MiR-15a-3p调节Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-15a-3p通过调节碱性螺旋环螺旋转录因子1(Twist1)/Jagged1/Notch/Kruppel样因子4(KLF4)信号通路对肺腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:采用RT-qPCR实验检测肺腺癌组织、癌旁组织和肺腺癌细胞系(A549、HCC827)及人肺正常上皮细胞(BEAS-2B)中miR-15a-3p和Twist1 mRNA水平。A549细胞分成Control组(未转染)、NC mimics组(转染NC mimics)、miR-15a-3p mimics组(转染miR-15a-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-Twist1组(转染si-Twist1)、miR-15a-3p mimics+pcDNA组(共转染miR-15a-3p mimics和pcDNA)、miR-15a-3p mimics+pc-Twist1组(共转染miR-15a-3p mimics和pc-Twist1)。CCK-8法检测细胞增殖情况;TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况;Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告分析实验确定miR-15a-3p和Twist1的靶向作用关系;Western blotting实验检测Twist1、Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达水平。结果:在肺腺癌组织和细胞系中,miR-15a-3p表达降低,Twist1 mRNA表达升高(P<0.05)。A549细胞通过转染miR-15a-3p mimics或si-Twist1,上调miR-15a-3p或下调Twist1后,细胞增殖率(24 h、48 h、72 h)显著下降,TUNEL阳性细胞比显著增加,细胞迁移数和侵袭数显著降低(P<0.05)。Twist1是miR-15a-3p的下游靶基因,被miR-15a-3p直接负调控。Twist1的上调明显逆转了miR-15a-3p过表达对A549细胞进展的抑制作用。miR-15a-3p过表达抑制Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达,而继续上调表达Twist1后Jagged1、Notch、KLF4蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:miR-15a-3p通过靶向抑制Twist1/Jagged1/Notch/KLF4信号通路,降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进凋亡。

miR-27a-3p激活MAPK信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖

背景:目前多项研究证实了丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与了细胞的增殖过程,且miRNA参与增生性瘢痕的发生发展,因此深入探讨了miR-27a-3p和丝裂原活化蛋白激酶信号通路在病理性瘢痕形成中的作用。目的:探究miR-27a-3p通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:收集皮肤标本并分别分离出原代成纤维细胞,倒置显微镜观察原代细胞,免疫荧光予以验证;采用qRT-PCR检测miR-27a-3p在组织中的相对表达水平;利用数据库预测miR-27a-3p的靶基因,再将预测的靶基因进行基因本体功能富集分析及京都基因与基因组百科全书生物通路富集分析;设置分组为:空白对照组、阴性对照组、miR-27a-3p过表达组、miR-27a-3p抑制组、miR-27a-3p过表达+p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+细胞外信号调节蛋白激酶抑制剂组、miR-27a-3p过表达+c-Jun氨基末端激酶抑制剂组,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38激酶总量及其磷酸化水平,采用CCK-8法和EdU检测细胞增殖情况。结果与结论:①与正常皮肤成纤维细胞相比,增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性更强(P<0.05),增殖速度也更快(P<0.001);②与正常皮肤相比,miR-27a-3p在增生性瘢痕中呈高表达(P<0.001);③与阴性对照组相比,过表达miR-27a-3p能促进细胞的增殖活性(P<0.001)和增殖水平(P<0.001);④与阴性对照组相比,敲低miR-27a-3p能抑制细胞的增殖活性(P<0.05)和增殖水平(P<0.001);⑤与阴性对照组相比,过表达miR-27a-3p促进细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P<0.05);与阴性对照组相比,敲减miR-27a-3p能抑制细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的磷酸化水平(P<0.05);⑥与miR-27a-3p过表达组相比,细胞外调节蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶的特异性抑制剂可逆转miR-27a-3p对成纤维细胞的增殖活性(P<0.01)和增殖水平(P<0.001);⑦提示miR-27a-3p通过激活丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。

LINC_00355通过miR-15a-5p调节PHF19在肺癌侵袭转移中的作用机制研究

目的 探讨LINC_00355通过miR-15a-5p调节PHF19在肺癌侵袭转移中的作用机制。方法 采用A549肺癌细胞作为实验细胞。将细胞分为A549肺癌细胞组、lncRNA-NC组、LINC_00355 mimics组、LINC_00355 inhibitor组,进行不同处理。A549肺癌细胞组:不进行任何处理;lncRNA-NC组:加入空白载体;LINC_00355 mimics组:加入LINC_00355过表达载体;LINC_00355 inhibitor组:加入LINC_00355低表达载体。培养结束后,MTT法测定细胞活力,检测单克隆形成数、迁移和侵袭水平。采用萤光素酶报告基因实验分析LINC_00355对miR-15a-5p的靶向作用;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞LINC_00355、miR-15a-5p、PHF19,Western blot检测PHF19蛋白表达水平。结果 与A549肺癌细胞组、lncRNA-NC组比较,LINC_00355 mimics组吸光度(A)值、细胞活力、单克隆形成数、穿膜数、迁移距离升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);LINC_00355 inhibitor组A值、细胞活力、单克隆形成数、穿膜数、迁移距离降低,凋亡率升高(P<0.05);与LINC_00355 mimics组比较,LINC_00355 inhibitor组A值、细胞活力、单克隆形成数、穿膜数、迁移距离降低,凋亡率升高(P<0.05)。LINC_00355过表达可明显降低miR-15a-5p-wt的萤光素酶活性(P<0.05);与A549肺癌细胞组、lncRNA-NC组比较,LINC_00355 mimics组细胞LINC_00355、PHF19 mRNA表达上调,miR-15a-5p表达降低(P<0.05),LINC_00355 inhibitor组细胞LINC_00355及PHF19 mRNA和蛋白表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05);与LINC_00355 mimics组比较,LINC_00355 inhibitor组细胞LINC_00355 mRNA、PHF19 mRNA和蛋白表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。结论 LINC_00355过表达促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭并诱导细胞凋亡,敲低LINC_00355则产生相反的效果;其机制可能与LINC_00355负调控miR-15a-5p进而上调肺癌细胞中PHF19的表达有关。

贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响研究

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向。本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响。方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率。本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061)。结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%)。观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组。观察组治疗后的CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著。

彩色多普勒超声联合miR-151a-3p、miR-1285-3p对结核性胸膜炎患者的诊断价值

目的研究彩色多普勒超声联合miR-151a-3p、miR-1285-3p对结核性胸膜炎患者的诊断价值。方法选取2022年3月至2023年3月于河南省胸科医院就诊的100例结核性胸膜炎患者,记为TP组,选取健康对照组100例,记为CO组。对两组分别进行彩色多普勒超声及miR-151a-3p、miR-1285-3p检测,评估并分析两组检测结果。结果与CO组相比,TP组PSV升高,RI降低(P<0.05);与CO组相比,TP组血清miR-151a-3p表达升高,miR-1285-3p表达降低(P<0.05);PSV与血清中miR-151a-3p呈正相关(r=0.937,P<0.001)、与miR-1285-3p呈负相关(r=-0.835,P<0.001),RI与血清中miR-151a-3p呈负相关(r=-0.951,P<0.001)、与miR-1285-3p呈正相关(r=0.835,P<0.001);彩色多普勒超声检测的AUC为0.729,血清miR-151a-3p检测为0.707,血清miR-1285-3p检测为0.629,三者联合为0.898。结论彩色多普勒超声联合miR-151a-3p、miR-1285-3p对结核性胸膜炎患者的诊断,与单一检测相比更全面、更有效、更客观,可以更有针对性地制定治疗方法,达到精准治疗。

SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞miR-4524a-3p的表达及临床意义

目的探究miR-4524a-3p在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)及主要免疫细胞中的表达情况及其临床价值。方法收集SLE患者和健康对照的外周血,采用人外周血淋巴细胞分离液(Ficoll)及免疫磁珠细胞分选法分离PBMCs、CD3^(+)T、CD19^(+)B淋巴细胞及CD14^(+)单核细胞;应用荧光定量PCR法检测miR-4524a-3p表达水平;采用Pearson线性相关分析评估miR-4524a-3p与SLE患者疾病活动度评分(SLEDAI)的关系;应用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-4524a-3p对SLE的诊断效能。结果与健康对照相比,miR-4524a-3p在SLE患者PBMCs(P<0.05)、CD3^(+)T细胞(P<0.001)及CD14^(+)单核细胞(P<0.001)中表达显著降低,与SLEDAI评分呈负相关(r=-0.406,P<0.01);miR-4524a-3p在中度或重度活动期患者体内的表达水平显著低于轻度及非活动期患者(P<0.01);SLE狼疮性肾炎和关节受累组中,miR-4524a-3p表达水平低于无累及组(P<0.01);ROC曲线结果显示,miR-4524a-3p对SLE具有良好的诊断价值。结论miR-4524a-3p在SLE患者CD3^(+)T和CD14^(+)单核细胞中表达显著降低,与疾病活动度密切相关,对SLE具有一定的临床诊断价值。

LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。

miR-125a-5p通过靶向STAT3减轻戊四唑诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应

目的:探讨miR-125a-5p通过靶向信号转导与转录激活因子3(STAT3)对戊四唑(PTZ)诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应的影响。方法:采用PTZ点燃法建立大鼠癫痫模型,并将其随机分为6组:Con组、PTZ组、PTZ+agomir NC组、PTZ+miR-125a-5p agomir组、PTZ+miR-125a-5p agomir+pcDNA组和PTZ+miR-125a-5p agomir+pc-STAT3组,评价miR-125a-5p对大鼠癫痫持续时间、潜伏期、惊厥次数和严重程度的影响。qRT-PCR检测miR-125a-5p和STAT3 mRNA表达;改良神经系统严重程度评分(mNSS)、开场实验和Rotarod测试评价癫痫大鼠的神经功能;Morris水迷宫实验评价癫痫大鼠的认知功能;免疫染色观察海马CA1和CA3区域神经元凋亡;ELISA检测海马组织炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18)水平;Western blot检测海马组织中STAT3蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-125a-5p和STAT3的关系。结果:在PTZ诱导的癫痫大鼠中,miR-125a-5p表达上调,STAT3表达下调,且miR-125a-5p靶向抑制STAT3表达。与PTZ组相比,PTZ+miR-125a-5p agomir组癫痫大鼠的潜伏期缩短,癫痫评分降低,癫痫发作时间和次数减少,mNSS降低,掉落潜伏期及外围区域的移动距离、开放区域的总距离延长,逃避潜伏期显著降低,穿越平台次数及停留在目标象限的时间和游泳距离均增加,海马组织TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18表达降低,CA3和CA1区的NenN+细胞增多(P<0.05);STAT3过表达可逆转miR-125a-5p agomir对癫痫大鼠神经功能障碍及炎症反应的缓解作用(P<0.05)。结论:miR-125a-5p通过靶向下调STAT3,减轻PTZ诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应。

NEAT1、miR-27a-3p在阿尔茨海默病患者血清和脑脊液中的表达关系

目的:探究长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long chain non-coding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1, LncRNA NEAT1)、miR-27a-3p在阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)患者血清和脑脊液中的表达关系及意义。方法:选择2019年10月至2021年9月天津市第五中心医院神经内科收治的AD患者66例作为病例组,根据临床痴呆评定量表(clinical dementia rating, CDR)评分分为轻度组(≤1分,n=41)与中重度组(>1分,n=25);另取同期门诊其他就诊患者血清和脑脊液标本66例志愿者作为对照组。收集所有受试者的一般资料并评估认知程度,采用实时荧光定量PCR检测血清和脑脊液miR-27a-3p、NEAT1表达水平,酶联免疫吸附试验检测脑脊液β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1,BACE1)、β淀粉样蛋白(amyloid β,Aβ)40和Aβ42水平,采用Spearman法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与简易精神状态检测量表的相关性,采用Pearson法分析血清miR-27a-3p、NEAT1水平与Aβ沉积平均标准摄取值比率(standardized uptake value ratio, SUVR)及脑脊液miR-27a-3p、NEAT1、BACE1、Aβ42、Aβ40水平的相关性。结果:MMSE评分[21 (17,25),9(7,11)vs. 27 (21,34)]、MoCA评分[17 (12,21),10 (7,13)vs. 27 (21,31)]、血清miR-27a-3p水平(0.55±0.13,0.46±0.06 vs. 0.97±0.22)、脑脊液miR-27a-3p(0.48±0.10,0.35±0.10 vs. 1.03±0.31)、Aβ42水平[(303.55±36.77) ng/L,(231.45±34.14) ng/L vs.(499.99±53.63) ng/L]及Aβ42/Aβ40比值(0.030±0.008, 0.022±0.007 vs. 0.048±0.010)轻度组、中重度组AD患者均低于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组低(P均<0.05);血清NEAT1水平(2.31±0.64,3.13±0.76 vs. 1.05±0.20)、SUVR(1.50±0.29,1.76±0.52 vs. 0.74±0.15)及脑脊液NEAT1(3.51±1.24,4.30±1.65 vs. 1.01±0.23)、BACE1水平[(55.78±5.98)μg/L,(72.32±16.08)μg/L vs.(21.39±3.73)μg/L]轻度组、中重度组AD患者均高于对照组(P均<0.05),且中重度组AD患者较轻度组高(P均<0.05)。AD患者血清NEAT1水平与SUVR及脑脊液NEAT1、BACE1呈正相关(r=0.350,0.606,0.341,P<0.05),与MMSE评分、MoCA评分呈负相关(r=-0.473,-0.482,P均<0.05);血清miR-27a-3p水平与脑脊液miR-27a-3p水平、MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r=0.695,0.424,0.412,P<0.05),与SUVR及脑脊液BACE1水平呈负相关(r=-0.521、-0.447,P均<0.05)。结论:NEAT1、miR-27a-3p在AD患者血清及脑脊液中表达趋势具有一致性,NEAT1水平均升高,miR-27a-3p水平均降低,二者水平呈负相关,与AD患者脑中Aβ沉积程度有关,并参与AD的病情进展。

不明原因复发性流产患者血清lncRNA-KCNQ1OT1、miR-29a-3p及SOCS3mRNA水平的表达及其相关性

复发性流产是指与同一性伴侣在妊娠28周之前,连续2次及以上发生自然流产的情况,其病因复杂,至今仍有50%以上的复发性流产病因尚未明确,即不明原因复发性流产(URSA)^([1-2])。有研究表明URSA患者子宫蜕膜存在明显的炎症微环境,可以引起性激素紊乱,与URSA的发生及发展密切相关^([3])。细胞因子信号传导抑制因子3 (SOCS3)是一个具有多项调节功能的蛋白质分子,可以调节机体免疫炎症反应,能够促进滋养细胞和T细胞增殖分化,从而影响着复发性流产的发生和发展^([4-5])。

血清miR-200a-3p与miR-30a-5p表达在心力衰竭诊断及预后评估中的价值

目的分析血清中微小核糖核酸200a-3p(miR-200a-3p)和微小核糖核酸30a-5p(miR-30a-5p)表达在心力衰竭(HF)诊断以及HF患者预后评估中的价值。方法前瞻性选取内蒙古医科大学附属医院2018年4月~2020年4月期间收治的HF患者131例为研究对象(HF组),同时期健康体检志愿者131例为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平;采用Spearman相关分析血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p水平与HF患者病情严重程度的相关性;采用ROC曲线分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p对HF的诊断价值;采用Logistic回归分析HF患者预后的影响因素;采用Kaplan-Meier生存分析血清miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者预后的关系。结果与对照组相比,HF组血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);轻度HF、中度HF和重度HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平依次升高,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平与HF患者病情严重程度呈正相关(r_(s)=0.442,r_(s)=0.564,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-200a-3p和miR-30a-5p联合诊断HF较miR-200a-3p和miR-30a-5p单一指标诊断效果更好(P<0.05);Logistic回归分析结果发现,NT-proBNP、LVEF、LVEDD、miR-200a-3p和miR-30a-5p是HF患者预后的影响因素(Waldχ^(2)=4.321~128.193,P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p高表达患者3年生存率低于miR-200a-3p和miR-30a-5p低表达患者(均P<0.05)。结论HF患者血清中miR-200a-3p和miR-30a-5p表达水平显著升高,二者与HF的发生及患者预后相关。

黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响

目的黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响。方法清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型组、地塞米松组(200 mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(100 mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(200 mg/kg),每组20只。除正常对照组外,模型组、地塞米松组、黄芩总黄酮低高剂量组通过卵清蛋白(OVA)建立支气管哮喘模型,并予以相应药物干预。实验结束后,检测肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数,以及肺/体比值、肺损伤评分、动脉血氧分压(PaO_(2))水平;反逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法检测肺支气管组织微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)、NADPH氧化酶4(NOX4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平。结果与正常对照组比较,模型组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、黄芩总黄酮低剂量组和黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平降低,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,黄芩总黄酮低剂量组、黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与黄芩总黄酮低剂量组比较,黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩总黄酮对大鼠支气管哮喘具有明显治疗作用,其机制可能与黄芩总黄酮促进miR-133a-3p的表达进而抑制NOX4/NLRP3信号轴的激活相关。

miR-34a-5p/PLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

背景:目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的:探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法:选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组,通过Real-time PCR法检测PLCD3和miR-34a-5p表达的关系;通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响;使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平;使用ELISA法检测炎症因子的表达。结果与结论:①PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标,同时PLCD3和miR-34a-5p表达水平呈负相关。②PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移,而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移;miR-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高,而PLCD3过表达则表现出相反趋势。③PLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达,而miR-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明,miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。

miR-103a-3p在先天性巨结肠中的作用及机制

目的探讨miR-103a-3p在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HSCR)发生、发展中的作用及机制。方法RT-PCR检测miR-103a-3p在HSCR狭窄段及扩张段结肠肠管组织标本中的表达差异。CCK-8和Transwell法评估miR-103a-3p对细胞增殖和迁移的影响。运用KEGG、GO以及蛋白质-蛋白质相互作用网络分析预测潜在靶基因。通过RT-PCR、自动免疫印迹、双荧光素酶报告基因检测在细胞和组织层面验证miR-103a-3p的靶基因PIK3R1。结果在HSCR病变段结肠组织中miR-103a-3p表达显著上调。miR-103a-3p可以抑制细胞的增殖和迁移。生物信息学分析提示:PIK3R1可能是miR-103a-3p在HSCR中的潜在靶点。双荧光素酶实验证实miR-103a-3p可与PIK3R1的3′-UTR结合,并影响其mRNA和蛋白质的表达水平。而在组织样本中,病变段肠管的PIK3R1表达水平明显降低,与miR-103a-3p呈负向关系。结论miR-103a-3p在HSCR的病变肠管中存在表达差异,其可通过靶向PIK3R1影响细胞增殖及迁移,在HSCR的发生发展中起着重要作用。

急性脑梗死患者血清miR-151a-3p和miR-210的表达及其与炎性因子的关系

目的分析急性脑梗死(ACI)患者血清miR-151a-3p和miR-210的表达及其与炎性因子的关系,并分析其临床意义。方法选择2015年3月—2018年2月在新疆医科大学附属中医医院诊治的ACI患者160例作为观察组,患者脑梗死体积<5 cm^3者79例为轻度组,5～15 cm^3者35例为中度组,> 15 cm^3者46例为重度组。另选同期在医院接受体检的健康志愿者160例作为健康对照组。对比观察组与健康对照组、不同梗死体积患者血清miR-151a-3p、miR-210以及白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10 (IL-10)和白介素-17 (IL-17)水平,采用Pearson法分析miR-151a-3p和miR-210的表达与炎性因子的关系,并用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-151a-3p和miR-210对ACI的诊断价值。结果观察组血清miR-151a-3p、IL-1β、TNF-α、IL-10及IL-17水平均明显高于健康对照组,miR-210水平明显低于健康对照组(t=4. 339、6. 240、46. 930、30. 605、56. 776、17. 789,均P=0. 000)。重度组和中度组miR-151a-3p、IL-1β、TNF-α、IL-10及IL-17水平均明显高于轻度组,且重度组又高于中度组,而miR-210水平明显低于轻度组,且重度组又低于中度组(F=3. 068、3. 147、5. 048、9. 784、7. 239、5. 213,P=0. 002、0. 003、0. 000、0. 000、0. 000、0. 000)。Pearson相关性分析发现,miR-151a-3p与IL-1β、TNF-α、IL-10及IL-17呈正相关(r=0. 571、0. 597、0.627、0. 582,P均<0. 01),miR-210与IL-1β、TNF-α、IL-10及IL-17呈负相关(r=-0. 640、-0. 614、-0. 665、-0. 597,P均<0. 01)。根据ROC曲线分析,miR-210联合miR-151a-3p诊断ACI的曲线下面积为0. 826,灵敏度为0. 805,特异度为0. 782,约登指数为0. 587。结论ACI患者的血清miR-151a-3p表达较高,miR-210表达较低,二者与炎性因子的关系密切,可将其纳入到监测ACI患者的指标体系中,且联合检测ACI的价值较好。

miR-125a-3p靶向FOXM1调控银屑病大鼠皮肤损伤和炎症反应的作用机制

目的:探究miR-125a-3p对银屑病大鼠皮肤损伤和炎症反应的影响及机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、银屑病组、miR-NC组和miR-125a-3p组,对大鼠进行银屑病面积和严重性指数(PASI)评分、Baker评分;ELISA检测皮肤组织IL-6、IL-1β、TNF-α水平;qRT-PCR检测皮肤组织miR-125a-3p表达;qRT-PCR、Western blot检测皮肤组织叉头盒蛋白M1(FOXM1)mRNA和蛋白表达。分离培养银屑病大鼠角质形成细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-125a-3p与FOXM1的靶向关系;分别抑制或过表达miR-125a-3p以及过表达miR-125a-3p基础上过表达FOXM1,检测细胞miR-125a-3p、FOXM1mRNA和蛋白表达以及细胞培养上清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,银屑病组大鼠皮肤组织miR-125a-3p表达降低,PASI评分、Baker评分、IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及FOXM1mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与银屑病组、miR-NC组比较,miR-125a-3p组大鼠皮肤组织miR-125a-3p表达升高,PASI评分、Baker评分、IL-6、IL-1β、TNF-α水平以及FOXM1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。miR-125a-3p与FOXM1存在靶向关系。抑制miR-125a-3p表达后,细胞FOXM1 mRNA和蛋白表达、细胞活力以及细胞培养上清中IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05),过表达miR-125a-3p则作用相反;过表达FOXM1可减弱过表达miR-125a-3p对细胞活力、凋亡率及炎症反应的影响。结论:miR-125a-3p在银屑病大鼠皮损组织中低表达,其过表达可能通过靶向下调FOXM1抑制角质形成细胞增殖并促进其凋亡,改善银屑病大鼠皮肤损伤,减轻炎症反应。

针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织miR-29a-3p、miR-29b-3p表达的影响

目的观察针刺干预72 h后脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠缺血侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p的表达,探讨针刺促CIRI修复的机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组10只,造模组大鼠使用线栓法制备CIRI模型,假手术组只剥离血管不插入线栓;假手术组和模型组只捆绑不针刺,针刺组捆绑后针刺“大椎”“百会”“水沟”穴,一天治疗两次,共治疗7次。采用Garcia评分法对神经功能进行评定,TTC染色法检测脑梗死面积比,qRT-PCR法检测缺血侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p的表达。结果干预前与假手术组比较,造模组Garcia评分显著降低(P<0.01),脑梗死面积比显著增加(P<0.01),患侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p表达量降低(P<0.05,P<0.01);干预72h后与模型组比较,针刺组Garcia评分明显上升(P<0.01),脑梗死面积比显著下降(P<0.01),患侧海马组织miR-29a-3p、miR-29b-3p的表达量明显增加(P<0.01)。结论针刺可减少CIRI大鼠缺血侧脑梗死面积、改善神经功能损伤、发挥脑保护作用,可能与干预72h后上调缺血侧海马区miR-29a-3p、miR-29b-3p表达有关。

miR-146a-3p抑制胰岛素样生长因子1表达调控星形胶质细胞增殖、迁移和凋亡

背景:mi R-146a-3p水平改变是大多数神经系统疾病发病机制中的常见事件,mi R-146a-3p调节星形胶质细胞的具体机制尚未被研究。目的:验证mi R-146a-3p通过胰岛素样生长因子1调控星形胶质细胞的增殖、迁移和凋亡。方法:将12只SD大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,每组6只。术后2周对大鼠脊髓组织进行了RNA-Seq测序分析,筛选出差异基因(log2FC>2),同时挑选出Genecards数据库中脊髓损伤相关基因(Score>20),再通过Targetscan预测mi R-146a-3p的靶基因,取这3个基因集交集,筛选出胰岛素样生长因子1为其中一个重要的目的基因。q PCR、Western blot和免疫组化分析脊髓组织中胰岛素样生长因子1的表达水平。将原代星形胶质细胞分为NC组、NC-mimics组和mi R-146a-3p mimics组,用Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡情况、CCK-8法检测细胞增殖情况、Transwell法检测细胞的迁移能力。结果与结论:脊髓损伤组大鼠脊髓组织中mi R-146a-3p的表达较假手术组下降(P<0.05),胰岛素样生长因子1的表达较假手术组上升(P<0.05)。与NC组和NC-mimics组比较,mi R-146a-3p mimics组星形胶质细胞凋亡率增加(P<0.01),增殖能力下降(P<0.01),迁移数量减少(P<0.01)。结果表明,脊髓损伤后脊髓组织中mi R-146a-3p表达量下降,胰岛素样生长因子1表达量上升;在星形胶质细胞中mi R-146a-3p靶向调节胰岛素样生长因子1抑制星形胶质细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。