miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期患者中的表达水平及与病情的相关性

目的分析miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期(PE)患者血清中的表达,并探讨其临床意义。方法选取2019年3月至2021年3月在南京市妇幼保健院治疗的PE患者103例,分为轻度PE组(57例)和重度PE组(46例),另选取同期正常孕妇50例作为对照组。检测各组孕妇血清miR-21、miR-26a及miR-200a表达水平,分析其与年龄、孕周、BMI、血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局的相关性,并分析血清miR-21、miR-26a及miR-200a对PE的诊断价值。结果重度PE组BMI、舒张压、收缩压以及24h尿蛋白高于轻度PE组及对照组,且差异具有统计学意义(F值分别为4.116、141.063、143.118和342.736,P<0.05)。对照组、轻度PE组及重度PE组孕妇血清中miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平依次升高。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平与血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局发生率呈正相关(r值介于0.446~0.832之间,P<0.001)。经受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析发现,血清miR-21、miR-26a及miR-200a联合诊断PE的曲线下面积(AUC)为0.967,敏感度为98.10%,特异性为92.30%。结论PE患者血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达高于正常孕妇,且与患者的临床指标及不良妊娠结局相关,检测血清miR-21、miR-26a、miR-200a水平对早期诊断PE及评估患者预后具有十分重要的意义。

miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

MiR-200家族与子宫内膜异位症相关性的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种具有恶性肿瘤特征的良性疾病,严重影响患者的生活质量,增加患者的医疗、经济负担。目前子宫内膜异位症的发病机制不明,临床治疗效果欠佳。近年来发现,miR-200家族在多种疾病的发病中发挥着重要的作用。有研究表明,miR-200家族在EMs中存在差异表达并稳定存在,认为其在EMs发病过程中起重要作用,但作用机制尚不明确。本文就有关miR-200家族与EMs相关性的研究进行综述,为进一步研究及临床治疗EMs提供新思路。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

血清miR-200c表达水平与复发性卵巢癌的相关性及临床意义

目的分析血清miR-200c表达水平与上皮性卵巢癌(EOC)患者治疗后复发的关系。方法选取2019年6月至2020年6月昆明医科大学第三附属医院收治的160例EOC患者作为研究对象,随访2年,有104例复发。调查患者的基线资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测患者血清miR-200c的表达水平,采用单因素分析患者治疗后复发与血清miR-200c的表达水平和基线资料的相关性,多因素Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c预测EOC患者治疗后复发的效能。结果单因素分析显示,雌激素受体、孕激素受体、淋巴结转移、血清糖类抗原125(CA125)和人附睾蛋白4(HE4)的水平与EOC患者治疗后复发呈正相关,血清miR-200c水平与EOC患者治疗后复发呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,血清CA125高表达(OR>1,P<0.05)、miR-200c低表达(OR<1,P<0.05)是EOC患者术后复发的独立危险因素;ROC曲线结果显示,血清CA125、miR-200c水平单独及联合预测EOC患者治疗后复发的曲线下面积分别为0.915、0.954、0.993,血清miR-200c的预测效能优于CA125,联合预测效能优于单项指标。结论miR-200c是提示EOC细胞侵袭性的分子标志物,血清miR-200c表达水平的降低会增加EOC患者治疗后复发的风险,可作为潜在的癌症复发预测指标和治疗靶点。

结核性脑膜炎患者脑脊液中miR-200a,miR-4652-3p水平表达对疾病严重程度和预后预测价值研究

目的分析结核性脑膜炎(tuberculous meningItis,TBM)患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p表达及其对疾病严重程度和预后的预测价值。方法选择2018年1月~2022年12月于青岛市胸科医院就诊的187例结核性脑膜炎患者,按照病情程度分为Ⅰ期(n=62)、Ⅱ期(n=76)和Ⅲ期(n=49),根据预后情况分为预后良好组(n=131)和预后不良组(n=56)。qRT-PCR法检测脑脊液miR-200a和miR-4652-3水平表达。Spearman法分析miR-200a和miR-4652-3p与临床资料间相关性;ROC曲线分析脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平对结核性脑膜炎患者疾病严重程度及预后的预测价值。多因素Logistic回归分析预后不良影响因素。结果Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a(1.05±0.14,0.91±0.14,0.76±0.13)和miR-4652-3p(0.92±0.11,0.78±0.11,0.65±0.10)表达水平依次降低,差异具有统计学意义(F=61.079,87.203,均P<0.001)。预后良好组患者脑脊液miR-200a(0.95±0.14)和miR-4652-3p(0.82±0.11)表达水平显著高于预后不良组患者(0.84±0.13,0.73±0.10),差异具有统计学意义(t=5.025,5.262,均P<0.05);预后良好患者脑脊液腺苷脱氨酶和TNF-α,IL-23,LTB4,CRP,mRS评分显著低于预后不良患者,差异具有统计学意义(t=5.649,7.721,11.150,9.455,11.314,14.407,均P<0.05)。结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平呈正相关(r=0.405,P<0.001);miR-200a,miR-4652-3p与LTB4,TNF-α,CRP,mRS评分,IL-23,腺苷脱氨酶呈负相关(r=-0.472,-0.466,-0.461,-0.435,-0.422,-0.419;-0.459,-0.531,-0.471,-0.417,-0.513,-0.408,均P<0.05)。miR-200a,miR-4652-3p预测患者疾病严重程度的AUC(95%CI)分别为0.881(0.825~0.923)和0.878(0.822~0.921),二者联合预测的AUC(95%CI)为0.945(0.902~0.973),高于单项检测,差异具有统计学意义(Z=3.008,2.960,all P=0.003)。脑脊液miR-200a和miR-4652-3p水平评估患者预后不良的AUC(95%CI)为0.749(0.681~0.809)和0.756(0.688~0.816),二者联合评估患者预后不良的AUC(95%CI))为0.839(0.778~0.889),高于二者单独检测,差异有统计学意义(Z=2.994,2.697,P=0.003,0.007)。腺苷脱氨酶[OR(95%CI):1.106(1.033~1.185)]、miR-200a[OR(95%CI):0.529(0.369~0.744)]、miR-4652-3p[OR(95%CI):0.471(0.310~0.715)]、CRP[OR(95%CI):4.423(1.459~13.412)]、TNF-α[OR(95%CI):1.196(1.061~1.348)]、IL-23[OR(95%CI):4.809(1.086~3.013)]和LTB4[OR(95%CI):1.327(1.064~1.655)]为结核性脑膜炎患者预后不良的影响因素(均P<0.05)。结论结核性脑膜炎患者脑脊液miR-200a和miR-4652-3p表达下调,与疾病严重程度及预后密切相关,二者联合能较好地预测结核性脑膜炎严重程度及预后,具有一定临床价值。

miR-200c靶向ZEB1调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-200c对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法利用RT-qPCR检测52例宫颈癌组织及癌旁组织中miR-200c的表达水平,使用miR-200c模拟物或抑制物转染宫颈癌细胞系,RT-qPCR验证转染效率后,使用CCK8检测转染细胞的增殖水平,流式细胞术检测转染细胞的凋亡水平;生物信息学预测miR-200c的靶基因,荧光素酶报告基因验证其靶向关系;RT-qPCR检测癌组织中靶基因的表达水平,Pearson相关性分析miR-200c和靶基因的表达关系;RT-qPCR和蛋白质印迹检测转染靶基因siRNA或质粒细胞的增殖和凋亡水平。结果宫颈癌组织中miR-200c的表达显著低于癌旁组织,转染miR-200c模拟物的HT3细胞增殖水平显著降低,凋亡水平显著增加,而转染miR-200c抑制物的HeLa细胞增殖水平显著增加,凋亡水平显著降低;荧光素酶报告基因实验证实ZEB1是miR-200c的指标靶标,miR-200c模拟物显著降低ZEB1表达,而抑制物则发挥相反效应;宫颈癌组织中ZEB1的表达显著高于癌旁组织,且其表达与miR-200c呈显著负相关关系;敲低ZEB1显著抑制HT3的增殖水平,促进其凋亡,而过表达ZEB1则发挥相反效应。结论miR-200c通过靶向抑制ZEB1表达调控宫颈癌细胞的增殖与凋亡,从而参与宫颈癌的发生发展。

妊娠期糖尿病视网膜病变患者血清miR-200c-3p、 miR-20b-5p表达水平及检测临床意义

目的:探讨妊娠期糖尿病视网膜病变(DR)患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平变化及检测临床意义。方法:选择妊娠期糖尿病孕妇80例(GDM组)和DR孕妇75例(DR组),正常妊娠期女性95例(对照组)。采用qRT-PCR法对受试者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平进行测定,采用全自动生化分析仪对受试者低密度脂胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)进行测定,采用血糖检测仪对受试者空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)进行测定。结果:GDM组、DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于对照组(均P<0.05);DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于GDM组(均P<0.05);随着病情严重程度的增加,DR组患者miR-200c-3p、miR-20b-5p水平显著升高(均P<0.05);预后不良组DR患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于预后良好组(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高为DR患者发生预后不良的危险因素;ROC曲线结果显示,血清miR-200c-3p、miR-20b-5p、两者联合诊断DR患者不良预后曲线下面积(AUC)为0.927(95%CI:0.843~0.974)、0.848(95%CI:0.746~0.920)、0.985(95%CI:0.924~0.999)。结论:DR患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高,对DR不良预后具有一定的预测价值。

miR-200a通过靶向NALP3抑制肺癌细胞的增殖的研究

目的 探讨微RNA-200a(miR-200a)对肺癌细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制。方法 应用RTqPCR检测肺癌细胞系(H1975、A549、H1299、HCC827)中miR-200a的表达水平。应用CCK-8实验检测miR-200a对肺癌细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测miR-200a对肺癌细胞凋亡的影响。生物信息学预测miR-200a可能的靶基因,双荧光素酶报告实验验证miR-200a对NALP3的调控作用。Western Blot实验检测miR-200a调控NALP3及AMPK通路蛋白表达。结果 miR-200a在肺癌细胞系中表达明显降低,差异有统计学意义(P <0.05)。沉默miR-200a表达后可明显促进肺癌细胞的增殖能力,差异有统计学意义(P <0.05)。双荧光素酶报告实验证实miR-200a可直接靶向NALP3的3’-UTR区域并负性调控其表达水平。Western Blot实验证实沉默miR-200a表达后可显著增强NALP3、AMPKα、SIRT1、p-mTOR的蛋白表达水平,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 miR-200a通过直接靶向NALP3抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡,发挥抑癌基因的作用。

miR-200a对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、成血管分化的作用机制

目的探讨miR-200a对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSC)增殖、凋亡、成血管分化的作用机制。方法将hBMSC分为3组,对照组;阴性对照组(NC组),NC组转染NC质粒;试验组,试验组转染MIR-200a inhibitor质粒,MTT法检测各组细胞24、48h和72h细胞活力,流式细胞法检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)和Caspase3表达水平,通过miRDB软件对miR-200a的靶向基因进行预测,双荧光素报告实验验证靶基因,Western blot实验检测靶基因转化生长因子β_(2)(TGF-β_(2))及成血管分化关键分子血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素-1(Ang-1)的表达水平。结果与对照和NC组相比,试验组细胞增殖受到显著抑制,并且随着时间增加抑制能力增强(r=0.63);细胞凋亡显著增加,凋亡相关蛋白Bcl-2表达显著降低,Caspase3表达显著增加,结果均具有显著的统计学意义(P<0.01)。miRDB预测结果表明,TGF-β_(2)为miR-200a靶基因,荧光报告基因实验验证了其靶向性。Western blot结果表明,相比与对照组和NC组,试验组细胞TGF-β_(2)、VEGF、Ang-1表达水平均显著降低(P<0.01)。结论下调miR-200a可以抑制hBMSC活性,诱导细胞凋亡,抑制成血管分化作用,其机制可能通过靶向调控成血管分化关键因子VEGF和Ang1相关。

miR-200b、miR-200c靶向肝细胞生长因子抑制结直肠癌细胞

目的研究miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖的机制。方法采用生物信息学软件预测和验证miR-200b、miR-200c靶基因,分析miR-200b、miR-200c过表达抑制HGF表达,并分析miR-200b、miR-200c在体外影响结直肠癌细胞增殖活性的情况。结果培养1d、2d、3d,阴性对照模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b模拟物、miR-200c模拟物、miR-200b/c模拟物(P<0.05),阴性对照抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂、miR-200b/c抑制剂(P<0.05),miR-200b模拟物、miR-200c模拟物的结直肠癌细胞增殖活性均高于miR-200b/c模拟物(P<0.05),miR-200b抑制剂、miR-200c抑制剂的结直肠癌细胞增殖活性均低于miR-200b/c抑制剂(P<0.05)。结论miR-200b、miR-200c对肝细胞生长因子进行靶向调节抑制结直肠癌细胞增殖,可以作为潜在治疗靶点。

上皮性卵巢癌患者血清miR-200a、miR-200b水平变化及意义

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清miR-200a和miR-200b水平变化及意义。方法 选取EOC患者80例(EOC组)、卵巢良性病变患者80例(良性对照组)、体检健康女性80例(正常对照组),采集受试者血清,采用qRT-PCR法检测miR-200a、miR-200b。比较三组血清miR-200a、miR-200b水平,分析EOC患者血清miR-200a、miR-200b水平与临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价二者对EOC的诊断价值。对EOC患者行手术联合化疗方案进行治疗,术后随访2年,记录患者复发情况,根据miR-200a、miR-200b中位数将患者分为低水平和高水平,比较二者的复发时间。结果 EOC组血清miR-200a和miR-200b水平较良性对照组和正常对照组升高(P均<0.01)。EOC晚期、合并淋巴结转移、腹水或腹腔灌洗液检出恶细胞患者的血清miR-200a、miR-200b水平分别高于晚期、未合并淋巴结转移、腹水或腹腔灌洗液检出恶细胞患者(P均<0.05)。ROC分析显示,血清miR-200a(AUC=0.890)和miR-200b(AUC=0.912)有助于EOC的诊断。在EOC患者中,血清miR-200a(Log-Rank=4.061,P=0.044)和miR-200b(Log-Rank=5.012,P=0.025)高水平者的复发时间均短于低水平者。结论 EOC患者血清miR-200a和miR-200b水平升高,监测血清miR-200a和miR-200b水平有助于EOC的诊断和预后评估。

绵羊miR-200b启动子鉴定及其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响

旨在鉴定绵羊miR-200b的启动子区并研究其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响。本研究体外分离培养绵羊卵泡颗粒细胞,通过构建包含3个不同长度启动子区重组质粒,利用生物信息软件和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-200b核心启动子区;利用在线工具预测转录因子NR4A1的结合位点;通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR检测过表达NR 4A1基因对miR-200b启动子活性和表达水平的影响;通过转染miR-200b mimic和mimic NC,分别检测颗粒细胞线粒体形态和数量、线粒体膜电位、ROS水平、ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ的浓度,并检测线粒体氧化磷酸化相关基因表达水平。结果表明,miR-200b-P1(-159/+36 nt)活性最高,确定该区域为miR-200b核心启动子区;预测出核心启动子存在1个NR4A1的结合位点,且过表达NR 4A1基因显著上调miR-200b启动子活性和miR-200b的表达水平(P<0.01)。与mimic NC组相比,转染miR-200b mimic导致颗粒细胞平均光密度显著降低(P<0.01),细胞长度显著缩短(P<0.01)、线粒体膜电位下降(P<0.05)、ATP(P<0.05)和线粒体呼吸链体复合物Ⅰ(P<0.01)的浓度降低、ROS水平升高(P<0.01),同时下调ATP 6V1G1和NDUFV 1的表达(P<0.01),上调NOX 4的表达水平(P<0.01)。该研究确定了绵羊miR-200b的核心启动子区(-159/+36 nt),NR4A1正向调控miR-200b的转录,且miR-200b能够影响线粒体氧化磷酸化过程,诱导颗粒细胞线粒体损伤。该研究结果为进一步揭示miR-200b调控绵羊卵泡发育的机制提供了理论依据。

鼻咽癌组织中miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin的表达及调控作用

目的:观察鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中miR-200c、潜伏期膜蛋白1(LMP1)、E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-binding protein 2,ZEB2)和E-cadherin的表达变化,并探讨其调控作用。方法:选取2021-05~2022-06于广州市花都区人民医院住院的NPC患者62例和鼻咽炎患者41例为研究对象。分别采用RT-PCR法检测两组患者组织中的miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达和免疫印迹的方法检测两组组织中LMP1、ZEB2和E-cadherin蛋白表达,并对miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达进行Pearson线性相关分析。结果:NPC组织中miR-200c的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05),LMP1和ZEB2 mRNA和蛋白的表达水平均高于鼻咽炎组(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05);NPC组织中LMP1 mRNA与miR-200c的表达呈负相关(r=-0.853,P<0.05),miR-200c与ZEB2 mRNA的表达呈负相关(r=-0.842,P<0.05),ZEB2 mRNA与E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.590,P<0.05)。结论:NPC组织中LMP1和ZEB2表达升高,而miR-200c和E-cadherin表达水平降低,有望成为NPC诊疗新靶点;LMP1可能通过诱导下调miR-200c的表达,使得ZEB2转录因子表达上调,最终抑制E-cadherin的表达,从而促进NPC的侵袭和转移。

miR-200b和上皮-间质转化在卵巢子宫内膜异位症中的研究

目的探讨卵巢子宫内膜异位症(EMs)是否发生了上皮-间质转化(EMT)现象,以及miR-200b在EMs中的表达情况及在EMs发生发展中的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测EMs患者异位子宫内膜(ECs)和在位子宫内膜(EUs)以及正常子宫内膜(ENs)中miR-200b的表达水平。采用Western blot法检测所有标本中Snail蛋白的表达水平。采用非参数Student t检验或方差分析(ANOVA)进行统计分析,然后进行两两多重比较。结果在不同内膜组织中,miR-200b有不同程度的表达。与ENs组织相比,ECs和EUs组织中的miR-200b表达水平明显降低。并且ECs中miR-200b表达水平较EUs组织下调。相反,与ENs组织相比,ECs和EUs组织中Snail表达量明显升高,且ECs组织中的Snail表达水平明显高于EUs组织。Pearson相关系数检验显示,miR-200b和Snail呈显著的负相关。结论在卵巢EMs中,miR-200b表达水平降低,下调的miR-200b可能通过降低对EMT转录因子Snail的抑制作用从而促进Snail的表达,从而促使EUs组织发生了EMT,增加了EMs的发病风险。

生松素调控miR-200c基因影响白血病细胞HL-60增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的 探讨生松素对白血病细胞HL-60增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 HL-60细胞分为NC组、不同浓度生松素(100、200、400、800μmol/L)组、anti-miR-NC组、anti-miR-200c组、miR-NC组、miR-200c组、800μmol/L生松素+anti-miR-NC组,800μmol/L生松素+anti-miR-200c组;细胞HS-5用0、800μmol/L处理。细胞计数试剂盒(CCK)-8检测HL-60细胞活性;流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡情况;Transwell检测HL-60细胞的迁移和侵袭数量;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-200c表达水平。结果 不同浓度生松素处理后HL-60细胞的活性及迁移、侵袭数量降低,细胞的凋亡率升高,miR-200c表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-200c后,HL-60细胞的活性及迁移、侵袭数量降低,细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-200c表达逆转了生松素对白血病细胞HL-60增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用(P<0.05)。结论 生松素通过上调miR-200c抑制白血病细胞HL-60增殖、迁移和侵袭,且促进细胞凋亡。

牦牛VEGFA双荧光素酶载体构建及与miR-200b的靶向验证

为探究微小RNA(miR-200b)与血管内皮生长因子A(VEGFA)基因之间的靶向关系,采用miRanda和Targetscan软件预测牦牛miR-200b与VEGFA可能存在结合位点,构建了VEGFA基因3′UTR区的野生型和突变型双荧光素酶载体。利用与目的miRNA靶种子序列相结合基因的突变序列,构建该靶基因的突变型重组质粒(pGL3-promoter-mut VEGFA),再进行重组质粒和目的miRNA的miRNA mimic的共转染实验。结果表明,预测到的miR-200b与VEGFA基因的3′UTR区存在结合位点。PCR进行扩增和测序之后,VEGFA基因3′UTR区的野生型、突变型载体构建成功。共转染VEGFA野生型载体和miR-200b mimic的双荧光素酶活性极显著低于对照组(P<0.05),VEGFA突变型载体和miR-200b mimic共转染的双荧光素酶活性与对照组无显著差异(P>0.05)。说明VEGFA基因的3′UTR区能与miR-200b结合并抑制双荧光素酶活性,验证了VEGFA是miR-200b的靶基因。

MIF激活lncRNA-ZEB1-AS1/miR-200b信号通路促进结肠癌增殖和转移作用研究

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在结肠癌中发挥的作用及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR检测MIF在结肠癌组织和癌旁组织中的表达及其对结肠癌患者预后的影响;qRT-PCR和免疫荧光检测MIF在结肠癌细胞HCT116和正常肠上皮细胞HIEC-6中的表达;si-RNA沉默MIF在HCT116细胞中的表达,CCK-8、Transwell和细胞划痕实验观察HCT116细胞增殖和迁移能力的变化,同时检测长链非编码RNA锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1(lncRNA-ZEB1-AS1)表达;starBase数据库预测分析lncRNA-ZEB1-AS1和miR-200b间的关系,双荧光素酶进行验证;分别过表达lncRNA-ZEB1-AS1和沉默miR-200b后检测HCT116增殖能力变化。结果:MIF在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织;MIF在HCT116细胞中表达显著高于HIEC-6细胞。靶向沉默MIF表达后,HCT116细胞增殖和转移能力降低,且lncRNA-ZEB1-AS1表达随着MIF沉默显著降低;starBase数据库预测及双荧光素酶标记实验结果表明lncRNA-ZEB1-AS1抑制miR-200b表达,且过表达lncRNAZEB1-AS1和沉默miR-200b均可逆转沉默MIF导致的细胞增殖能力下降。结论:MIF可能通过激活ZEB1-AS1/miR-200b信号通路促进结肠癌细胞的增殖和转移。

循环血液外泌体miR145、miR-200与非小细胞肺癌患者放化疗后复发、转移的关系

目的 探讨循环血液外泌体微小RNA-145(miR145)、微小RNA-200(miR-200)与非小细胞肺癌患者放化疗后复发、转移的关系。方法 回顾性选取72例非小细胞肺癌患者作为实验组,并选取同期72例健康体检者作为对照组。实验组患者均接受放化疗治疗,出院后展开为期1年的随访,对比2组患者循环血液外泌体miR145、miR-200表达量,分析实验组患者不同病理特征miR145、miR-200表达量;以KM曲线法绘制复发转移曲线分析miR145、miR-200表达量对患者放化疗后复发、转移的影响。结果 与对照组相比,实验组miR145水平显著更低,miR-200显著更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。实验组循环血液外泌体miR145和miR-200表达量在不同TNM分期和淋巴结转移情况方面差异比较具有统计学意义(P<0.05);高miR145组(n=42)与低miR145组(n=30)2年内复发转移率分别为28.57%(12/42)和73.33%(22/30),两者差异具有统计学意义(P<0.05);高miR-200组(n=27)与低miR-200组(n=45)2年内复发转移率分别为70.37%(19/27)和33.33%(15/45),两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 循环血液外泌体miR145、miR-200在非小细胞肺癌患者中出现明显变化,其表达水平与放化疗后复发、转移存在明显的关系。

上调miR-200c-5p的表达抑制人结直肠癌细胞系SW480增殖

目的探讨miR-200c-5p对人结直肠癌细胞系SW480恶性增殖的影响。方法将miR-200c-5p模拟物/抑制剂及阴性对照分别瞬时转染人结直肠癌细胞系SW480。通过qPCR检测miR-200c-5p的表达,利用CCK-8法和平板克隆形成试验检测miR-200c-5p对结直肠癌细胞增殖活力和克隆形成能力的影响。使用生物信息学方法分析miR-200c-5p在结直肠癌中的差异靶基因和相关通路。结果瞬时转染miR-200c-5p模拟物/抑制剂成功高/低表达miR-200c-5p(P<0.05);高表达miR-200c-5p细胞增殖活力降低,低表达则相反(P<0.05);高表达miR-200c-5p的细胞克隆形成率低于对照组细胞,低表达则相反(P<0.05);miR-200c-5p的靶基因CXCL10在结直肠癌细胞中显著上调,C2orf72、ZC3H12C和DST显著下调,miR-200c-5p显著相关的KEGG通路为“melanoma”、“microRNAs in cancer”和“bladder cancer”。结论miR-200c-5p抑制人结直肠癌细胞系SW480的增殖及克隆形成,与结直肠癌的发生、发展相关。