COX-2、G-17、miR-92a表达及幽门螺杆菌感染与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、胃泌素17(G-17)、miR-92a表达及幽门螺杆菌(Hp)感染与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性。方法选取2021年1月至2022年12月在四川绵阳四○四医院就诊的结直肠息肉患者62例(息肉组),结直肠癌患者48例(肿瘤组),检查两组组织COX-2、外周血G-17、粪便miR-92a表达以及幽门螺旋杆菌感染情况,分析其与结直肠息肉、结直肠癌发生的相关性。结果肿瘤组COX-2阳性表达率和Hp感染率分别为68.75%和75.00%,明显高于息肉组(P<0.05);肿瘤组G-17和miR-92a相对表达量分别为(25.56±7.76)pmol/L和(1.94±0.43),明显高于息肉组(P<0.05);息肉最大直径≥10mm患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为41.94%、(22.42±5.28)pmol/L、(1.29±0.25)和38.71%,明显高于息肉最大直径<10mm患者(P<0.05);息肉多发患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为45.83%、(23.12±5.14)pmol/L、(1.33±0.23)和54.17%,明显高于息肉单发患者(P<0.05);多发肿瘤患者G-17和miR-92a相对表达量分别为(30.72±6.00)pmol/L和(2.12±0.33),明显高于单发肿瘤患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者COX-2阳性表达率、G-17、miR-92a相对表达量和Hp感染率分别为100.00%、(29.60±6.80)pmol/L、(2.15±0.44)和100.00%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);息肉组Hp感染患者COX-2阳性表达率、G-17和miR-92a相对变量分别为56.25%、(23.42±5.65)pmol/L和(1.34±0.21),明显高于无Hp感染患者(P<0.05);肿瘤组Hp感染患者COX-2阳性表达率、G-17和miR-92a相对变量分别为83.33%、(27.12±5.109)pmol/L和(2.12±0.26),明显高于无Hp感染患者(P<0.05)。结论COX-2、G-17、miR-92a表达及Hp感染与结直肠息肉、结直肠癌临床特征有关,同时Hp感染可提高COX-2、G-17、miR-92a表达。

miR-17～92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中的表达及意义

目的检测宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中miR-17～92基因簇的表达，初步探讨miR-17～92基因簇与妇科肿瘤发生的关系。方法利用实时定量PCR方法配对检测Hela／Siha、Ishikawa／HEC-1A、H0—8910／HO．8910PM、SKOV3／SK0v3．TR30／SKOV3-DDP、COCl／COCl-DDP和CAOV3、OVCAR3中miR-17—92基因簇的表达水平；应用miRWalk数据库、nfiR2Subpath数据库和KEGGpathway功能聚类分析miR-17～92基因簇调控的靶基因及参与的与肿瘤相关的信号通路。结果与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304相比，miR-17～92基因簇在宫颈癌细胞系Hela与Siha中均呈下调表达（F=9．86，P〈0．001）；在子宫内膜癌细胞系Ishikawa与HEC-1A中均呈上调表达（F=10-35，P〈0．005）；与人正常卵巢细胞系IOSE386相比，miR-17～92基因簇在卵巢癌细胞系HO-8910、HO-8910PM、COCl、COCl／DDP、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、SKOV3-TR30、SKOV3／DDP均呈上调表达（F=12．64，P〈0．001）。，预测得出miR-17～92基因簇的靶基因为ABCAJ、ARHGAP21、BAP1、C100ff46、CCND1、CD4等共30个；通过miR2Subpath数据库富集分析得出miR-17—92基因簇参与的生物学过程共8个，KEGGpathway分析得出miR-17～92基因簇参与的信号通路共11条。结论miR-17～92基因簇在宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌多种细胞系中表达，且在生物学行为不同的同一肿瘤细胞系中存在差异表达。miR-17～92基因簇可能通过相关的靶基因和信号通路参与宫颈癌、子宫内膜癌与卵巢癌的发生、发展并影响其生物学行为。

miR-17-92基因簇microRNAs对哺乳动物器官发育及肿瘤发生的调控

microRNAs(miRNAs)是近年发现的一种高度保守的非编码小RNA,它们通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解,在转录后水平调控基因的表达,参与调控哺乳动物多个器官的发育过程和人类疾病的发生。miR-17-92基因簇是一个高度保守的基因簇,编码miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1等7个miRNAs。大量证据表明,miR-17-92基因簇miRNAs参与了心、肺、免疫系统的发育、血管生长及前脂肪细胞的分化等过程。此外,miR-17-92基因簇miRNAs在多种肿瘤中高表达,能作为致癌基因诱发淋巴瘤和血管化肿瘤的发生,但它也可以作为抑癌基因抑制乳腺癌细胞的增殖。文章对miR-17-92基因簇miRNAs在哺乳动物器官发育及肿瘤发生中的作用进行综述。

miR-20a在妇科常见恶性肿瘤中的作用机制

宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌作为妇科最常见的三大恶性肿瘤,其发病率近年来在各年龄段中呈上升趋势,已严重威胁我国女性健康。尽管多种靶向药物的应用已使该类患者的生存期明显延长,但其仍是一类无法被精准诊断和治疗的疾病。miR-17-92基因簇作为最早被确定为癌基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)家族,其作用机制一直被广泛关注。miR-20a是miR-17-92基因簇中的一员,可通过降低或上调表达的方式发挥转录后调控功能,进而影响下游基因通路,调控恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,并最终实现恶性肿瘤的发生及进展。根据目前研究进展,miR-20a在宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌中表达特异性升高通常与疾病的恶性进展有关,综述miR-20a在妇科常见三大恶性肿瘤发病机制中作用的最新研究。

鸡miR-17-92基因簇上游调控区功能分析

miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在细胞增殖、分化、凋亡、动物发育以及肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇的转录调控已有深入研究,但该基因簇在鸡等鸟类中的转录调控研究还未见报道,主要原因在于鸟类miR-17-92基因簇上游的基因组序列都存在一个gap,且该基因簇启动子的位置和序列也还不清楚。为此,本研究采用染色体步移的方法获得鸡miR-17-92基因簇上游gap区序列,并采用生物信息学分析和报告基因及截短突变技术开展该gap区的功能分析。染色体步移分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游gap区全长1704 bp,GC含量达80.11%。生物信息学分析显示,鸡miR-17-92基因簇上游gap区内1段200 bp的序列与人、牛、小鼠等9种动物miR-17-92基因簇上游序列保守性较高,且该区域为人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇宿主基因的核心启动子区。将克隆的gap区序列插入pGL3 basic荧光素酶报告基因载体,构建成启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)。荧光素酶报告基因活性分析表明,p GL3-c MIR17HG(-4228/-2506)报告基因的活性是pGL3 basic空载体活性的417倍,证明所克隆的gap区片段是鸡miR-17-92基因簇宿主基因的启动子。为进一步分析该启动子的结构和功能,构建gap区片段的5'端缺失突变(缺失448 bp)和3'端缺失突变(缺失894 bp)的荧光素酶报告基因载体。与pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)相比,5'端和3'端缺失突变分别使启动子报告基因活性降低19.82%和60.14%。这些数据提示,鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的重要调控区位于-3400/-2506。本研究结果为进一步开展鸡miR-17-92基因簇的转录调控奠定了基础。

鸡mir-17-92基因簇的结构、功能及其调控

mir-17-92基因簇(mir-17-92cluster)是脊椎动物的一个保守miRNA基因簇,在哺乳动物细胞增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中起重要的调控作用。同时,mir-17-92基因簇又是一个癌基因,在多种肿瘤中表达。尽管对mir-17-92基因簇的研究非常广泛,但其作用机制还不完全清楚。鸡mir-17-92基因簇的结构组成特点、功能及其作用机制尚未见研究报道。该文根据同一miRNA基因簇的miRNAs在功能上相关的特点,以鸡mir-17-92基因簇序列为研究对象,采用生物信息学研究方法和手段,开展了鸡mir-17-92基因簇的基因组结构、miRNAs序列组成、靶生物学过程和信号通路以及miRNAs结合位点分布特点等分析研究。结果发现,鸡mir-17-92基因簇调控MAPK、Wnt和TGF-β等多个重要细胞信号通路;miRNA结合位点分布分析显示,该miRNA基因簇多个成员共同作用于同一个靶基因,提示该基因簇的miRNAs成员以组合和协同的方式调控靶基因。该研究为深入了解mir-17-92基因簇如何调控癌症和发育中的关键细胞过程奠定了基础。

miR-17-92基因簇与肿瘤

微小RNA(miRNA)是近年来新发现的与肿瘤的发生发展密切相关的一类RNA。它可通过调控其靶标基因参与的信号通路,影响肿瘤的发生和发展,发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能,因此miRNA失调在肿瘤中起重要作用。较多的研究发现,miR-17-92簇与肿瘤的发生密切相关,具有癌基因和抑癌基因双重功能。本文就miR-17-92簇在肿瘤中的作用机制及功能作一综述。

miR-17-92基因簇在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨人骨肉瘤组织和邻近正常骨组织中mi R-17-92基因簇的表达情况及其临床意义。方法:运用Q-PCR法检测63例骨肉瘤组织及邻近部位正常骨组织中mi R-17-92基因簇的表达水平,并分析mi R-17-92基因簇表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:mi R-17-92在所有组织中均有表达,且在肿瘤组织中表达明显高于在正常组织中的表达(P<0.05),另外,mi R-17-92基因簇高表达患者预后更差,差异有统计学意义(P=0.027)。结论:mi R-17-92基因簇在骨肉瘤组织和邻近正常骨组织中表达存在差异性,可能在骨肉瘤发生、发展过程中起重要作用,有望成为骨肉瘤患者预后一种新的指标。

miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性

背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。

miR-17-92基因簇在肿瘤发生发展中作用的研究进展

肿瘤是威胁全世界人类健康和影响社会经济的重要因素.近年来,随着经济的发展,肿瘤的发病率呈明显上升趋势,但是其病因尚未完全阐明.越来越多的证据显示肿瘤的发生和遗传因素有关,随着病理生理学和遗传学的发展,许多学者认为生物标志物可以预测癌症甚至指导临床治疗.微小RNA(microRNA,miRNA)是非编码小分子RNA,在发育、生理、病理过程以及肿瘤发生等环节中起着重要的调节作用.miR-17-92基因簇是研究较为深入、最有特点的miRNA,被认为是原癌基因miRNA的代表,在多种肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用.本文就miR-17-92基因簇在肿瘤发生发展中的作用及功能进行综述.

miR-17-92启动子区多态性在广西人群中分布及与淋巴细胞关系

目的:研究广西人群中miR-17-92基因簇启动子区rs9515692C/T和rs1352743A/G多态性分布特点和在不同人群间分布差异,探讨其多态性和淋巴细胞的关系。方法:采取多重单碱基延伸法(SNaPshot)和DNA测序法进行基因分型。运用流式细胞仪检测淋巴细胞数。数据分析利用SPSS17.0统计学软件。结果:2位点基因型及等位基因频率在广西人群的不同性别间差异无统计学意义(P>0.05)。rs9515692C/T和rs1352743A/G基因型及等位基因频率与国际人类基因组单体型图计划(HapMap)公布的欧洲、日本和非洲人群的比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rs9515692C/T和rs1352743A/G基因多态性在不同人群中存在着不同程度差异。此外,rs9515692C/T多态性与B淋巴细胞数有关。

mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药的关系

目的探讨mir-17-5p、mir-92a、let-7b表达水平与非小细胞肺癌顺铂耐药关系。方法以人非小细胞肺癌细胞系A549及其耐药株A549/DDP为研究对象,采用RT-PCR法检测mir-17-5p、mir-92a及let-7b在细胞中的表达水平,采用cck8检测其细胞存活情况,采用细胞克隆平台方法,检测转染前后细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡情况。结果(1)A549/DDP细胞mir-17-5p的表达水平是A549细胞的2.11±0.25倍(P<0.05);A549/DDP细胞mir-92a的表达水平是A549细胞的7.40±1.05倍(P<0.05);而A549/DDP细胞let-7b的表达水平是A549细胞的(26.54±2.90)%(P<0.05);(2)A549转染mir-17-5pmimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后对顺铂的敏感性下降(P<0.05);A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后对顺铂的敏感性增加(P<0.05);(3)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞形成克隆集落数量数量多于对照组(P<0.05);而A549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞形成克隆集落数量数量少于对照组(P<0.05);(4)A549转染mir-17-5p mimic,mir-92a mimic以及let-7b inhibitor后,细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);而a549/ddp转染mir-17-5p inhibitor,mir-92a inhibitor以及let-7b mimic后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论 Mir-17-5p、mir-92a表达水平升高,let-7b表达水平下降,可以促进肺癌细胞增殖,抑制其凋亡以及使肺癌细胞对顺铂敏感性下降。

miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对胃癌细胞增殖与侵袭的抑制作用

目的:探讨miR-17-92基因簇反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖及侵袭的影响。方法:合成miR-17-92基因簇中miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸,通过实时荧光定量PCR验证miR-17、miR-18a、miR-20a反义寡核苷酸对SGC-7901细胞的miR-17、miR-18a、miR-20a的抑制效果,然后利用MTT、Transwell检测抑制表达后对细胞增殖及侵袭的影响。结果:miR-17、miR-18a、miR-20a的反义寡核苷酸能够抑制对应miRNA的表达,同时抑制了胃癌细胞的增殖与侵袭。结论:miR-17-92基因簇可能在胃癌发生发展中起到了癌基因的作用。

miR-17-92基因簇在食管鳞癌的表达及其临床意义

目的探讨miR-17-92基因簇在食管鳞癌中的表达,并分析其与肿瘤分化程度及预后的关系。方法半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR方法分别检测58例ESCC组织和来自同一患者的邻近正常食管组织中miR-17-92的表达。采用Mann Whitney-U非参数检验和卡方检验比较低表达组和高表达组的临床病理特征和预后指标,采用Kaplan-Meier法分析miR-17-92表达水平与食管鳞癌患者生存时间之间的关系。结果 miR-17-92在所有的组织中都有表达,且在食管鳞癌组织中miR-17-92的表达高于正常食管组织(P<0.001)。miR-17-92在TNM分期越高、分化程度越低的肿瘤组织中表达越高(分别是P=0.032,P=0.035)。另外,miR-17-92高表达的患者发生转移和死亡的风险明显增高,预后更差(P=0.038)。结论 miR-17-92基因簇在食管鳞癌组织和邻近正常食管组织中表达存在差异性,可能在食管鳞癌发生、发展过程中起重要作用,有望成为食管鳞癌患者预后一种新的指标。

miR-17-92基因簇在胃癌组织中的表达和临床意义

目的研究miR-17-92基因簇在人胃癌组织中的表达情况和临床意义,并探讨过表达miR-17-92对胃癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织及其对应的癌旁正常组织中的表达差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征的相关性。运用含过表达miR-17-92质粒的慢病毒上清感染MGC-803细胞,并用嘌呤霉素筛选出单克隆细胞,进一步扩增得到稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株。采用xCelligence系统实时动态监测MGC-803-miR-17-92胃癌细胞及其对照组细胞的生长情况及侵袭能力。运用Western blot法检测两组细胞中AKT、ERK1/2信号通路相关分子及Integrinβ1蛋白的表达。通过明胶酶谱实验检测两组细胞上清培养液中MMP-2和MMP-9的活性。结果miR-17-92基因簇各亚单位在胃癌组织中的表达均较癌旁正常组织显著升高。miR-17-92基因簇各亚单位的表达水平均与胃癌患者的TNM分期呈正相关,其中miR-17、miR-20的表达水平与胃癌患者的肿瘤分化程度呈正相关,miR-19a、miR-19b、miR-92的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小呈正相关。成功构建了稳定过表达miR-17-92的MGC-803胃癌细胞株。MGC-803-miR-17-92细胞的生长速度明显快于MGC-803-control细胞。两组细胞中总的AKT蛋白表达水平差异无统计学意义,然而MGC-803-miR-17-92细胞中AKT蛋白在苏氨酸308位点的磷酸化水平较MGC-803-control细胞显著升高,而其在丝氨酸473位点的磷酸化水平在两组细胞中差异无统计学意义。两组细胞中总的ERK1/2蛋白表达水平差异无统计学意义,然而MGC-803-miR-17-92细胞中磷酸化的ERK1/2蛋白表达显著高于对照组MGC-803-control细胞。MGC-803-miR-17-92细胞的侵袭能力显著强于MGC-803-control细胞。MGC-803-miR-17-92细胞中Integrinβ1的蛋白表达水平及MMP-2的活性显著高于MGC-803-control细胞。结论miR-17-92基因簇在人胃癌组织中的表达水平较癌旁正常组织显著升高,并与胃癌患者的肿瘤大小、分化程度及TNM分期呈正相关。过表达miR-17-92能够显著加快MGC-803细胞的生长,该过程与AKT及ERK1/2信号通路的活化相关。过表达miR-17-92能够显著增强MGC-803细胞的侵袭能力,其机制与Integrinβ1的表达上调及MMP-2的活性增强有关。

miR-17-92簇高表达与恶性肿瘤患者预后关系的Meta分析

目的：采用Meta分析评估miR-17-92簇高表达在肿瘤患者预后中的价值。方法：检索Web of Science、Pub Med、EMBASE数据库从建库至2015年10月1日关于miR-17-92簇成员高表达与恶性肿瘤患者预后关系的英文文献,提取关键数据,计算合并风险比（hazard ratio,HR）及其95%置信区间（confidence interval,CI）。结果：共纳入39篇文献,包含4 908例患者。miR-17-92簇的高表达与恶性肿瘤患者总生存率（HR=1.83,95%CI：1.58-2.12,P=0.000）低有关,并且miR-17-92簇高表达的肿瘤患者的无病生存率（HR=1.80,95%CI：1.43-2.26,P=0.000）、无进展生存率（HR=1.83,95%CI：1.11-3.02,P=0.018）及肿瘤特异性生存率（HR=1.59,95%CI：1.04-2.42,P=0.032）均降低;然而无复发生存率的合并风险比无统计学意义（P=0.539）。结论：miR-17-92簇高表达与恶性肿瘤患者的不良预后有关,有望成为新型肿瘤预后标志物。

广西人群miR-17-92基因簇启动子区rs1491033A/C和rs1813389A/G多态性研究

目的探讨广西正常人群中mi R-17-92基因簇启动子区的rs1491033A/C位点和rs1813389A/G位点多态性分布特点,比较其在不同人群间的分布差异。方法采取多重单碱基延伸法(SNa Pshot)和DNA测序结合的方法对275例广西人群rs1491033A/C和rs1813389A/G位点进行基因分型检测,并分析其基因型和等位基因频率在不同性别及组间分布差异。结果 rs1491033A/C存在AA、AC、CC 3种基因型,分布频率分别为21.1%、53.1%、25.8%,其基因型和等位基因与人类基因组计划项目公布的欧洲和非洲人群的差异有统计学意义(P<0.05);rs1813389A/G存在AA、AG、GG 3种基因型,分布频率分别为40.0%、50.2%、9.8%,其基因型和等位基因频率与欧洲、北京、日本和非洲人群的差异均有统计学意义(P<0.05);而两位点基因型及等位基因频率在广西人群的不同性别间均无统计学差异(P>0.05)。结论 mi R-17-92基因簇rs14911033A/C和rs1813389A/G位点多态性在不同种族和地区间存在着不同程度差异。

鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的甲基化及其功能分析

为研究鸡脂肪组织miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子的甲基化情况,实验以东北农业大学高、低腹脂双向选择品系肉鸡为实验材料,采用Sequenom MassARRAY法检测鸡腹部脂肪组织MIR17HG启动子区CpG岛的甲基化;利用CpG甲基转移酶处理MIR17HG启动子片段,采用报告基因技术检测DNA甲基化对MIR17HG启动子活性的影响。结果表明:高、低脂鸡脂肪组织中MIR17HG启动子区都存在一定程度的甲基化,其中2周龄低脂鸡脂肪组织MIR17HG启动子区的整体甲基化程度显著高于高脂鸡(P<0.05),4个CpG位点(25、26、27、28)的甲基化在高、低脂鸡脂肪组织间差异均显著(P<0.05);3周龄高、低脂鸡脂肪组织中MIR17HG启动子区的甲基化程度无显著差异(P>0.05);7周龄低脂鸡脂肪组织MIR17HG启动子的2个CpG位点(41和42)的甲基化程度显著低于高脂鸡(P<0.05)。总体看,高、低脂鸡脂肪组织MIR17HG的启动子甲基化随年龄增长呈下降趋势;体外甲基化分析发现,DNA甲基化抑制MIR17HG启动子活性。

鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区启动子活性鉴定与分析

文章采用基因定点突变和报告基因技术作A/T富集区启动子鉴定和转录调控分析,研究鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区是否具有启动子活性。PromPredict预测分析提示miR-17-92基因簇上游-388^-444 bp处可能是启动子区域。转录因子结合位点分析发现,A/T富集区存在3个E2F1潜在结合位点,分别位于miR-17-92基因簇上游-1 273 bp(结合位点1)、-1 186 bp(结合位点2)和-753 bp(结合位点3)处。报告基因活性分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游A/T富集区具有启动子活性,其中miR-17-92基因簇上游-440/-1区域启动子活性最强。共转染分析显示,转录因子E2F1极显著抑制该A/T富集区启动子活性(P<0.01);进一步定点突变分析表明E2F1通过E2F1结合位点1和2抑制A/T富集区启动子活性。报告基因分析发现,与对A/T富集区启动子作用不同,E2F1促进miR-17-92基因簇宿主基因(MIR17HG)启动子活性。文章首次发现鸡miR-17-92基因簇上游存在一个新的转录调控区,对揭示鸡miR-17-92基因簇转录调控具有重要意义。

鸡miR-17-92基因簇靶基因ZFPM2的鉴定及功能分析

miR-17-92基因簇在哺乳动物的许多生理和病理过程中发挥重要作用。本实验室前期研究发现,miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞的增殖,但其作用机制尚不清楚。为了揭示miR-17-92基因簇促进鸡前脂肪细胞增殖的作用机制,本研究采用CCK-8细胞增殖检测方法分析干扰ZFPM2对前脂肪细胞的影响,结果发现,干扰ZFPM2能显著促进鸡前脂肪细胞的增殖(P<0.01);与CCK-8分析结果相一致,干扰ZFPM2可致使细胞增殖标志基因PCNA、Ki67、Cyclin D1的mRNA表达量明显升高(P<0.01或P<0.05)。进一步对鸡ZFPM2基因进行生物信息学分析,发现该基因mRNA的3′UTR有两个区域存在miR-17-92基因簇4个成员(miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b)的潜在结合位点。为验证miR-17-92基因簇是否靶作用于鸡ZFPM2基因,构建了鸡ZFPM2基因3′UTR区的荧光素酶报告基因载体(野生型)(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-WT)及其突变型的荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-MUT)。报告基因活性分析显示,过表达mi-17-92基因簇能极显著地抑制野生型ZFPM2的报告基因活性(P<0.01);转染miR-17-5p、miR-20a及miR-19a的抑制剂均能显著地提高野生型ZFPM2报告基因的活性(P<0.01或P<0.05),但这些抑制剂对突变型ZFPM2报告基因的活性无明显影响。q RT-PCR分析发现,miR-17-5p、miR-19a及miR-20a的抑制剂能显著提高内源性ZFPM2基因mRNA的表达水平(P<0.01或P<0.05)。共转染分析发现,尽管差异不显著,但miR-17-5p和miR-19a的抑制剂均倾向于降低ZFPM2干扰片段的促细胞增殖作用。本研究结果表明:miR-17-92基因簇成员miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b靶作用于ZFPM2;miR-17-92基因簇至少部分通过抑制ZFPM2基因表达从而促进鸡前脂肪细胞的增殖。