miR-181a表达水平与ER阳性乳腺癌对内分泌治疗敏感性的关系

目的:研究miR-181a表达水平与雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性乳腺癌对内分泌治疗敏感性之间的关系。方法:采用梯度递增法诱导乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株,利用集落形成实验检测细胞对他莫昔芬的敏感性。利用RT-PCR法检测miR-181a表达的情况,利用KM-plotter分析miR-181表达与乳腺癌患者预后之间的关系。结果:我们成功的诱导了MCF-7他莫昔芬继发耐药细胞株TAM-R。RT-PCR分析结果显示:他莫昔芬继发耐药的TAM-R细胞株及原发他莫昔芬耐药BT474细胞株中miR-181a的表达水平均显著高于对他莫昔芬敏感的MCF-7细胞株。生存分析结果显示:miR-181a的表达水平与ER阴性乳腺癌患者的总生存无关,但在ER阳性乳腺癌中miR-181a表达高的患者总生存明显差于miR-181a低表达者。进一步分析结果显示:在ER阳性但未接受内分泌治疗的乳腺癌患者中miR-181a表达与总生存无关,但在ER阳性且接受过内分泌治疗的乳腺癌患者中miR-181a高表达者总生存显著差于miR-181a低表达者。结论:miR-181a高表达ER阳性乳腺癌患者对内分泌治疗敏感性差,miR-181a可能是预测ER阳性乳腺癌对内分泌治疗敏感性的指标。

转化生长因子-β1促进miR-181a表达诱导肝星状细胞-T6细胞活化

目的观察转化生长因子-β1(TGF-β1)对miR-181a表达的影响,以及miR-181a对体外培养的肝星状细胞(HSC)-T6细胞的作用。方法 TGF-β1处理HSC-T6细胞后,检测miR-181a和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。miR-181amimics转染HSC-T6细胞后,Western印迹检测α-SMA和Ⅰ型胶原a2链(collagenⅠa2,ColⅠA2)蛋白表达,CCK-8计数法检测细胞增殖。结果 TGF-β1处理组细胞中miR-181a和miR-181b表达量较对照组细胞明显升高,miR-181a转染组细胞中α-SMA和ColIA2表达量明显高于对照组细胞,miR-181a对HSC-T6增殖无明显影响。结论在HSC-T6中,TGF-β1促进miR-181a表达,miR-181a可促进HSC-T6细胞活化和分泌胶原,进一步明确了TGF-β1促进HSC-T6活化的机制。

缺血性脑卒中病人血清miR-181a表达水平与认知功能障碍的关系

目的探讨缺血性脑卒中病人血清miR-181a表达水平及其与认知功能障碍的关系。方法纳入2018年1月—2019年3月新乡医学院第一附属医院168例缺血性脑卒中病人作为研究对象,治疗后采用中文版简易智能精神状态检查量表(MMSE)评估缺血性脑卒中病人否存在认知功能障碍,根据是否发生认知功能障碍分为认知功能障碍组(73例)和非认知功能障碍组(95例),其中认知功能障碍组根据严重程度分为轻度认知功能障碍组、中度认知功能障碍组和重度认知功能障碍组3个亚组。于清晨空腹抽取所有研究对象外周静脉血5 mL,并采用定量聚合酶链式反应(PCR)法检测血清中miR-181a表达水平,血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100β表达水平采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测。比较组间miR-181a、NSE、S-100β表达水平及MMSE评分,相关性分析采用Pearson分析,miR-181a表达水平诊断缺血性脑卒中后认知功能障碍采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果与非认知功能障碍组相比,认知功能障碍组血清miR-181a、NSE和S-100β表达水平均明显升高,而MMSE评分明显降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。轻度认知功能障碍组、中度认知功能障碍组和重度认知功能障碍组血清miR-181a、NSE和S-100β表达水平差异有统计学意义(P<0.001);与轻度认知功能障碍组和中度认知功能障碍组相比,重度认知功能障碍组血清miR-181a、NSE和S-100β表达水平明显升高(P<0.05),与中度认知功能障碍组相比,重度认知功能障碍组血清miR-181a、NSE和S-100β表达水平明显升高(P<0.05)。血清miR-181a与NSE(r=0.514,P<0.05)和MMSE量表评分(r=-0.336,P<0.05)均存在相关性,而与S-100β无明显相关性(r=0.223,P=0.087)。血清miR-181a诊断缺血性脑卒中后认知功能障碍的曲线下面积(AUC)为0.889[95%CI(0.826,0.951)],当取最佳截断值1.14时,诊断敏感度和特异度分别为90.5%和84.2%。结论缺血性脑卒中后认知功能障碍病人血清miR-181a表达水平明显升高,且与认知功能障碍的严重程度有关,miR-181a可作为缺血性脑卒中后认知功能障碍的一项血清学标志物。

多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖、迁移的相关性

目的:探讨多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖、迁移的相关性。方法:选择2012年3月～2017年12月间在本院确诊并治疗的多发性骨髓瘤患者52例作为多发性骨髓瘤组,另取同期在本院进行骨髓穿刺并最后明确骨髓功能无殊的健康者36例作为正常对照组。对比两组骨髓组织中miR-181a表达量以及疾病相关增殖基因、疾病相关侵袭基因表达量的差异,采用Pearson检验评估多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖、迁移的相关性。结果:多发性骨髓瘤组骨髓组织中miR-181a的表达量高于正常对照组;骨髓组织中PCDH10、TIP30 mRNA的表达量低于正常对照组,c-maf、ADAM10 mRNA的表达量高于正常对照组;骨髓组织中Annexin2、HSP90、PIK3R1、Twist1 mRNA的表达量高于正常对照组,TGFBI、PTEN mRNA的表达量低于正常对照组(P<0.05)。相关性分析发现,多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量与肿瘤细胞增殖及迁移活力直接相关。结论:多发性骨髓瘤骨髓组织中miR-181a表达量异常增高,具体表达量与肿瘤细胞的增殖及迁移活力直接相关。

miR-181a表达在慢性粒细胞白血病早期疗效预测中的临床意义

目的探讨治疗前外周血单个核细胞miR-181a表达与慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)患者接受伊马替尼治疗3个月、6个月反应性的预测价值。方法选择2017年1月至2017年12月间在德阳市人民医院血液科确诊并接受伊马替尼治疗的95例CML-CP患者,收集治疗前、治疗3个月、6个月后外周血单个核细胞并提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-181a的表达水平。比较治疗前后miR-181a表达的变化,并分析与伊马替尼治疗3个月、6个月后获得临床反应的关系。采用单因素和多因素Logistic回归模型分析影响患者获得6个月完全细胞遗传学反应(CCyR)的因素。结果治疗前CML-CP患者外周血单个核细胞miR-181a表达水平为0.73±0.26,中位表达水平为0.72,治疗3个月、6个月后miR-181a表达水平较治疗前逐渐升高(P<0.05)。48例患者miR-181a表达量≤0.72,为低表达组,其余47例为高表达组。低表达组患者治疗6个月后CCyR获得率为77.08%(37/48),高于高表达组(P<0.05)。单因素和多因素Logistic回归模型结果显示,治疗前和治疗3个月单个核细胞miR-181a表达水平是CML-CP患者治疗6个月获得CCyR的独立影响因素(P<0.05)。结论伊马替尼治疗可上调CML-CP患者外周血单个核细胞miR-181a表达水平,并且治疗前miR-181a低表达者伊马替尼早期反应性更好,可能是影响早期伊马替尼治疗反应的独立因素。

血清miR-210、miR-181a表达水平与慢性阻塞性肺疾病稳定期患者糖皮质激素治疗效果的关系及其预测价值研究

背景吸入性糖皮质激素(ICS)是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的常用治疗药物,但其治疗效果评价研究较为缺乏。微小核糖核酸(miR)被证实参与COPD的发病,其中miR-210、miR-181a与COPD患者关系密切。目前临床有关miR-210、miR-181a与COPD患者ICS治疗效果的关系研究较为缺乏。目的探讨血清miR-210、miR-181a表达水平与COPD稳定期患者ICS治疗效果的关系及其预测价值。方法收集2017年1月至2020年6月于三六三医院门诊治疗的COPD稳定期患者86例,行布地奈德福莫特罗粉吸入剂治疗4周后进行治疗效果评价,将肺功能分级降低≥1个级别或慢性阻塞性肺疾病评估测试(CAT)评分降低≥2分判断为有效并归为有效组,其余纳入无效组。检测患者治疗前后的肺功能指标〔包括用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气容积(FEV_(1))、最大呼气流量(PEF)〕、CAT评分与血清miR-210、miR-181a表达水平。采用Pearson相关分析探讨ICS治疗前与治疗4周后血清miR-210、miR-181a表达水平与肺功能指标、CAT评分的相关性,并绘制ROC曲线以分析血清miR-210、miR-181a表达水平对COPD稳定期患者ICS治疗效果的预测价值。结果ICS治疗后,COPD稳定期患者FVC、FEV_(1)、PEF等高于治疗前,CAT评分及血清miR-210、miR-181a表达水平低于治疗前(P<0.05)。ICS治疗前患者血清miR-210、miR-181a表达水平与CAT评分呈正相关(P<0.05)。ICS治疗后患者血清miR-210、miR-181a表达水平与FEV_(1)呈负相关(P<0.05)。有效组治疗前与治疗后的血清miR-210、miR-181a表达水平低于无效组(P<0.05)。治疗前miR-210、miR-181a表达水平预测COPD患者ICS治疗效果的ROC曲线下面积为0.807、0.844。结论ICS治疗有效的COPD稳定期患者治疗前与治疗后的血清miR-210、miR-181a表达水平均低于无效患者,且治疗前血清miR-210、miR-181a表达水平可较好地预测ICS治疗效果。

老年痴呆患者血清中miR-181a表达及临床意义

目的探讨miR-181a在老年痴呆患者中的表达水平及临床意义。方法选择74例老年痴呆患者作为研究对象,其中阿尔茨海默病(AD)组35例,轻度认知功能障碍(MCI)组39例。并选择同期健康老人45例作为对照组。采用qRT-PCR检测研究对象血清miR-181a的表达水平。比较不同组血清中同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂联素(ANP)水平、miR-181a水平差异,采用Logistic回归分析探讨血清miR-181a水平与老年痴呆的关系。结果AD组血清Hcy、LDL-C、ANP水平、精神症状评分、血清miR-181a水平,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析结果显示血清miR-181a与Hcy呈正相关(r=0.568,P=0.004),血清miR-181a与ANP水平、精神症状评分呈负相关(r=-0.562,P=0.001;r=-0.624,P=0.003)。教育程度(高中以上)为老年痴呆的保护因素(OR=0.53,95%CI:0.32~0.88),血清miR-181a≥0.78(OR=3.51,95%CI:1.71~7.21)、Hcy≥19.25 mmol/L(OR=4.79,95%CI:2.89~7.95)为老年痴呆的危险因素。结论老年痴呆患者血清miR-181a水平增高,高水平血清miR-181a可能是老年痴呆的危险因素。

结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a表达变化及其与患者临床病理特征的关系

目的探讨结直肠癌组织长链非编码RNA(lncRNA)结直肠肿瘤差异表达基因(CRNDE)、微小RNA-181a(miR-181a)表达变化及其与患者临床病理特征的关系。方法选择结直肠癌组织与癌旁正常组织各91例份,采用RT-qPCR法检测lncRNACRNDE、miR-181a表达,并分析二者表达的关系及其与患者临床病理特征的关系。结果与癌旁正常组织比较,结直肠癌组织lncRNACRNDE相对表达量明显升高,miR-181a相对表达量明显降低(P均<0.05)。结直肠癌组织lncRNA CRNDE、miR-181a相对表达量与肿瘤临床分期、组织分化程度有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位及淋巴结转移无关(P均>0.05)。结直肠癌组织lncRNACRNDE相对表达量与miR-181a相对表达量呈明显负相关关系(r=-0.632,P<0.05)。结论结直肠癌组织lncRNACRNDE表达升高、miR-181a表达降低,二者共同参与结直肠癌的恶性进展。

MiR-181a过表达参与调控Treg细胞对儿童变应性鼻炎的机制研究

目的:探讨miR-181a在AR儿童血清中的表达,并分析miR-181a对AR患儿Treg细胞分化和功能的调控作用。方法:选择20例AR患儿和20例年龄相近,无过敏史的儿童为研究对象。Pearson相关分析外周血Treg数量与miR-181a表达之间关系。从AR患儿外周血中分离纯化Tregs。将miR-181a模拟物和抑制剂转染到Tregs细胞中。用流式细胞仪和ELISA法评价Tregs的功能。用卵清蛋白建立AR小鼠模型,然后通过功能增益和功能损失法确定miR-181a在AR中的作用。结果:与对照组相比,AR患儿外周血Treg数量减少,并且miR-181a表达显著降低。Pearson相关分析显示外周血Treg数量与miR-181a表达呈显著正相关(R2=0.335,P<0.001)。miR-181a模拟物促进了Tregs的增殖,并上调了IL-10和TGF-β的mRNA表达。荧光素酶报告试验表明,miR-181a直接靶向OPN的3'UTR。在动物实验中,与AR和AR+miR-NC组相比,AR+miR-181a模拟组炎症减轻,AR+miR-181a抑制剂组炎症更严重。重组OPN蛋白显著逆转了miR-181a模拟物的抗炎作用。此外,AR组小鼠Treg细胞明显减少,miR-181a模拟物显著增加了AR小鼠的Treg细胞,而重组OPN蛋白显著逆转了miR-181a模拟物诱导的Treg细胞增多。结论:miR-181a的上调显著降低了OPN的表达,进而减少了嗜酸性粒细胞和增强Treg功能,减轻了AR发病过程中气道炎症的发生。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌患者中的表达及临床意义

目的探讨miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌及宫颈癌前病变组织中的表达差异及对宫颈癌诊断的价值。方法收集2020年6月—2022年12月河北中石油中心医院收治的30例宫颈低级别鳞状上皮内病变(CINⅠ级组)、30例宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(CINⅡ~Ⅲ级组)、50例宫颈癌(宫颈癌组)患者的临床资料及宫颈组织标本。采用免疫组化法检测各组宫颈组织中miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达情况,比较各组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率;采用RT-qPCR法检测宫颈癌组患者癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量,分析miR-495-3p和miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者临床病理特征的关系、miR-495-3p和miR-181d-5p对宫颈癌的诊断价值及二者在宫颈癌组织中表达的相关性。结果宫颈癌组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率均明显低于CINⅠ级组及CINⅡ~Ⅲ级组(P均<0.05)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与FIGO分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05),FIGO分期越高、浸润越深二者表达量越低;miR-181d-5p表达量与分化程度有关(P<0.05),分化程度越高miR-181d-5p表达量越低。miR-495-3p、miR-181d-5p联合检测对宫颈癌的诊断价值高于miR-495-3p、miR-181d-5p单一检测(P=0.001)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达呈正相关。结论miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者的FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移情况相关,两者表达之间具有一定相关性,二者联合检测有助于宫颈癌的诊断。

过表达miR-181a-5p的口腔癌皮下移植瘤小鼠模型的小肠代谢组学研究

目的通过检测口腔癌皮下移植瘤小鼠小肠中代谢物和代谢通路的变化,分析过表达miR-181a-5p对皮下移植瘤小鼠小肠中代谢物和代谢物组的影响。方法实验分为3组,空白对照(Control)组、阴性对照(negative control,NC)组以及实验(over expression of miR-181a-5p,OE)组。将不同组别处理后的细胞混悬液,通过皮下注射到M-NSG重度免疫缺陷雌性小鼠右侧腹股沟中上部,构建成口腔癌皮下移植瘤小鼠模型。按时记录小鼠体重变化,对小鼠小肠组织进行HE染色,观察各组病理变化。采用超高效液相色谱-串联飞行时间质谱联用仪和串联Orbitrap质谱联用仪检测NC组、OE组和Control组小鼠小肠中的代谢物,使用XCMS预分析原始数据,质量评价样本数据,鉴定Control组与NC组、NC组与OE组的差异代谢物,进行KEGG富集分析获取差异代谢通路。结果Control组和NC组小肠组织中共鉴定出170种差异代谢物。代谢物富集的显著性信号通路包括胆碱代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、γ-氨基丁酸(GABA)神经突触代谢、甘油磷脂代谢、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路代谢、癌症中心碳代谢以及烟酸和烟碱胺代谢通路。NC组和OE组相比,小鼠小肠中检测到VIP(variable importance in the projection)>2的差异代谢物有16种,显著性差异代谢物包括甘油磷酰胆碱、棕榈酸、3-羟基丁酰肉碱、β-羟丁酸等。代谢物富集到的显著性差异通路为胆碱代谢通路。结论口腔癌皮下移植瘤可引起小鼠小肠的代谢物发生变化,主要改变了小肠中与能量代谢相关的代谢物。过表达miR-181a-5p影响口腔癌皮下移植瘤小鼠小肠代谢物,代谢物富集通路为胆碱代谢通路。

远华蟾毒精通过下调miR-181a抑制胃癌细胞生长及侵袭研究

目的 回顾性分析胃癌患者样本中miR-181a的表达水平,根据临床病例病理数据分析miR-181a与胃癌的相关性。采用药物干预的方法,观察远华蟾毒精对胃癌细胞中miR-181a表达的影响以及参与胃癌生长及侵袭的作用机制。方法 本实验纳入2019年1月—2020年12月于滨州医学院附属医院诊治的90例胃癌患者的胃部病变标本及血液,另纳入30份癌旁组织样本。远华蟾毒精组使用0.05、0.10、0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精干预,对照组不加药。RT-qPCR探究组织层面的miR-181a表达水平。比较miR-181a在胃癌患者癌组织和癌旁组织中的表达水平,分析miR-181a表达水平与临床参数的相关性。以胃癌细胞系SGC-7901为研究对象,利用MTT法、细胞凋亡实验和Transwell实验探究远华蟾毒精对胃癌细胞增殖、细胞系SGC-7901细胞活力、侵袭力、细胞凋亡率的影响,并检测远华蟾毒精对miR-181a表达水平的影响。结果 与癌旁组织相比,胃癌组织中miR-181a呈高表达(P<0.05)。miR-181a低表达的胃癌患者生存曲线优于高表达者(P<0.05)。miR-181a高表达患者间肿瘤Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移率大于miR-181a低表达(P<0.05);miR-181a高表达与miR-181a低表达患者年龄、体质指数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。远华蟾毒精组细胞系SGC-7901 24、48 h存活率及侵袭数低于对照组,浓度为0.50、1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组48 h存活率低于24 h存活率(P<0.05)。浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901细胞早期和晚期的凋亡率及总凋亡率高于对照组,且浓度为1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901晚期凋亡率低于早期凋亡率(P<0.05)。与对照组比较,浓度为1.00、1.25μg/ml的远华蟾毒精组细胞系SGC-7901中miR-181a表达水平降低(P<0.05),且浓度为1.00μg/ml的远华蟾毒精组48 h的miR-181a表达水平较24 h低(P<0.05)。结论 miR-181a表达水平是胃癌患者中的风险基因,远华蟾毒精可以通过下调miR-181a表达来发挥抗癌功能。

食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

天麻素调控miR-181b对创伤性颅脑损伤大鼠行为及脑水肿的作用机制探究

目的探究天麻素(GAS)调控miR-181b对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠行为及脑水肿的作用机制。方法将120只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、TBI模型组(Model组)、低剂量GAS组(GAS-L组,50 mg/kg GAS)、高剂量GAS组(GAS-H组,100 mg/kg GAS)、高剂量GAS+miR-181b antagomir NC组(GAS-H+miR-181b antagomir NC组,100 mg/kg GAS+200 nmol miR-181b antagomir NC)和高剂量GAS+miR-181b antagomir组(GAS-H+miR-181b antagomir组,100 mg/kg GAS+200 nmol miR-181b antagomir),每组20只大鼠。采用改良神经功能缺损严重程度评分量表(mNSS)对各组大鼠神经功能进行评估。采用转棒测试、旷场实验评价大鼠行为学变化。干湿重法测定大鼠脑组织含水量。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定各组大鼠脑组织miR-181b水平。Western blot法测定大鼠脑组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、水通道蛋白-4(AQP-4)的表达水平。结果与Sham组相比,Model组大鼠mNSS评分、脑组织含水量、脑组织MMP-9、AQP4蛋白表达显著升高(P<0.05),转棒测试跌落时间、旷场实验区域中心停留时间、脑组织miR-181b水平显著降低(P<0.05),大鼠脑皮质神经元萎缩,结构紊乱,细胞轮廓不清晰,出现严重的脑损伤。与Model组相比,GAS-H组大鼠相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。miR-181b antagomir减弱了GAS对TBI导致的大鼠行为学障碍和脑水肿的减轻作用。结论GAS可能通过提高miR-181b的表达来改善TBI导致的大鼠行为学障碍和脑水肿。

miR-506-3p、sST2和CEA在恶性胸腔积液患者中表达水平及诊断价值分析

目的分析miR-506-3p、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)和癌胚抗原(CEA)在恶性胸腔积液患者中表达水平及其诊断价值。方法选取108例胸腔积液患者作为研究组,根据超声检查及病理检查结果,将32例结核性胸腔积液患者纳入结核性组,41例癌性胸腔积液患者和35例淋巴瘤性胸腔积液患者纳入恶性组。另随机抽取54例本院健康体检者纳入对照组。比较研究组患者及对照组健康体检者的血清sST2、CEA水平;比较恶性组与结核性组患者胸水miR-506-3p、sST2和CEA水平。采用ROC分析各指标对恶性胸腔积液的诊断价值。结果血清sST2和CEA水平,恶性组>结核性组>对照组(P<0.05)。与结核性组比较,恶性组胸水miR-506-3p水平降低(P<0.05),而sST2和CEA水平升高(P<0.05)。ROC结果显示,血清sST2、CEA及胸水miR-506-3p、sST2、CEA对恶性胸腔积液均具有诊断价值,且联合诊断的灵敏度最高。结论在恶性胸腔积液患者中,胸水miR-506-3p低表达,而血清和胸水sST2、CEA高表达;对恶性胸腔积液具有一定诊断价值,且联合诊断的灵敏度最高。

miR-370-3p在绵羊中的表达、生物信息学分析与靶基因预测

本研究以新吉细毛羊和小尾寒羊为实验动物,用实时荧光定量PCR检测miR-370-3p在绵羊不同组织中的表达变化;利用Mega11.0对miR-370-3p进行序列分析,并构建进化树;利用miRBase对脊椎动物的miR-370-3p序列进行检索,使用Ensembl数据库对miR-370-3p进行定位;利用在线网站预测miR-370-3p的靶基因,并进行GO、KEGG分析。组织表达结果显示,miR-370-3p在2种绵羊1月份和10月份的皮肤组织中均存在显著差异;在2种绵羊同组织间均存在显著差异。miR-370-3p序列主要存在于哺乳动物,且在不同物种间高度保守;miR-370-3p共有315个靶基因;GO分析结果显示靶基因主要富集在蛋白质的自磷酸化、细胞核与细胞质的运输、神经元凋亡过程等方面;KEGG通路分析表明靶基因主要富集到MAPK信号通路、寿命调节通路和细胞内吞作用等,其中多个与毛囊生长发育相关的基因富集到相关通路之上。绵羊miR-370-3p在皮肤组织存在时空表达差异,在各组织间广泛表达,可能通过靶向MAPK信号通路及寿命调节等通路参与调控毛囊的生长发育。

外泌体源性miR-181b-5p在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的:探讨外泌体源性miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病患儿不同疾病阶段的表达水平差异及其与临床特点的相关性。方法:收集86例ALL患儿骨髓血浆标本,采用外泌体提取试剂盒提取血浆中外泌体,TRIzol法提取外泌体中RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测初诊组、复发组、缓解组、对照组患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平,比较分析miR-181b-5p表达水平在各组患儿中的差异,以及miR-181b-5p表达水平与临床特征之间的关系。结果:初诊和复发组ALL患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平均明显低于缓解组和对照组(P<0.05);初诊组T-ALL患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平明显高于B-ALL患儿(P<0.05);初诊组男性患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平明显高于女性患儿(P<0.01)。结论:外泌体源性miR-181b-5p在ALL儿童病程中呈动态变化,可以作为监测疾病状态的标记性miRNA;外泌体可以在肿瘤微环境中传递信息,作为生物分子靶向治疗的潜在载体。

miR-181a靶向Bcl-2调控氧糖剥夺/再灌注模型诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡

目的皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一,基于前期深度测序技术,我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能,明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型,脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及Western Blot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤,检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNA hybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3′-UTR区,且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现,相对于Bcl-23′UTR-WT与mimic-NC共转染组,Bcl-23′UTR-WT与miR-181a mimic共转染后的荧光活性更低(P<0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181a mimic共转染组,荧光活性无显著差异(P>0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞,miR-181a可以抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平(P<0.001)。过表达miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P<0.001),而抑制miR-181a表达可使SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P<0.001)。结论miR-181a可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。