CircRHOT1调节miR-187-3p/SOX4轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的:研究环状RNA ras同源物基因家族成员T1(CircRHOT1)调节miR-187-3p/性别决定区Y框蛋白4(SOX4)轴对乳腺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot检测体外培养的人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231中CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;将体外培养的MCF-7细胞随机分为对照组、CircRHOT1敲低(转染CircRHOT1 siRNA质粒)组、miR-187-3p mimics(转染miR-187-3p mimics)组、共转染阴性对照(转染空载质粒和miR-187-3p inhibitor阴性对照)组、CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor(转染CircRHOT1 siRNA质粒和miR-187-3p inhibitor)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞CircRHOT1、miR-187-3p与SOX4表达;采用EdU染色和平板集落形成实验检测各组细胞增殖;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡;采用免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达比值(Bax/Bcl-2)。各组细胞与人外周血淋巴细胞共培养并分组转染后,采用流式细胞术检测各组人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例;采用MTT法检测人外周血淋巴细胞对各组MCF-7细胞的杀伤率。采用双荧光素酶报告实验检测MCF-7细胞CircRHOT1对miR-187-3p、miR-187-3p对SOX4的靶向调控。结果:与人正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,人乳腺癌MCF-7、Hs-578T、MDA-MB-231细胞CircRHOT1、SOX4蛋白与mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-187-3p表达明显降低(P<0.05)。与对照组相比,CircRHOT1敲低组、miR-187-3p mimics组细胞SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率降低(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率升高(P<0.05)。与CircRHOT1敲低组相比,CircRHOT1敲低+miR-187-3p inhibitor组细胞CircRHOT1表达差异无统计学意义(P>0.05),SOX4蛋白与mRNA表达、EdU阳性率、集落生成率升高(P<0.05),miR-187-3p表达、凋亡率、Bax/Bcl-2、人外周血淋巴细胞中活化CD8^(+)T细胞比例及其对MCF-7细胞杀伤率降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低CircRHOT1可通过上调miR-187-3p而降低SOX4表达,从而减弱乳腺癌细胞增殖活性,并促进其凋亡,还可抑制CD8^(+)T细胞活化并增强其癌细胞杀伤力,减弱乳腺癌细胞免疫逃逸。

CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞CNE1恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircMATR3调节miR-129-5p/SOX2轴对鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:以鼻咽癌细胞系CNE1为研究对象,将CNE1细胞分NC组、si-NC组、si-CircMATR3组、miR-NC组、miR-129-5p mimic组、si-CircMATR3+inhibitor NC组、si-CircMATR3+miR-129-5p inhibitor组、si-SOX2组。RT-qPCR检测细胞中CircMATR3、miR-129-5p、SOX2 mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间的靶向关系;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Hoechst33342实验观察细胞形态学变化;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡。结果:CircMATR3与miR-129-5p、miR-129-5p与SOX2之间存在靶向关系;沉默CircMATR3或过表达miR-129-5p或沉默SOX2可以抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭和细胞周期转变,促进细胞凋亡和凋亡小体的形成;抑制miR-129-5p表达一定程度可以逆转沉默CircMATR3对于CNE1细胞的抑制作用。结论:沉默CircMATR3可以上调miR-129-5p表达,抑制SOX2表达,进而抑制鼻咽癌细胞CNE1的克隆形成、侵袭,促进细胞凋亡。

CircCSNK1G1调节miR-381-3p/BRD4轴对喉癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircCSNK1G1调节miR-381-3p/溴结构域蛋白4(BRD4)轴对喉癌(laryngeal cancer,LC)细胞恶性生物学行为的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、western blot分别检测60例LC患者癌组织、癌旁组织及喉上皮细胞NP69及人LC细胞Hep-2、Tu212、M4E中CircCSNK1G1、miR-381-3p、BRD4蛋白表达;将人喉癌Hep-2细胞分为:control组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-CircCSNK1G1组(转染si-CircCSNK1G1)、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组(si-CircCSNK1G1和inhibitor-NC共转染)、si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组(si-CircCSNK1G1和miR-381-3p inhibitor共转染);RT-qPCR检测Hep-2细胞中CircCSNK1G1、miR-381-3p的表达水平;MTT法检测Hep-2细胞增殖;划痕实验检测Hep-2细胞迁移;Transwell小室检测Hep-2细胞侵袭;流式细胞仪检测Hep-2细胞凋亡;western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及BRD4蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证CircCSNK1G1和miR-381-3p、miR-381-3p和BRD4的关系。结果:在LC组织和LC细胞中,CircCSNK1G1、BRD4蛋白高表达,miR-381-3p低表达,且在Hep-2细胞中CircCSNK1G1、BRD4蛋白水平最高,miR-381-3p表达最低(P<0.05),因此,选择Hep-2细胞进行转染;与control组、si-NC组比较,si-CircCSNK1G1组Hep-2细胞中CircCSNK1G1表达、OD490值、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、Bcl-2、BRD4蛋白表达显著降低,miR-381-3p、凋亡率、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与si-CircCSNK1G1组、si-CircCSNK1G1+inhibitor-NC组比较,si-CircCSNK1G1+miR-381-3p inhibitor组Hep-2细胞中OD490值、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、MMP-2、Bcl-2、BRD4蛋白表达显著升高,miR-381-3p、凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);CircCSNK1G1靶向调控miR-381-3p表达,miR-381-3p靶向负调控BRD4表达。结论:敲低CircCSNK1G1可能通过靶向miR-381-3p来下调BRD4表达,进而抑制Hep-2细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。

miR-363-3p靶向调控SOX4抑制卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-363-3p靶向调控SOX4对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭影响。方法:RT-qPCR检测miR-363-3p和SOX4在正常卵巢IOSE80细胞及卵巢癌SKOV3细胞中的表达。在SKOV3细胞中转染miR-363-3p mimics和mimics NC,Transwell实验探究miR-363-3p对SKOV3细胞迁移和侵袭作用;采用RT-qPCR和Western blot分别检测SOX4、vimentin和E-cadherin mRNA和蛋白表达。双荧光素酶试验检测miR-363-3p和SOX4的靶向关系。结果:与人正常卵巢细胞相比,SKOV3细胞中miR-363-3p表达降低、SOX4表达升高(P<0.05)。在SKOV3细胞中过表达miR-363-3p可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。结果,SOX4和vimentin表达miR-363-3p mimics组低于mimics阴性对照组和空白对照组,E-cadherin表达高于mimics阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。miR-363-3p靶向调控SOX4的3'-UTR(P<0.05)。结论:miR-363-3p通过结合到SOX4的3'-UTR促进SOX4的降解,从而下调vimentin和上调E-cadherin的活性,抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭。

超声微泡介导miR-187-3p调节S100A4对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探究超声微泡(UM)介导miR-187-3p对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法qRT-PCR检测不同乳腺细胞中miR-187-3p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-187-3p与S100钙结合蛋白A4(S100A4)的靶向关系。使用miR-187-3p mimic、miR-NC或UM介导的miR-187-3p mimic、miR-NC处理MDA-MB-231细胞,并过表达S100A4进行回复实验,采用qRT-PCR、Westernblot检测细胞中miR-187-3p、S100A4mRNA和蛋白表达水平,CCK-8、EdU染色检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 miR-187-3p在人乳腺癌细胞中低表达,其中MDA-MB-231细胞中miR-187-3p表达水平变化最为明显。过表达miR-187-3p可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭;UM介导的miR-187-3p进一步增强了miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用;经验证,MDA-MB-231细胞中miR-187-3p与S100A4存在靶向调控关系,且过表达S100A4可部分减弱UM介导的miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 UM介导的miR-187-3p可能通过负靶向调节S100A4抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

lncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/SOX4轴对子宫内膜癌细胞恶性生物行为的影响

目的探讨lncRNA FGD5-AS1调节miR-129-5p/SOX4轴对子宫内膜癌(EC)细胞恶性生物行为的影响。方法qRT-PCR、Westernblot分别检测人EC细胞HEC-1A以及人子宫颈内膜细胞End1/E6E7中lncRNAFGD5-AS1、miR-129-5p、SOX4蛋白表达;将HEC-1A细胞分为NC组、si-NC组、si-FGD5-AS1组、si-FGD5-AS1+inhibitor NC组、si-FGD5-AS1+miR-129-5p inhibitor组。双萤光素酶报告基因实验检测lncRNA FGD5-AS1、miR-129-5p、SOX4的关系;qRT-PCR检测HEC-1A细胞中lncRNAFGD5-AS1、miR-129-5p表达;CCK-8法检测HEC-1A细胞增殖情况;流式细胞术检测HEC-1A细胞凋亡;Transwell检测HEC-1A细胞侵袭、迁移数量;Westernblot检测HEC-1A细胞SOX4、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平。结果与End1/E6E7细胞相比,HEC-1A细胞中lncRNA FGD5-AS1、SOX4水平均显著上调(P<0.05),miR-129-5p显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-FGD5-AS1组HEC-1A细胞OD450值、迁移、侵袭细胞数量、lncRNA FGD5-AS1表达量、SOX4、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),HEC-1A细胞凋亡率、miR-129-5p表达量、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而miR-129-5p低表达减弱了沉默lncRNA FGD5-AS1抑制HEC-1A细胞恶性生物行为的作用;lncRNA FGD5-AS1靶向调节miR-129-5p/SOX4轴。结论沉默lncRNA FGD5-AS1可能通过上调miR-129-5p来抑制SOX4表达,进而对EC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭产生影响。

LncRNA MALAT1调控卵巢癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨LncRNA MALAT1对卵巢癌增殖和迁移的影响。方法:比较卵巢癌与癌旁组织、SKOV3与IOSE80细胞中MALAT1及miR-363-3p、Sox4表达及其增殖和迁移能力。结果:卵巢癌组织中MALAT1、Sox4表达增加,miR-363-3p表达降低;沉默MALAT1或过表达miR-363-3p抑制SKOV3细胞增殖和迁移;下调miR-363-3p逆转沉默MALAT1对细胞增殖和迁移的抑制作用;过表达Sox4逆转上调miR-363-3p对细胞增殖和迁移的抑制作用。结论:MALAT1靶向miR-363-3p/Sox4影响卵巢癌增殖和迁移。