齐墩果酸通过miR-18a-5p/STK4轴抑制白血病K562细胞恶性进展

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗药物和靶点十分关键。有研究表明,miRNAs与慢性粒细胞白血病在内的多种肿瘤有密切联系,齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对白血病细胞有较好的抑制效果。通过对转录物组测序结果发现,齐墩果酸可以显著上调丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4(serine/threonine-protein kinase 4,STK 4)的水平,而miR1a-5p是STK 4的靶miRNA。因此,本文旨在探究齐墩果酸是否可以通过miR-18a-5p/STK4影响K562细胞恶性进展。K562细胞经齐墩果酸处理后差异表达基因富集在凋亡相关通路上。EdU实验和CCK-8实验结果发现,齐墩果酸降低K562细胞增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR,免疫荧光和Western印迹结果显示,齐墩果酸处理后,K562细胞中STK 4蛋白质水平表达显著上调(P<0.05),miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在细胞中转染miR-18a-5p mimics,能显著抑制STK 4的表达(P<0.05);转染miR-18a-5p inhibitor能显著增加STK 4的表达(P<0.05)。活性氧(reactive oxygen species、ROS)检测和线粒体膜电位检测结果显示,齐墩果酸可以促进K562细胞中ROS的增加,降低线粒体膜电位。过表达STK 4后,与Vector组相比,细胞的线粒体膜电位下降;敲降STK 4可以逆转齐墩果酸组导致的线粒体膜电位下降。流式细胞术检测显示,齐墩果酸能明显促进细胞凋亡的发生,而转染miR-18a-5p mimics后凋亡率显著下调(P<0.05);过表达STK 4可以促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转化,而同时转染miR-18a-5p mimics可以抑制这一现象。我们的研究结果证实,齐墩果酸可以通过维持miR-18a-5p的低表达和保持STK 4的高表达状态来促进K562细胞的凋亡。

circDCUN1D4调节miR-18a-5p/FBP1轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的探讨环状RNA(circRNA)DCUN1D4调节微小RNA(miR)-18a-5p/果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法选取人肺癌细胞系(H1975、H1650、A549、SPCA-1)和人正常肺表皮细胞(HPL-1),qRT-PCR检测各种细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平。取对数生长期的A549细胞并分为空白组、circDCUN1D4过表达质粒(circDCUN1D4)组、过表达质粒阴性对照(NC)组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物阴性对照(circDCUN1D4+mimics NC)组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物(circDCUN1D4+miR-18a-5p mimics)组。CCK-8法检测各组A549细胞活力,流式细胞术检测各组A549细胞凋亡水平,qRT-PCR检测各组A549细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平,Western blot检测各组A549细胞中FBP1、caspase-3、Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)及程序性死亡分子配体-1(PD-L1)表达水平,双荧光素酶实验验证miR-18a-5p分别与circDCUN1D4、FBP1的靶向关系。结果与HPL-1细胞相比,人肺癌细胞系中circDCUN1D4、FBP1 mRNA表达显著下降(P<0.05),miR-18a-5p表达显著增加(P<0.05)。miR-18a-5p分别与circDCUN1D4、FBP1存在靶向关系。与空白组、NC组相比,circDCUN1D4组细胞24 h和48 h的OD值、Ki67、PCNA、miR-18a-5p、PD-L1表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、circDCUN1D4、FBP1、caspase-3表达显著增加(P<0.05);过表达miR-18a-5p逆转了circDCUN1D4对肺癌细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论circDCUN1D4过表达可以促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞增殖及免疫逃逸,其作用机制可能与调控miR-18a-5p/FBP1轴有关。

MiR-18a-5p通过介导自噬加重同型半胱氨酸诱导的心肌损伤

目的:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平是心脑血管疾病的独立危险因素。MiR-18a-5p是微RNA(microRNA,miR)家族中的重要成员,与心血管疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-18a-5p对Hcy损伤心肌细胞的影响。方法:对H9c2细胞进行miR-18a-5p模拟物(mimic)/miR-18a-5p mimic阴性对照(negative control,NC)转染或与Hcy联合干预,另设未处理细胞作为对照组。采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)验证转染效率,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62、Bax、Bcl-2和Notch2的蛋白质表达水平,双荧光素酶报告分析检测miR-18a-5p与Notch2的相互作用。结果:与对照组相比,Hcy或转染miR-18a-5p mimic单独处理,或转染miR-18a-5p mimic/miR-18a-5p mimic NC与Hcy联合干预均显著降低H9c2细胞的活力,增加H9c2细胞的凋亡率和ROS的生成,上调Bax和Beclin1的蛋白质表达水平,下调Bcl-2、p62和Notch2的蛋白质表达水平,同时使LC3-Ⅱ/LC3-I值增加(均P<0.05)。与miR-18a-5p mimic NC和Hcy联合干预相比,miR-18a-5p mimic和Hcy联合干预的H9c2细胞上述指标的改变更显著,且2组之间差异有统计学意义(均P<0.05)。Notch2与miR-18a-5p存在靶向结合。结论:MiR-18a-5p通过增加心肌细胞内ROS的生成,诱导自噬和凋亡,加重Hcy诱导的心肌损伤。Notch2是miR-18a-5p的作用靶点。

高危型HPV感染对宫颈阴道微生态菌群及miR-222、miR-18a表达的影响

目的分析高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染对宫颈阴道微生态菌群及miR-222、miR-18a表达的影响。方法前瞻性选取2020年1月至2021年5月复旦大学附属闵行医院妇产科门诊随机行宫颈筛查的妇女共1500例,均行HPV检测,根据是否感染,分为HR-HPV阴性组(n=1338)和HR-HPV阳性组(n=162)。采用PCR法检测宫颈和阴道脱落细胞中HR-HPV的感染情况;DNA探针技术检测阴道分泌物中加德纳细菌(BV)、霉菌(VVC)和滴虫(TV)感染情况;阴道微生态检测仪Unit-500检测过氧化氢(H_(2)O_(2))、唾液酸苷酶和白细胞酯酶;实时定量荧光PCR检测miR-222和miR-18a的表达;Spearman法分析阴道微生态和miR-222、miR-18a的相关性。采用单因素和多因素Logistic回归模型分析HR-HPV感染的影响因素。结果1500例筛查人群中,检出的HR-HPV感染者162例,HPV16检出率最高,为91例,占比56.17%。HR-HPV阳性组受试者菌群多样性Ⅱ~Ⅲ级比率、BV阳性率、H_(2)O_(2)阳性率为33.95%、30.86%、95.06%,均显著高于HR-HPV阴性组(25.64%、20.25%、89.91%),差异均有统计学意义(P<0.05),两组VVC、TV、唾液酸苷酶和白细胞酯酶比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HR-HPV阳性组中miR-222和miR-18a的表达量为2.73±0.46、3.11±0.52,明显高于HR-HPV阴性组(0.56±0.08、0.82±0.13),差异有统计学意义(P<0.05)。BV阳性率和miR-222、miR-18a呈正相关(r=0.397、0.256,P<0.05),H_(2)O_(2)阳性率与miR-222、miR-18a也呈正相关(r=0.321、0.373,P<0.05)。单多因素回归分析结果显示,BV阳性率、H_(2)O_(2)阳性率、miR-222、miR-18a是影响HR-HPV感染危险因素(OR=1.963,95%CI=1.032~3.735;OR=1.671,95%CI=0.584~4.779;OR=1.296,95%CI=0.802~2.094;OR=1.374,95%CI=1.003~2.753,P<0.05)。结论HR-HPV感染患者的微生态环境紊乱,miR-222、miR-18a的表达明显升高,且BV阳性率、H_(2)O_(2)阳性率、miR-222、miR-18a是影响HR-HPV感染危险因素。治疗中了解HR-HPV感染的危险因素,有利于针对HR-HPV感染患者制定个体化治疗方案。

miR-18a通过阻断TLR4/NF-κB通路减轻小鼠过敏性鼻炎的炎症和组织损伤

目的探究微小RNA-18a(miR-18a)在小鼠过敏性鼻炎发病过程中的作用。方法22只BALB/c小鼠被随机分为空白组、模型组及miR-18a组。模型组和miR-18a组小鼠采用腹腔注射卵清蛋白(OVA)混悬液的方法制备过敏性鼻炎模型,miR-18a组小鼠同时给予过表达miR-18a的慢病毒载体质粒。采用行为学评分及HE染色评价各组小鼠过敏症状及形态学变化,ELISA检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,免疫荧光组织化学染色检测小鼠鼻黏膜组织CD45^(+)细胞浸润情况,流式细胞术检测鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量,荧光定量PCR检测鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平,Western blot法检测鼻黏膜组织Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制物α(IκBα)、磷酸化的IκBα(p-IκBα)的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组小鼠血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著增高,鼻黏膜组织及鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量增多,鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平及TLR4、NF-κB p65、p-IκBα表达水平升高;与模型组相比,miR-18a组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低,鼻黏膜组织及鼻腔灌洗液CD45^(+)细胞数量减少,鼻黏膜组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平及TLR4、NF-κB p65、p-IκBα表达水平降低。结论miR-18a能够通过阻断TLR4/NF-κB通路抑制小鼠过敏性鼻炎的发生和发展。

miR-18a对于成肌细胞胶原蛋白表达的影响

细胞外基质是骨骼肌微环境的重要组成,基质中胶原蛋白的过量表达,会导致骨骼肌纤维化,因此研究miR-18a对于成肌细胞胶原蛋白表达的影响具有重要意义。利用实时荧光定量PCR、细胞划痕、组织切片苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, HE)染色等方法检测了肌肉损伤修复模型中miR-18a及胶原蛋白基因的表达变化以及在成肌细胞C2C12中过表达miR-18a模拟物后对胶原蛋白基因表达、细胞迁移和成肌细胞转分化的影响。结果表明,miR-18a及胶原蛋白的表达量会响应骨骼肌的损伤修复过程。在成肌细胞中,miR-18a的过表达会抑制胶原蛋白相关基因的表达。但miR-18a的过表达并不影响成肌细胞的迁移和向骨的转分化。因此miR-18a对于细胞外基质相关基因的研究,可以为骨骼肌损伤修复的治疗提供理论依据。

鼻咽癌中miR-18a和缺氧诱导因子-1α的表达及其与放疗敏感性和预后的相关性

目的探究鼻咽癌中miR-18a和缺氧诱导因子-1α的表达及其与放疗敏感性和预后的相关性。方法选取鼻咽癌患者91例。根据放疗敏感性的不同将患者分为放疗敏感组(n=24)和放疗抵抗组(n=67)。结果miR-18表达水平与鼻咽癌患者年龄、性别、T分期、M分期、N分期以及临床分期等临床参数无关(P>0.05);HIF-1α表达水平与鼻咽癌患者年龄、性别、T分期、M分期以及N分期等临床参数无关(P>0.05),但是与临床分期有关(P<0.05)。统计学分析两组年龄、性别、T分期、M分期、N分期以及临床分期的差异无统计学意义(P>0.05),化疗敏感组miR-18a、HIF-1α的表达水平明显低于化疗抵抗组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果发现,miR-18a、HIF-1α表达水平与放疗敏感性有关(P<0.05)。统计学分析发现复发、远处转移以及死亡患者的miR-18a、HIF-1α表达水平明显高于无复发、远处转移以及生存患者(P<0.05)。结论鼻咽癌患者miR-18a和缺氧诱导因子-1α水平与放疗敏感性有关,为今后探索鼻咽癌的预后指标提供了一定的参考依据。

血清miR-18a-5p、miR-21在老年胃癌临床诊断及预后评估中的应用

目的 探讨血清微小RNA-18a-5p(miR-18a-5p)、微小RNA-21(miR-21)在老年胃癌临床诊断及预后评估中的价值。方法 收集85例胃癌患者(胃癌组)术前和术后血清,以及45例非胃癌对照者(对照组)血清,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测两组受试者血清样本中miR-18a-5p和miR-21的表达水平,分析其在不同临床病理特征老年胃癌患者中的表达,探讨其表达水平在临床诊断及预后评估中的价值。结果 胃癌组血清miR-18a-5p、miR-21、癌胚抗原(CEA)及糖类抗原199(CA199)水平均高于对照组(P<0.05);血清miR-18a-5p、miR-21、CEA及CA199诊断胃癌的曲线下面积(AUC)分别为0.750、0.807、0.656、0.690,4项联合诊断的AUC为0.879,明显高于各单一指标(P<0.05);不同TNM分期、肿瘤最大径、肿瘤浸润深度、组织分化程度及淋巴结转移情况的胃癌患者miR-18a-5p、miR-21表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与术前比较,术后患者miR-18a-5p、miR-21、CEA及CA199表达水平均下降(P<0.05);预后良好者术后30 d时血清miR-18a-5p、miR-21、CEA及CA199表达水平均低于预后不良者(P<0.05);术后30 d时血清miR-18a-5p、miR-21、CEA及CA199联合预测胃癌不良预后的AUC为0.821,明显高于各单一指标(P<0.05)。结论 血清miR-18a-5p、miR-21表达水平在老年胃癌患者中异常升高,可辅助性用于患者临床诊断和预后评估。

miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建

【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系,为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中,DNA测序鉴定;将构建好的载体转染293T细胞,获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体,感染人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2,嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系,PCR及western blot鉴定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR-18a干扰载体及过表达载体,滴度均为3×10~8TU/mL;转染miR-18a抑制表达的慢病毒载体的CNE1和CNE2中ATM表达增高;与对照病毒转染相比,转染miR-18a过表达慢病毒载体的CNE1(20.3倍,P<0.01)和CNE2(122.5倍,P<0.01)中miR-18a表达显著增高,靶蛋白ATM表达下调。【结论】成功构建人miR-18a慢病毒抑制表达和过表达载体,并获得相应的慢病毒稳转人鼻咽癌细胞株。

MiR-18a通过靶定ATM调节白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性

目的:研究miR-18a调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR化疗敏感性的分子机制。方法:构建稳定过表达miR-18a的HL-60-pc DNA3.1-miR-18a细胞系,检测其对VP-16和VCR的敏感性;构建ATM 3'UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-18a对ATM的靶向作用;Western blot检测过表达miR-18a的HL-60细胞内ATM的表达水平;siRNA敲减HL-60细胞中ATM水平,CCK-8检测细胞对VP-16和VCR的敏感性;在稳定过表达miR-18a的HL-60细胞内转染miR-18a inhibitor,Western blot检测ATM的表达水平,并检验细胞对VP-16和VCR的敏感性变化。结果:过表达miR-18a后,用相同浓度的VP-16和VCR处理时HL-60细胞存活率降低;荧光素酶活性检测表明,miR-18a能够抑制ATM的荧光素酶活性;过表达miR-18a后HL-60细胞内ATM的表达降低;敲减ATM后的HL-60细胞经VP-16和VCR处理后存活率降低;转染miR-18a inhibitor后,ATM表达水平显著上调,经VP-16和VCR处理的细胞存活率明显高于对照组。结论:miR-18a能够通过靶定ATM而调控白血病细胞HL-60对VP-16和VCR的敏感性。

miR-18a和雌激素受体α在单发及多发子宫肌瘤中的表达

目的检测单发及多发子宫肌瘤组织中miR-18a及雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)的表达,探讨miR-18a与ERα的关系及2者在单发及多发子宫肌瘤发生中的作用。方法采用原位杂交法检测miR-18a在单发及多发子宫肌瘤组织石蜡切片中的表达;采用免疫组化法检测ERα在单发及多发子宫肌瘤组织石蜡切片的表达。采用相关分析研究miR-18a和ERα的表达相关性。结果多发子宫肌瘤组织中的ERα表达水平均明显高于单发子宫肌瘤组织(P<0.05);但miR-18a水平明显低于单发子宫肌瘤组织(P<0.05);相关分析结果表明,2者表达呈负相关(r单发=-0.4421,r多发=-0.4181)。结论多发性子宫肌瘤中miR-18a的表达更低,ERα表达更高。miR-18a可作为治疗多发性子宫肌瘤的新靶标。

miR-18a对结肠癌血管生成的影响

目的探讨miR-18a对结肠癌血管生成的影响及其机制。方法以用合成的miR-18a模拟物转染人结肠癌细胞系SW620细胞。应用MTT法检测过表达miR-18a对细胞增殖活性的影响。分别用稳转miR-18a的SW620细胞接种建立裸鼠人结肠癌移植瘤模型。每周测量瘤体积。5周后麻醉处死裸鼠。免疫组化法检测增殖细胞核标志物Ki 67和血管内皮细胞标志物CD31的表达。应用Western blotting法检测血管生成相关的mTOR通路中mTOR下游靶蛋白S6K1和4E BP1的磷酸化情况,并检测肿瘤组织血管生成相关因子缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长凶子(VEGF)的表达。结果 miR-18a过表达显著降低SW620细胞的增殖能力(P<0.01)。并且,该基因对裸鼠人结肠癌移植瘤有明显的生长抑制作用,SW620组瘤体显著减小,抑瘤率达71.8%(P<0.01)。免疫组化检测显示,miR-18a显著抑制细胞增殖核抗原蛋白Ki-67(P<0.01)和血管内皮细胞标记物CD31(P<0.05)的表达。Western blot法检测显示,miR-18a显著抑制S6K(IP<0.01)和4E-BP(IP<0.05)的磷酸化,而且抑制肿瘤组织中HIF-1α(P<0.05)和VEGF蛋白(P<0.01)的表达。结论过表达miR-18a抑制结肠癌生长和血管生成,这可能与其抑制mTOR/VEGF通路有关,提示过表达miR-18a可能成为结肠癌治疗的新方法。

miR-18a表达在HPV感染及宫颈癌发生发展中的意义

目的研究宫颈脱落细胞中miR-18a的表达水平在人乳头状瘤病毒(HPV)感染及宫颈癌发生发展中的意义。方法收集2015年6月至2017年6月深圳市南山区妇幼保健院及广州南方医院门诊及住院患者宫颈脱落细胞标本,通过HPV DNA分型检测将宫颈脱落细胞标本分为HPV未感染组(NE-HPV)、低危型HPV感染组(LR-HPV)、高危型HPV感染组(HR-HPV),采用荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测各组间miR-18a相对表达量;收集HR-HPV感染阳性的宫颈脱落细胞标本,依据病理检查结果分为宫颈上皮内瘤变(CIN)组及宫颈癌组各30例,对照组选取年龄、体重配对的30例宫颈上皮细胞正常无化生的标本,采用qRT-PCR检测各组间miR-18a相对表达量,分析miR-18a表达与HPV感染及宫颈癌发生发展的关系。结果 HR-HPV感染组宫颈脱落细胞中miR-18a相对表达量高于LR-HPV组与NE-HPV组,差异均有统计学意义(t值分别为11.144、18.482,均P<0.05);宫颈癌组、CIN组中miR-18a表达较对照组显著增高(t值分别为25.02、15.355,均P<0.05),但宫颈癌组与CIN组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线显示宫颈脱落细胞中miR-18a用于诊断CIN的曲线下面积(AUC)为0.699(95%CI:0.606～0.791,P<0.001),用于诊断宫颈癌的AUC为0.801(95%CI:0.724～0.879,P<0.001)。结论 HR-HPV感染者宫颈脱落细胞中miR-18a相对表达量明显升高,并与宫颈癌的发生发展密切相关。宫颈脱落细胞中miR-18a可能作为宫颈癌或癌前病变潜在标志物用于早期无创诊断。

miR-18a对人主动脉内皮细胞血管生成能力的影响

目的:观察miR-18a对人主动脉内皮细胞血管生成能力的影响。方法:分别将10 nmol/L miR-18a mimics和20 nmol/L miR-18a inhibitor转染至人主动脉内皮细胞,qRT-PCR法检测miR-18a表达情况并观察内皮细胞的迁移、黏附和管腔形成能力。结果:转染48 h后,miR-18a mimics组miR-18a表达为对照组的608倍(P<0.05);miR-18a inhibitor组miR-18a表达降低至对照组的31%(P<0.05)。与对照组相比,miR-18a mimics转染后迁移至Transwell小室下层的内皮细胞数目和毛细血管管腔形成数目分别减少60%和52%(P<0.01);而miR-18a inhibitor转染后分别增加100%(P<0.05)和84%(P<0.01),细胞黏附能力增加43%(P<0.05)。结论:miR-18a的表达水平与人主动脉内皮细胞的血管生成能力相关,可能成为血管性疾病治疗的分子靶点。

miR-18a-5p调控PSORS1C1对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响

目的探讨微小RNA-18a-5p(miR-18a-5p)对类风湿关节炎成纤维细胞(SFs)样滑膜细胞迁移、侵袭及炎症反应的影响及其作用机制。方法体外培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A,分为miR-18a-5p组、miR-NC组、si-PSORS1C1组、si-NC组、miR-18a-5p+pcDNA3.1-PSORS1C1组、miR-18a-5p+pcDNA3.1组。qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-18a-5p表达;分别采用Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭的情况。双荧光素酶报告基因实验检测miR-18a-5p与PSORS1C1的靶向关系;Western印迹检测PSORS1C1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、钙黏附蛋白-E(E-cadherin)蛋白表达;测定细胞上清液中白细胞介素(IL)-1、IL-2水平。结果miR-18a-5p在MH7A细胞中的表达水平显著降低(P<0.05),miR-18a-5p过表达可明显抑制MH7A细胞迁移及侵袭能力,IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平均显著升高(P<0.05);miR-18a-5p可靶向结合PSORS1C1;抑制PSORS1C1表达后,与si-NC组相比,MH7A细胞迁移及侵袭能力显著降低(P<0.05),IL-1水平与MMP-2表达水平显著降低(P<0.05),而IL-2水平与E-cadherin表达水平显著升高(P<0.05);过表达PSORS1C1可逆转miR-18a-5p对MH7A细胞迁移、侵袭及炎症因子的作用。结论miR-18a-5p过表达通过抑制PSORS1C1表达而减弱SFs样滑膜细胞迁移、侵袭能力,并可减轻炎症反应。

miR-18a在老年胃癌患者血清中的表达及意义

目的探讨胃癌患者血清microRNA-18a表达变化及其临床诊断意义。方法采用实时荧光定量PCR检测52例老年胃癌患者和33例健康体检者血清mi R-18a表达水平。通过分析受试者工作特征曲线(ROC)判断mi R-18a表达水平在胃癌诊断中的灵敏度和特异度。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测患者血清肿瘤标记物水平。结果胃癌患者血清mi R-18a较健康对照组高(P<0.05)。血清mi R-18a水平与患者年龄、性别无关(P>0.05),与分化程度、临床分期、浸润深度和淋巴结转移明显相关(P<0.05或P<0.01)。ROC分析结果显示最佳的mi R-18a相对表达量的临界值为2.77,诊断灵敏度77.2%,特异度82.8%,ROC曲线下面积为0.791。血清mi R-18a水平与胃癌相关抗原MG7-Ag明显正相关,与糖抗原(CA)-72-4、CA-50和甲胎蛋白(AFP)正相关,与癌胚抗原(CEA)无明显相关性。结论 mi R-18a在胃癌患者血清中水平升高,作为新的血清学指标在胃癌筛查诊断中有重要参考价值。

子宫肌瘤及瘤旁平滑肌组织中miR-18a及ERα的表达分析

目的子宫肌瘤及瘤旁平滑肌组织中miR-18a及ERα的表达分析。方法选取子宫肌瘤患者的肌瘤组织标本68例,取其瘤旁组织作为对照,比较子宫肌瘤组织和瘤旁组织、单发肌瘤组织和多发肌瘤组织中miR-18a和ERα表达的差异,分析子宫肌瘤组织中miR-18a和ERα表达的相关性。结果子宫肌瘤组织的miR-18a表达平均光密度(95.28±4.50)低于瘤旁组织(138.54±5.62),差异具有显著性(P<0.05):子宫肌瘤组织的ERα表达平均光密度(381.49±18.35)高于瘤旁组织(935.21±24.68),差异具有显著性(P<0.05)。多发肌瘤组织的miR-18a表达平均光密度(89.35±4.05)低于单发肌瘤组织(102.84±4.18),差异具有显著性(P<0.05);多发肌瘤组织的ERα表达平均光密度(367.54±25.17)高于单发肌瘤组织(392.71±22.29),差异具有显著性(P<0.05);子宫肌瘤组织的miR-18a表达平均光密度与ERα表达平均光密度呈负相关(r=-0.485,P<0.001)。结论miR-18a在子宫肌瘤组织特别是多发肌瘤组织中呈低表达,而ERα呈高表达,可能为miR-18a影响了子宫肌瘤组织中ERα的表达。

miR-18a对结直肠癌SW116细胞辐射敏感性的影响

目的:探讨miR-18a与结直肠癌SW116细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-18a影响细胞凋亡和自噬的可能机制。方法:人结直肠癌SW116细胞分为miR-18aNC组、miR-18amimic组、miR-18aNC+4Gy组和miR-18amimic+4Gy组。qRT-PCR法检测照射前后SW116细胞中miR-18a的表达;集落形成实验观察miR-18a对SW116细胞辐射敏感性的影响;GFPLC3形态学方法检测SW116细胞自噬率;流式细胞术检测SW116细胞凋亡率;采用生物信息学方法预测miR-18a的靶基因,以荧光素酶报告基因验证miR-18a与靶基因3′UTR结合;Western blotting法检测SW116细胞中共济失调-毛细血管扩张突变基因(ATM)蛋白表达。结果:与照射前比较,照射后SW116细胞中miR-18a表达水平明显降低(P<0.05)。集落形成实验,与miR-18aNC组比较,miR-18amimic组SW116细胞辐射敏感性增强(P<0.05),细胞凋亡率和自噬率明显增加(P<0.05)。与miR-18aNC+4Gy组比较,miR-18amimic+4Gy组SW116细胞中ATM蛋白表达减少。结论:miR-18a的靶基因为ATM;miR-18amimic可促进辐射诱导的细胞凋亡和自噬,且能增加结直肠癌SW116细胞辐射敏感性。

下调miR-18a和miR-328抑制肺腺癌A549细胞的侵袭和迁移

目的分析miR-18a和miR-328在肺腺癌A549细胞中的表达,并探讨下调miR-18a或miR-328的表达对其侵袭和迁移能力的影响。方法用荧光定量PCR检测A549细胞中miR-18a和miR-328的表达;通过转染miR-18a抑制物(miR-18a inhibitor)或miR-328 inhibitor,下调miR-18a或miR-328的表达,采用TranswellTM侵袭、迁移实验分析A549细胞侵袭和迁移能力的变化。结果 A549细胞中miR-18a和miR-328均呈高表达;而转染相应抑制物后miR-18a、miR-328表达下降,A549细胞的侵袭、迁移能力均明显降低。结论下调A549细胞miR-18a或miR-328水平可有效抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移。

miR-18a-5p在鸡不同生长时期的表达及其生物信息学分析与靶基因预测

为探究miR-18a-5p在鸡不同生长时期组织表达变化规律及其生物信息学特点,本研究以苏禽3号鸡为试验动物,利用实时荧光定量PCR技术检测不同生长时期鸡miR-18a-5p的组织表达变化。通过文献和miRBase检索脊椎动物的miR-18a-5p序列,利用Ensembl数据库确定miR-18a-5p在基因组中的位置,根据成熟序列构建系统进化树;使用miRmap、microT、miRanda和TargetScan网站预测miR-18a-5p靶基因,并进行GO和KEGG分析。组织表达分析结果显示,miR-18a-5p序列在鸡心脏、脾脏、肾脏和下丘脑中的表达量显著高于除大脑以外的其他组织(P<0.05)。与3日龄雏鸡相比,90日龄鸡心脏、脾脏、肾脏、腿肌和下丘脑中miR-18a-5p的表达量均显著上升(P<0.05)。在50种脊椎动物中共发现52条miR-18a-5p序列,几乎所有物种都只有1条成熟序列;基因定位分析发现,鸡miR-18a-5p位于1号染色体上的基因间隔区。多序列比对分析表明,不同物种miR-18a-5p的成熟序列同源性较高,物种间较为保守。系统进化树分析发现,鸡miR-18a-5p与原鸽、斑胸草雀等其他鸟类聚为一类,这表明miR-18a-5p进化过程中是保守的。靶基因预测和功能分析发现,miR-18a-5p共有121个靶基因。GO分析结果显示,靶基因主要富集到蛋白质泛素化、细胞周期阻滞、白细胞介素-6产生的负调控等功能。KEGG通路分析表明,靶基因主要富集到细胞周期及Wnt和FoxO信号通路等。多个与肌肉生长及细胞增殖等相关的基因富集到相关通路之上。综上,鸡miR-18a-5p是组织广泛表达的miRNA,其可能通过Wnt及FoxO信号通路调控肌肉生长及细胞增殖分化。本研究为miR-18a-5p功能及调控机制的深入研究提供参考依据。