miR-19b-3p靶向IGF-1参与绒毛膜癌发生发展的机制研究

目的探究miR-19b-3p靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)参与绒毛膜癌增殖、侵袭和转移的机制。方法以人绒毛膜癌细胞系JEG-3为研究对象,A组:miR-19b-3p mimics组,B组:miR-19b-3p mimics NC组,C组:miR-19b-3p inhibitor组,D组:miR-19b-3p inhibitor NC组,E组:空白对照组。A组、B组、C组、D组按照分组情况进行相应转染,E组不做任何处理。分别用Real-time PCR和Western blot检测五组miR-19b-3p RNA和IGF-1蛋白表达水平,采用CCK-8法测定细胞增殖,采用划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定细胞迁移和侵袭能力,并进行比较;采用双荧光素酶(Dualluciferase)报告实验验证miR-19b-3p对IGF-1的靶向关系。结果与E组的(0.98±0.13)相比,A组miR-19b-3p mRNA表达水平(2.23±0.16)明显上调,C组miR-19b-3p mRNA表达水平(0.73±0.08)明显下调(P<0.05)。与E组的(1.03±0.03)nmol/L相比,A组IGF-1蛋白表达水平(1.48±0.12)nmol/L明显上调,C组IGF-1蛋白表达水平(0.76±0.05)nmol/L明显下调(P<0.05)。72 h时,与E组的(5.03±0.14)%相比,A组细胞增殖活力(10.34±0.87)%明显增加,C组细胞增殖活力(2.42±0.13)%明显下调(P<0.05);与E组的(1.09±0.07)mm相比,A组细胞划痕迁移距离(1.45±0.08)mm明显增加,C组细胞划痕迁移距离(0.73±0.07)mm明显减少(P<0.05)。与E组的(103.00±7.00)个相比,A组侵袭细胞数(173.00±4.00)个明显增加,C组侵袭细胞数(82.00±1.00)个明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示:miR-19b-3p转染WT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.57±0.08)Kat低于miR-NC的(0.95±0.06)Kat(P<0.05);miR-19b-3p转染MUT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.98±0.05)Kat与miR-NC的(0.96±0.06)Kat比较无明显差异(P>0.05)。结论miR-19b-3p靶向上调IGF-1促进绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移。

血浆外泌体miR-19b、miR-126检测鉴别肺结节良恶性的临床研究

目的利用液态活检技术,寻找合适的外泌体miRNA肿瘤生物标志物,用于肺结节良恶性鉴别诊断。方法选取2019年1月—12月安徽省第二人民医院初诊肺癌术后的24对肺癌组织及癌旁组织样本,筛选出差异性表达的miRNA标志物miR-19b和miR-126。选取2020年1月—2022年12月初诊肺恶性结节患者58例为观察组,良性结节患者31例为对照组,检测血浆外泌体miR-19b、miR-126在两组的表达量,以miR-16为内参,分析血浆外泌体miR-19b和miR-126表达量差异在肺结节良恶性鉴别中的应用价值。结果肺癌组织中miR-19b表达水平为(45.91±13.73),与癌旁组织(11.61±3.87)相比显著升高(P<0.05);miR-126表达水平为(0.70±0.22),与癌旁组织(2.56±0.75)相比显著降低(P<0.05)。miR-19b和miR-126在观察组血浆外泌体表达水平分别为(1.83±0.49)和(0.83±0.26),显著高于对照组[(0.93±0.31)和(0.40±0.12)](P<0.05);血浆外泌体miR-19b在观察组和对照组鉴别的曲线下面积[AUC:0.808(95%CI:0.718~0.898,P<0.001)],取cutoff值为0.936,灵敏度为82.8%,特异性为64.5%,高于miR-126的检测。对miR-19b和miR-126相对定量值进行秩和检验,按肿瘤大小和肿瘤浸润性分组,miR-19b表达水平有显著性差异(P<0.05),按肿瘤浸润性分组,miR-126表达水平有显著性差异(P<0.05)。结论血浆外泌体miR-19b、miR-126的表达量值可辅助鉴别肺结节良恶性。

基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的干预效应及机制

目的基于lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制。方法60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型。将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14d。观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O_(2))、亚铁离子(Fe^(2+))含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNAH19、miR-19b3p mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3pmRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05)。结论归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关。

替米沙坦联合羟苯磺酸钙通过miR-19b-3p/SOCS1轴调节自发性高血压主动脉的抗炎作用

目的探讨替米沙坦联合羟苯磺酸钙在自发性高血压中对主动脉的保护作用及作用机制。方法将自发性高血压(SHR)大鼠及其WKY大鼠随机分为(n=6):对照组(WKY)、SHR+NC组(未经处理的SHR大鼠)、SHR+替米沙坦组(替米沙坦治疗的SHR大鼠)、SHR+CAD组(CAD治疗的SHR大鼠)、替米沙坦+CAD组(替米沙坦和CAD联合治疗的SHR大鼠),每组6只。利用苏木精-伊红染色观察治疗前后主动脉血管的变化情况;利用ELISA检测炎症因子的表达水平。利用TargetScan预测miR-19b-3p的下游靶基因,利用双荧光素酶实验验证miR-19b-3p以及下游靶基因之间的结合关系。细胞分组:control组,替米沙坦+NC组,NC+CAD组及替米沙坦+CAD组。随后为了验证替米沙坦与羟苯磺酸钙与miR-19b-3p/SOCS1信号轴的调节关系,利用替米沙坦、羟苯磺酸钙单独处理或者联合对VSMC细胞进行处理。细胞分组:空白组、miR-19b-3p inhibitoror组、miR-19b-3p inhibitor+替米沙坦+NC组、miR-19b-3p inhibitor+NC+CAD组、miR-19b-3p inhibitoror+替米沙坦+CAD组。利用qRT-PCR检测miR-19b-3p和SOCS1的表达水平。从自发性高血压大鼠主动脉中分离血管平滑肌细胞(VSMC),利用CCK-8、Transwell小室实验、qRT-PCR以及Western blot方法验证替米沙坦和羟苯磺酸钙对细胞增殖、迁移表型分型以及炎症因子表达的影响。结果与对照组相比,SHR+NC组大鼠的主动脉管壁厚度明显增厚,管腔内壁降低;经SHR+替米沙坦和SHR+CAD组的SHR大鼠胸主动脉管壁厚度降低,管腔半径增加。ELISA结果显示,与对照组相比,SHR+NC组大鼠血液中IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平显著增加(P<0.05),SHR+替米沙坦、SHR+CAD组、替米沙坦+CAD组的大鼠体内炎症因子的表达水平较SHR+NC组显著降低(P<0.05)。与对照组主动脉中miR-19b-3p的表达水平相比,SHR+NC组显著升高,SHR+替米沙坦和SHR+TAD组显著降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组SOCS1的表达水平相比,SHR+NC组显著降低,SHR+替米沙坦、SHR+CAD组、替米沙坦+CAD组较SHR+NC组显著上调(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与control组相比,替米沙坦+NC组、NC+CAD组和替米沙坦+CAD组VSMC细胞中α-SMA、SM22α的表达水平显著增高,OPN的表达水平显著下降(P<0.05)。transwell小室实验结果显示,与control组VSMC细胞的迁移相比,替米沙坦+NC组、NC+CAD组和替米沙坦+CAD组显著降低(P<0.05)。与空白组相比,miR-19b-3p inhibitor组IL-1β、TNF-α的表达水平显著降低,进一步添加替米沙坦与羟苯磺酸钙处理后能增强这一结果(P<0.05)。结论替米沙坦与羟苯磺酸钙联用可以通过调节miR-19b-3p/SOCS1信号轴改善自发性高血压大鼠主动脉损伤,抑制炎症因子的表达。

LncRNA H19靶向调控miR-19b-3p/SOX9通路对 脂肪间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:分析长链非编码核糖核酸(LncRNA)H19靶向调控miR-19b-3p/性别决定区Y框转录因子9(SOX9)通路对脂肪间充质干细胞(ADMSC)向成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人ADMSC细胞并鉴定,将ADMSC细胞分为对照组(常规培养)、H19组(转染LncRNA H19慢病毒过表达载体)、LncRNA-NC组(转染慢病毒空载体)、miR-19b-3p组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-19b-3p模拟物慢病毒载体)、miR-NC组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-NC慢病毒载体),检测各组LncRNA H19、miR-19b-3p、SOX9及含锌指的成骨细胞特异性转录因子(Osx)、骨钙素(OCN)和RUN相关转录因子2(RUNX2)表达。观察各组ALP染色和茜素红染色情况,比较细胞增殖活力、ALP活性,分析各组SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达,验证LncRNA H19和miR-19b-3p的靶向关系。结果:与对照组、LncRNA-NC组比,H19组LncRNA H19和SOX9、Osx、OCN、RUNX2的mRNA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量增加,miR-19b-3p表达降低(P<0.05),与H19组、miR-NC组比,miR-19b-3p组LncRNA H19和SOX9、Osx、OCN、RUNX2的mRNA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量降低,miR-19b-3p表达增加(P<0.05)。各组细胞24h、48h、72h的吸光度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA H19和miR-19b-3p间存在靶向关系。结论:LncRNA H19能负向调控miR-19b-3p,上调SOX9,有助于人ADMSC细胞向成骨细胞分化。

病毒性心肌炎患者外周血心肌酶谱和miR-26b miR-19b表达变化分析及与预后的关系

目的:探讨病毒性心肌炎患者外周血心肌酶学指标、血清微小RNA-26b(miR-26b)、微小RNA-19b(miR-19b)的变化及与患者预后结局的关系。方法:选取我院2020年11月至2022年8月收治的116例病毒性心肌炎患者作为心肌炎组、另外选取同期健康体检的非心肌炎志愿者60例作为对照组,对比两组的心肌酶学指标、血清miR-26b、miR-19b水平,并根据患者随访6个月的预后结局进行分组,对比两组的各项一般资料及研究指标,采用Logistic回归分析影响病毒性心肌炎患者预后结局的相关指标。结果:心肌炎组患者的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b表达水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);心肌炎组患者的miR-26b相对表达强度低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);根据6个月随访,预后不良患者36例,其中死亡2例、再次出现心力衰竭入院18例、心律失常入院9例、心肌炎复发7例;预后良好组和预后不良组患者的年龄、BMI、性别、胸痛情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);预后不良组的收缩压、舒张压低于预后良好组,预后不良组患者的心率频率、胸闷、心肌、乏力、呼吸频率、房扑/房颤、房室传导阻滞、束支阻滞均高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者的ALT、AST、LDH、cTnI、CK-MB、CK、miR-19b表达水平高于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);预后不良组患者的miR-26b相对表达强度低于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析结果显示:房扑/房颤、房室传导阻滞、束支阻滞、ALT增高、AST增高、LDH增高、cTnI增高、CK-MB增高、CK增高、miR-19b增高、miR-26b降低是心肌炎患者不良预后结局的独立危险因素(P<0.05)。结论:病毒性心肌炎患者外周血心肌酶学指标及miR-19b表达显著增高、miR-26b表达显著降低,并且与患者不良的预后结局具有密切关系。

外泌体包裹的miR-19b抑制EV71复制的影响

[目的]探讨外泌体包裹的miR-19b对EV71病毒复制的影响,为EV71病毒的miRNA防治药物的开发提供参考.[方法]将游离的miR-19b-cy3.5分子和转染miR-19b-cy3.5的HT29细胞分泌的外泌体分别处理T98G细胞,观察进入细胞的效率;分别提取未处理的、转染mimic-n.c.和转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体,并给予T98G细胞孵育后,检测细胞内miR-19b的表达;分别以60 mg/L转染mimic-n.c.的HT29细胞分泌的外泌体、60 mg/L和40 mg/L转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体孵育T98G细胞并感染EV71病毒,检测病毒RNA载量;将携带包裹的miR-19b-cy3.5的HT29细胞来源的外泌体,通过尾静脉注射小鼠检测miR-19b在小鼠各个器官中的表达.[结果]miR-19b-cy3.5能够通过外泌体的形式进入T98G细胞中,而游离的miR-19b-cy3.5无法进入细胞;转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体在处理T98G细胞后,胞内miR-19b高表达,同时,外泌体处理后的T98G细胞中EV71病毒RNA复制量显著降低;动物实验中,外泌体包裹的miR-19b能够在小鼠的脑、肝及肺有效表达.[结论]外泌体包裹的miR-19b能够有效进入靶细胞中,并且可以抑制靶细胞中EV71病毒的复制;同时,外泌体包裹的miR-19b能够有效进入小鼠脑、肝以及肺等组织中并表达.

基于RhoA/ROCK信号通路研究上调miR-19b对MSCs成骨分化的影响

目的基于Ras同源基因家族成员(Rho)A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号通路研究上调miR-19b对骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法选取24只雌性大鼠,随机选取6只为正常组,剩余18只建立骨质疏松模型,分为模型组、空白组和上调组各6只,聚合酶链反应(PCR)检测miR-19b表达量,Western印迹检测成骨细胞特异性转录因子(OSX)、骨黏连蛋白(OSN)、骨桥蛋白(OPN)、RhoA、ROCK蛋白水平。结果上调组miR-19b表达量高于模型组和空白组,OSX、OSN、OPN蛋白水平高于模型组和空白组RhoA、ROCK蛋白水平低于模型组和空白组,均有统计学差异(均P<0.05)。结论上调miR-19b可通过调控RhoA/ROCK通路蛋白促进MSCs成骨分化。

运用Logistic回归联合ROC曲线评估miR-19b-3p对抑郁症疗效的预测价值

目的运用Logistic回归联合ROC曲线评估微小核糖核酸-19b-3p(microRNA-19b-3p,miR-19b-3p)对抑郁症疗效的预测价值。方法选取本院收治的抑郁症患者112例为研究对象(病例组),另选取同期来本院进行体检的健康志愿者60例(作为对照组)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测所有受试者外周血清miR-19b-3p表达水平,并比较治疗前2组血清miR-19b-3p表达水平及病例组治疗前后血清miR-19b-3p表达水平变化。根据治疗效果将病例组分为预后良好组和预后不良组,比较预后良好组与预后不良组血清miR-19b-3p表达水平及其他因素。采用Logistic回归分析法明确影响抑郁症患者预后不良的危险因素,并绘制受试者工作特征(receiver operating characteristical,ROC)曲线分析治疗前后血清miR-19b-3p表达水平对抑郁症患者预后不良的预测价值。结果治疗前,病例组血清miR-19b-3p水平高于对照组(P<0.05),治疗后,病例组血清miR-19b-3p水平为低于治疗前(P<0.05)。预后良好组抑郁症家族史(阳性)、治疗依从性差、家庭社会支持情况差、与邻里关系差、重大生活事件占比,发作次数、治疗前后血清miR-19b-3p水平高于预后良好组(P<0.05)。Logistic回归分析显示治疗依从性差、家庭社会支持情况差、伴有精神病症状、miR-19b-3p(治疗前后)、重大生活事件均是影响抑郁症患者预后不良的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,治疗前血清miR-19b-3p水平预测抑郁症患者预后不良的曲线下面积(area under curve,AUC)、敏感度、特异度、最佳截断点分别为0.739、78.56%、64.28%、11.25。治疗后血清miR-19b-3p水平预测抑郁症患者预后不良的AUC、敏感度、特异度、最佳截断点分别为0.756、80.75%、60.15%、7.14。结论血清miR-19b-3p在抑郁症患者体内呈异常高表达,与抑郁症患者预后不良具有一定的关系,可用于抑郁症患者预后的预测。

miR-19b-1在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌是一种发病率高、死亡率高的恶性消化道肿瘤。早期筛查及早期诊断有助于提高结直肠癌患者的远期预后。微小RNA参与多种恶性肿瘤的发生、发展过程,在结直肠癌中具有特异性表达谱、结构稳定且易于检测的特点,有望成为肿瘤筛查和早期诊断的分子标记物。miR-19b-1靶向多基因、多通路参与结直肠癌的疾病过程,并与结直肠癌的临床病理特征、患者预后密切相关,是结直肠癌潜在的肿瘤标记物。因此,本文就miR-19-1在结直肠癌发生发展中的作用及其临床研究进展进行系统综述。

miR-19a和miR-19b在非小细胞肺癌中的表达

目的通过检测非小细胞肺癌患者癌组织和血清中miR-19a、miR-19b的表达水平,探讨其与临床病理参数的关系和作为肿瘤分子标志物的可能性。方法采用实时荧光定量PCR技术检测正常人和非小细胞肺癌患者血清,以及非小细胞肺癌组织和癌旁组织中miR-19a、miR-19b的表达,分析miR-19a、miR-19b的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系。采用ROC曲线分析miR-19a、miR-19b对非小细胞肺癌的诊断价值。结果 miR-19a、miR-19b在癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05);miR-19a、miR-19b在NSCLC血清中的浓度显著高于对照组。miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1,特异度94.0;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4,特异度94.0。结论非小细胞肺癌患者癌组织和血清miR-19a、miR-19b高表达,miR-19a、miR-19b有望作为NSCLC诊断及预后评价的检测指标。

miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的研究miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其与ALL临床特征和PTEN mRNA表达的相关性。方法采用实时定量PCR的方法检测67例儿童ALL(初诊组38例、完全缓解组20例、难治复发组9例)骨髓单个核细胞(BMMNC)中miR-19b的表达,分析其表达与临床特征及PTEN mRNA表达水平的关系。以15例原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿作为对照组。结果 miR-19b在初诊组和难治复发组的表达量显著高于完全缓解组和对照组(P<0.01)。动态观察6例ALL患儿发现完全缓解后miR-19b表达量较初诊时显著降低(P<0.05)。miR-19b高表达与外周血高WBC计数(≥50×109/L)、危险度分型(中、高危)、脾肿大、BCR-ABL融合基因阳性有相关性(P<0.05),与发病年龄、性别、免疫分型、形态学分型、MLL-AF4融合基因、肝及淋巴结肿大、早期泼尼松反应等因素无相关性(P>0.05)。miR-19b与PTEN mRNA表达量无相关性(r=0.107,P>0.05)。结论 miR-19b可能在儿童ALL发生、发展及不良预后中发挥一定作用,未发现miR-19b表达量同PTEN mRNA的表达量存在相关性。

非小细胞肺癌中miR-19a和miR-19b的表达及临床意义

目的:分析miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:非小细胞肺癌手术标本61例及其癌旁正常组织,提取总RNA,采用实时定量PCR方法检测miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌及其癌旁正常组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果:miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌组织中的表达高于对应的癌旁正常肺组织,其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移相关(P<0.05)。而在不同年龄、性别和吸烟史患者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-19a、miR-19b高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型及有无淋巴结转移密切相关,miR-19a、miR-19b有可能成为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。

芒柄花素调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路影响卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的研究芒柄花素对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-19b-3p/转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)/Smad2信号通路相关。方法采用噻唑蓝法、transwell实验、流式细胞术分析不同浓度(35、70、140μmol·L^(-1))的芒柄花素对卵巢癌细胞SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。实时定量PCR分析miR-19b-3p表达。采用上述方法检测过表达或抑制miR-19b-3p对SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。免疫印迹法检测TGF-β和Smad2蛋白表达量。结果35、70、140μmol·L^(-1)的芒柄花素处理显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调miR-19b-3p表达。过表达miR-19b-3p显著增加SKOV3细胞活力、迁移和侵袭数量,降低细胞凋亡率,上调TGF-β和Smad2蛋白表达量。抑制miR-19b-3p表达显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调TGF-β和Smad2蛋白表达量。140μmol·L^(-1)的芒柄花素显著抑制TGF-β和Smad2蛋白表达量。过表达miR-19b-3p可显著减弱芒柄花素处理对SKOV3细胞增殖、迁移侵袭、凋亡以及TGF-β和Smad2蛋白表达的影响。结论芒柄花素可抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用可能与调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路有关。

外周血miR-19a和miR-19b的检测在胃癌诊断中的临床意义

目的:探讨血清miR-19a和miR-19b诊断胃癌的价值及其与临床病理特征的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)技术检测61例正常人和61例胃癌患者血清中miR-19a和miR-19b的表达量,分析其表达与胃癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断胃癌的价值。结果:胃癌患者血清miR-19a和miR-19b相对表达水平均高于正常对照组(P<0.05),其表达水平与临床分期及淋巴结有无转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄及吸烟史无相关性(P>0.05);miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1%,特异度94.0%;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4%,特异度94.0%。结论:血清中miR-19a和miR-19b可作为一种非损伤性诊断方法,辅助胃癌诊断。

miR-19b转基因小鼠的构建及表型分析

目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析。方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZRPCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重组酶连接到带有alpha-MHC启动子的载体上。将所得载体线性化后,采用显微注射方法注射到小鼠胚胎干细胞内。再将所得的重组胚胎干细胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宫内,在所得的子代,即Founder小鼠中采用特异的引物鉴定出转基因小鼠,并选出相应的品系,进行表型分析。结果:成功构建miR-19b转基因小鼠,且miR-19b转基因小鼠舒张期室间隔厚度、舒张期左室游离壁厚度以及射血分数均有升高。结论:心肌特异性过表达miR-19b可以导致心脏肥大。

上皮性卵巢癌患者血小板中miR-19b表达的临床意义

目的探讨miR-19b在上皮性卵巢癌患者血小板中的表达及其潜在临床意义。方法收集2018年6月至2019年10月广东省第二人民医院住院治疗的上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)患者40例,依据国际妇产科联盟(FIGO)卵巢癌手术病理分期分为FIGOⅠ-Ⅱ期组、FIGOⅢ-Ⅳ期组。血栓弹力图检测血小板聚集功能,流式细胞术检测血小板CD62P(P-selectin)的表达,实时荧光定量PCR法检测血小板miR-19b的表达。结果与FIGOⅠ-Ⅱ期组相比,FIGOⅢ-Ⅳ期的血小板计数、MA值、CI值、血小板CD62P阳性率和血小板miR-19b表达水平等明显升高(P≤0.001),R值、K值降低(P <0.05),Angle值无明显变化(P=0.332)。相关性分析显示:血小板miR-19b表达水平分别与MA、CI、血小板计数、血小板CD62P阳性率、CA125、DVT事件呈正相关(P≤0.001),与K值呈弱负相关(r=-0.336,P=0.034),与R、Angle值无明显相关(P> 0.05)。结论晚期上皮性卵巢癌患者血小板数量增多、聚集和活性功能增强,血小板miR-19b表达上调,提示miR-19b可能参与调控了血小板的促EOC转移作用。

miR-19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法根据前期miRNA芯片结果提示丹皮酚处理后人肝癌HepG2细胞的miR-19b表达增加,采用qRT-PCR验证丹皮酚处理HepG2细胞的miR-19b表达改变;将hsa-miR-19b mimics瞬时转染HepG2细胞,采用qRT-PCR验证转染效率,MTT比色法检测转染后细胞体外增殖抑制率,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 qRT-PCR验证62.5 mg/L丹皮酚处理人肝癌HepG2细胞24 h后miR-19b差异表达明显。过表达miR-19b可以抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡。结论丹皮酚作用可以引起肝癌细胞miR-19b表达出现差异性表现。过表达miR-19b可能是丹皮酚抑制HepG2细胞增殖和促进凋亡作用的部分机制。

血清中miR-19a和miR-19b定量检测非侵入性诊断非小细胞肺癌的意义

目的探讨miR-19a、miR-19b诊断非小细胞肺癌的价值及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测50例正常人和61例非小细胞肺癌患者血清中miR-19a、miR-19b的表达量,分析miR-19a、miR-19b的表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断非小细胞肺癌的价值。结果非小细胞肺癌患者miR-19a、miR-19b相对表达水平高于正常对照组(P<0.05),其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移显著相关(P<0.05),而与性别、年龄及吸烟史无相关性(P>0.05);miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1%,特异度94.0%;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4%,特异度94.0%。结论血清中miR-19a、miR-19b测定的诊断性能较高,作为非小细胞肺癌的一种非损伤性诊断方法具有良好的应用前景。

miR-19b通过抑制STAT3的转录活性抑制不稳定斑块形成

目的探讨miR-19b对不稳定斑块的影响及潜在机制。方法回顾性选取2015年3月至2016年3月新疆医科大学第五附属医院收治的80例不稳定型心绞痛(UA)患者为UA组,同期收集80例健康体检者为对照组。检测和比较两组研究对象血miR-19b的表达。将miR-19b模拟物或抑制物转染到人脐静脉细胞融合细胞EA. hy926;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、微管形成实验检测过表达miR-19b对细胞增殖、迁移、血管新生的影响;蛋白印迹检测过表达miR-19b对信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响。结果 UA组miR-19b水平(1. 24±0. 36)△△CT显著高于对照组(0. 50±0. 12)△△CT(P <0. 05);过表达miR-19b后,EA. hy926细胞抑制率升高,愈合率、微管形成均显著下降(P <0. 05);蛋白印迹表明过表达miR-19b抑制STAT3的活性。结论过表达miR-19b可影响STAT3的转录活性,抑制内皮细胞增殖、迁移和血管新生,进而延缓不稳定型心绞痛患者不稳定斑块进展。