+pcDNA3.1-TIMP2组。采用流式细胞术、免疫荧光染色、蛋白质印迹实验检测过表达miR-9-5p和TIMP2对U266细胞自噬和凋亡的影响;双萤光素酶报告实验验证miR-9-5p和TIMP2的靶向关系。结果与初诊MM患者相比,复发MM患者miR-9-5p表达水平升高,TIMP2表达降低;miR-9-5p和TIMP2表达水平呈负相关(P<0.05)。与miR-对照组相比,miR-9-5p组MAP1LC3B-Ⅱ的表达水平降低,MAP1LC3B-Ⅰ和SQSTM1的表达水平增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-TIMP2组MAP1LC3B-Ⅱ的表达水平升高,MAP1LC3B-Ⅰ和SQSTM1的表达水平降低,细胞凋亡率增加(P<0.05)。生物信息学和双萤光素酶报告实验证实TIMP2是miR-9-5p的靶基因。结论miR-9-5p靶向TIMP2抑制MM细胞的自噬和凋亡,从而促进MM的发生发展。

HDAC抑制剂通过miR-200c调控靶向CRKL抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭的研究

目的探讨HDAC-miR200c-CRKL信号轴在HDAC抑制剂抗乳腺癌的作用机制。方法 RT-PCR和Western-blotting印迹分析,验证miR-200c、HDAC IIa成员及CRKL在乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞中的表达;miR-200c模拟物转染到MDA-MB-231中以过表达miR-200c,观察miR-200c对乳腺癌增殖,侵袭和迁移所起作用及CRKL的蛋白表达;miR-200c抑制剂转染MDA-MB-231细胞,再用HDAC抑制剂处理,观察miR-200c和CRKL表达,及乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。结果 miR-200c在乳腺癌细胞中呈低表达,与CRKL和HDAC IIa成员的表达水平呈反比。用miR-200c模拟物转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,过表达miR-200c使CRKL表达下调了约68%;显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭和迁移。用miR-200c抑制剂转染MDA-MB-231细胞,再用HDAC抑制剂处理后miR-200c表达上升,CRKL表达下降;降低乳腺癌细胞的增殖和侵袭;用100nM miR-200c抑制剂转染下调miR-200c可部分削弱HDAC抑制剂对乳腺癌细胞增殖和侵袭的抑制。结论 HDAC抑制剂的抗乳腺癌作用部分是通过调节miR-200c直接靶向CRKL来实现的。HDAC-miR200c-CRKL信号轴可能成为乳腺癌新的诊断标志物和潜在的治疗靶点。。