灰树花多糖通过LncRNA HULC/miR-186-5p轴调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析灰树花多糖(Grifola frondose polysaccharide,GFP)对胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:将对数期GBC-SD细胞随机分组:对照组、GFP组(0.5、1、2µg/mL GFP)、shNC组、shHULC组、miR-NC组、miR-186-5p mimics组、GFP+pcDNA组、GFP+pcDNA-HULC组。CCK-8法检测细胞抑制率;Transwell小室法检测GBC-SD细胞迁移和侵袭;Western Blot印迹检测Cyclin D1、P21、MMP-2、MM-9蛋白水平;qRT-PCR检测LncRNA HULC和miR-186-5p的水平;Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p的结合位点,双荧光素酶报告实验检测LncRNA HULC和miR-186-5p的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测GFP对GBC-SD细胞移植瘤体内生长的影响。结果:0.25~8µg/mL GFP对胆囊癌GBC-SD细胞具有一定的抑制作用;与对照组比较,0.5、1、2µg/mL的GFP(极)显著(P<0.05,P<0.01)抑制GBC-SD细胞迁移和侵袭,(极)显著降低Cyclin D1、MMP-2和MM-9水平(P<0.05,P<0.01),(极)显著(P<0.05,P<0.01)增加P21水平,极显著(P<0.01)下调LncRNA HULC,上调miR-186-5p的表达(P<0.05,P<0.01);Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p存在结合位点,与miR-NC组比较,miR-186-5p mimics组HULC-WT的荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),而HULC-MUT荧光素酶活性无统计学差异(P>0.05);与shNC组比较,shHULC组HULC相对表达水平极显著(P<0.01)降低,miR-186-5p相对表达水平极显著(P<0.01)增加,细胞存活率、迁移数目、侵袭数目极显著(P<0.01)降低,Cylin D1、MMP-2和MM-9水平极显著下调(P<0.01);与GFP+pcDNA组比较,GFP+pcDN-HULC组抑制率显著降低(P<0.05),迁移数目、侵袭数目极显著增加(P<0.01),Cylin D1、MMP-2和MM-9水平显著上调(P<0.05);与GFP+pcDNA给药组比较,GFP+pcDN-HULC给药组瘤体体积、质量极显著增加(P<0.01),miR-186-5p水平极显著下调(P<0.01)。结论:GFP可抑制胆囊癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与调控LncRNA HULC/miR-186-5p有关。

急性胰腺炎患者血清TFF2、miR-186-5p表达水平与疾病严重程度的关系

目的 探究急性胰腺炎(AP)患者血清中三叶因子2(TFF2)、微小RNA-186-5p(miR-186-5p)表达水平与疾病严重程度的关系。方法 选取2021年3月—2022年3月沧州市中心医院收治的AP患者110例作为研究对象,根据病情严重程度分为轻症组60例和重症组50例,同时选取55名在本院体检健康人员作为对照组,比较三组血清TFF2、miR-186-5p水平。采用Pearson相关性分析血清TFF2、miR-186-5p水平与hs-CRP、IL-18、TNF-α水平和APACHEⅡ评分的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)分析血清TFF2、miR-186-5p水平对重症SAP的诊断价值。采用Logistic回归分析影响重症AP的因素。结果 重症组TFF2、hs-CRP、IL-18、TNF-α水平和APACHEⅡ评分均高于轻症组,miR-186-5p水平低于轻症组(P<0.05)。相关性分析显示,miR-186-5p与TFF2有靶向结合位点且miR-186-5p与TFF2表达呈负相关(r=-0.479,P<0.05),AP患者血清TFF2与hs-CRP、TNF-α、IL-18、APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.496、0.541、0.474、0.418,P<0.05);miR-186-5p与hs-CRP、TNF-α、IL-18、APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.421、-0.561、-0.443、-0.425,P<0.05)。ROC分析显示,TFF2、miR-186-5p辅助评估是否发生重症AP的曲线下面积(AUC)分别是0.800(95%CI:0.717~0.882)、0.824(95%CI:0.747~0.900),二者联合检测的灵敏度为80.00%,特异度为83.30%,AUC为0.888(95%CI:0.826~0.950)。多因素Logistic回归分析显示,TFF2是影响重症AP的危险因素,miR-186-5p是保护因素(P<0.05)。结论 AP患者血清TFF2水平升高,miR-186-5p表达水平降低,并且二者与AP患者病情的严重程度密切相关,可作为评估AP患者病情的分子标志物。

miR-186-5p调控PRKAA2促进肺腺癌细胞铁死亡的机制研究

背景与目的肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型,miRNAs作为基因表达的调控分子调控细胞增殖、凋亡和分化,从而影响细胞内稳态。本研究通过实验验证miR-186-5p通过调控其下游靶蛋白PRKAA2影响铁死亡途径从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。方法前期研究获得肺癌中表达显著下调的miRNA,即miR-186-5p;生物信息学方法预测其下游铁死亡相关靶蛋白并查询其在肺腺癌中的表达水平及对患者生存预后的影响;双荧光素酶验证两者结合位点;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测过表达miR-186-5p后PRKAA2的基因和蛋白表达情况;EdU、Transwell、划痕实验验证miR-186-5p在A549、H1299细胞中的增殖、侵袭迁移能力的影响以及miR-186-5p对Fer-1抑制铁死亡敏感性的作用机制;活性氧(reactive oxygen species,ROS)实验检测miR-186-5p对肺腺癌细胞ROS含量的影响;丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞铁死亡指标变化的影响;脂质ROS(lipid ROS,L-ROS)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞L-ROS含量的影响。结果PRKAA2在肺腺癌中表达上调;过表达miR-186-5p使PRKAA2的基因和蛋白表达量下降;过表达miR-186-5p通过调控PRA2促进铁死亡抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力;miR-186-5p能够增加A549细胞ROS含量;过表达miR-186-5p和敲低PRKAA2上调肺腺癌细胞MDA含量,下调还原型GSH含量;miR-186-5p通过靶向PRKAA2增加肺腺癌细胞L-ROS含量,促进肺腺癌细胞铁死亡敏感性。结论miR-186-5p通过靶向调控PRA2促进肺腺癌A549、H1299细胞铁死亡,从而抑制肺腺癌增殖、侵袭和迁移能力。

miR-186-5p靶向CXCL13基因通过Wnt/β-catenin信号调节胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭

目的探讨miR-186-5p对胃癌HGC-27细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法在胃癌HGC-27细胞中通过脂质体转染miR-186-5p模拟物(mimics),采用实时荧光定量PCR检测转染效果,MTT实验分析HGC-27细胞增殖水平,流式细胞术分析细胞周期变化和细胞凋亡情况,Transwell实验分析HGC-27细胞迁移和侵袭能力,生物信息学、双荧光素酶报告基因实验以及Western blotting分析miR-186-5p和CXCL13的靶向关系,Western blotting分析Wnt/β-catenin信号通路活化情况。结果体外转染miR-186-5p mimics可上调HGC-27细胞中miR-186-5p的表达。上调miR-186-5p表达能够抑制HGC-27细胞体外增殖、细胞周期进程、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,上调miR-186-5p表达能够抑制β-catenin和c-Myc的表达。结论miR-186-5p可靶向抑制CXCL13的表达,阻断Wnt/β-catenin信号通路,并抑制胃癌HGC-27细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-186-5p通过抑制HMGB1信号通路改善脊髓损伤后神经修复

目的探究miR-186-5p在脊髓损伤(SCI)中的变化及对神经修复的影响。方法①将小胶质细胞分为对照组(正常培养)、脂多糖(LPS)组(1μg/ml LPS刺激24 h)、LPS+miR-186-5p-mimic组(转染miR-186-5p-mimic后1μg/ml LPS刺激24 h)和LPS+miR-186-5p-inhibitor组(转染miR-186-5p-inhibitor后1μg/ml LPS刺激24 h)。通过RT-PCR检测细胞中miR-186-5p水平,通过RT-PCR和Western blot检测细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)mRNA和蛋白表达水平,通过ELISA检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平。②将大鼠分为假手术组、SCI+LV-NC组和SCI+LV-miR-186-5p组,每组10只大鼠,假手术组大鼠仅行椎板切除术,其余组采用脊髓打击器建立SCI模型。建模后,假手术组大鼠正常饲养,SCI+LV-NC组和SCI+LV-miR-186-5组大鼠分别脊髓注射空载体慢病毒和过表达miR-186-5p的重组慢病毒。通过RT-PCR检测脊髓组织中miR-186-5p水平。通过Western blot检测脊髓组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、p-p65、total p65、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、血红素加氧酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD-1)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。ELISA检测脊髓组织中的TNF-α和IL-6的水平;免疫荧光检测脊髓组织中的离子钙结合接头蛋白分子1(IBA-1)、iNOS、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经丝蛋白-200(NF-200)的表达;通过BBB评分评价大鼠的运动功能;通过尼氏染色测定脊髓前角运动神经元数量。结果①与对照组相比,LPS组miR-186-5p表达降低(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-186-5p-mimic组miR-186-5p表达升高(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+miR-186-5p-inhibitor组miR-186-5p水平降低(P<0.05),而HMGB1、iNOS、TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05)。②与假手术组相比,SCI+LV-NC组大鼠脊髓出现明显损伤,iNOS/IBA-1比例升高(P<0.05),TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2、HO-1和SOD-1蛋白表达下调(P<0.05),GFAP和IBA-1的阳性染色比例增加(P<0.05),HMGB1和TLR4的蛋白水平及NF-κB p65的磷酸化水平增加(P<0.05),BBB评分降低(P<0.05),脊髓前角运动神经元数量减少(P<0.05)。与SCI+LV-NC组相比,SCI+LV-miR-186-5p组脊髓损伤区域减少,iNOS/IBA-1比例降低(P<0.05),TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05),Bax蛋白表达下调(P<0.05),Bcl-2、HO-1和SOD-1蛋白表达上调(P<0.05),GFAP和IBA-1的阳性染色比例降低(P<0.05),HMGB1和TLR4的蛋白水平及NF-κB p65的磷酸化水平降低(P<0.05),BBB评分升高(P<0.05),脊髓前角运动神经元数量增多(P<0.05)。结论上调miR-186-5p通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路提高了脊髓损伤大鼠的运动功能和神经修复。

miR-186-5p基于JAK/STAT3通路对三叉神经痛模型大鼠胶质细胞活化的影响

目的 基于酪氨酸蛋白激酶/信号传导与转录激活因子(JAK/STAT)3通路探讨微小RNA-186-5p(miR-186-5p)对三叉神经痛模型大鼠胶质细胞活化的影响。方法 选取50只健康雄性大鼠,随机选取10只为正常组,剩余40只建立三叉神经痛模型,最终39只建模成功,随机分为三叉神经痛组、上调组、下调组各13只。建模完成后上调组注射10μl miR-186-5p过表达慢病毒悬液,下调组注射10μl miR-186-5p沉默慢病毒悬液,正常组、三叉神经痛组不做处理。对比各组体质量、机械痛阈,酶标分析仪检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)水平,Western印迹法检测非受体型JAK2、STAT3表达。结果 与正常组比较,其他3组GDNF、GFAP、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平显著较高(P<0.05)。与三叉神经痛组比较,上调组GDNF、GFAP表达水平较低,TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平较高,下调组GDNF、GFAP表达水平较高,TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与上调组比较,下调组GDNF、GFAP表达水平较高,TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调组JAK2、STAT3表达显著低于三叉神经痛组、上调组(P<0.05)。结论 下调三叉神经痛大鼠miR-186-5p表达能有效改善机械痛阈,减轻炎症反应,改善胶质细胞GDNF、GFAP表达,其机制可能是JAK/STAT3信号通路达得调控效果的。

miR-186-5p通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化

先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化。我们首先分析了miR-186-5p在人肺癌细胞中的表达。荧光定量PCR(QRT-PCR)结果显示,与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺腺癌细胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表达量明显降低。为研究miR-186-5p在肺腺癌细胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表达载体,实现了在A549细胞中的过表达。基因转染结合Transwell侵袭结果显示,与对照质粒转染的A549细胞相比,过表达miR-186-5p的A549细胞的体外侵袭能力明显下降。Western印迹检测细胞中EMT相关标志物揭示,GV369-miR-186-5p转染的A549细胞中的上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达明显上调,而神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达明显下调。同时,GV369-miR-186-5p转染引起其靶基因——垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1)编码蛋白在A549细胞中明显降低。重要的是,过表达miR-186-5p与敲减PTTG1均可导致上皮-钙黏着蛋白表达上调,而神经-钙黏着蛋白和波形蛋白下调;而miR-186-5p和PTTG1表达载体共转染后,3种EMT相关标志物在A549的表达与对照细胞的表达无明显差异,提示过表达PTTG1可抵消miR-186-5p对EMT相关标志物表达的影响。综上所述,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制EMT的发生,进而抑制肺腺癌细胞的侵袭转移。

miR-186-5p对绵羊黑色素细胞迁移增殖的影响

旨在研究miR-186-5p对绵羊黑色素细胞迁移增殖的影响。本研究通过荧光定量PCR检测不同毛色绵羊皮肤中miR-186-5p的表达差异;运用细胞转染使miR-186-5p在绵羊黑色素细胞中过表达,然后通过荧光定量PCR检测miR-186-5p的表达,通过分光光度计测定转染细胞中黑色素含量,运用划痕试验判定黑色素细胞的增殖迁移能力。结果显示,miR-186-5p在绵羊不同毛色皮肤中均有表达,但白色皮肤表达高于黑色皮肤且差异显著(P<0.05);在过表达miR-186-5p的绵羊黑色素细胞中,miR-186-5p的表达显著升高(P<0.01);黑色素含量显著减少(P<0.05);黑色素细胞的增殖和迁移能力有所降低。综上表明,miR-186-5p与绵羊皮肤黑色素的生成有关,绵羊黑色素细胞中过表达miR-186-5p降低了黑色素的生成,同时也抑制了绵羊黑色素细胞的迁移和增殖。

MiR-186-5p通过靶向调控RAB2A在乳腺癌细胞阿霉素耐药性中的逆转作用机制

目的探讨miRNA-186-5p在乳腺癌细胞阿霉素耐药性逆转作用中的分子机制。方法采用阿霉素诱导人乳腺癌细胞系MCF-7,建立阿霉素耐药性细胞株,命名为MCF-7/ADR;采用双荧光素酶实验检测miR-186-5p与RAB2A的靶向结合情况;采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞中miR-186-5p、RAB2A mRNA的表达及RAB2A蛋白的表达情况;特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,下调MCF-7中的miR-186-5p后,采用CCK-8和Western blot分别检测乳腺癌细胞增殖情况以及RAB2A蛋白的表达;采用Western blot和CCK-8分别检测共转染后,细胞增殖情况的变化及PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果双荧光素酶实验结果显示,RAB2A是miR-186-5p的直接靶点;qRT-PCR结果显示,在MCF-7/ADR细胞中miR-186-5p mRNA表达明显下调,而RAB2A mRNA表达没有明显变化,RAB2A的蛋白表达明显上调。特异性上调MCF-7/ADR中的miR-186-5p,其增殖能力明显下降,RAB2A蛋白的表达明显下调;下调MCF-7中的miR-186-5p,其增殖能力明显增加,RAB2A蛋白的表达明显上调。Western blot和CCK-8结果显示,过表达miR-186-5p使PI3K/Akt信号通路表达明显减弱,且上调RAB2A逆转了上调miR-186-5p所致的增殖能力的减弱。结论 miR-186-5p通过靶向调控RAB2A,经PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞的阿霉素耐药和增殖。

miR-186-5p与α-MSH互作对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响

黑色素合成受多种基因和miRNAs的调控,为了研究miR-186-5p与α-MSH协同作用对绵羊黑素细胞黑色素生成的影响。本研究在绵羊黑素细胞中转染miR-186-5p表达载体,同时添加α-MSH,通过实时荧光PCR (quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测MITF、TYR、TYRP1和TYRP2 4种可能与之相关的基因表达情况;利用免疫组化检测MITF蛋白在黑素细胞中的表达和亚细胞定位;通过分光光度法测定黑色素含量变化;利用划痕试验测定细胞迁移情况,试验分为miR-186-5p转染组、miR-186-5p+α-MSH互作组和对照组,每组3个重复。结果显示,miR-186-5p能够抑制绵羊黑素细胞中MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表达,并最终抑制黑色素的生成。而添加α-MSH能缓解miR-186-5p对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2表达的抑制作用,进而在一定程度上恢复黑色素的含量。另外,miR-186-5p还能抑制细胞分裂,并阻碍细胞的迁移,而α-MSH无法抵消miR-186-5p产生的这种负面影响。上述结果表明,在绵羊黑素细胞中,miR-186-5p和α-MSH均参与调控黑色素合成途径,其中,miR-186-5p主要起负调控作用,而α-MSH主要参与相关位点的正调控,并能部分恢复miR-186-5p导致的黑色素含量下降。值得注意的是,miR-186-5p还参与调控细胞的增殖和迁移,而α-MSH不参与相关调控。

MiR-186-5p对绵羊黑色素细胞黑色素生成的调控

黑色素合成是极其复杂的过程,其中涉及多种基因和miRNAs的参与。miR-186-5p在绵羊不同毛色皮肤中差异表达,说明其可能与毛色形成有关,生物信息学预测和绵羊不同毛色皮肤中miR-186-5p和Mitf的差异表达间接说明二者可能存在靶向关系,双荧光报告直接证实了二者的靶向关系。为了证实miR-186-5p在黑色素形成中的作用,本研究构建miR-186-5p真核表达载体,并转染绵羊黑素细胞。结果显示,miR-186-5p通过与Mitf mRNAs的3′UTR结合抑制Mitf的表达和翻译。MITF是Tyr基因家族的调节因子。实时荧光聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和Western免疫印迹结果表明,过表达miR-186-5p引起的MITF下调抑制了TYR、TYRP1和TYRP2的表达。其中,mRNA表达水平分别下降34%、66%和52%;蛋白质表达水平分别下降32%、6%和46%。分光光度检测结果显示,黑色素含量下降59%倍。上述结果表明,miR-186-5p通过抑制靶基因Mitf的表达,抑制了绵羊黑素细胞内黑色素的生成。

拟黑多刺蚁活性组分通过miR-186-5p/Cx43促进结直肠癌SW116细胞凋亡的作用

目的 探究拟黑多刺蚁活性组分促进结直肠癌SW116细胞凋亡的作用机制。方法 采用CCK8法、划痕实验、凋亡实验检测拟黑多刺蚁活性组分对SW116细胞增殖、迁移和凋亡的影响,Western blot法检测拟黑多刺蚁活性组分对SW116细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,RT-qPCR法检测miR-186-5p表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-186-5p与GJA1的靶向关系;过表达/抑制miR-186-5p,并检测Cx43蛋白表达;过表达Cx43,并检测拟黑多刺蚁活性组分对凋亡及相关蛋白、PI3K/Akt信号通路的影响。结果 拟黑多刺蚁活性组分能抑制SW116细胞增殖和迁移能力、Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡、Bax蛋白和miR-186-5p表达。GJA1是miR-186-5p的下游靶基因,过表达miR-186-5p可降低SW116细胞Cx43蛋白表达,抑制miR-186-5p表达可升高SW116细胞Cx43蛋白表达,抑制miR-186-5p表达可逆转拟黑多刺蚁活性组分对Cx43表达的抑制作用。过表达Cx43可逆转拟黑多刺蚁活性组分对SW116细胞凋亡及相关蛋白、PI3K/Akt信号通路的影响。结论 拟黑多刺蚁活性组分抑制SW116细胞恶性生物学行为,通过miR-186-5p/Cx43调控PI3K/Akt信号通路,促进结直肠癌SW116细胞凋亡。

白藜芦醇通过circACTR2/miR-186-5p对高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤的影响

目的探讨白藜芦醇对高糖诱导的视网膜血管内皮细胞(hRMEC)损伤的影响及机制。方法hRMEC分为正常对照(NG)组、高糖(HG)组、HG+白藜芦醇低、中、高剂量组、HG+si-NC组、HG+si-circACTR2组、HG+白藜芦醇+pcDNA组、HG+白藜芦醇+pcDNA-circACTR2组。流式细胞术检测各组hRMEC凋亡率,ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)水平和丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR检测circACTR2和miR-186-5p的表达水平;双荧光素酶报告实验检测circACTR2和miR-186-5p的靶向关系。结果低、中、高剂量白藜芦醇处理后,高糖诱导的hRMEC的凋亡率降低,SOD活性升高,LDH水平和MDA含量降低,circACTR2表达水平降低,miR-186-5p表达水平升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。沉默circACTR2后,hRMEC的凋亡率降低,SOD活性升高,LDH水平和MDA含量降低(P<0.05)。过表达circACTR2可减弱白藜芦醇对高糖诱导的hRMEC损伤的作用。circACTR2靶向调控miR-186-5p表达。结论白藜芦醇可通过调控circACTR2/miR-186-5p抑制高糖诱导的hRMEC损伤。

急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清miR-186-5p,miR-23和miR-652水平检测的临床意义

目的探讨急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清miR-186-5p,miR-23b和miR-652水平检测的临床意义。方法选择2016年1月~2018年1月在延安大学附属医院行经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)手术的ACS患者68例作为观察组,另外选取同期做冠脉造影符合冠心病诊断,但排除ACS的患者68例作为对照组。收集两组受试对象外周血,检测血清中miR-186-5p,miR-23b和miR-652水平,并进行相关性分析。绘制ROC曲线分析miR-186-5p,miR-23b和miR-652单个指标及联合使用诊断ACS的临床价值。结果与对照组比较,观察组患者血清中miR-186-5p,miR-23b和miR-652水平均提高,差异有统计学意义(Z=3.312~6.451,均P<0.05)。不同病变支数的ACS患者血清中miR-186-5p,miR-23b和miR-652的水平比较不全相同,差异有统计学意义(F=6.017~8.151,均P<0.05)。与术前比较,术后患者血清中miR-186-5p,miR-23b和miR-652水平显著降低,差异有统计学意义(Z=2.090~3.036,均P<0.05)。ACS患者血清中miR-186-5p,miR-23b和miR-652水平与cTnI呈显著相关(r=0.689,0.779,0.746,均P=0.000)。其临界值、AUC,灵敏度和特异度,miR-186-5p依次为0.110,0.775,61.8%和91.2%;miR-23b依次为0.133,0.799,69.1%和88.2%;miR-652依次为0.164,0.789,67.6%和91.2%。三者联用AUC,灵敏度和特异度分别为0.941,91.2%和83.8%。cTnI的AUC灵敏度和特异度分别为0.857,76.5%和79.4%。miRNAs联合AUC显著高于cTnI(Z=2.243,P<0.05)。结论ACS患者血清中miR-186-5p,miR-23b和miR-652水平升高,联合使用诊断ACS具有一定的临床价值。

长链非编码RNA SNHG3通过靶向调节miR-186-5p调控WNT5A对黑色素瘤增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA SNHG3、miR-186-5p和WNT5A对黑色素瘤增殖和侵袭的影响情况及相关机制。方法qPCR检测黑色素瘤组织和癌旁组织、黑色素瘤细胞系和人永生化表皮细胞系中SNHG3、miR-186-5p和WNT5A的表达情况;采用starBase数据库预测并用双荧光素酶报告基因验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p和WNT5A的靶向关系;采用SNHG3-siRNA和miR-186-5p抑制剂分别构建SNHG3和miR-186-5p低表达模型,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞侵袭,qPCR和Western blotting检测干扰SNHG3或miR-186-5p后WNT5A的mRNA和蛋白表达情况。结果与癌旁组织或人永生化表皮细胞相比,黑色素瘤组织或细胞中SNHG3表达明显增高(P<0.05);miR-186-5p表达明显降低(P<0.05),二者表达水平呈负相关;荧光素酶活性实验进一步证实SNHG3和miR-186-5p存在靶向关系;功能实验证实,敲低SNHG3抑制了黑色素瘤细胞的增殖和侵袭,而低表达miR-186-5p具有相反的效应。进一步探究miR-186-5p的下游机制表明,WNT5A是其下游的重要靶点。结论SNHG3在黑色素瘤发生发展过程中起重要作用,SNHG3可以调节miR-186-5p/WNT5A轴调控黑色素瘤细胞的增殖和侵袭能力。

miR-186-5p调控猪原代前体脂肪细胞增殖和分化的研究

旨在探究miR-186-5p对猪原代前体脂肪细胞增殖和成脂分化的调控作用及机制。本研究采集7日龄健康马身猪公猪的颈部皮下脂肪,分离培养马身猪原代前体脂肪细胞;猪原代前体脂肪细胞分为4组,分别转染miR-186-5p模拟物(mimics)及其对照组(mimics NC),miR-186-5p抑制剂(inhibitor)及其对照组(inhibitor NC),用CCK8和划痕试验分析猪原代前体脂肪细胞的增殖效果,油红O染色检测其成脂分化能力,qPCR检测其增殖和成脂分化相关基因的表达水平;预测miR-186-5p的靶基因,用双荧光素酶报告试验检测miR-186-5p与靶基因的相互作用。结果,当猪原代前体脂肪细胞中转染mimics时,miR-186-5p的表达量极显著升高(P<0.01),细胞增殖能力和增殖相关基因:增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinases 4,CDK4)的表达量以及预测靶基因去乙酰化酶2(sirtuins 2,SIRT2)的表达量都极显著降低(P<0.01),而细胞成脂分化能力和成脂分化相关基因:过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)、固醇调节元件结合转录因子1(sterol regulatory element binding transcription factor 1,SREBF1)、CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)、脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)的表达量都极显著升高(P<0.01);当猪原代前体脂肪细胞转染inhibitor时,miR-186-5p的表达量极显著降低(P<0.01),细胞增殖能力以及增殖相关基因PCNA和CDK4的表达量、预测靶基因SIRT2的表达量都显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01),而细胞成脂分化能力以及成脂分化相关基因PPARγ、SREBF1、C/EBPβ、FABP4、LPL的表达量都极显著降低(P<0.01)。转染miR-186-5p mimics可以显著抑制SIRT23′UTR野生型双荧光素酶报告载体(SIRT2-Wt-psiCHECK-2)中荧光素酶的活性,但不影响SIRT23′UTR突变型双荧光素酶报告载体(SIRT2-Mut-psiCHECK-2)中荧光素酶的活性。miR-186-5p可以靶向结合SIRT2的3′UTR序列,降低SIRT2的表达,抑制马身猪原代前体脂肪细胞增殖,促进其成脂分化。

白藜芦醇通过上调miR-186-5p表达抑制肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的:探讨白藜芦醇抑制肝癌细胞转移的分子机制。方法:利用CCK-8法检测白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7存活率的影响,筛选后续实验适合的浓度;实时定量RT-PCR检测肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p的表达;细胞划痕实验、Transwell小室实验和蛋白质印迹法分别检测白藜芦醇或miR-186-5p表达变化对肝癌细胞HepG2和Huh7迁移、侵袭和上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:6.25μmol/L白藜芦醇对肝癌细胞HepG2和Huh7的存活率无显著影响,遂后续实验中白藜芦醇的浓度选择6.25μmol/L。实验结果显示,白藜芦醇可以抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,并增加上皮钙黏素表达,降低波形蛋白和Twist1表达(均P<0.05).与癌旁组织和正常肝细胞相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-186-5p表达均下调(均P<0.05).白藜芦醇能诱导肝癌细胞中miR-186-5p的表达(均P<0.01)。上调miR-186-5p表达可显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(均P<0.05),而敲低miR-186-5p表达能阻断白藜芦醇对肝癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的抑制作用。结论:白藜芦醇能体外抑制肝癌转移,其机制可能与上调miR-186-5p表达有关。

miR-186-5p通过下调MYCN轴增强小儿神经母细胞瘤NB1/DDP细胞顺铂敏感性的机制研究

目的 探讨miR-186-5p对小儿神经母细胞瘤NB1/DDP细胞顺铂敏感性的影响。方法 构建小儿神经母细胞瘤细胞顺铂耐药株NB1/DDP后,实验分组为:NC组(未加入DDP的NB1顺铂敏感细胞)、Resistance组(加入0.5 mol·L^(-1)DDP处理的NB1/DDP耐药细胞)、miR-186-5p mimic组(在0.5 mol·L^(-1)DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染miR-186-5p mimic)、miR-186-5p inhibitor组(在0.5 mol·L^(-1)DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染miR-186-5p inhibitor)、pcDNA3.1-MYCN组(在0.5 mol·L^(-1)DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染pcDNA3.1-MYCN)、sh-MYCN组(在0.5 mol·L^(-1)DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染sh-MYCN)和miR-186-5p mimic+pcDNA3.1-MYCN组(在0.5 mol·L^(-1)DDP处理的NB1/DDP耐药细胞中转染miR-186-5p mimic和pcDNA3.1-MYCN);应用RT-qPCR检测miR-186-5p的表达水平;双荧光素酶报告基因验证miR-186-5p和MYCN的靶向关系;Western blot检测MYCN的表达水平;采用MTT试剂盒和Transwell法分别检测NB1/DDP细胞增殖活力和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 过表达miR-186-5p显著抑制NB1/DDP细胞增殖和侵袭(P<0.05)并增强NB1/DDP细胞对顺铂的敏感性,而抑制miR-186-5p则相反;miR-186-5p靶向负调控MYCN的表达水平;过表达MYCN逆转了miR-186-5p对NB1/DDP细胞增殖和侵袭的抑制作用(P<0.05)。结论 miR-186-5p通过下调MYCN的表达水平增强NB1/DDP细胞对顺铂的敏感性。

LncRNA XIST通过调控miR-186-5p促进非小细胞肺癌的增殖和侵袭实验研究

目的:探究LncRNA XIST通过调控miR-186-5p促进非小细胞肺癌增殖和侵袭的作用机制。方法:选用非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549、H1299、Calu-3及人支气管上皮细胞系BEAS-2B进行研究。采用RT-PCR检测NSCLC细胞系中LncRNA XIST表达情况。构建XIST siRNA转染敲降XIST表达,采用MTT法、Transwell实验及Western blot法验证其对NSCLC细胞增殖、侵袭及相关蛋白表达的影响。构建包含miR-186-5p结合位点的pmir GLO-XIST-Wt和pmir GLO-XIST-Mut基因片段报告载体,采用荧光素基因实验进行两者结合验证,并利用RIP实验及营救实验检测验证XIST和miR-186-5p靶向调控关系。结果:NSCLC细胞系A549、H1299、Calu-3中LncRNA XIST表达水平均显著高于人支气管上皮细胞系BEAS-2B(P<0.05)。敲降XIST表达后A549、H1299细胞中LncRNA XIST表达显著降低,miR-186-5p表达显著增高(P<0.05)。过表达miR-186-5p可显著降低A549、H1299细胞中XIST表达。敲降XIST显著抑制A549、H1299细胞增殖、侵袭能力,降低CCND1、PCNA、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。XIST是miR-186-5p的靶向基因。XIST与miR-186-5p存在于相同RISC复合物中,miR-186-5p以Ago2依赖的方式调控XIST。过表达miR-186-5p后A549细胞增殖、侵袭能力显著降低,逆转XIST过表达后促进A549细胞增殖、侵袭。结论:LncRNA XIST在非小细胞肺癌中高表达,LncRNA XIST通过调控miR-186-5p进而抑制XIST表达影响NSCLC的生物学行为。

长链非编码RNA LINC00665对小细胞肺癌增殖、侵袭的影响及其与miR-186-5p的调控关系

目的观察长链非编码RNALINC00665对小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响,并分析LINC00665与miR-186-5p在此过程中的调控关系。方法选取小细胞肺癌细胞H1688和正常肺上皮细胞BEAS-2B,采用实时荧光定量PCR法检测细胞中的LINC00665。将H1688细胞分为三组,LINC00665过表达组和阴性序列组分别转染LINC00665过表达序列和对照序列,对照组不转染;采用MTT法观察细胞增殖情况,Transwell实验观察细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR法检测细胞中的miR-186-5p。再将H1688细胞另分为三组,LINC00665过表达组和miR-186-5p+LINC00665过表达组分别转染LINC00665过表达序列、miR-186-5p+LINC00665过表达序列,对照组不转染;采用实时荧光定量PCR法检测细胞中的LINC00665,MTT法观察细胞增殖情况,Transwell实验观察细胞侵袭能力。结果LINC00665在H1688细胞中的表达量高于BEAS-2B细胞(P<0.05)。LINC00665过表达组除0 h外同时点细胞OD值、穿膜细胞数高于阴性序列组和对照组(P均<0.05),细胞中miR-186-5p表达量低于阴性序列组和对照组(P均<0.05),阴性序列组与对照组各指标差异无统计学意义。细胞中LINC00665表达量、除0 h外同时点细胞OD值、穿膜细胞数LINC00665过表达组>miR-186-5p+LINC00665过表达组>对照组(P均<0.05)。结论LINC00665可促进小细胞肺癌细胞的增殖、侵袭,该作用与其负向调控miR-186-5p表达有关。