miR-181c-5p调控BIRC5对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的探讨miR-181c-5p对前列腺癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过TCGA数据库中前列腺癌数据分析BIRC5、miR-181c-5p与前列腺癌病理关系,采用miRNA靶基因预测数据库分析miR-181c-5p与BIRC5靶结合位点并使用双色荧光素酶活性实验验证,Western blot检测miR-181c-5p过表达细胞中BIRC5蛋白表达。以前列腺癌细胞PC3、DU145为研究背景,构建miR-181c-5p过表达细胞系(miR-181c-5p组)及其阴性对照(miR-NC组)并用qRT-PCR验证,CCK-8法检测细胞增殖情况[450 nm处光密度值(OD_(450 nm)值)],流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot检测细胞增殖、凋亡相关蛋白表达。建立miR-181c-5p/BIRC5双过表达调细胞系(miR-181c-5p+BIRC5组),用上述相同方法检测细胞生长、细胞周期分布、细胞凋亡率及相关蛋白表达。结果BIRC5在前列腺癌组织表达升高且在肿瘤高侵犯程度、淋巴结转移和复发患者呈现更高表达趋势,BIRC5高表达患者生存情况较差;miR-181c-5p在前列腺癌癌组织表达降低,miR-181c-5p水平与BIRC5水平呈负相关,miR-181c-5p靶向抑制BIRC5表达。在PC3、DU145细胞中,miR-181c-5p组细胞miR-181c-5p水平高于miR-NC组(P<0.05),OD_(450 nm)值和S期细胞百分比低于miR-NC组(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞百分比、细胞凋亡率和BAX、caspase-3、PARP蛋白表达高于miR-NC组(P<0.05),CDK2、CCNB1、BCL-2蛋白表达弱于miR-NC组(P<0.05)。miR-181c-5p+BIRC5组细胞的BIRC5蛋白表达和OD_(450 nm)值高于miR-181c-5p组(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞百分比低于miR-181c-5p组(P<0.05),S期细胞百分比高于miR-181c-5p组(P<0.05),细胞凋亡率低于miR-181c-5p组(P<0.05),CDK2、CCNB1和BCL-2蛋白表达高于miR-181c-5p组,BAX、caspase-3、PARP蛋白表达低于miR-181c-5p组。结论miR-181-5p可以靶作用BIRC5抑制人前列腺癌细胞增殖,使细胞周期在G_(0)/G_(1)期阻滞,促进细胞凋亡。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过miR-181c对脊髓损伤的修复作用研究

目的探索骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的miR-181c对脊髓损伤(SCI)的修复作用。方法用全骨髓贴壁法分离大鼠BMSC,流式细胞术检测CD29、CD90、CD45及CD34表达。根据转染物质的不同分为Control组(未处理)、miR-181c组(转染miR-181c mimc质粒)及miR-NC组(转染miR-NC质粒)。提取外泌体,用透射电子显微镜观察外泌体形态。构建SCI大鼠模型,造模后1 h,SCI+外泌体组大鼠尾静脉注射BMSC来源的外泌体;SCI+miR-181c组大鼠尾静脉注射转染miR-181c mimic的BMSC来源的外泌体;SCI+miR-NC组大鼠尾静脉注射转染miR-NC的BMSC来源的外泌体;Sham组、模型组大鼠尾静脉注射等体积的0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。处理后第1天、第3天、第7天、第14天及第28天采用行为学评分(BBB)评估大鼠的运动功能,TUNEL染色检测脊髓组织细胞凋亡,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清炎性因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测脊髓组织、外泌体中miR-181c,脊髓组织中TNF-α、IL-1βmRNA水平,Western blot检测脊髓组织中Cleaved半胱胺酸蛋白酶第三型(Caspase 3)、Caspase 3、Bcl关联X蛋白(Bax)及B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl2)蛋白,BMSC、外泌体中CD9、CD63表达水平。结果透射电子显微镜下观察,BMSC来源的外泌体呈类圆形,直径约50~100 nm。Control组与miR-NC组外泌体中miR-181c表达水平差异无统计学意义(t=0.297,P>0.05)。与miR-NC组比较,miR-181c组外泌体miR-181c表达水平升高(1.03±0.21 vs 0.34±0.04)(t=7.813,P<0.05)。与SCI组比较,SCI+外泌体组脊髓组织miR-181c表达水平升高(0.42±0.06 vs 0.23±0.03)(t=9.500,P<0.05)。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组脊髓组织miR-181c表达水平升高(0.22±0.03 vs 1.32±0.13)(t=18.440,P<0.05)。SCI+miR-181c组大鼠BBB评分高于SCI+miR-NC组(t=18.440,P<0.05)。SCI+外泌体组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平均低于SCI模型组(P<0.05),SCI+miR-181c组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量和脊髓组织中TNF-α、IL-1β表达水平低于SCI+miR-NC组(P<0.05)。与SCI组比较,SCI+外泌体组大鼠脊髓组织中Cleaved Cas pase 3/Caspase 3、Bax表达水平降低,Bcl2表达水平升高,脊髓组织凋亡率降低(P<0.05)。与SCI+miR-NC组比较,SCI+miR-181c组大鼠脊髓组织中Cleaved Caspase 3/Caspase 3、Bax表达水平降低,Bcl2表达水平升高,脊髓组织凋亡率降低(P<0.05)。结论BMSC来源的外泌体中miR-181c可修复脊髓损伤,机制可能与抑制炎症、抗凋亡有关。

lncRNA SNHG14通过miR-181c-5p/SOX6信号轴调控缺血性脑卒中神经元细胞凋亡

目的通过IS体外模型探究lncRNA SNHG14在神经元细胞凋亡中的作用机制。方法通过氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的神经元细胞损伤来模拟IS。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG14、miR-181c-5p、SOX6基因表达,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Caspase-3检测试剂盒测定Caspase-3活性,RNA免疫沉淀实验和萤光素酶报告分析实验验证miR-181c-5p与SNHG14、SOX6的相互作用。结果sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于sh-NC组(P<0.05),OGD+sh-SNHG14组SNHG14 mRNA相对表达量低于OGD+sh-NC组低(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞活性率较OGD+sh-NC组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14组细胞凋亡率、Caspase-3相对表达量较OGD+sh-NC组低(P<0.05)。miR-NC组miR-181c-5p相对表达量较miR-181c-5p mimics组低(P<0.05),inhibitor NC组较miR-181c-5p inhibitor组高(P<0.05)。SNHG14-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SNHG14-WT+miR-NC组低(P<0.05),SNHG14-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SNHG14-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。SOX6-WT+miR-181c-5p mimics组萤光素酶相对活性较SOX6-WT+miR-NC组低(P<0.05),SOX6-WT+miR-181c-5p inhibitor组较SOX6-WT+inhibitor NC组高(P<0.05)。miR-NC组SOX6 mRNA相对表达量较miR-181c-5p mimics组高(P<0.05),miR-181c-5p inhibitor组较inhibitor NC组高(P<0.05)。对照组细胞活性率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05),OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组较OGD组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组细胞凋亡率较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。OGD+sh-SNHG14+miR-181c-5p inhibitor组Caspase-3相对表达量较OGD+sh-SNHG14组高(P<0.05)。结论SNHG14可调节IS模型中神经元细胞凋亡,作用机制可能是通过靶向miR-181c-5p/SOX6信号通路实现的。

血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平联合检测诊断精神分裂症的效能

目的:分析血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平联合检测诊断精神分裂症的效能。方法:回顾性分析2021年3月至2023年3月该院收治的120例首发精神分裂症患者的临床资料作为研究组,另选取同期该院60名健康体检者作为对照组,根据研究组阳性和阴性症状量表(PANSS)评分中位数(58分)将其分为高分组(>58分)58例、低分组(≤58分)62例。比较两组及高分组与低分组miR-30b、miR-103a、miR-181c水平,采用Pearson相关性分析血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平与PANSS评分的相关性,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平单项及联合检测诊断精神分裂症的效能。结果:研究组miR-30b、miR-103a水平均低于对照组,miR-181c水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);高分组miR-30b、miR-103a水平均低于低分组,miR-181c水平高于低分组,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,miR-30b、miR-103a水平与PANSS评分均呈负相关(r<0,P<0.05),miR-181c水平与PANSS评分呈正相关(r>0,P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平单项及联合检测诊断精神分裂症的曲线下面积分别为0.776、0.687、0.736、0.897,均具有诊断价值,且联合检测诊断价值高于三者单项检测。结论:血清miR-30b、miR-103a、miR-181c水平联合检测诊断精神分裂症的效能高于三者单项检测,血清miR-30b、miR-103a水平与PANSS评分均呈负相关,血清miR-181c水平与PANSS评分呈正相关。

血清miR-181c联合神经损伤标志物对脑出血改良大骨瓣减压术后疗效及认知功能的预测价值

目的探讨血清miR-181c联合神经损伤标志物水平对脑出血改良大骨瓣减压术后疗效及认知功能的预测价值。方法回顾性分析2016年1月-2019年6月邢台市第三医院收治的568例脑出血接受改良大骨瓣减压术治疗患者的临床资料,根据脑出血患者术后疗效分为无效组52例和有效组516例,比较各组研究对象血清miR-181c、神经损伤标志物[血清铁蛋白(SF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)]表达水平。运用简易精神状态检查量表(MMSE)评估患者术后认知功能,并分析其与血清miR-181c、SF以及GFAP水平的相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析三者水平对术后认知功能的诊断价值。结果术后血肿量、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分以及血清miR-181c、SF、GFAP水平呈降低趋势,其中有效组各指标显著低于无效组(P<0.001)。术后1个月,185例(32.57%)患者出现认知功能障碍,平均MMSE评分为(21.35±2.10)分,Pearson相关性结果显示miR-181c、SF、GFAP表达水平均与MMSE评分呈负相关性(r=-0.641,-0.498,-0.536;P<0.05)。miR-181c以1.23为诊断截断值时,ROC曲线下面积(AUC)为0.814(95%CI:0.764~0.865);血清SF以325.36为诊断截断值时,AUC为0.681(95%CI:0.616~0.747);血清GFAP以10.25为诊断截断值时,AUC为0.634(95%CI:0.567~0.701);三者联合检测的AUC为0.886(95%CI:0.761~0.932),显著高于各单项检测(P<0.05)。结论脑出血后认知功能受损患者血清miR-181c、SF以及GFAP水平显著升高,其表达水平与病情转归密切相关,可作为疗效评估的重要指标;且三者联合检查可提高脑出血改良大骨瓣减压术后认知功能诊断效能。

丙氨酰―谷氨酰胺配合高压氧治疗对中青年缺血性脑卒中患者恢复期外周血T淋巴亚群及miR-124、miR-181c的影响

目的探索丙氨酰―谷氨酰胺配合高压氧治疗对中青年缺血性脑卒中患者恢复期外周血T淋巴亚群及微小RNA-124(miR-124)、miR-181c的影响。方法选取2017年7月至2021年7月该院128例中青年缺血性脑卒中恢复期患者作为研究对象,依据随机数字表法分为4组:阴性对照组、对照A组、对照B组、观察组,每组32例。阴性对照组予以脑卒中恢复期常规治疗;在此基础上,对照A组予以丙氨酰―谷氨酰胺治疗;对照B组予以高压氧治疗;观察组予以丙氨酰―谷氨酰胺配合高压氧治疗,均连续治疗4周。比较4组治疗前、治疗2周后、4周后神经功能[美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分]、日常生活能力[Barthel指数(BI)]、肢体运动功能[Fugl-Meyer运动功能评分量表(FMA)评分]、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素12(IL-12)]、外周血T淋巴亚群(CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))、脑血流动力学[颈动脉最小血流速度(Vmin)、最小血流量(Qmin)]、miR-124、miR-181c表达。结果观察组治疗2周后、4周后NIHSS评分低于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05);BI指数高于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05);上、下肢肢体运动功能评分高于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05)。观察组治疗2周后、4周后血清TNF-α、MCP-1、IL-12水平低于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05);CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平高于对照A组、对照B组和阴性对照组;CD8^(+)低于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05)。治疗2周后、4周后对照A组CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)高于对照B组和阴性对照组(P<0.05);CD8^(+)低于对照B组和阴性对照组(P<0.05)。观察组治疗2周后、4周后Vmin、Qmin高于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05),且对照B组Vmin、Qmin高于对照A组和阴性对照组(P<0.05)。观察组治疗2周后、4周后miR-124、miR-181c表达低于对照A组、对照B组和阴性对照组(P<0.05)。结论丙氨酰―谷氨酰胺配合高压氧治疗能进一步改善恢复期中青年缺血性脑卒中患者细胞免疫功能,下调miR-124、miR-181c表达水平,改善患者神经功能及日常生活能力。

miR-181c通过影响线粒体自噬发生调控锯齿状腺瘤癌变

目的探讨miR-181c表达变化在锯齿状腺瘤癌变过程中的作用及意义。方法用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测锯齿状腺瘤、锯齿状腺癌组织及FHC细胞、Caco-2细胞中miR-181c表达情况,同时用蛋白质免疫印记(Western Blot)实验检测2组组织中线粒体自噬相关蛋白PINK1,线粒体剩余量标志蛋白TOM20、HSP60的表达。结果锯齿状腺癌组织及Caco-2细胞中miR-181c表达较锯齿状腺瘤组织及FHC细胞明显减少,但TOM20、HSP60表达增加,PINK1表达减少(均P<0.05)。上调miR-181c表达后,Caco-2细胞中TOM20、HSP60表达减少,PINK1表达增加(均P<0.05)。结论miR-181c可通过调控线粒体自噬发生,参与锯齿状腺瘤癌变的过程。

胃癌组织中miR-181c基因甲基化的研究

目的:通过比较对照组与胃癌组miR-181c基因启动子区的甲基化状态以及Pre-miR-181c、NOTCH4和KRAS的表达变化,初步探讨胃癌发病机制,寻找胃癌发生标记物。方法:选取60例新鲜胃镜活检标本,其中胃癌组30例,男18例,女12例,平均年龄58岁。正常对照组(正常或浅表性胃炎)30例,男14例,女16例,平均年龄54岁。应用甲基化特异性PCR法(MSP)检测组织标本中miR-181c基因启动子区的甲基化状态,并用RT-PCR法检测组织中Pre-miR-181c、NOTCH4和KRAS的表达。结果:胃癌组miR-181c基因启动子区的高甲基化率明显高于对照组(P<0.05);胃癌组Pre-miR-181c基因表达较对照组显著下降(P<0.05),胃癌组NOTCH4和KRAS基因表达较对照组显著升高(P<0.05)。结论:胃癌中miR-181c可能通过甲基化作用低表达或不表达,并且通过调节靶基因NOTCH4和KRAS的表达情况,在胃癌形成过程中起着重要的作用。miR-181c的甲基化状况可能成为胃癌发生、发展的标记物。

miR-181c对耐顺铂鼻咽癌细胞凋亡的作用及其机制

目的:探讨鼻咽癌细胞HNE1/DDP及HNE1中miR-181c的表达差别,分析miR-181c对耐顺铂鼻咽癌细胞凋亡的作用及其机制。方法:本次实验共分为低剂量HNE1/DDP组和高剂量HNE1组,采用RT-PCR方式检测转染之后的miR-181c在2株细胞之中的表达情况;使用MTT法检测转染的模拟物miR-181c mimics以及抑制物inhibitors对于2株细胞增殖抑制的作用。同时利用PI单染细胞对转染的miR-181c模拟物进行检验。结果:(1)HNE1/DDP细胞相对于细胞HNE1,抗凋亡蛋白MRP、Bcl-2表达提升,促凋亡蛋白Bax、Bim表达降低。(2)低剂量HNE1/DDP组内,转染miR-181c模拟物使miR-181c含量提升至(9.04±0.51),同时高剂量HNE1组内,转染miR-181c阻抑剂使miR-181c含量降低至(0.18±0.01)。转染48 h后,HNE1/DDP细胞株内miR-181c含量提升至(32.42±0.17),且HNE1细胞株内miR-181c含量减少。同均数相比,miR-181c的变异程度更高。(3)经过PI单染实验的细胞,低剂量HNE1/DDP组转染的miR-181c模拟物表达上升至(20.34±0.31),然而转染miR-181c抑制剂的HNE1细胞却由于DDP诱导的凋亡而降低至(15.02±0.12)。结论:HNE1/DDP较亲本细胞HNE1具有较强的耐药性。HNE1与HNE1/DDP细胞中的miR-181c的表达能力不一样,同时过表达的miR-181c会加速HNE1/DDP细胞死亡。

miR-181c-5p靶向TRIM71调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡研究

目的探讨miR-181c-5p调控非小细胞肺癌细胞A549的潜在机制。方法检测非小细胞肺癌细胞A549和人正常肺细胞HLF-a中miR-181c-5p的表达水平。过表达或敲低miR-181c-5p后,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平。通过miRDB在线分析miR-181c-5p潜在底物,过表达miR-181c-5p后,通过实时荧光定量PCR检测潜在底物的表达水平。敲低潜在底物后,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平。结果miR-181c-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的表达水平低于人正常肺细胞HLF-a(P<0.05)。过表达miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡上升(P<0.05);敲低miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡下降(P<0.05)。敲低TRIM71时,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达TRIM71后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(P<0.05)。过表达miR-181c-5p后,TRIM71的蛋白水平下降;而敲低miR-181c-5p后,TRIM71的蛋白水平上升。敲低TRIM71后,非小细胞肺癌细胞A549的P53水平上升;而过表达TRIM71后,非小细胞肺癌细胞A549的p53水平下降。过表达miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的p53水平上升;而敲低miR-181c-5p后,非小细胞肺癌细胞A549的p53水平下降。结论miR-181c-5p通过靶向TRIM71 mRNA的3端非编码区后降低了TRIM71的表达水平,随后凋亡活化基因p53的蛋白水平上升,最后促进了非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。

脑梗死患者血清miR-181c、miR-21水平与颈动脉狭窄及其不良预后的相关性预测

目的探讨脑梗死患者血清miR-181c、miR-21水平与颈动脉狭窄的关系及对预后不良的相关性预测。方法纳入2015年1月~2019年6月在辽阳市中心医院诊断为脑梗死的患者120例为研究对象,行前瞻性研究。120例患者中颈动脉狭窄患者58例(轻度狭窄患者24例,中度狭窄患者22例,重度狭窄患者12例),设为颈动脉狭窄组,非颈动脉狭窄患者患者62例,设为非颈动脉狭窄组,比较两组患者的一般资料、miR-181c、miR-21水平之间的差异。纳入患者行Rankin量表评分后,分为预后良好组(76例)与预后不良组(44例),比较两组患者的一般资料、miR-181c、miR-21水平,并分析预后不良患者的危险因素。结果颈动脉狭窄组与非颈动脉狭窄组患者的性别、年龄以及体重指数之间比较差异无统计学意义(P>0.05),颈动脉狭窄组患者的糖尿病、高血压以及高脂血症患者的比例显著高于非颈动脉狭窄组(P<0.05);不同颈动脉狭窄程度患者的性别、年龄、体重指数、高血压及高脂血症之间比较差异无统计学意义(P>0.05),随着患者的颈动脉狭窄情况的加重,患者的糖尿病发病情况显著升高(P<0.05);颈动脉狭窄组患者的miR-181c、miR-21水平显著高于非颈动脉狭窄组(P<0.05);不同颈动脉狭窄患者的miR-181c、miR-21水平比较差异有统计学意义(P<0.05),随着患者的颈动脉狭窄程度的升高,患者的miR-181c、miR-21水平显著升高(P<0.05);预后良好组患者的miR-181c、miR-21水平显著低于预后不良组(P<0.05);预后不良组患者的糖尿病、高血压、高脂血症发生率以及NIHSS评分显著高于预后良好组(P<0.05);通过多因素分析,糖尿病、高血压、高脂血症、NIHSS、miR-181c、miR-21均是造成患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论随着脑梗死颈动脉狭窄情况的加重,局部病灶部位的炎性水平显著升高,血清miR-181c、miR-21水平显著升高。

MiR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的作用

目的观察miR-181c对人脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,进一步探讨miR-181c的生物学功能。方法化学合成miR-181c,脂质体转染U251细胞。应用cck-8法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡。结果miR-181c上调后对U251细胞具有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,而对照组无明显抑制作用。结论化学合成的miR-181c在人脑胶质瘤细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。

miR-181c-5p靶向作用Beclin1抑制口腔鳞癌SCC-090细胞增殖并促进细胞凋亡的机制

目的检测雷帕霉素刺激SCC-090后miR-181c-5p的表达量,验证后者与自噬基因Beclin1的作用关系及对SCC-090的增殖与凋亡的影响。方法应用qRT-PCR检测雷帕霉素(RAPA)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别刺激SCC-090细胞后miR-181c-5p的表达量;应用qRT-PCR、免疫印迹及荧光活性验证miR-181c-5p与Beclin1的作用关系;应用CCK8检测细胞的增殖,应用流式细胞术检测凋亡细胞比率,应用Western blot检测凋亡基因Bcl-2的表达。结果雷帕霉素处理细胞后,miR-181c-5p表达升高(P<0.05),3-MA处理后的细胞中,miR-181c-5p的表达下降(P<0.05);当miR-181c-5p高表达时,Beclin1表达下调(P<0.05),当miR-181c-5p表达降低时,Beclin1表达升高(P<0.05);miR-181c-5p与Beclin1有靶向关系;miR-181c-5p可明显抑制SCC-090细胞的增殖并促进细胞的凋亡。结论雷帕霉素诱导SCC-090细胞自噬后miR-181c-5p的表达量明显升高,且miR-181c-5p可通过抑制Beclin1的表达降低SCC-090细胞的增值能力且促进细胞的凋亡。

超声微泡介导miR-181c-shRNA质粒转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的探讨miR-181c表达与肝细胞肝癌(HCC)患者预后的相关性及超声微泡介导miR-181c干扰质粒(miR-181c-shRNA)转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)中HCC患者数据集,分析miR-181c表达与HCC患者生存时间及预后的关系,利用前期实验筛选的最优超声转染条件介导miR-181c-shRNA质粒转染人肝癌HepG2细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)检测转染后细胞miR-181c的表达情况,并检测沉默miR-181c表达后细胞增殖、周期及凋亡情况。结果生存分析结果显示,miR-181c高表达患者的无病生存期较低表达患者明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),而总生存期相比较差异无统计学意义(P>0.05);Cox比例风险模型提示miR-181c表达是HCC的独立预后因素(P<0.05);转染miR-181c-shRNA质粒后细胞的miR-181c表达下调,人肝癌HepG2细胞的增殖受到抑制、周期受到阻滞(P<0.05),但对凋亡无明显影响。结论miR-181c表达可作为HCC的独立预后因素,超声微泡介导miR-181c-shRNA转染人肝癌HepG2细胞后,miR-181c表达下调,细胞增殖受到抑制、周期发生阻滞,但对凋亡无明显影响,本研究有望为HCC的基因治疗提供新的靶点。

miR-181c靶向己糖激酶2抑制癌相关成纤维细胞的糖酵解

目的探讨mi R-181c在癌相关成纤维细胞(CAFs)糖酵解中的作用和机制。方法用组织贴壁法分离原代肺腺癌病人肺组织CAF及肺正常成纤维细胞(NFs)。用LipofectamineTM2000转染mi R-181c mimics,mi R-181c inhibitor,si RNA-HK2和HK2-vecto等;Q-PCR检测mi R-181家族表达水平;Western blotting检测己糖激酶2(HK2)蛋白表达;2-NBDG法检测细胞葡萄糖摄取率;DRY-CHEM FCD3500仪器检测细胞上清中乳酸生成;双荧光素酶报告基因系统检测HK2 m RNA表达。结果在细胞形态上CAFs与NFs无明显区别。与NFs组相比,CAFs组葡萄糖摄取、乳酸生成和HK2蛋白表达明显增加,而mi R-181家族表达明显减少(P<0.05)。在NFs转染inhibitor-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显增加(P<0.05);相反,CAFs转染了mimics-181c后,其HK2蛋白表达、葡萄糖摄取和乳酸生成明显减少(P<0.05)。并且在敲低HK2细胞的CAFs中,mimics-181c不能减少葡萄糖摄取和乳酸生成;而mimics-181c可以减少过表达HK2对NFs葡萄糖摄取和乳酸生成的增强作用。结论 mir-181c可以通过抑制HK2的蛋白表达来抑制CAFs的糖酵解。

急性脑梗死患者的磁共振弥散峰度成像参数变化及与血清miR-181c、miR-210水平变化的相关性分析

本研究探讨急性脑梗死患者磁共振弥散峰度成像(DKI)参数变化及与血清微小RNA(miR)-181c、miR-120水平的相关性及意义。选取急性脑梗死患者155例(观察组),同时选取体检健康者100例作为对照组,检测两组血清miR-181c、miR-210水平,采用观察组给予MRI检查,分析平均峰度(MK)、径向峰度(RK)、轴向峰度(AK)、轴向张量(AD)、平均扩散系数(MD)和径向张量(RD)。实验结果显示:观察组血清miR-181c相对表达量明显高于对照组(P<0.05),而miR-120相对表达量明显低于对照组(P<0.05);观察组患者病变侧MK、RK和AK明显高于对照侧(P<0.05),而AD、MD和RD明显低于对照侧(P<0.05);多元线性回归分析结果显示:miR-181c相对表达量、miR-210相对表达量、MK、RK、AK是NIHSS评分的影响因素(P<0.05)。研究证实:急性脑梗死患者DKI参数与血清miR-181c呈正相关,与miR-210呈负相关,与患者神经缺损程度有一定关系。

狗脊多糖通过miR-181c调控IL-1β介导的骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡

目的探讨狗脊多糖(CBPS)通过调节miR-181c表达调控软骨细胞增殖和凋亡的潜在机制。方法以白细胞介素(IL)-1β联合CBPS干预软骨细胞,qRT-PCR、噻唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测细胞中miR-181c表达及细胞增殖和凋亡。检测过表达miR-181c联合IL-1β处理对细胞增殖和凋亡的影响。采用MTT、流式细胞仪和Western印迹检测下调miR-181c表达联合CBPS对IL-1β介导的细胞增殖和凋亡及细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-13蛋白表达的影响。结果IL-1β组miR-181c表达水平(0.41±0.06)明显低于Control组(1.00±0.14,t=6.709,P=0.000)。IL-1β组48 h及72 h细胞活力均明显低于Control组,而细胞凋亡率明显高于Control组(均P<0.05);miR-181c组miR-181c表达水平(4.72±0.35)明显高于miR-con组(1.06±0.12,P<0.05)。与Control组(1.00±0.08)相比,IL-1β组miR-181c表达水平(0.35±0.05)显著降低(P<0.05),IL-1β+miR-181c组miR-181c表达水平(0.81±0.11)明显高于IL-1β+miR-con组(0.38±0.07,P<0.05),基本恢复至正常水平。IL-1β组48 h及72 h细胞活力均明显低于Control组,而细胞凋亡率均明显高于Control组(均P<0.05);IL-1β+CBPS组48 h及72 h细胞活力均明显高于IL-1β+PBS组,而细胞凋亡率均明显低于IL-1β+PBS组(均P<0.05)。IL-1β组48 h、72 h细胞活力及细胞凋亡率均明显低于Control组(P<0.05);IL-1β+CBPS组48 h及72 h细胞活力及细胞凋亡率均明显高于IL-1β+PBS组(P<0.05)。IL-1β+CBPS组TNF-α及MMP-13水平明显低于IL-1β+PBS组,而TIMP-1水平明显高于IL-1β+PBS组(均P<0.05);IL-1β+CBPS+anti-miR-181c组TNF-α及MMP-13水平均明显高于IL-1β+CBPS+anti-miR-con组,而TIMP-1水平明显低于IL-1β+CBPS+anti-miR-con组(均P<0.05)。结论CBPS能够通过上调miR-181c表达,促进软骨细胞增殖并诱导凋亡,同时降低MMP-13/TIMP-1比值和TNF-α分泌。

脑梗死患者血清miR-181c、miR-128b表达水平及其与90天预后的相关性

目的探讨脑梗死患者血清微小RNA(miRNA)miR-181c、miR-128b表达水平及其与90天预后的相关性,为miRNA在脑梗死诊断和治疗上提供参考意义。方法选取128例脑梗死患者以及同期108例健康体检者作为研究对象,分别作为研究组和对照组。比较两组研究对象的miR-181c和miR-128b表达水平,并分析miR-181c、miR-128b表达水平与疾病严重程度的相关性以及脑梗死相关危险因素;根据90天随访的预后情况分为预后良好组和预后不良组,并对影响90天预后的相关因素进行单因素和Logistic回归分析,探讨影响疾病发生及预后的独立影响因素。结果研究组吸烟、高血脂、高血压、糖尿病以及心房颤动比例明显高于对照组(P<0.05),研究组患者miR-181c、miR-128b表达水平显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),Logistic回归分析结果显示糖尿病、miR-181c、miR-128b表达水平是脑梗死的独立危险因素(P<0.05);Spearman相关性分析显示急性脑梗死患者病情严重程度与血清miR-181c和miR-128b水平呈正相关(r=0.867,P=0.005;r=0.885,P=0.002);预后不良组患者发生高血压、糖尿病、心房颤动的比例和入院时NIHSS评分以及血清miR-181c、miR-128b水平均显著高于预后良好组(P<0.05),Logistic回归分析结果显示入院时NIHSS评分及血清miR-181c、miR-128b水平均与脑梗死患者90天预后存在密切相关性(P<0.05)。结论脑梗死患者血清miR-181c、miR-128b表达水平显著高于健康人群,糖尿病、miR-181c、miR-128b表达水平是脑梗死的危险因素(P<0.05),miR-181c、miR-128b表达水平与患者脑梗死严重程度存在显著正相关,且两者表达水平以及NIHSS评分均与急性脑梗死患者90天预后存在密切联系。