miR-18a-5p靶向调控RORA在结直肠癌增殖进展中的作用及临床意义

目的探讨miR-18a-5p和RORA在结直肠癌增殖中的作用机制及临床意义。方法采用qRT-PCR、FISH、IHC方法检测miR-18a-5p和RORA在结直肠癌细胞和组织中的表达情况。通过EdU和CFSE实验检测细胞增殖能力、FCM实验检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。进一步通过双荧光素酶报告实验、细胞功能挽救实验、RT-PCR和Western blot实验验证miR-18a-5p对RORA的靶向调控作用。最后运用生物信息学探究miR-18a-5p调控RORA促进结直肠癌恶性增殖和侵袭进展的分子机制。结果miR-18a-5p在结直肠癌组织和细胞中高表达(P<0.05),并且能够促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。此外RORA是miR-18a-5p的靶基因,过表达RORA能够有效消减miR-18a-5p促结直肠癌细胞恶性生物学表型的作用(P<0.05)。RORA在结直肠癌组织中的表达与CD8+T细胞浸润及其表面标志蛋白CD8A的表达显著正相关(P<0.05)。结论miR-18a-5p可能通过靶向调控RORA促进结直肠癌的进展;miR-18a-5p/RORA调控通路可能参与了结直肠癌免疫微环境的塑造,是结直肠癌的潜在治疗靶点。

齐墩果酸通过miR-18a-5p/STK4轴抑制白血病K562细胞恶性进展

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗药物和靶点十分关键。有研究表明,miRNAs与慢性粒细胞白血病在内的多种肿瘤有密切联系,齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对白血病细胞有较好的抑制效果。通过对转录物组测序结果发现,齐墩果酸可以显著上调丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4(serine/threonine-protein kinase 4,STK 4)的水平,而miR1a-5p是STK 4的靶miRNA。因此,本文旨在探究齐墩果酸是否可以通过miR-18a-5p/STK4影响K562细胞恶性进展。K562细胞经齐墩果酸处理后差异表达基因富集在凋亡相关通路上。EdU实验和CCK-8实验结果发现,齐墩果酸降低K562细胞增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR,免疫荧光和Western印迹结果显示,齐墩果酸处理后,K562细胞中STK 4蛋白质水平表达显著上调(P<0.05),miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在细胞中转染miR-18a-5p mimics,能显著抑制STK 4的表达(P<0.05);转染miR-18a-5p inhibitor能显著增加STK 4的表达(P<0.05)。活性氧(reactive oxygen species、ROS)检测和线粒体膜电位检测结果显示,齐墩果酸可以促进K562细胞中ROS的增加,降低线粒体膜电位。过表达STK 4后,与Vector组相比,细胞的线粒体膜电位下降;敲降STK 4可以逆转齐墩果酸组导致的线粒体膜电位下降。流式细胞术检测显示,齐墩果酸能明显促进细胞凋亡的发生,而转染miR-18a-5p mimics后凋亡率显著下调(P<0.05);过表达STK 4可以促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转化,而同时转染miR-18a-5p mimics可以抑制这一现象。我们的研究结果证实,齐墩果酸可以通过维持miR-18a-5p的低表达和保持STK 4的高表达状态来促进K562细胞的凋亡。

circDCUN1D4调节miR-18a-5p/FBP1轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的探讨环状RNA(circRNA)DCUN1D4调节微小RNA(miR)-18a-5p/果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法选取人肺癌细胞系(H1975、H1650、A549、SPCA-1)和人正常肺表皮细胞(HPL-1),qRT-PCR检测各种细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平。取对数生长期的A549细胞并分为空白组、circDCUN1D4过表达质粒(circDCUN1D4)组、过表达质粒阴性对照(NC)组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物阴性对照(circDCUN1D4+mimics NC)组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物(circDCUN1D4+miR-18a-5p mimics)组。CCK-8法检测各组A549细胞活力,流式细胞术检测各组A549细胞凋亡水平,qRT-PCR检测各组A549细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平,Western blot检测各组A549细胞中FBP1、caspase-3、Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)及程序性死亡分子配体-1(PD-L1)表达水平,双荧光素酶实验验证miR-18a-5p分别与circDCUN1D4、FBP1的靶向关系。结果与HPL-1细胞相比,人肺癌细胞系中circDCUN1D4、FBP1 mRNA表达显著下降(P<0.05),miR-18a-5p表达显著增加(P<0.05)。miR-18a-5p分别与circDCUN1D4、FBP1存在靶向关系。与空白组、NC组相比,circDCUN1D4组细胞24 h和48 h的OD值、Ki67、PCNA、miR-18a-5p、PD-L1表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、circDCUN1D4、FBP1、caspase-3表达显著增加(P<0.05);过表达miR-18a-5p逆转了circDCUN1D4对肺癌细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论circDCUN1D4过表达可以促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞增殖及免疫逃逸,其作用机制可能与调控miR-18a-5p/FBP1轴有关。

lncRNA MGP-AS2通过miR-18a/Wnt/β-catenin轴抑制膀胱癌的进展

目的探讨膀胱癌组织中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)MGP-AS2表达与膀胱癌患者生存期的关系,研究MGP-AS2对膀胱癌细胞生物学功能的影响及可能机制。方法采用TANRIC数据库分析膀胱癌组织中MGP-AS2表达及其与患者生存期的关系。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测MGP-AS2在膀胱癌细胞系中的表达水平。将MGP-AS2过表达质粒和阴性对照(negative control,NC)质粒分别转染至膀胱癌5637细胞,分别作为MGP-AS2组和NC组。平板克隆实验、细胞划痕实验以及Transwell实验分别分析过表达MGP-AS2对膀胱癌5637细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验验证MGP-AS2和miR-18a之间的靶向结合。TANRIC数据库分析膀胱癌组织中MGP-AS2和miR-18a表达的相关性。RT-qPCR法检测过表达MGP-AS2对膀胱癌5637细胞中miR-18a表达的影响。Western blot法检测过表达MGP-AS2对膀胱癌5637细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达的影响。结果膀胱癌组织中MGP-AS2表达水平显著低于正常膀胱组织(P<0.01)。MGP-AS2高表达患者的总生存期和无病生存期均显著长于MGP-AS2低表达患者(P<0.01)。膀胱癌细胞系中MGP-AS2表达水平均低于SV-HUC-1细胞(P<0.05),MGP-AS2表达最低的膀胱癌细胞是5637细胞(P<0.01)。与NC组比较,过表达MGP-AS2可显著抑制膀胱癌5637细胞的增殖、迁移以及侵袭能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实MGP-AS2可靶向结合miR-18a(P<0.01)。与NC组比较,过表达MGP-AS2可下调miR-18a的表达(P<0.01)。过表达MGP-AS2后,膀胱癌5637细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白均下调(P<0.01)。结论膀胱癌中MGP-AS2呈低表达,MGP-AS2表达量与膀胱癌患者的预后相关,MGP-AS2可能通过吸附miR-18a抑制Wnt/β-catenin信号通路转导,从而抑制膀胱癌的进展。

miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建

【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系,为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中,DNA测序鉴定;将构建好的载体转染293T细胞,获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体,感染人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系,PCR及western blot鉴定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR-18a干扰载体及过表达载体,滴度均为3×10~8TU/mL;转染miR-18a抑制表达的慢病毒载体的CNE1和CNE2中ATM表达增高;与对照病毒转染相比,转染miR-18a过表达慢病毒载体的CNE1(20.3倍,P<0.01)和CNE2(122.5倍,P<0.01)中miR-18a表达显著增高,靶蛋白ATM表达下调。【结论】成功构建人miR-18a慢病毒抑制表达和过表达载体,并获得相应的慢病毒稳转人鼻咽癌细胞株。

MiR-18b-5p对大肠癌PTEN/PI3K/Akt2信号通路的调控

目的:探讨miR-18b-5p对大肠癌PTEN/PI3K/Akt2信号转导通路的调控。方法:qRT-PCR方法检测33例大肠癌患者癌组织中miR-18b-5p表达水平,将患者临床病理特征与癌组织miR-18b-5p表达水平进行独立样本t检验和多元线性回归分析。应用microrna.org预测miR-18b-5p靶基因,miR-18b-5p类似物、抑制物转染肠癌细胞SW480及HCT116,qRT-PCR检测细胞PTEN、PI3K、Akt2 mRNA表达水平。结果:在大肠癌患者癌组织中,miR-18b-5p表达水平显著增高,为癌旁组织的3.6倍(P<0.01),其表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关。Microrna.org预测PTEN可能是miR-18b-5p的靶基因,大肠癌细胞转染类似物后PTEN含量明显降低,其下游基因PI3K、Akt2表达增高。结论:miR-18b-5p下调抑癌基因PTEN表达,诱导PI3K/Akt2信号转导通路持续活化,促进了大肠癌的发生发展。

MiR-18a-5p通过介导自噬加重同型半胱氨酸诱导的心肌损伤

目的:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平是心脑血管疾病的独立危险因素。MiR-18a-5p是微RNA(microRNA,miR)家族中的重要成员,与心血管疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-18a-5p对Hcy损伤心肌细胞的影响。方法:对H9c2细胞进行miR-18a-5p模拟物(mimic)/miR-18a-5p mimic阴性对照(negative control,NC)转染或与Hcy联合干预,另设未处理细胞作为对照组。采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)验证转染效率,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62、Bax、Bcl-2和Notch2的蛋白质表达水平,双荧光素酶报告分析检测miR-18a-5p与Notch2的相互作用。结果:与对照组相比,Hcy或转染miR-18a-5p mimic单独处理,或转染miR-18a-5p mimic/miR-18a-5p mimic NC与Hcy联合干预均显著降低H9c2细胞的活力,增加H9c2细胞的凋亡率和ROS的生成,上调Bax和Beclin1的蛋白质表达水平,下调Bcl-2、p62和Notch2的蛋白质表达水平,同时使LC3-Ⅱ/LC3-I值增加(均P<0.05)。与miR-18a-5p mimic NC和Hcy联合干预相比,miR-18a-5p mimic和Hcy联合干预的H9c2细胞上述指标的改变更显著,且2组之间差异有统计学意义(均P<0.05)。Notch2与miR-18a-5p存在靶向结合。结论:MiR-18a-5p通过增加心肌细胞内ROS的生成,诱导自噬和凋亡,加重Hcy诱导的心肌损伤。Notch2是miR-18a-5p的作用靶点。

MiR-18a通过靶定ATM调节白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性

目的:研究miR-18a调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性的分子机制。方法:构建稳定过表达miR-18a的HL-60-pc DNA3.1-miR-18a细胞系,检测其对VP-16和VCR的敏感性;构建ATM 3'UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-18a对ATM的靶向作用;Western blot检测过表达miR-18a的HL-60细胞内ATM的表达水平;siRNA敲减HL-60细胞中ATM水平,CCK-8检测细胞对VP-16和VCR的敏感性;在稳定过表达miR-18a的HL-60细胞内转染miR-18a inhibitor,Western blot检测ATM的表达水平,并检验细胞对VP-16和VCR的敏感性变化。结果:过表达miR-18a后,用相同浓度的VP-16和VCR处理时HL-60细胞存活率降低;荧光素酶活性检测表明,miR-18a能够抑制ATM的荧光素酶活性;过表达miR-18a后HL-60细胞内ATM的表达降低;敲减ATM后的HL-60细胞经VP-16和VCR处理后存活率降低;转染miR-18a inhibitor后,ATM表达水平显著上调,经VP-16和VCR处理的细胞存活率明显高于对照组。结论:miR-18a能够通过靶定ATM而调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR的敏感性。

术后结合替莫唑胺对神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的影响

目的:分析神经胶质瘤患者术后结合替莫唑胺对血清mi R-181b及mi R-497表达的影响。方法:将收治的76例神经胶质瘤术后患者随机分为A、B两组。其中A组(38例)采用司莫司汀方法治疗,B组(38例)采用司莫司汀联合替莫唑胺的方法治疗。观察比较两组患者的临床疗效,术后1、2、3年生存率,Karnofsky评分。同时收集患者治疗前、治疗后的血清样本,以检测mi R-181b及mi R-497表达的变化。结果:B组患者的客观有效率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组中位生存期以及术后1、2、3年生存率明显高于A组(P<0.05);B组术后的Karnofsky评分显著高于A组(P<0.05)。术后血清mi R-181b浓度明显提高[术后(162.34±51.79)fmol/L vs.术前(91.37±40.41)fmol/L,P<0.05];术后血清mi R-497明显提高[术后(166.23±53.68)fmol/L vs.术前(88.36±36.72)fmol/L,P<0.05]。结论:术后结合替莫唑胺能够提高神经胶质瘤患者血清mi R-181b及mi R-497的表达,延长患者生存期。

miR-18a和雌激素受体α在单发及多发子宫肌瘤中的表达

目的检测单发及多发子宫肌瘤组织中miR-18a及雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)的表达,探讨miR-18a与ERα的关系及2者在单发及多发子宫肌瘤发生中的作用。方法采用原位杂交法检测miR-18a在单发及多发子宫肌瘤组织石蜡切片中的表达;采用免疫组化法检测ERα在单发及多发子宫肌瘤组织石蜡切片的表达。采用相关分析研究miR-18a和ERα的表达相关性。结果多发子宫肌瘤组织中的ERα表达水平均明显高于单发子宫肌瘤组织(P<0.05);但miR-18a水平明显低于单发子宫肌瘤组织(P<0.05);相关分析结果表明,2者表达呈负相关(r单发=-0.4421,r多发=-0.4181)。结论多发性子宫肌瘤中miR-18a的表达更低,ERα表达更高。miR-18a可作为治疗多发性子宫肌瘤的新靶标。

miR-18a对结肠癌血管生成的影响

目的探讨miR-18a对结肠癌血管生成的影响及其机制。方法以用合成的miR-18a模拟物转染人结肠癌细胞系SW620细胞。应用MTT法检测过表达miR-18a对细胞增殖活性的影响。分别用稳转miR-18a的SW620细胞接种建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型。每周测量瘤体积。5周后麻醉处死裸鼠。免疫组化法检测增殖细胞核标志物Ki 67和血管内皮细胞标志物CD31的表达。应用Western blotting法检测血管生成相关的mTOR通路中mTOR下游靶蛋白S6K1和4E BP1的磷酸化情况,并检测肿瘤组织血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长凶子(VEGF)的表达。结果 miR-18a过表达显著降低SW620细胞的增殖能力(P<0.01)。并且,该基因对裸鼠人结肠癌移植瘤有明显的生长抑制作用,SW620组瘤体显著减小,抑瘤率达71.8%(P<0.01)。免疫组化检测显示,miR-18a显著抑制细胞增殖核抗原蛋白Ki-67(P<0.01)和血管内皮细胞标记物CD31(P<0.05)的表达。Western blot法检测显示,miR-18a显著抑制S6K(IP<0.01)和4E-BP(IP<0.05)的磷酸化,而且抑制肿瘤组织中HIF-1α(P<0.05)和VEGF蛋白(P<0.01)的表达。结论过表达miR-18a抑制结肠癌生长和血管生成,这可能与其抑制mTOR/VEGF通路有关,提示过表达miR-18a可能成为结肠癌治疗的新方法。

miR-18b对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-18b(miR-18b)对胃癌细胞系SGC-7901凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法 miR-18b inhibitor对SGC-7901细胞进行转染;流式细胞仪进行细胞凋亡检测;Western blot检测P53、Bcl-2的表达变化。结果在SGC-7901细胞中抑制miR-18b的表达,能够促进细胞凋亡,并能降低凋亡相关蛋白P53、Bcl-2的表达。结论 miR-18b在胃癌的发生、发展中起一定作用,其可能通过调节P53、Bcl-2的表达而影响细胞凋亡。

miR-18a表达在HPV感染及宫颈癌发生发展中的意义

目的研究宫颈脱落细胞中miR-18a的表达水平在人乳头状瘤病毒(HPV)感染及宫颈癌发生发展中的意义。方法收集2015年6月至2017年6月深圳市南山区妇幼保健院及广州南方医院门诊及住院患者宫颈脱落细胞标本,通过HPV DNA分型检测将宫颈脱落细胞标本分为HPV未感染组(NE-HPV)、低危型HPV感染组(LR-HPV)、高危型HPV感染组(HR-HPV),采用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测各组间miR-18a相对表达量;收集HR-HPV感染阳性的宫颈脱落细胞标本,依据病理检查结果分为宫颈上皮内瘤变(CIN)组及宫颈癌组各30例,对照组选取年龄、体重配对的30例宫颈上皮细胞正常无化生的标本,采用qRT-PCR检测各组间miR-18a相对表达量,分析miR-18a表达与HPV感染及宫颈癌发生发展的关系。结果 HR-HPV感染组宫颈脱落细胞中miR-18a相对表达量高于LR-HPV组与NE-HPV组,差异均有统计学意义(t值分别为11.144、18.482,均P<0.05);宫颈癌组、CIN组中miR-18a表达较对照组显著增高(t值分别为25.02、15.355,均P<0.05),但宫颈癌组与CIN组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线显示宫颈脱落细胞中miR-18a用于诊断CIN的曲线下面积(AUC)为0.699(95%CI:0.606～0.791,P<0.001),用于诊断宫颈癌的AUC为0.801(95%CI:0.724～0.879,P<0.001)。结论 HR-HPV感染者宫颈脱落细胞中miR-18a相对表达量明显升高,并与宫颈癌的发生发展密切相关。宫颈脱落细胞中miR-18a可能作为宫颈癌或癌前病变潜在标志物用于早期无创诊断。

肝癌患者血清miR-126、miR-155、miR-18b变化及其临床意义

目的探究肝癌患者血清miR-126、miR-155、miR-18b变化及其临床意义。方法选取120例HCC患者作为研究对象,另外选取同期120例肝脏良性病变患者作为对照组。采用荧光定量PCR法检测两组血清miR-126、miR-155、miR-18b水平,采用ROC曲线分析miR-126、miR-155、miR-18b水平与HCC患者早期诊断及预后评估的关系。结果HCC组血清miR-126指标水平低于对照组,且miR-155、miR-18b指标水平高于对照组(P<0.05);血清miR-126、miR-155、miR-18b对于HCC患者早期诊断的联合测定AUC(0.920)高于miR-126、miR-155及miR-18b的单独测定的AUC(0.780、0.869、0.741)(P<0.05);预后良好组血清miR-126指标水平高于预后不良组,且miR-155、miR-18b指标水平低于预后不良组(P<0.05);血清miR-126、miR-155、miR-18b对HCC患者的预后评估的联合测定AUC(0.854)高于miR-126、miR-155及miR-18b的单独测定的AUC(0.754、0.746、0.676)(P<0.05);年龄、肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移是HCC患者预后复发的影响因素(P<0.05);miR-155≥0.402(OR=29.371,P=0.000)、miR-18b≥0.344(OR=4.609,P=0.016)均为影响HCC患者预后的独立危险因素,miR-126≥0.431(OR=0.010,P=0.000)为影响HCC患者预后的有利因素。结论miR-126、miR-155、miR-18b联合检测可作为HCC早期诊断和预后评估的有效指标。

miR-18b-5p在肝癌早期筛查中的临床应用价值研究

目的 观察miR-18b-5p在肝癌早期筛查中的临床应用价值。方法 随机选择2021年1月~2021年12月确诊的肝癌患者90例,乙型肝炎患者90例,丙型肝炎50例,健康体检者90例作为研究对象。所有纳入研究患者均给予miR-18b-5p水平测定。冻存于-80℃的血液样本提取总RNA,qRT-PCR法检测miR-18b-5p表达,计算PCR的扩增的Ct,比较四组纳入研究人员的miR-18b-5p水平,肝癌组患者不同性别、年龄、分期、淋巴结转移、有无腹水患者的miR-18b-5p水平。通过ROC曲线评价PCR检测miR-18b-5p的在肝癌中诊断效能。结果 肝脏组患者miR-18b-5p水平高于乙型肝炎、丙型肝炎和对照组,乙型肝炎和丙型肝炎患者miR-18b-5p水平高于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05),但乙型肝炎和丙型肝炎组患者miR-18b-5p水平无明显差异(P> 0.05)。肝癌组患者根据不同病理特征分组,肿瘤大小超过5 cm患者的miR-18b-5p水平高于肿瘤大小<5 cm,TNM分期为Ⅲ期患者的miR-18b-5p水平高于Ⅰ+Ⅱ期水平,差异均具有统计学意义(P <0.05),但是不同性别、年龄以及是否合并肝硬化患者miR-18b-5p水平差异无统计学意义(P> 0.05)。通过ROC曲线评价PCR检测miR-18b-5p的在肝癌中诊断效能,其灵敏度为95.77%,特异度为87.23%。结论 miR-18b-5p对于肝癌的诊断、鉴别诊断具有重要的应用价值,尤其是对于肝癌的早期筛查意义重大。

miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表达研究

目的探讨miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表达特征及其在肺癌发生发展过程中的作用。方法收集47例肺癌住院患者的癌组织和癌旁组织,利用Trizol提取总RNA,实时荧光定量PCR检测基因相对表达量。结果肺癌组织与癌旁组织中miR-10b(t=2.83,P<0.05)、miR-18b(t=2.88,P<0.05)及miR-130b(t=2.46,P<0.05)表达量均差异存在显著性。比较鳞癌、腺癌和癌旁组织中miR-10b(F=7.16,P<0.05)、miR-18b(F=4.11,P<0.05)及miR-130b(F=3.43,P<0.05)的表达量也有显著性。癌组织中miR-10b与pri-miR-10b表达量存在负相关关系(r=-0.50,P<0.05)。癌组织与临床指标之间的关系中miR-18b、miR-130b与KI67呈正相关(P<0.05),pri-miR-10b与TOPOⅡ、pri-miR-130b与MRP呈负相关(P<0.05)。结论 miR-10b、miR-18b及miR-130b在癌组织中表达量上调,可能具有促进肺癌发生发展的作用。

miR-18b增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性的作用及其机制

目的:探讨miR-18b在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂(DDP)化疗敏感性中的作用,阐明其可能的机制。方法:乳腺癌MDA-MB-231细胞根据转染条件分为MDA-MB-231组、MDA-MB-231+DDP组、MDA-MB-231-NC组、MDA-MB-231-NC+DDP组、MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231 mimic+DDP组。采用生物信息学方法预测的miR-18b的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-18b与靶基因3′UTR的结合;应用qRT-PCR法检测各组MDA-MB-231细胞中miR-18b的表达水平;Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中ATM蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞的生长抑制率。结果:荧光素酶实验报告验证ATM为miR-18b的靶基因,并与ATM 3′UTR序列部分结合;与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231 mimic组和MDA-MB-231mimic+DDP组细胞中miR-18b的表达水平升高(P<0.05);Western blotting法检测,与MDAMB-231组比较,MDA-MB-231+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平升高(P<0.05);与MDA-MB-231-NC组比较,MDA-MB-231mimic组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);与MDA-MB-231-NC+DDP组比较,MDA-MB-231mimic+DDP组细胞中ATM蛋白表达水平降低(P<0.05);CCK-8法检测,与MDA-MB-231NC组比较,经不同浓度DDP作用后,MDA-MB-231 mimic组细胞生长抑制率均升高。结论:miR-18b通过靶向调控ATM蛋白增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对DDP的化疗敏感性。

miR-18a对人主动脉内皮细胞血管生成能力的影响

目的:观察miR-18a对人主动脉内皮细胞血管生成能力的影响。方法:分别将10 nmol/L miR-18a mimics和20 nmol/L miR-18a inhibitor转染至人主动脉内皮细胞,qRT-PCR法检测miR-18a表达情况并观察内皮细胞的迁移、黏附和管腔形成能力。结果:转染48 h后,miR-18a mimics组miR-18a表达为对照组的608倍(P<0.05);miR-18a inhibitor组miR-18a表达降低至对照组的31%(P<0.05)。与对照组相比,miR-18a mimics转染后迁移至Transwell小室下层的内皮细胞数目和毛细血管管腔形成数目分别减少60%和52%(P<0.01);而miR-18a inhibitor转染后分别增加100%(P<0.05)和84%(P<0.01),细胞黏附能力增加43%(P<0.05)。结论:miR-18a的表达水平与人主动脉内皮细胞的血管生成能力相关,可能成为血管性疾病治疗的分子靶点。

miR-18a-5p在鸡不同生长时期的表达及其生物信息学分析与靶基因预测

为探究miR-18a-5p在鸡不同生长时期组织表达变化规律及其生物信息学特点,本研究以苏禽3号鸡为试验动物,利用实时荧光定量PCR技术检测不同生长时期鸡miR-18a-5p的组织表达变化。通过文献和miRBase检索脊椎动物的miR-18a-5p序列,利用Ensembl数据库确定miR-18a-5p在基因组中的位置,根据成熟序列构建系统进化树;使用miRmap、microT、miRanda和TargetScan网站预测miR-18a-5p靶基因,并进行GO和KEGG分析。组织表达分析结果显示,miR-18a-5p序列在鸡心脏、脾脏、肾脏和下丘脑中的表达量显著高于除大脑以外的其他组织(P<0.05)。与3日龄雏鸡相比,90日龄鸡心脏、脾脏、肾脏、腿肌和下丘脑中miR-18a-5p的表达量均显著上升(P<0.05)。在50种脊椎动物中共发现52条miR-18a-5p序列,几乎所有物种都只有1条成熟序列;基因定位分析发现,鸡miR-18a-5p位于1号染色体上的基因间隔区。多序列比对分析表明,不同物种miR-18a-5p的成熟序列同源性较高,物种间较为保守。系统进化树分析发现,鸡miR-18a-5p与原鸽、斑胸草雀等其他鸟类聚为一类,这表明miR-18a-5p进化过程中是保守的。靶基因预测和功能分析发现,miR-18a-5p共有121个靶基因。GO分析结果显示,靶基因主要富集到蛋白质泛素化、细胞周期阻滞、白细胞介素-6产生的负调控等功能。KEGG通路分析表明,靶基因主要富集到细胞周期及Wnt和FoxO信号通路等。多个与肌肉生长及细胞增殖等相关的基因富集到相关通路之上。综上,鸡miR-18a-5p是组织广泛表达的miRNA,其可能通过Wnt及FoxO信号通路调控肌肉生长及细胞增殖分化。本研究为miR-18a-5p功能及调控机制的深入研究提供参考依据。

miR-18a在老年胃癌患者血清中的表达及意义

目的探讨胃癌患者血清microRNA-18a表达变化及其临床诊断意义。方法采用实时荧光定量PCR检测52例老年胃癌患者和33例健康体检者血清mi R-18a表达水平。通过分析受试者工作特征曲线(ROC)判断mi R-18a表达水平在胃癌诊断中的灵敏度和特异度。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测患者血清肿瘤标记物水平。结果胃癌患者血清mi R-18a较健康对照组高(P<0.05)。血清mi R-18a水平与患者年龄、性别无关(P>0.05),与分化程度、临床分期、浸润深度和淋巴结转移明显相关(P<0.05或P<0.01)。ROC分析结果显示最佳的mi R-18a相对表达量的临界值为2.77,诊断灵敏度77.2%,特异度82.8%,ROC曲线下面积为0.791。血清mi R-18a水平与胃癌相关抗原MG7-Ag明显正相关,与糖抗原(CA)-72-4、CA-50和甲胎蛋白(AFP)正相关,与癌胚抗原(CEA)无明显相关性。结论 mi R-18a在胃癌患者血清中水平升高,作为新的血清学指标在胃癌筛查诊断中有重要参考价值。