原发性舍格伦综合征患者血清miR-193b表达水平及其临床价值研究

目的探讨原发性舍格伦综合征(primary Sjogren’s syndrome,pSS)患者血清中miR-193b表达变化以及临床意义。方法选取2015年9月~2020年9月在黄石市中心医院治疗的98例pSS患者作为病例组,45例健康体检者作为对照组。根据患者病情严重程度分为轻度组(n=31)、中度组(n=43)和重度组(n=24)。收集临床资料,实时荧光定量PCR法检测血清中miR-193b表达量,采用Pearson相关分析分析pSS患者血清中miR-193b表达量和临床指标间相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清中miR-193b表达量对pSS患者诊断价值。结果pSS患者血清中miR-193b表达量在对照组、pSS轻度组、pSS中度组和pSS重度组依次升高(1.79±0.311,1.91±0.21,2.46±0.25,3.11±0.22),差异有统计学意义(F=165.948,P<0.001),且pSS重度组>pSS中度组>pSS轻度组>对照组(t=10.720,9.924,2.029,均P<0.05);Pearson相关分析结果显示,pSS患者血清中miR-193b表达量与B细胞比例、ESR,IgG,ESSDAI评分和ESSPRI评分呈正相关(r=0.432,0.554,0.448,0.356和0.361,均P<0.05),而与白细胞数、唾液流率和泪流率呈负相关(r=-0.215,-0.323,-0.369,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,血清中miR-193b表达量在预测pSS发生时曲线下面积为0.864(95%CI:0.805~0.923),当血清中miR-193b表达量为2.06时,灵敏度和特异度分别为78.57%,82.22%。结论miR-193b在pSS患者血清中表达量升高,与pSS病情轻重和患者腺体分泌有关,检测血清miR-193b有助于诊断pSS。

CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的:探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂(DDP)耐药的影响。方法:培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组、sh CircNRIP1+inhibitor NC组、sh CircNRIP1+mi R-193b-3p inhibitor组,测定各组AGS/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭能力以及STMN1蛋白水平;测定mi R-193b-3p与CircNRIP1、STMN1靶向关系。结果:与AGS细胞比较,AGS/DDP细胞CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白水平升高,细胞增殖抑制率、miR-193b-3p降低(P<0.05);与AGS/DDP组相比,sh CircNRIP1组细胞增殖抑制率、凋亡率、mi R-193b-3p升高,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白减少(P<0.05);与sh CircNRIP1组相比,sh CircNRIP1+miR-193b-3p inhibitor组细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-193b-3p降低,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白升高(P<0.05);miR-193b-3p与CircNRIP1、STMN1均存在靶向关系。结论:沉默AGS/DDP细胞中CircNRIP1表达,可靶向mi R-193b-3p/STMN1抑制AGS/DDP细胞增殖、侵袭,促进AGS/DDP细胞凋亡,实现AGS/DDP细胞对DDP耐药的逆转。

血清miR-193b-3p与动脉瘤性蛛网膜下腔出血病人不良预后的关系

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-193b-3p与动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)病人不良预后的关系。方法2019年1月1日至2021年12月1日前瞻性收集aSAH共159例,采用RT-PCR检测入院24 h内血清miR-193b-3p水平。发病90 d,采用GOS评分评估预后,其中4~5分为预后良好,1~3分为预后不良。结果159例中,预后良好153例,预后不良56例(35.2%),其中死亡39例。ROC曲线分析显示,入院24 h内血清miR-193b-3p水平预测aSAH不良预后的曲线下面积为0.912(95%CI 0.870~0.954),最佳截断值为0.62,灵敏度和特异度分别为75.7%和94.6%。入院24 h内血清miR-193b-3p水平与入院时Hunt-Hess分级呈明显负相关(r=-0.384,P<0.001),与入院时Fisher分级呈明显负相关(r=-0.200,P=0.011),与入院时GCS评分呈明显正相关(r=0.409,P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,入院24 h内血清miR-193b-3p≥0.62是aSAH病人预后不良的独立危险因素(OR=3.148;95%CI 1.017~5.167;P<0.001)。结论本文结果提示入院24 h内血清miR-193b-3p作为非侵入性生物标志物,不仅可以用于评估aSAH病人的病情严重程度,还可以在早期用于预测病人的预后。

Hsa-miR-193b抑制人子宫内膜腺癌细胞株HEC-1B侵袭能力

目的探讨Hsa-miR-193b对人子宫内膜腺癌细胞系HEC-1B侵袭的影响及其相关机制。方法将Hsa-miR-193b模拟物(mimics)、Hsa-miR-193b抑制剂(inhibitor)转染HEC-1B细胞,Real-time PCR证实转染是否成功;Transwell小室法检测转染Hsa-miR-193b mimics后HEC-1B细胞的侵袭能力;通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查Hsa-miR-193b指向与侵袭相关的靶基因;Real-time PCR检测转染Hsa-miR-193b mimics转染组和对照组mRNA水平;Western blot检测各组GRB7蛋白表达的水平。结果①Hsa-miR-193b mimics、Hsa-miR-193b inhibitor转染HEC-1B细胞成功,两转染组Hsa-miR-193b表达水平与未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。②转染Hsa-miR-193b mimics组与对照组比较,肿瘤细胞的侵袭能力明显降低(P<0.05)。③转染后,靶基因GRB7蛋白Hsa-miR-193b mimics组表达下降(P<0.05)、Hsa-miR-193b inhibitor组表达增加(P<0.05),且各组GRB7 mRNA水平无显著变化。结论在HEC-1B中转染Hsa-miR-193b mimics能下调GRB7蛋白表达,并抑制HEC-1B细胞的侵袭。

过表达miR-193b对黑色素细胞中MITF和TYR表达的影响

旨在探讨miR-193b对黑色素生成关键基因MITF和TYR表达的影响,进而说明miR-193b对黑色素形成的影响。本研究通过细胞转染技术,在绵羊黑色素细胞中过表达miR-193b,检测黑色素细胞中黑色素含量的变化,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别对转染细胞中MITF和TYR mRNA和蛋白表达水平进行测定。结果显示:过表达miR-193b的黑色素细胞,黑色素含量明显减少;MITF mRNA和TYR mRNA表达均显著降低(P<0.01),分别降低0.233倍和0.198倍;MITF和TYR蛋白表达量也显著降低(P<0.01),分别降低0.232倍和0.321倍。本研究表明,过表达miR-193b使黑色素细胞中MITF和TYR表达量降低而间接影响黑色素生成。

miR-193b及其靶基因Kit在不同毛色羊驼皮肤中的表达

本研究旨在检测miR-193b及其靶基因Kit在不同毛色羊驼皮肤中的表达,并分析它们与羊驼毛色的关系。试验以不同毛色的成年羊驼为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR)对miR-193b及Kit在不同毛色羊驼皮肤中的相对表达量进行检测。结果显示,miR-193b在棕色羊驼中显著表达,其相对表达量是白色羊驼的1.741346倍;而Kit在白色羊驼中显著表达,其相对表达量是棕色羊驼的4.6029倍。通过以上研究结果显示miR-193b及其靶基因Kit可能参与羊驼毛色形成过程。提示,miR-193b可能通过负调控Kit参与羊驼毛色形成。

miR-193b与肿瘤相关性的研究进展

miRNAs已被证实是基因表达的关键调控因子,不同水平的表达与各种疾病相关。大多数的研究表明,miRNAs表达谱中的miR-193b参与机体多种病理生理过程,在肿瘤发生、发展过程中发挥抑癌基因的作用,可抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力。因此,miR-193b在疾病的诊断、治疗和预后评估等方面将会发挥更大的作用,有着广阔的应用前景。本文就miR-193b与肿瘤相关性研究进展作一综述。

MiR-193b在肝癌组织中的表达及临床意义

观察microRNA-193b(miR-193b)在肝癌组织中的表达,并探讨其临床意义。采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测40例肝癌组织及相应的癌旁非肿瘤组织标本中miR-193b表达,分析miR-193b表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移等临床病理参数的关系,并比较miR-193b高、低表达患者5年生存率。结果显示,相对于癌旁非肿瘤组织,肝癌组织中miR-193b表达水平明显降低(P<0.01),miR-193b表达与肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P>0.05);与miR-193b低表达组患者相比,高表达组患者5年生存率明显增加(P<0.05)。MiR-193b在肝癌组织呈低表达,可作为评估肿瘤恶性程度及判断预后的分子标记物。

Akt信号通路调控miR-193b抑制胃癌细胞增殖

目的研究胃癌相关miR-193b调控胃癌细胞增殖的功能作用,并通过研究其与Akt信号通路的关系探讨miR-193b的调控机制。方法在PTEN基因特异性敲除(PTEN^(-/-))小鼠胃癌组织中,Northern Blot法检测miR-193b的表达变化;在胃上皮正常细胞系GES-1和5种胃癌细胞系AGS、BGC-823、SGC-7901、N87、SNU-16中,Real-Time PCR和Western Blot分别检测miR-193b与p Akt、Akt的表达水平;激活或抑制胃癌细胞Akt信号通路,RealTime PCR检测miR-193b表达改变;在胃癌细胞BGC-823、SGC-7901中过表达miR-193b,检测细胞的增殖变化。结果 miR-193b在Akt异常激活的小鼠胃癌组织中表达显著下调;胃癌细胞中Akt信号通路激活程度与miR-193b表达水平呈负相关,Akt信号通路抑制miR-193b表达;过表达miR-193b抑制胃癌细胞增殖。结论 miR-193b抑制胃癌细胞增殖并受Akt信号通路负向调节,其表达下调可能参与Akt信号通路调控的细胞增殖与胃癌发生。

MiR-193b体外协同增强顺铂对宫颈癌细胞的抗肿瘤效应

目的:研究microRNA-193b(miR-193b)是否能增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性并探讨其机制。方法:用RT-q PCR方法检测宫颈癌患者及健康对照者病理组织标本的miR-193b表达水平。MTT法检测miR-193b联合顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学、定量PCR及Western blot方法验证miR-193b是否调节宫颈癌细胞Mcl-1的表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对miR-193b联合顺铂治疗宫颈癌疗效的影响。结果:宫颈癌患者病理组织miR-193b表达水平显著低于对照组病理组织。miR-193b联合顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性显著高于顺铂单治疗组。miR-193b转染后,Hela细胞Mcl-1的mRNA表达水平及蛋白表达水平均下降。miR-193b联合顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性显著低于未转染Mcl-1表达载体的miR-193b联合顺铂组。结论:MiR-193b可能通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤活性。

miR-193b通过负向调控MCT7基因的表达抑制人胶质瘤U251细胞的迁移与侵袭

为探讨miR-193b对人胶质瘤U251细胞的迁移和侵袭能力的影响,利用HiPerFect转染试剂瞬时转染miR-193b模拟物(mimics)上调U251细胞中miR-193b的表达,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其转染效率,然后进行细胞划痕实验及侵袭实验,分别检测miR-193b对U251细胞迁移及侵袭能力的影响.结果显示过表达miR-193b可抑制U251细胞迁移和侵袭的能力.应用生物信息学软件预测,提示单羧酸转运蛋白7(MCT7)基因可能是miR-193b的潜在靶基因.进而构建双荧光素酶报告基因系统从转录水平上证明MCT7为miR-193b调控的靶基因;qRT-PCR及蛋白质免疫印记(Western blot)分别在mRNA和蛋白水平上进一步证明MCT7基因的表达受miR-193b的负调控.由此可见,miR-193b很可能通过负向调控MCT7基因的表达来抑制U251细胞的迁移与侵袭.

lncRNA CYTOR/miR-193b-3p/HMGB1轴调控T细胞急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4增殖与凋亡的作用研究

目的 探讨lncRNA CYTOR对T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养人正常骨髓基质细胞系HS-5和T-ALL细胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1),采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞中lncRNA CYTOR、miR-193b-3p和HMGB1 mRNA表达;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中HMGB1蛋白表达。分别转染si-CYTOR、miR-193b-3p mimics、si-HMGB1及共转染si-CYTOR与anti-miR-193b-3p至MOLT-4细胞,以CCK-8法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡,以Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白表达。通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-193b-3p、miR-193b-3p与HMGB1的调控关系。结果 与HS-5细胞比较,T-ALL细胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)中lncRNA CYTOR、HMGB1 mRNA及其蛋白表达均升高,miR-193b-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调lncRNA CYTOR、上调miR-193b-3p或下调HMGB1后,MOLT-4细胞增殖受到抑制,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率和细胞中Bax、cleaved-caspase3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA CYTOR竞争性吸附miR-193b-3p,HMGB1是miR-193b-3p的靶基因。上调HMGB1表达可逆转lncRNA CYTOR对T-ALL细胞MOLT-4增殖和凋亡的作用。敲低miR-193b-3p可逆转lncRNA CYTOR对MOLT-4细胞增殖和凋亡的作用。结论 lncRNA CYTOR在T-ALL细胞系中表达上调,其可能通过竞争性吸附miR-193b-3p进而上调HMGB1的表达来促进T-ALL细胞增殖,并阻碍细胞凋亡,其有可能成为T-ALL治疗的分子靶点。

miR-193b对子宫内膜癌侵袭的影响

目的探讨miR-193b对人子宫内膜癌细胞侵袭的影响及其机制。方法人子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞转染miR-193b抑制剂(miR-193b inhibitor)24h后,利用Transwell小室评价分析其侵袭能力的变化。进一步,我们利用Westernblot验证侵袭相关基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果 miR-193b inhibitor有效抑制HEC-1A细胞细胞内miR-193b表达,并且其侵袭能力较对照组明显下降(P<0.05)。Western blot验证miR-193b inhibitor可有效抑制MMP-2、MMP-9蛋白表达。结论 miR-193b通过可调节侵袭相关MMP-2、MMP-9蛋白表达有效调控HEC-1A细胞细胞侵袭能力。

基于circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1探讨肥胖性高血压发生的分子机制

目的基于circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1轴探讨肥胖性高血压发生的分子生物学机制。方法90只SD大鼠采用随机数字表法将其分为空白对照组(n=30)、肥胖性高血压组(n=30)、NRG-1阻断剂组(n=30)三组,检测大鼠的血压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油和总胆固醇水平及胸主动脉中circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1的表达;微阵列分析肥胖性高血压大鼠中circNRG-1的表达;双荧光素酶分析circNRG-1与miR-193b-5p的靶向关系。结果微阵列结果发现,在空白对照组和肥胖性高血压组之间有382个circRNAs的差异表达,其中235个表达上调,147个表达下调(>2倍);与空白对照组比较,肥胖性高血压组的MMU-CircRNA-42742(其父本基因为NRG-1)上调,肥胖性高血压组大鼠的收缩压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油、总胆固醇、胸主动脉中NRG-1、circNRG-1、miR-193b-5p的mRNA表达均升高,且血管壁增生,血管中膜增厚;与肥胖性高血压组比较,NRG-1阻断剂组大鼠的收缩压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油、总胆固醇、胸主动脉中NRG-1、circNRG-1、miR-193b-5p的mRNA表达均降低,且血管出现重构现象。结论肥胖性高血压大鼠中circNRG-1、NRG-1表达上调,miR-193b-5p表达下调,阻断NRG-1后肥胖性高血压大鼠症状有所改善,circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1轴可能是治疗肥胖性高血压的潜在靶点。

组织miR-193b表达及甲基化状态对前列腺癌患者术后骨转移的预测价值

目的:探究组织miR-193b表达及甲基化状态对前列腺癌(prostate cancer,PCa)患者术后发生骨转移的预测价值。方法:回顾性分析2016年09月至2018年07月期间在我院首次接受根治性前列腺切除术的154例患者,将骨转移作为本研究的主要研究终点,比较组织miR-193b表达及其甲基化状态与PCa患者发生骨转移的相关性。结果:骨转移组肿瘤组织miR-193b相对表达量低于非骨转移组,同时miR-193b基因启动子甲基化率高于非骨转移组(P<0.05)。miR-193b基因启动子甲基化组织中miR-193b相对表达量较非甲基化组织降低(P<0.05)。经Pearson法分析,肿瘤组织中miR-193b表达和基因启动子甲基化呈负相关性(r=-0.45,P<0.05)。经单因素和多因素Logistic回归分析,bGS>7分、cTx:T_(3)-T_(4)、tPSA水平升高、组织miR-193b基因启动子甲基化都是影响PCa患者发生骨转移的独立危险因素。经受试者工作特征曲线分析,组织miR-193b表达预测PCa患者发生骨转移的AUC为0.912(95%CI:0.863~0.960)。结论:miR-193b基因启动子高甲基化是PCa患者术后发生骨转移的独立危险因素,且肿瘤组织中miR-193b表达与基因启动子甲基化状态呈负相关性,因此检测组织miR-193b表达可用于预测PCa患者术后骨转移风险。

含miR-193b前体基因的重组腺病毒感染K562细胞可抑制其增殖

目的构建小RNA193前体(pre-miR-193b)重组腺病毒,观察miR-193b对慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。方法化学合成miR-193b cDNA序列,克隆进入pAdTrack-CMV穿梭质粒;重组穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化后,转入含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经PacI线性化后转入HEK293细胞包装、扩增。倍比稀释法测定病毒滴度。实时荧光定量PCR检测K562细胞中miR-193b表达水平,MTT法检测K562细胞增殖能力。结果pAd-miR-193b重组腺病毒质粒,经限制性内切酶鉴定和测序分析显示构建成功,并能够高效转染K562细胞;与对照组相比,荧光定量PCR检测显示重组腺病毒载体感染K562细胞后,miR-193b基因表达明显增加;同时高表达miR-193b基因的K562细胞增殖水平低于对照组。结论K562细胞高效表达的miR-193b可抑制K562细胞的增殖。

miR-193b对胃癌细胞浸润和转移的影响

目的探讨miR-193b转染对胃癌细胞浸润、转移的影响及其作用机制。方法应用microRNA芯片检测TGF-β1处理胃癌细胞BGC823前后miRNA的差异表达谱;应用划痕实验,transwell迁移浸润及裸鼠成瘤等实验分别检测瞬时转染miR-193b抑制剂前后胃癌细胞株生物学行为的变化。结果 TGF-β1处理胃癌细胞BGC823前后miRNA的表达谱存在6个差异表达,包括3个(miR-27a,miR-29b-1和miR-194)表达上调,3个(miR-193b,miR-574-3p和miR-130b)表达下调。转染miR-193b抑制剂后,胃癌细胞株BGC823迁移、浸润和转移的能力明显增强。结论 TGF-β1可能通过下调miR-193b的表达负向调控胃癌细胞的迁移、浸润和转移。

喉鳞状细胞癌SMAD3和hsa-miR-193b表达与靶向关系验证

目的 Hsa-miR-193b与LSCC的发生发展密切相关。本研究探讨LSCC中miR-193b与SMAD3的表达及二者的靶向调控关系。方法 qRT-PCR检测山西医科大学第一医院2013-01-03-2014-06-30来源的20例喉鳞状细胞癌(laryngal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及癌旁正常黏膜组织中miR-193b的表达,qRT-PCR、蛋白质印迹法检测SMAD3的表达。构建野生型和突变型SMAD3 3′UTR载体,与miR-193bmimics或NC共转染HEK-293T细胞,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。结果 qRT-PCR检测结果,癌组织miR-193b总表达为11.50±6.289,癌旁正常组织为1.00±0.000,与癌旁正常组织相比,miR-193b在LSCC组织中的表达上调且差异有统计学意义,t=7.466,P<0.001;癌组织SMAD3表达为0.402±0.201,癌旁正常组织表达为1.00±0.000,SMAD3在LSCC组织中的表达降低且差异有统计学意义,t=13.31,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果,癌组织SMAD3表达为1.57±0.127,癌旁正常组织表达为3.68±0.198,SMAD3在癌组织的表达降低且差异有统计学意义,t=48.40,P<0.001。经测序,成功构建野生型与突变型SMAD3 3′UTR载体,共转染后各组样品经检测显示,miR-193b+mutSMAD3组荧光素酶活性变化倍数为1.042±0.100 8,NC+mutSMAD3组为1.102±0.070 6,差异无统计学意义(t=0.854,P=0.442),miR-193b+SMAD3组荧光素酶活性变化倍数为0.449±0.047 2,NC+SMAD3组为1.124±0.014 1,miR-193b+SMAD3组比NC+SMAD3组荧光素酶活性明显降低(t=31.89,P=0.001),说明miR-193b可以与SMAD3 3′UTR结合。结论 LSCC组织中miR-193b表达上调,SMAD3表达明显降低。SMAD3是miR-193b的直接调控靶基因。

miR-193b靶向调节cyclin D1对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响

目的探讨miR-193b通过靶向调节cyclin D1对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响。方法河北北方学院附属第一医院2019年5月至2020年5月收治的20例宫颈癌患者被纳入研究,取其宫颈癌组织和癌旁组织,qRT-PCR检测miR-193b与cyclin D1在宫颈癌组织的表达。筛选耐辐射HeLa细胞,另外干预HeLa细胞中miR-193b和cyclin D1的表达并将细胞分为如下组:空白对照组、miR-NC组、miR-193b mimics组、miR-193b过表达+PCDNA-cyclin D1 NC组、miR-193b过表达+PCDNA-cyclin D1组。观察miR-193b对耐辐射HeLa细胞增殖能力及细胞周期的影响。双荧光素酶实验验证miR-193b与cyclin D1的靶向关系。挽救实验检测miR-193b是否通过抑制cyclin D1调控细胞周期。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中的miR-193b水平明显降低(P=0.007),cyclin D1水平显著升高(P=0.003);与对照组[(1.89±0.13)(2.73±0.18)(3.37±0.26)]相比,耐辐射HeLa细胞转染miR-193b mimics后,细胞48、72、96 h的增殖能力[(0.72±0.04)(1.63±0.14)(2.05±0.17)]明显降低(P<0.05)。相对于miR-NC组(51.53%±3.71%),过表达miR-193b能够导致细胞G1期(62.95%±4.15%)阻滞(P<0.05)。cyclin D1是miR-193b的靶基因。挽救实验证实miR-193b通过cyclin D1调控细胞周期。结论过表达miR-193b水平能降低耐辐射HeLa细胞增殖能力,提高放疗的敏感性,其作用机制可能是通过下调Cyclin D1表达,诱导细胞周期G1期阻滞。

Hsa-miR-193b对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞生物学功能的影响

目的:研究hsa-miR-193b对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖、凋亡等生物学功能的作用。方法:实验分组为Hep-2组、NC组(Hep-2细胞+miR-193binhibitor NC)、miR-193b抑制组(Hep-2细胞+miR-193binhibitor)。采用qRT-PCR检测miR-193b的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期以及凋亡,Transwell检测细胞迁移能力。采用生物信息学技术进行靶基因预测,Western blot检测转染miR-193b后Hep-2细胞SMAD3的表达情况。结果:转染miR-193binhibitor后,miR-193b抑制组细胞miR-193b的表达显著降低,与Hep-2组和NC组比较差异有统计学意义(P<0.01),后2组miR-193b表达量差异无统计学意义(P>0.05)。和NC组比较,miR-193b抑制组的Hep-2细胞增殖能力在24、48和72h显著降低(P<0.05或P<0.01),G1/S期的细胞比例增多(P<0.01),细胞凋亡明显增多(P<0.01),细胞迁移能力显著降低(P<0.01)。生物学信息分析预测miR-193b靶基因为SMAD3,Hep-2细胞转染miR-193b后与NC组相比,SMAD3蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:miR-193b抑制剂能够抑制Hep-2细胞的增殖、迁移,促进细胞凋亡,提示miR-193b对喉鳞状细胞癌起到"癌基因"的作用,有望成为临床治疗的新靶点。