circ_0001721/miR-198对前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨circ_0001721/miR-198分子轴对人前列腺癌细胞DU145生物学行为的影响及相关作用机制。方法:应用qRT-PCR法检测circ_0001721、miR-198的表达量;DU145细胞转染si-circ_0001721、miR-198 mimics、anti-miR-198以及相应的对照(si-NC、miR-NC、anti-miR-NC);CCK-8法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、克隆、凋亡、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证circ_0001721与miR-198的靶向关系;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果:与癌旁组织比较,circ_0001721在前列腺癌组织中高表达(P<0.05),而miR-198在前列腺癌组织中低表达(P<0.05);与转染si-NC或转染miR-NC相比,si-circ_0001721或miR-198 mimics可以提高细胞增殖抑制率、凋亡率和E-cadherin蛋白水平(P<0.05),降低克隆形成数、迁移和侵袭数以及N-cadherin蛋白水平(P<0.05);circ_0001721可靶向结合miR-198;与共转染si-circ_0001721和anti-miR-NC相比,共转染si-circ_0001721和anti-miR-198降低了细胞增殖抑制率、凋亡率和E-cadherin蛋白水平(P<0.05),而增加了克隆形成数、迁移和侵袭数以及N-cadherin蛋白水平(P<0.05)。结论:敲低circ_0001721可通过上调miR-198抑制前列腺癌细胞的生长和转移。

miR-198靶向MAPK1调控宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和侵袭

目的探究miR-198对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制。方法用miR-198mimic转染HeLa细胞,qRT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1 (Mitogen-activated protein kinase1,MAPK1)的mRNA水平;荧光素酶实验检测miR-198和MAPK1的靶向关系;用pcDNA3.0-MAPK1(pc-MAPK1)和miR-198 mimic转染细胞,CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭能力,Westernblot检测蛋白的表达。结果 miR-198mimic转染细胞后,miR-198表达水平明显升高,MAPK1mRNA表达水平明显降低;荧光素酶报告实验表明miR-198序列上存在MAPK1结合位点;miR-198过表达能显著降低宫颈癌细胞增殖倍数、诱导细胞凋亡,同时还能明显降低HeLa细胞侵袭能力;此外,miR-198 mimic能显著抑制MAPK1下游基因核糖体S6激酶2(Ribosomal S6 kinase 2, RSK2)、c-Myc和c-fos的蛋白表达;pc-MAPK1能明显减弱miR-198 mimic对HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭及对MAPK1下游蛋白表达的调控作用。结论 miR-198过表达能通过靶向MAPK1抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力并诱导细胞凋亡。

过表达miR-198通过靶向调控Wnt2B表达抑制滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭

目的研究过表达miR-198对人滋养细胞株HTR-8/SVneo增殖、转移和侵袭能力的影响,并探讨其可能作用机制。方法qRT-PCR检测子痫前期(PE)患者及正常产妇胎盘组织中miR-198表达水平。培养人滋养细胞株HTR-8/SVneo,采用脂质体法将miR-198 mimics及其阴性对照mimics NC转染至HTR-8/SVneo细胞中,qRT-PCR检测细胞中miR-198、Wnt2B mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,Western blot检测细胞中Wnt2B、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达,双荧光素酶报告基因验证miR-198与Wnt2B的靶向关系。再将miR-198 mimics和Wnt2B过表达质粒分别或同时转染至HTR-8/SVneo细胞中,Western blot检测细胞中Wnt2B蛋白表达变化,CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活性以及细胞迁移与侵袭能力。结果与正常组比较,PE患者胎盘组织中miR-198表达水平显著升高(P<0.001)。miR-198过表达可显著抑制HTR-8/SVneo细胞增殖活性以及细胞迁移与侵袭能力(P<0.01,P<0.001),促进细胞中E-cadherin蛋白表达(P<0.001),抑制细胞中Wnt2B、N-cadherin和Vimentin等蛋白表达(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-198靶向负调控Wnt2B基因表达。过表达Wnt2B可显著逆转miR-198对HTR-8/SVneo细胞增殖以及迁移与侵袭能力的抑制作用(P<0.001)。结论过表达miR-198可抑制人滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭,其机制可能与靶向抑制Wnt2B基因表达有关。

miR-198靶向MAPK1对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探究微小型RNA-198 (miR-198)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:miR-198mimic转染MCF-7细胞后,q RT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1, MAPK1)的表达水平;荧光素酶报告实验证实miR-198靶向作用MAPK1。pcDNA MAPK1(pc-MAPK1)和miR-198 mimic转染MCF-2细胞,Western blotting检测转染细胞MAPK1的表达水平,CCK-8法检测MCF-7细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:miR-198mimic能明显升高MCF-7细胞miR-198的表达水平(P<0.01),表明转染成功;miR-198 mimic能降低MAPK1 mRNA表达水平,还能降低MAPK1野生质粒的荧光素酶活性(P<0.05);同时pc-MAPK1能促进MAPK1表达。此外,miR-198 mimic转染细胞4 d后,MCF-7细胞增殖速度显著降低、细胞凋亡率明显升高(均P<0.05);miR-198 mimic+pcMAKPI组MCF-7细胞凋亡率逆转降低、增殖率逆转升高(均P<0.05)。结论:miR-198通过靶向下调MAPK1表达调控人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡。

半枝莲醇提取物调控circ_0092283/miR-198对结直肠癌细胞克隆形成和凋亡的影响

目的:探讨半枝莲醇提取物(EESB)对结直肠癌细胞HCT-116克隆形成和凋亡的影响及可能机制。方法:HCT-116细胞分为不同剂量(0,200,400,800μg·ml-1)EESB组、circ0092283小干扰RNA(si-circ0092283)组、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、400μg·ml-1 EESB+circ0092283过表达载体(pcDNA-circ0092283)组、400μg·ml-1EESB+miR-198抑制剂(anti-miR-198)组,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹(Western Blot)法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测circ0092283和miR-198表达。收集30例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织,培养HCT-116和肠上皮细胞HIEC-6,RT-qPCR法检测组织和细胞中circ0092283和miR-198表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ0092283和miR-198调控关系。结果:不同剂量(200,400,800μg·ml-1)的EESB作用于HCT-116细胞或干扰circ0092283表达后,HCT-116细胞克隆形成数和细胞中Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率和细胞内Bax蛋白表达升高(P<0.05)。结直肠癌组织和HCT-116细胞中circ0092283呈高表达,而miR-198呈低表达。circ0092283靶向负调控miR-198。EESB抑制circ0092283表达,而促进miR-198表达;过表达circ0092283或抑制miR-198表达可降低EESB对HCT-116细胞克隆形成、细胞凋亡和Bal、Bax蛋白表达的影响。结论:EESB可能通过调控circ0092283/miR-198轴降低结直肠癌HCT-116细胞的克隆形成能力,并促进HCT-116细胞凋亡。

精神分裂症患者外周血白细胞miR-198、miR-206的表达及意义

目的:探讨精神分裂症患者与健康人群外周血白细胞中miR-198、miR-206相对表达水平的差异。方法:选择精神分裂症患者40例作为病例组,性别、年龄匹配的40例健康人群作为对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测两组个体外周血白细胞miR-198及miR-206的相对表达水平,阳性与阴性症状(PANSS)量表进行症状学评估。结果:病例组外周血白细胞miR-198、miR-206的相对表达明显高于健康对照组(t=20.363,P<0.01;t=33.762,P<0.01)。miR-198与miR-206的相对表达与PANSS各分量表评分相关性均无统计学意义(均P>0.05)。结论:miR-198、miR-206在精神分裂症诊断与疾病易感基因研究中可能具有一定的价值。

miR-198通过调控盘状结构域受体2影响肺癌细胞放疗抵抗的分子机制

目的旨在探讨 miR-198 通过调控盘状结构域受体 2(DDR2)影响肺癌细胞放疗抵抗的分子机制。方法培养人正常胚肺细胞与肺癌细胞,通过克隆形成实验比较各种细胞对放疗的敏感性。双荧光素酶报告基因实验检测 DDR2 与 miR-198 的关系。RT-PCR 和 Western blot 实验检测相关基因的表达水平。Transwell 实验检测细胞迁移能力。结果人肺癌细胞株 A549 对放疗最不敏感,放疗抵抗细胞株 A549-R 中 miR-198 表达显著低于其他细胞且 DDR2 表达显著高于其他细胞。DDR2 是 miR-198 的直接靶基因,过表达 miR-198 显著抑制 A549-R 细胞中 DDR2 蛋白的表达水平,增强细胞对放疗的敏感性,同时显著抑制了细胞的迁移能力。结论 miR-198 通过直接靶向 DDR2 调控肺癌细胞对放疗的抵抗作用。

miR-198在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖作用的机制研究

目的研究微小RNA-198(microRNA-198,miR-198)在卵巢癌中的表达水平及对卵巢癌细胞增殖的影响,并探讨其发挥作用的分子机制。方法采用qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌和正常卵巢组织中的表达水平;t检验分析卵巢癌中miR-198的表达水平与患者临床病理参数的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-198的表达对癌患者预后的影响;qRT-PCR检测miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1和正常卵巢上皮细胞IOSE80中的表达;选择低表达miR-198的卵巢癌细胞系,转染miR-198模拟物(mimic),分为对照组NC和实验组miR-198 mimic,qRT-PCR检测各组细胞中miR-198的表达水平;MTS实验检测各组细胞的增殖活性;平板克隆检测各组细胞的克隆形成能力;流式细胞仪检测各组细胞的周期比率;Western blotting检测miR-198对增殖周期相关蛋白CDK4、CDK6、cyclinD1和p21表达的影响。结果qRT-PCR结果显示miR-198在卵巢癌中的表达低于正常卵巢组织(t=6.55,P<0.001),且miR-198的表达与患者淋巴结转移和FIGO分期相关(P<0.05);miR-198低表达的卵巢癌患者预后较差(χ^(2)=4.14,P=0.035)。与正常卵巢上皮细胞IOSE80相比,miR-198在卵巢癌细胞SKOV3、CAOV4、CoC1中的表达降低,在SKOV3细胞系中的表达最低(F=59.07,P<0.001)。与对照组NC相比,实验组miR-198 mimic细胞中miR-198的表达增加(t=16.50,P<0.001),miR-198 mimic组细胞增殖活性和克隆形成能力降低及诱导细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);与对照组NC相比,miR-198 mimic组细胞中CDK4、CDK6和cyclinD1蛋白表达降低,p21蛋白表达增加(P<0.05)。结论miR-198可能通过调控细胞周期抑制卵巢癌细胞的增殖。miR-198可能是治疗卵巢癌的潜在靶点。

miR-198靶向抑制FGFR1表达抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的:探究微小RNA(miR)-198对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:培养人胃癌细胞株系MKN-45、SGC-7901和BGC-823以及人胃黏膜上皮细胞(GES-1),采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-198在胃癌细胞中的表达;对胃癌细胞MKN-45进行miR-198模拟物(mimic)和阴性对照(mimiccontrol)转染,分别设定为miR-198 mimic+control组和miR-198 mimic+FGFR1组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和流式细胞仪检测miR-198表达上调对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。采用生物信息学网站预测miR-198的潜在靶基因;采用双荧光素酶报告实验及免疫印迹(Western Blot)验证miR-198对成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的调控关系。结果:与GES-1细胞相比,miR-198在MKN-45、SGC-7901和BGC-823胃癌细胞中的表达显著下调,差异有统计学意义(t=35.068,t=9.872,t=20.585;P<0.01);miR-198表达上调显著抑制胃癌细胞的增殖,两组细胞在转染第48 h和72 h增殖比较和诱导细胞凋亡比较,差异均有统计学意义(t_(增殖)=5.041,t=6.041;t_(凋亡)=6.797;P<0.01);WesternBlot实验中,miR-198 mimic组FGFR1蛋白水平与mimic control组相比,显著抑制了FGFR1蛋白水平表达,差异有统计学意义(t=6.030,P<0.01);CCK-8实验中miR-198mimic组+FGFR1细胞增殖能力明显增强,细胞凋亡率显著降低,与miR-198 mimic+control组相比,差异有统计学意义(t=4.797,t=7.249;P<0.01)。结论:miR-198通过靶向抑制FGFR1的表达而抑制胃癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡,在胃癌中发挥抑癌基因功能。

miR-198过表达抑制视网膜母细胞瘤生长及侵袭的实验研究

目的探究微小RNA-198(miR-198)过表达对视网膜母细胞瘤(RB)Y79细胞系生长、侵袭及裸鼠异体移植瘤的影响。方法培养RB Y79细胞系,随机分为空白对照组(Control组)、阴性对照组和过表达组,采用Lipofectamine2000分别转染miR-NC、miR-198模拟物至阴性对照组和过表达组Y79细胞。qRT-PCR检测转染后Y79细胞中miR-198的相对表达水平;利用干细胞成球试验和Transwell小室试验分别检测各组Y79细胞的增殖及侵袭能力;Western blot检测各组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平。将培养好的miR-NC和miR-198 mimic细胞分别进行裸鼠皮下注射,60只裸鼠分为阴性对照组和过表达组,各组每5 d随机处死3只裸鼠,检测RB质量及体积,qRT-PCR检测瘤体中miR-198的mRNA相对表达水平;免疫组化法检测Ki67、SOX2、VEGF阳性表达率。结果与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中miR-198的相对表达水平较高(P<0.05),并且干细胞成球直径、数量、细胞侵袭率均较低(P<0.05);Western blot结果显示,与Control组及阴性表达组比较,过表达组Y79细胞中Ki67、SOX2、OCT4、VEGF、Fibronectin蛋白表达水平均较低(P<0.05)。过表达组裸鼠的瘤体质量及体积均小于阴性对照组(P<0.05),并且过表达组裸鼠瘤体组织中miR-198的mRNA相对表达水平高于阴性对照组(P<0.05),过表达组Ki67、SOX2、VEGF的阳性表达率低于阴性对照组(P<0.05)。结论miR-198可能在RB中作为抑癌基因发挥作用,过表达miR-198可明显抑制RB的增殖及侵袭能力,并抑制裸鼠瘤体生成。

miR-198通过靶向ZEB2调控EMT过程抑制肝癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨微小核糖核酸-198(miR-198)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织细胞中的表达及其对癌细胞增殖、迁移的影响及其相关机制。方法采用qRT-PCR检测miR-198在HCC组织及细胞(HepG2,Hep3G,MHCC97H,Huh7)中的表达情况;采用脂质体2000向Huh7细胞中单独转染miR-198 mimics,共转染miR-198 mimics和pcDNA3.1-ZEB2;生物信息学网站预测miR-198的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;采用Western blot检测E盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)及上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)相关蛋白表达;CCK-8法和细胞划痕实验检测Huh7细胞增殖和迁移能力。结果20例HCC组织中miR-198相对表达量(0.354±0.022)明显低于邻近正常组织(4.762±1.135),差异有统计学意义(t=17.365,P<0.001)。HCC细胞系HepG2(0.589±0.103),Hep3G(0.495±0.086),MHCC97H(0.558±0.056)和Huh7(0.362±0.045)中miR-198相对表达量较正常肝细胞LO2(1.823±0.125)显著降低(t=17.159,18.466,17.590,20.315,均P<0.05)。miR-198 mimics组细胞增殖(0.398±0.146 vs 0.691±0.213)和迁移能力(20.012±2.103 vs 84.032±6.512)较对照组明显降低(t=1.965,52.459,均P<0.001)。miR-198 mimics组细胞中E-cadherin表达较对照组明显升高,N-cadherin和Vimentin表达较对照组明显降低(t=18.478,17.550,19.706,均P<0.01)。ZEB2是miR-198的靶基因,miR-198负调控ZEB2。20例HCC组织中ZEB2相对表达量(3.621±1.143)明显高于邻近正常组织(0.736±0.030),差异有统计学意义(t=11.284,P<0.001),与miR-198表达呈负相关(r=-0.702,P<0.05)。共转染过表达ZEB2逆转了miR-198 mimics对HCC细胞增殖、迁移和EMT的抑制作用。结论miR-198在HCC组织和细胞中表达下调,miR-198通过靶向负调控ZEB2的表达抑制Huh7细胞的增殖和迁移。

基于miR-198调控PI3K-Akt信号通路探讨姜黄素治疗急性胰腺炎的机制

利用姜黄素对急性胰腺炎模型大鼠进行干预,探讨其可能机制。将120只大鼠随机分为空白组、模型组、模型+姜黄素组、模型+腺病毒(mock)+姜黄素组、模型+拮抗剂+姜黄素组、模型+姜黄素+LY294002组,每组20只,测定大鼠胰腺组织湿/干重比,HE染色法观察大鼠胰腺组织病理改变,TUNEL染色法测定细胞凋亡情况,ELISA法检测血清淀粉酶、脂肪酶、Bcl-2、Bax的水平变化,Western blot法测定胰腺组织PI3K,Akt,p-Akt水平变化。HE染色法显示姜黄素可改善急性胰腺炎模型大鼠胰腺病理改变,减少胰腺组织病理评分;ELISA法显示姜黄素可降低模型大鼠外周血清淀粉酶、脂肪酶活力与Bax水平,上调Bcl-2浓度;Western blot结果显示姜黄素干预后模型大鼠胰腺组织PI3K和p-Akt表达上调,并通过TUNEL染色法证实干预后大鼠胰腺细胞凋亡率减少,且上述作用可被miR-198拮抗剂和PI3K-Akt信号通路抑制剂LY294002削弱。姜黄素对急性胰腺炎有理想疗效,其机制可能通过miR-198-PI3K-Akt轴介导。

miR-198在肝细胞癌组织中的表达

目的探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中miR-198表达及意义。方法HCC患者65例,取手术切除HCC组织及癌旁组织分别为HCC组和癌旁组,采用实时定量PCR法检测2组miR-198mRNA相对表达量;依据癌组织中miR-198mRNA相对表达量将HCC组分为miR-198mRNA高表达组20例,miR-198mRNA低表达组45例,均给予标准方案治疗,比较2组临床病理特征,随访观察2组总生存期。结果HCC组miR-198mRNA相对表达量(1.50±0.82)低于癌旁组(2.11±0.48)(P<0.05);miR-198mRNA低表达组肿瘤中低分化(77.78%)、肿瘤直径≥5cm(71.11%)、有淋巴结转移(75.56%)、有远处转移(80.00%)、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(80.00%)、有门静脉癌栓(68.69%)、有血管浸润(71.11%)、有肿瘤包膜浸润比率(73.33%)高于miR-198mRNA高表达组(25.00%、45.00%、40.00%、50.00%、55.00%、35.00%、40.00%、30.00%)(P<0.05),年龄、性别比例与miR-198mRNA高表达组比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-198mRNA低表达组总生存期[(7.63±2.65)个月]较miR-198mRNA高表达组[(20.34±2.73)个月]短(P<0.05)。结论HCC组织miR-198表达明显降低,miR-198低表达可促进肿瘤进展。

游离微小RNA-198对肺癌恶性胸腔积液诊断价值研究

目的研究游离微小RNA-198（miR-198）对肺癌相关的恶性胸腔积液的诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法检测54例肺癌恶性胸腔积液和35例良性胸腔积液中胸液游离miR-198的相对表达水平。结果肺癌恶性胸腔积液miR-198的表达量小于良性胸腔积液,差异有统计学意义（P〈0.01）。ROC曲线显示miR-198能够较好地区分良恶性胸腔积液,曲线下面积（AUC）为0.899（95%CI：0.822~0.950）,优于CEA的0.774（95%CI：0.716~0.825）。当miR-198和CEA联合检测时,敏感度增高到85.7%,特异度为90.9%,AUC升高到0.920（95%CI：0.844~0.963）。游离miR-198表达水平与MPE患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤类型、肿瘤转移位置以及CEA的水平无关（P〉0.05）。结论胸液游离miR-198可作为肺癌恶性胸腔积液诊断的分子标志物。