miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:分析miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法:采用生物信息学方法对miR-194-3p的表达情况以及预后信息进行统计分析。采用荧光定量PCR检测胃癌细胞系中miR-194-3p的表达情况;采用CCK-8实验、克隆形成实验和流式细胞技术检测miR-194-3p对胃癌细胞增殖和凋亡能力的影响;Western blot检测过表达miR-194-3p后Caspase3的表达情况。结果:与癌旁组织相比,miR-194-3p在胃癌组织中显著高表达。TCGA预后分析显示,miR-194-3p的高表达与良好的预后相关。与GES-1相比,miR-194-3p在6种胃癌细胞系中均显著低表达。CCK-8和克隆形成实验结果显示,与空载组相比,慢病毒转染过表达miR-194-3p后显著抑制胃癌细胞增殖。流式细胞术显示,miR-194-3p可显著促进胃癌细胞凋亡。Western blot结果显示,Caspase3的表达在miR-194-3p过表达的胃癌细胞中显著增加。结论:miR-194-3p在胃癌细胞中低表达,miR-194-3p的过表达可显著抑制胃癌细胞的增殖,并促进细胞凋亡。其中miR-194-3p促进凋亡的机制可能是通过Caspase3的凋亡相关通路发挥作用。

miR-194a介导饲料维生素D3调节黄颡鱼JAK-STAT免疫通路的研究

为了研究miRNA如何介导饲料维生素D3在黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)JAK-STAT通路中调节免疫应答的机制,选择黄颡鱼幼鱼为主要研究对象,设计了3组维生素D3浓度分别为1120、3950和16600 IU/kg的饲料,开展了为期12周养殖实验,养殖实验结束后进行鮰爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)攻毒实验。对攻毒后的头肾和脾脏组织进行Illumina高通量测序,筛选差异表达的miRNAs,并对差异表达miRNAs进行靶基因的生物信息学预测和富集分析,发现miR-194a的靶基因富集在JAK-STAT信号通路中;进一步通过双荧光素酶报告基因实验验证了miR-194a对靶基因jak2a和tyk2具有靶向性调控的关系,能够发挥对jak2a和tyk2的抑制作用;通过体外巨噬细胞实验,在细胞中同样检测到miR-194a可以响应培养基中不同浓度的活性维生素D3,并对靶基因jak2a与tyk2同样发挥抑制作用;通过进一步对靶基因在JAK-STAT通路中的下游基因表达检测,发现随着JAK-STAT信号通路的激活,抗炎症反应(AIR)因子及被其诱导激活的靶基因的表达量随着培养基中维生素D3浓度升高呈现上升趋势(P<0.05),炎症通路NF-κB通路被抑制(P<0.05),促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α等表达量显著下降(P<0.05),并且调节了巨噬细胞由M1型极化向M2型极化的转变(P<0.05)。研究结果发现miR-194a能在体内体外实验中响应维生素D3的变化,维生素D3通过促进miR-194a的表达,负调控靶基因jak2a和tyk2,并对JAK-STAT通路中的下游基因发挥间接作用,阐释了miR-194a介导饲料维生素D3通过JAK-STAT信号通路调控黄颡鱼免疫应答的机制。

miR-194-5p通过Wnt5a抑制肝星状细胞活化

为研究miR-194-5p对肝星状细胞(HSCs)活化的影响及作用机制,采用CCK-8、β-半乳糖苷酶染色、Transwell、划痕、集落形成实验和RT-qPCR、Western blot分别检测miR-194-5p对LX-2细胞生物学特性、细胞活化标志物和靶基因表达的影响,并用生物信息学和双荧光素酶报告实验确定miR-194-5p靶基因.结果显示:miR-194-5p抑制LX-2细胞增殖、细胞集落形成、迁移能力以及LX-2细胞中活化标志物的表达,促进LX-2细胞衰老;Wnt5a为miR-194-5p的直接靶基因.研究表明miR-194-5p通过靶定Wnt5a抑制LX-2细胞活化,miR-194-5p和Wnt5a可能是治疗肝纤维化新的靶点.

胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因预测及生物信息学分析

目的:研究胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因,并分析其参与的生物学过程和信号转导通路,为胃癌耐药机制的表观遗传学研究提供前期基础.方法:通过NCBI数据库检索hsa-miR-194-5p的基本信息;使用预测数据库预测hsa-miR-194-5p的靶基因;使用DAVID数据库对靶基因集合进行功能富集分析(GO)和信号转导通路富集分析(KEGG).结果:成熟的miR-194-5p序列多个物种之间具有高度保守性.预测靶基因共325个,参与的生物学过程主要有Golgi组织和细胞对DNA损伤刺激的反应(P<0.01),分子功能包括泛素蛋白连接酶结合和泛素介导的蛋白水解(P<0.01),细胞组分富集在细胞核和细胞表面,调控包括TGF-β和WNT等多条信号转导通路(P<0.01).结论:miR-194-5p的靶基因SMURF1、RAC1、MAPK1与胃癌细胞的增殖密切相关.

乳腺高频超声联合血清miR-194对乳腺癌的诊断价值分析

目的:探讨乳腺高频超声联合血清miR-194对乳腺癌的诊断价值。方法:选取2021年6月—2023年3月赤峰学院附属医院收治的乳腺肿块患者76例,根据病理检查结果分为乳腺癌组(n=42)和乳腺良性病变组(n=34)。两组受检者均行乳腺高频超声检查及血清miR-194水平检测,分析乳腺高频超声联合血清miR-194对乳腺癌的诊断价值。结果:以病理检查结果为金标准,乳腺高频超声诊断乳腺癌的灵敏度、特异度和准确率分别为85.71%、88.24%、86.84%。乳腺癌组血清miR-194水平低于乳腺良性病变组(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ期乳腺癌患者血清miR-194水平低于Ⅱ期和Ⅰ期患者,低分化患者血清miR-194水平低于中、高分化患者,淋巴结转移患者血清miR-194水平低于无淋巴结转移患者(P<0.05);不同病理类型患者血清miR-194水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-194诊断乳腺癌的AUC为0.881(0.822~0.941),最佳截断值为1.60,预测灵敏度、特异度分别为81.6%、83.2%;血清miR-194联合乳腺高频超声诊断乳腺癌的AUC为0.975(0.953~0.996),灵敏度、特异度分别为94.7%、90.1%。结论:乳腺高频超声及血清miR-194水平对乳腺癌均具有一定的诊断价值,且联合应用的诊断效能更高。

长链非编码PCA3靶向miR-194影响前列腺癌细胞增殖和凋亡行为

目的:探讨长链非编码PCA3靶向miR-194的表达通过ERK信号通路对前列腺癌细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法:q PCR检测PCA3和miR-194在不同前列腺癌细胞中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测PCA3与miR-194的相互作用;克隆形成实验和凋亡实验检测抑制PCA3后前列腺细胞增殖能力和凋亡行为的变化,及过表达miR-194后前列腺细胞增殖能力和凋亡行为的变化;Western blot检测抑制PCA3后ERK信号通路蛋白的表达水平及过表达miR-194后ERK信号通路蛋白的表达水平变化。裸鼠体内成瘤试验检测PCA3对前列腺癌细胞成瘤能力的影响。结果:与其他前列腺癌细胞相比,LNCa P细胞中PCA3的表达水平最高,miR-194的表达水平较低;双荧光素酶试验证实PCA3可以调控miR-194的表达及活性,抑制PCA3的表达可以减弱前列腺癌细胞的增殖能力,加强其凋亡行为;过表达miR-194后前列腺癌细胞的增殖能力和凋亡行为得到一定的恢复;抑制PCA3的表达可以下调ERK信号通路的蛋白表达,抑制ERK信号通路的激活;同时过表达miR-194后可以逆转PCA3对ERK信号通路的抑制作用。抑制PCA3的表达后可以有效减弱前列腺癌细胞的体内成瘤能力。结论:PCA3可以靶向调节miR-194通过ERK信号通路调控前列腺癌细胞的增殖和凋亡行为。

miR-194对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨miR-194对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt/β-catenin信号通路的影响及作用机制。方法:将MCF-7细胞分为空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)和miR-194组。miR-194组转染miR-125b mimic,NC组转染NC,Blank组不转染。RT-PCR测定细胞中miR-194水平,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell小室测定细胞侵袭能力,划痕实验测定细胞迁移能力,Western blot测定细胞中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、C-Myc、基质金属蛋白酶7(MMP-7)蛋白水平。结果:乳腺癌MCF-7细胞中miR-194水平低于正常乳腺Hs578Bst细胞(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,miR-194组miR-194水平升高(P<0.05),OD值、侵袭细胞数减少、迁移距离缩短(P<0.05),p-GSK-3β、β-catenin、cyclin-D1、C-Myc、MMP-7蛋白水平降低(P<0.05),Blank组和NC组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乳腺癌细胞中miR-194水平降低,过表达miR-194可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭迁移。

miR-194对人脑胶质瘤U87细胞恶性生物学行为的影响

目的研究miR-194在人脑胶质瘤组织及人U87细胞中表达,以及其对U87细胞增殖、迁移、侵袭能力和凋亡率的影响。方法应用实时荧光定量PCR方法分别检测23例人脑胶质瘤组织及5例对照脑组织(脑出血及外伤脑组织)中miR-194的表达水平;将miR-194激动剂、拮抗剂及其各自的空白对照分别转染至U87细胞中,应用CCK-8方法检测转染miR-194后U87细胞增殖能力;Transwell实验检测U87细胞迁移、侵袭能力。流式细胞技术检测转染miR-194后细胞凋亡率。结果与对照组比较,人脑胶质瘤组织中miR-194表达量显著下调(P<0.05);过表达miR-194后能够明显抑制U87细胞增殖、迁移及侵袭能力,并显著促进U87细胞凋亡。结论 miR-194在胶质瘤组织中表达下调,过表达miR-194能够显著抑制U87细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡。

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性、细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P<0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P<0.05)。抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P<0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低。结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性。

miR-194在胃癌患者血液中的表达及临床意义

目的探讨miR-194在胃癌患者血液中的表达及临床意义。方法采集2015年2月至2016年7月120例胃癌患者和同期体检的40例健康对照者血液样本,实时RT-PCR法检测miR-194表达水平,并分析其表达水平与临床病理特征的关系。电化学发光法测定血清CA199、CA724、CEA含量;ELISA法检验miR-194靶基因BMI-1的表达水平,并分析miR-194表达水平与它们之间的相关性。结果胃癌患者血液中miR-194表达水平明显低于健康对照者(t=1.82,P=0.04);而肿瘤标志物水平CA199、CA724、CEA及靶基因BMI-1水平明显高于健康对照组(t=3.82,P=0.03;t=4.67,P=0.01;t=3.42,P=0.04;t=3.15,P=0.03)。miR-194的表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05),与分化程度、TNM分期、淋巴转移有关(t=2.93,P=0.031;t=3.81,P=0.019;t=3.34,P=0.008)。miR-194表达水平与BMI-1水平呈负相关(r=-0.91,P<0.001),与肿瘤标记物CA199、CA724、CEA也分别呈负相关关系(r=-0.82,P=0.023;r=-0.94,P=0.007;r=-0.72,P=0.021)。结论 miR-194临床上可作为诊断胃癌的潜在生物标志物,可能通过调控BMI-1参与胃癌发生发展,与患者分化程度、TNM分期、淋巴转移密切相关。

红树莓提取物通过miR-194-5p/PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的探讨红树莓提取物对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞AGS,分为对照组(NC组,细胞常规培养24 h)、不同浓度(20、40、80、160 mg/ml)红树莓提取物组(分别用20、40、80、160 mg/ml红树莓提取物干预AGS细胞24 h)、80 mg/ml红树莓提取物+anti-miR-194-5p组(80μg/ml的红树莓提取物干预转染anti-miR-194-5p的AGS细胞24 h)、80 mg/ml红树莓提取物+anti-miR-NC组(80μg/ml的红树莓提取物干预转染anti-miR-NC的AGS细胞24 h),CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中MMP-2、MMP-9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-194-5p表达。结果与NC组比较,胃癌细胞AGS经不同浓度(20、40、80、160 mg/ml)的红树莓提取物干预24 h后,细胞A值、迁移数和侵袭数及细胞中MM-P2、MMP-9表达明显降低(P<0.05),而miR-194-5p表达明显升高(P<0.05)。与NC组比较,80 mg/ml的红树莓提取物降低了AGS细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达(P<0.05)。与转染anti-miR-NC的AGS细胞比较,80 mg/ml的红树莓提取物作用的敲减miR-194-5p的AGS细胞A值、迁移数和侵袭数及MMP2、MMP9、p-PI3K和p-AKT蛋白表达升高(P<0.05)。结论红树莓提取物可能通过上调miR-194-5p及阻碍PI3K/AKT信号通路来抑制胃癌细胞AGS增殖、迁移和侵袭。

miR-194-5p靶向TSPAN1基因对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:本研究旨在探究miR-194-5p靶向TSPAN1基因对人皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:收集癌组织和癌旁正常皮肤组织,检测组织中TSPAN1和miR-194-5p的表达。双荧光素酶报告实验证实miR-194-5p与TSPAN1的靶向关系。取正常皮肤细胞作为Normal组,CSCC细胞给予miR-194-5p agomir、miR-194-5p antagomir、sh-RNA-TSPAN1处理。qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中凋亡和上皮间质转化(EMT)相关因子的表达。MTT检测各组细胞增殖活力;Transwell检测各组细胞侵袭情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡。结果:组织实验中,相对于Normal组,CSCC组织中miR-194-5p表达降低,TSPAN1表达升高。双荧光素酶报告实验证实TSPAN1为miR-194-5p的靶基因。细胞实验中,相对于Blank组,miR-194-5p agomir组、shRNA-TSPAN1组中细胞增殖、侵袭和EMT被抑制,凋亡加快(均P<0.05)。而miR-194-5p antagomir组细胞增殖、侵袭和EMT被诱导,凋亡被抑制(均P<0.05)。结论:miR-194-5p能够靶向抑制TSPAN1基因,抑制CSCC细胞增殖和侵袭,诱导其凋亡。

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低(P<0.05),LMNB1表达水平明显升高(P<0.05)。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。

血浆miR-181b和miR-194作为急性移植物抗宿主病诊断及疗效评价的标志物的研究

目的:研究血浆中miR-181b和miR-194的水平变化与异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关联性,确定新的aGVHD诊断及预测标志物。方法:采用qRT-PCR方法检测31例接受异基因造血干细胞移植的患者移植前、移植后15 d以及发生aGVHD时血浆中miR-181b和miR-194表达水平变化,利用ROC曲线及曲线下面积分析移植后第15天miR-181b和miR-194的表达量作为aGVHD早期诊断标志物的特异性和敏感性。结果:发生aGVHD时患者血浆miR-181b和miR-194表达水平较移植前显著上调(P <0.05),且在治疗后表达水平下调,与移植前水平相比无显著差异。移植后第15天,aGVHD组miR-181b和miR-194的表达水平较未发生aGVHD组显著上调(P <0.05),且表达水平增高先于临床诊断。该检测时间点miR-181b诊断aGVHD曲线下面积0.91±0.05(特异性为0.94,敏感性为0.69),miR-194诊断aGVHD曲线下面积0.91±0.06(特异性为0.94,敏感性为0.77)。结论:miR-181b和miR-194的表达量可作为aGVHD早期诊断及疗效评价的特异性标志物。

食管癌患者血清miR-194水平及癌组织中KDM5B表达水平与食管癌临床病理特征的关系

目的探讨组蛋白去甲基化转移酶(KDM5B)、miR-194在食管癌患者中表达水平及与食管癌临床病理特征的关系,以期为临床诊治提供参考。方法选取2020年1—6月在安阳市肿瘤医院接受手术治疗的96例食管鳞癌患者作为观察组,通过手术取得食管癌患者的癌组织和距离癌组织3 cm以上的癌旁组织。另外选取40例健康人作为对照组。采用免疫组化法检测KDM5B在食管癌组织、癌旁组织中的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测观察组和对照组研究对象血清miR-194水平;采用多因素Cox回归分析影响食管癌患者预后的危险因素。结果食管癌组织的KDM5B阳性表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(χ~2=9.632,P=0.007);对照组研究对象血清miR-194水平明显低于观察组,差异有统计学意义(Z=14.306,P<0.001)。临床分期为Ⅲ期、浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移的食管癌患者KDM5B阳性表达率、miR-194表达水平高于临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度为Tis~T2、无淋巴结转移的食管癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随访2年后,共有40例患者存活,存活率为41.67%(40/96)。KDM5B阳性表达患者的2年生存率(32.31%,21/65)低于KDM5B阴性表达患者(61.29%,19/31),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-194高表达组患者的2年生存率(31.25%,15/48)低于miR-194低表达组患者(52.08%,25/48),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度为Tis~T2、无淋巴结转移、KDM5B阴性表达、miR-194低表达的食管癌患者2年生存率高于临床分期为Ⅲ期、浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移、KDM5B阳性表达、miR-194高表达的食管癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移、KDM5B阳性表达、miR-194高表达是食管癌患者2年生存率的危险因素(P<0.05)。结论KDM5B、miR-194表达水平与食管癌患者的临床分期、浸润深度、是否有淋巴结转移密切相关,且KDM5B阳性表达、miR-194高表达是影响患者预后的危险因素,可以作为临床诊治食管癌的生物标志物。

miR-194靶向Bmi-1调控PI3K/Akt信号通路对脑胶质瘤细胞迁移和凋亡的影响

目的:探讨miR-194靶向Bmi-1调控PI3K/Akt信号通路对脑胶质瘤细胞迁移和凋亡的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测miR-194在脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞中的表达;Transwell迁移实验检测miR-194对U251细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测miR-194对U251细胞凋亡率的影响;免疫组织化学法检测Bmi-1在脑胶质瘤组织中的表达;qRT-PCR检测Bmi-1在脑胶质瘤细胞中的表达;TargetScan预测miR-194与Bmi-1的结合位点;双荧光素酶报告基因检测miR-194与Bmi-1的相互作用关系;Transwell迁移实验检测miR-194靶向Bmi-1对U251细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测miR-194靶向Bmi-1对U251细胞凋亡率的影响;Western blot检测miR-194靶向Bmi-1对PI3K/Akt通路相关蛋白的影响。结果:miR-194在脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞中呈低表达(P<0.01);过表达miR-194,U251细胞迁移能力下降(P<0.01),凋亡率提高(P<0.05);miR-194与Bmi-1存在靶向关系,且两者相互抑制;Bmi-1在脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞中呈高表达(P<0.01);过表达miR-194可逆转Bmi-1过表达引起的U251细胞迁移能力增强(P<0.01);过表达miR-194可逆转Bmi-1过表达引起的U251细胞凋亡率下降(P<0.01);过表达Bmi-1,PI3K和Akt蛋白磷酸化程度增强,过表达miR-194可逆转这一现象。结论:过表达miR-194可抑制Bmi-1表达,降低PI3K和Akt蛋白磷酸化程度,抑制脑胶质瘤细胞迁移,促进其凋亡。

2-脱氧-D-葡萄糖激活miR-194/K_(ATP)信号通路发挥抗癫痫作用

目的:癫痫是诸多原因导致的以大脑神经元细胞异常放电为主要特征的中枢神经功能失常综合征。寻找新的癫痫药物治疗靶点一直是神经病学研究的重点和热点。2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)通过介导K_(ATP)通道亚基Kir6.1、Kir6.2 mRNA和蛋白质的上调而发挥抗癫痫作用。通过使用TargetScan和miRBase的数据库对miRNA及相关靶基因的序列进行互补配对分析推测miR-194可能是K_(ATP)通道的上游信号分子。本研究旨在探讨2-DG通过miR-194调节K_(ATP)通道亚基Kir6.1、Kir6.2发挥抗癫痫作用的机制。方法:建立无镁癫痫细胞模型,将细胞随机分为对照组、癫痫组(EP组)、EP+2-DG组、miR-194干预组(包括EP+miR-194 mimic、EP+miR-194 mimic+2-DG、EP+mimic control、EP+miR-194 inhibitor、EP+miR-194 inhibitor+2-DG及EP+miR-194 inhibitor control共6组)。使用2-DG对miR-194模拟物进行干预,采用膜片钳方法检测自发性复发性癫痫样放电,应用real-time PCR检测神经元miR194、Kir6.1、Kir6.2的mRNA表达,蛋白质印迹法检测Kir6.1、Kir6.2的蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,EP组自发放电电位幅度差异无统计学意义(P>0.05),自发放电频率增加(P<0.05)。与EP组相比,EP+2-DG组自发放电频率降低(P<0.05)。与EP+miR-194 mimic control组相比,EP+miR-194 mimic组Kir6.1、Kir6.2的mRNA和蛋白质表达均下调(均P<0.05)。与EP+miR-194 inhibitor control组对比,EP+miR-194 inhibitor组Kir6.1、Kir6.2的mRNA和蛋白质表达均上调(均P<0.05)。经miR-194模拟物预处理后,K_(ATP)通道亚基Kir6.1、Kir6.2 mRNA及蛋白质表达水平降低。与EP+2-DG组相比,EP+miR-194 mimic+2-DG组Kir6.1、Kir6.2的mRNA和蛋白质表达均下调(均P<0.05);EP+miR194 inhibitor+2-DG组Kir6.1、Kir6.2的mRNA和蛋白质表达均上调(均P<0.05)。结论:2-DG可能通过miR-194上调K_(ATP)通道亚基Kir6.1、Kir6.2的表达发挥抗癫痫作用。

骨肉瘤中miR-194的表达水平及其与临床病理参数的关系

目的探讨骨肉瘤中miR-194的表达水平及其与临床病理参数的关系。方法应用荧光定量实时PCR分析68例冻存的骨肉瘤组织及其对应的癌旁组织标本中miR-194的表达水平,并分析其与临床病理参数及患者预后的关系。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-194的表达显著降低(t=8.408,P<0.001)。随着临床分期的增加,miR-194表达水平逐渐降低,miR-194表达下调与临床分期有关(χ2=15.859,P=0.001)。软组织浸润患者miR-194表达水平显著低于无软组织浸润患者(χ2=21.580,P<0.001)。与无转移患者相比,转移患者miR-194表达水平显著降低(χ2=14.071,P<0.001)。miR-194高表达组中位生存时间为30.40个月,累积生存率为81.48%(22/27);而低表达组中位生存时间为23.71个月,累积生存率为58.54%(24/41);两组比较差异有统计学意义(χ2=4.138,P=0.042)。结论骨肉瘤患者组织中miR-194表达水平明显降低,与临床分期、软组织浸润、肿瘤转移等临床病理特征有关,其低表达与患者预后不良密切相关。

miR-194-3p靶向调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-194-3p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:实验设置空白对照组(control)、miR-194-3p-mimics组(转染miR-194-3p-mimics)、miR-194-3p-inhibitor组(转染miR-194-3p-inhibitor)、siRNA-MMP-11组(转染siRNA-MMP-11)、ovRNA-MMP-11组(转染ovRNA-MMP-11)、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组(转染miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11),均以脂质体法转染至人成骨肉瘤细胞Saos-2;MTT法检测细胞增殖率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹实验(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶11(MMP-11)蛋白表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-194-3p的表达水平。结果:MTT法检测结果显示:miR-194-3p-mimics组、siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组会降低细胞增殖,并与空白对照组和ovRNA-MMP-11组相比有统计学差异(P<0.05)。细胞划痕实验检测结果显示:miR-194-3p-mimics组、siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组细胞愈合率明显低于ovRNA-MMP-11组(P <0.05)。细胞侵袭实验检测结果显示:siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组降低细胞侵袭能力,并与空白对照组和ovRNA-MMP-11组相比有统计学差异(P <0.05)。qRT-PCR检测结果显示:miR-194-3p-mimics组中miR-194-3p的表达水平与空白对照组、miR-194-3p-inhibitor组、siRNA-MMP-11组、ovRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组相比均有统计学差异(P <0.05)。结论:miR-194-3p在人成骨肉瘤细胞中高表达,并可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控MMP-11所参与的上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)信号通道有关,miR-194-3p将来可能为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。

miR-194在增龄性胸腺萎缩中的表达及靶基因研究

目的:检测增龄性胸腺萎缩过程中miR-194与PTPN12的表达水平变化,并分析二者相互作用,阐明其中的分子调节机制。方法:选用C57BL/6小鼠,分为4组:1月龄组、6月龄组、10月龄组和19月龄组,每组6只,雌雄各半。麻醉后取出胸腺组织,用CD45抗体与LS柱吸附洗脱,筛选出胸腺上皮细胞。实时荧光定量PCR与Western blot方法检测随年龄增长,胸腺上皮细胞中miR-194与PTPN12基因的表达变化趋势。体外实验共转染miR-194与PTPN12荧光素酶报告载体到HEK293细胞内,分别于24、48 h后检测自发荧光值。结果:随月龄增长,miR-194表达出现下调趋势(P<0.05),而PTPN12基因表达出现上调趋势(P<0.05),且二者呈负相关性(P<0.05)。体外荧光素酶报告基因结果显示,miR-194与PTPN12基因3'UTR区域发生直接作用,并在48 h结合效率最高。结论:PTPN12是miR-194靶基因之一,参与了增龄性胸腺萎缩过程,是调节胸腺上皮细胞功能的重要因子。