miR-200c/ZEB1/E-cadherin轴在胆管癌转移侵袭中的作用及对胆管癌预后评估的价值

目的:探讨微小RNA-200c(miR-200c)/锌指转录因子(ZEB1)/E-钙黏蛋白(E-cadherin)在胆管癌(HCCA)转移、侵袭中的作用及对HCCA预后评估的临床价值。方法:选取2020年08月至2022年12月间我院收治的胆管癌患者36例为研究对象,同时选取胆管良性疾病患者(胆总管结石或胆管良性狭窄)20例作为对照。采用原位杂交、实时荧光定量PCR检测miR-200c在HCCA患者组织及血清中的表达;生存曲线分析miR-200c表达与总生存期的相关性;Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力;免疫印迹检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达。体内研究构建裸鼠成瘤实验,采用免疫组化检测ZEB1及E-cadherin蛋白的表达;Tunel技术检测组织中的凋亡情况。受试者工作特征(ROC)曲线评估生物标志物对胆管癌预后的诊断效能。结果:miR-200c低表达于HCCA组织及血清中;生存曲线分析显示,miR-200c表达与患者的总生存期呈正相关性,TNM分期与患者的总生存期呈负相关性;miR-200c mimics抑制了胆管癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低ZEB1表达而诱导E-cadherin表达;转染ZEB1逆转miR-200c的作用效应,促进胆管癌细胞的迁移和侵袭特性,抑制胆管癌细胞的凋亡。CA199、CEA和miR-200c联合检测诊断胆管癌预后的ROC曲线下面积为0.892,灵敏度0.8611,特异度0.8000。结论:miR-200c/ZEB1/Ecadherin轴参与胆管癌的转移侵袭;CA199、CEA和miR-200c联合检测对胆管癌预后的诊断效能良好,对临床胆管癌的治疗策略具有重要指导价值。

miR-200c靶向ZEB1调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-200c对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法利用RT-qPCR检测52例宫颈癌组织及癌旁组织中miR-200c的表达水平,使用miR-200c模拟物或抑制物转染宫颈癌细胞系,RT-qPCR验证转染效率后,使用CCK8检测转染细胞的增殖水平,流式细胞术检测转染细胞的凋亡水平;生物信息学预测miR-200c的靶基因,荧光素酶报告基因验证其靶向关系;RT-qPCR检测癌组织中靶基因的表达水平,Pearson相关性分析miR-200c和靶基因的表达关系;RT-qPCR和蛋白质印迹检测转染靶基因siRNA或质粒细胞的增殖和凋亡水平。结果宫颈癌组织中miR-200c的表达显著低于癌旁组织,转染miR-200c模拟物的HT3细胞增殖水平显著降低,凋亡水平显著增加,而转染miR-200c抑制物的HeLa细胞增殖水平显著增加,凋亡水平显著降低;荧光素酶报告基因实验证实ZEB1是miR-200c的指标靶标,miR-200c模拟物显著降低ZEB1表达,而抑制物则发挥相反效应;宫颈癌组织中ZEB1的表达显著高于癌旁组织,且其表达与miR-200c呈显著负相关关系;敲低ZEB1显著抑制HT3的增殖水平,促进其凋亡,而过表达ZEB1则发挥相反效应。结论miR-200c通过靶向抑制ZEB1表达调控宫颈癌细胞的增殖与凋亡,从而参与宫颈癌的发生发展。

基于PD-1/PD-L1及miR-200c/ZEB通路研究健脾消癌方治疗结肠癌肝转移的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌肝转移荷瘤裸鼠肝组织中程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)及微小RNA200c(miRNA-200c)/转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响。方法:在50只裸鼠中随机抽取10只作为假移植组,另取40只建立结肠癌肝转移模型。造模成功后再将其分为4组:模型组,健脾消癌方低、中、高剂量组(简称为低、中、高剂量组),每组各10只。假移植组和模型组灌胃等量0.9%氯化钠注射液,低、中、高剂量组灌胃健脾消癌方(5.4、10.8、21.6 g/kg),每天1次,连续3周。观察各组裸鼠肝转移瘤的情况,检测PD-1、PD-L1、miRNA-200c、ZEB1 mRNA的表达及PD-1、PD-L1、ZEB1蛋白的表达情况。结果:除假移植组外,其余各组均可在裸鼠的肝脏表面发现肝转移结节。各组肝转移结节数量、质量高剂量组与低、中剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肝脏组织病理学结果显示,与模型组比较,低、中、高剂量组癌细胞增长速度较慢。与假移植组比较,模型组miRNA-200c表达降低,PD-1、PD-L1、ZEB1 mRNA表达及PD-1、PD-L1、ZEB1蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,高剂量组miRNA-200c表达升高、PD-1蛋白表达降低(P<0.01),各剂量组PD-1、PD-L1、ZEB1mRNA表达及PD-L1蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01),中、高剂量组ZEB1蛋白表达降低(P<0.01)。结论:健脾消癌方可有效抑制结肠癌肝转移,其扶正消癌的作用机制可能与升高miRNA-200c表达、降低PD-1、PD-L1、ZEB1蛋白表达相关。

miR-200c PAPP-A水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值

目的:探究血清miR-200c、妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)水平与经阴道超声鉴别诊断先兆流产和异位妊娠的价值。方法:本研究开展时间为2020年1月至2022年1月,研究对象为此时间段内在我院就诊的正常早孕孕妇、异位妊娠及先兆流产孕妇各43例,患者均接受阴道超声检查,记录各项超声参数,并比较各组孕妇就诊时血清miR-200c、PAPP-A水平差异,探究其对孕妇先兆流产及异位妊娠的诊断价值。结果:三组间孕妇的妊娠黄体平均径比较组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的子宫内膜厚度低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组孕妇的RI高于异位妊娠组和正常早孕组,且异位妊娠组高于正常早孕组(P<0.05);先兆流产组和异位妊娠组孕妇的PSV均低于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05)。先兆流产组和异位妊娠组孕妇的血清miR-200c水平高于正常早孕组(P<0.05),但先兆流产组和异位妊娠组组间差异无统计学意义(P>0.05),异位妊娠孕妇的PAPP-A低于先兆流产组和正常早孕组,且先兆流产组低于正常早孕组(P<0.05)。经分析,超声及miR-200c、PAPP-A水平联合诊断孕妇先兆流产特异度高于各指标单独诊断,对异位妊娠诊断的特异度及阳性预测值高于各指标单独诊断。结论:血清miR-200c和PAPP-A水平结合经阴道超声检查,能有效地用于鉴别诊断先兆流产和异位妊娠,提高诊断的准确率和特异度,具有较高的临床应用潜力。

miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2蛋白的相关性

目的:探讨miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2的相关性。方法:选取113例子宫内膜癌组织和癌旁组织标本,40例正常子宫内膜癌组织作为对照组,检测组织中miR-200c表达量,以及ZEB2基因和蛋白表达量,利用反义寡核苷酸技术抑制子宫内膜癌RL95-2细胞株中miR-200c表达,检测其对细胞侵袭力的影响,以及细胞中ZEB2基因和蛋白表达。结果:子宫内膜癌组织中miR-200c表达量、ZEB2基因和蛋白表达量均高于癌旁组织和对照组(P<0.05);反义miR-200c转染组穿膜细胞数少于阴性对照组和脂质体组(P<0.05);反义miR-200c转染组细胞中ZEB2基因和蛋白表达量均低于阴性对照组和脂质体组(P<0.05)。结论 :miR-200c在子宫内膜癌组织中呈高表达,可能是通过调控ZEB2而促进肿瘤细胞的浸润和转移。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

血清miR-200c表达水平与复发性卵巢癌的相关性及临床意义

目的分析血清miR-200c表达水平与上皮性卵巢癌(EOC)患者治疗后复发的关系。方法选取2019年6月至2020年6月昆明医科大学第三附属医院收治的160例EOC患者作为研究对象,随访2年,有104例复发。调查患者的基线资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测患者血清miR-200c的表达水平,采用单因素分析患者治疗后复发与血清miR-200c的表达水平和基线资料的相关性,多因素Logistic回归分析影响患者复发的独立危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-200c预测EOC患者治疗后复发的效能。结果单因素分析显示,雌激素受体、孕激素受体、淋巴结转移、血清糖类抗原125(CA125)和人附睾蛋白4(HE4)的水平与EOC患者治疗后复发呈正相关,血清miR-200c水平与EOC患者治疗后复发呈负相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,血清CA125高表达(OR>1,P<0.05)、miR-200c低表达(OR<1,P<0.05)是EOC患者术后复发的独立危险因素;ROC曲线结果显示,血清CA125、miR-200c水平单独及联合预测EOC患者治疗后复发的曲线下面积分别为0.915、0.954、0.993,血清miR-200c的预测效能优于CA125,联合预测效能优于单项指标。结论miR-200c是提示EOC细胞侵袭性的分子标志物,血清miR-200c表达水平的降低会增加EOC患者治疗后复发的风险,可作为潜在的癌症复发预测指标和治疗靶点。

尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病诊断中的价值

目的探讨尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c在早期糖尿病肾病(DN)诊断中的价值。方法选取2021年1月—2022年12月金华市人民医院2型糖尿病(T2DM)患者260例,根据其就诊时的微量尿蛋白排泄率(UAER)分为单纯T2DM组(135例)、早期DN组(82例)、临床期DN组(43例)。另选取同期金华市人民医院健康体检者50名作为正常对照组。收集所有研究对象的一般资料,并检测尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c和尿液肌酐(UCr)、尿液尿素氮(UUN)、尿液转化生长因子-β1(TGF-β1,以UCr校正)、糖化血红蛋白(HbA_(1c))、血清尿酸(UA)。采用Pearson相关分析评价各项指标之间的相关性。采用多元逐步回归分析评价尿液TGF-β1的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c诊断早期DN的效能。结果正常对照组、单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c相对表达量依次升高(P<0.001),miR-29c相对表达量依次降低(P<0.001)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、校正TGF-β1和HbA_(1c)、UA水平均高于正常对照组(P<0.05)。单纯T2DM组、早期DN组和临床期DN组UUN、UCr、UA、校正TGF-β1水平和UAER依次升高(P<0.001)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-200c与UCr、校正TGF-β1均呈显著正相关(P<0.01),miR-29c与UCr、校正TGF-β1均呈显著负相关(P<0.001),与UUN、UA均无相关性(P>0.05)。HbA_(1c)、UCr和尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c是尿液校正TGF-β1水平的独立影响因素(P<0.01)。尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c单项检测和联合检测诊断早期DN的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.855、0.799、0.557、0.923。结论尿外泌体miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c联合检测对早期DN有较好的诊断价值。

肾透明细胞癌中miR-200c负性调控ZEB2基因表达的机制研究

目的:探讨肾透明细胞癌中miR-200c调控ZEB2基因表达的分子机制。方法:实时定量PCR法检测肾透明细胞癌及癌旁组织中miR-200c及ZEB2基因的表达水平。培养肾透明细胞癌Caki-1细胞,将miR-200c的前体转染Caki-1细胞,Western blot法检测ZEB2蛋白的表达改变,荧光素酶报告基因表达分析实验验证miR-200c与ZEB2基因的3'非翻译区(3'UTR)的结合及调控作用。结果:实时定量PCR表达检测显示,与癌旁组织相比,miR-200c在肾透明细胞癌组织中的表达显著下调,而ZEB2 mRNA在肾透明细胞癌组织中的表达则呈现明显上调。Pearson相关性分析结果表明,在肾透明细胞癌及癌旁组织中miR-200c与ZEB2基因的表达均显示负性相关。荧光素酶报告基因表达分析实验明确miR-200c能够与ZEB2基因的3'UTR特异性地结合,并抑制荧光素酶的表达。miR-200c前体能够显著下调Caki-1细胞中ZEB2蛋白的表达。结论:miR-200c与ZEB2基因的表达异常与肾透明细胞癌相关,在肾透明细胞癌细胞中miR-200c能够负性调节其靶基因ZEB2的表达。

miR-200c通过抑制RhoA/ROCK通路延缓皮肤创伤愈合进程

目的探究miR-200c在皮肤创伤愈合中的作用及其调控机制。方法构建SD大鼠背部全层皮肤创伤模型,将创伤后大鼠分为agomir-NC组、miR-200c agomir组、sh-NC组和sh-RhoA组。采用qRT-PCR检测创面组织中miR-200c表达,Western blot检测创面组织中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin和RhoA蛋白表达。创伤后第1,7,14天计算大鼠创面愈合率。采用双荧光素酶报告实验分析miR-200c和RhoA靶向关系。将人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞分为inhibitor-NC组、miR-200c inhibitor组、miR-200c inhibitor+sh-NC组和miR-200c inhibitor+sh-RhoA组。采用EdU法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,qRT-PCR检测HaCaT细胞中miR-200c表达,Western blot检测HaCaT细胞中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达。结果与正常皮肤比较,创面组织中miR-200c表达降低(P<0.01),RhoA表达升高(P<0.01)。miR-200c与RhoA 3′UTR存在靶向结合关系。与agomir-NC组比较,miR-200c agomir组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-RhoA组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较,miR-200c inhibitor组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-200c inhibitor+sh-NC组比较,miR-200c inhibitor+sh-RhoA组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论miR-200c靶向RhoA,过表达miR-200c可以通过调控RhoA/ROCK通路抑制皮肤创伤愈合的再上皮化过程,进而延缓皮肤创伤愈合进程。

LncRNA XIST调控miR-200b/ZEB1轴参与儿童急性髓系白血病阿柔比星耐药的机制研究

目的:研究LncRNA XIST调控miR-200b/ZEB1轴参与儿童急性髓系白血病(AML)阿柔比星耐药的机制。方法:以阿柔比星浓度递增法诱导建立人AML阿柔比星耐药细胞株K562/ADM,检测人AML细胞K562及K562/ADM细胞中LncRNA XIST表达。体外培养K562/ADM细胞,随机分为对照组、LncRNA XIST inhibitor组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组,分组转染并以药物处理后,检测各组细胞增殖凋亡情况;检测各组细胞LncRNA XIST、miR-200b、ZEB1、MDR1 mRNA表达水平和ZEB1、耐药蛋白P-gp蛋白表达水平。结果:相比K562细胞,LncRNA XIST在K562/ADM细胞中表达明显升高(P<0.05)。与对照组相比,阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组细胞存活率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05);LncRNA XIST inhibitor组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组上述指标无明显改变(P>0.05)。与LncRNA XIST inhibitor组相比,阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组细胞存活率明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组、阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组分别相比,阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor组、LncRNA XIST inhibitor组LncRNA XIST、ZEB1及MDR1 mRNA表达水平、ZEB1及P-gp蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),miR-200b表达水平均明显升高(P<0.05);阿柔比星+LncRNA XIST inhibitor阴性对照组细胞上述各指标无明显改变(P>0.05)。结论:LncRNA XIST可使儿童AML细胞产生耐药性,下调其表达可促进miR-200b表达,降低ZEB1表达,抑制耐药基因MDR1、P-gp表达,提高阿柔比星对AML细胞的杀伤。

阴道彩超联合血清β-hCG、miR-200c对早期异位妊娠的临床诊断价值

目的:探究经阴道彩超联合血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)、miR-200c对早期异位妊娠(EP)的临床诊断价值。方法:回顾性选取2020年1月-2022年5月在本院住院治疗的早期EP患者204例作为EP组,另选取同期进行围产期保健检查的200例健康孕妇作为正常妊娠组。以诊断性刮宫或病理检查结果为金标准,收集所有受试者的临床资料,对所有受试者进行阴道彩超检测,同时检测其外周血β-HGG水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清中miR-200c表达水平。采用多因素logistic分析探究以上各项指标表达水平对EP的影响。结果:两组患者的人工流产占比、自然流产占比、年龄、体质量指数(BMI)、产次、孕次、孕周对比均无统计学差异(P>0.05),两组EP组患者外周血血管内皮生长因子(VEGF)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及肌酸激酶(CK)水平对比无统计学差异(P>0.05)。EP组患者血清miR-200c相对表达量以及血清β-hCG浓度均低于正常妊娠组(P<0.05)。阴道超声检测结果对比,EP组阻力指数(RI)、脉搏指数(PI)均大于对照组(P<0.05)。ROC分析显示,阴道超声RI、PI及血清β-hCG、miR-200c联合诊断EP的敏感度、特异度分别为97.55%、96.50%,AUC为0.989。结论:阴道彩超、血清β-hCG、miR-200c水平均能协助区分早期EP、正常妊娠,三者联合的诊断价值最高,值得临床重视。

鼻咽癌组织中miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin的表达及调控作用

目的:观察鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中miR-200c、潜伏期膜蛋白1(LMP1)、E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-binding protein 2,ZEB2)和E-cadherin的表达变化,并探讨其调控作用。方法:选取2021-05~2022-06于广州市花都区人民医院住院的NPC患者62例和鼻咽炎患者41例为研究对象。分别采用RT-PCR法检测两组患者组织中的miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达和免疫印迹的方法检测两组组织中LMP1、ZEB2和E-cadherin蛋白表达,并对miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达进行Pearson线性相关分析。结果:NPC组织中miR-200c的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05),LMP1和ZEB2 mRNA和蛋白的表达水平均高于鼻咽炎组(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05);NPC组织中LMP1 mRNA与miR-200c的表达呈负相关(r=-0.853,P<0.05),miR-200c与ZEB2 mRNA的表达呈负相关(r=-0.842,P<0.05),ZEB2 mRNA与E-cadherin mRNA表达呈负相关(r=-0.590,P<0.05)。结论:NPC组织中LMP1和ZEB2表达升高,而miR-200c和E-cadherin表达水平降低,有望成为NPC诊疗新靶点;LMP1可能通过诱导下调miR-200c的表达,使得ZEB2转录因子表达上调,最终抑制E-cadherin的表达,从而促进NPC的侵袭和转移。

miR-200c-3p通过靶向Zeb1调控骨关节炎小鼠模型中软骨细胞凋亡和炎症反应

目的研究miR-200c-3p在骨关节炎(OA)中的作用及其下游的分子机制。方法通过破坏内侧半月板的稳定性构建骨关节炎小鼠模型,采用脂多糖(LPS)处理小鼠原代软骨细胞构建骨关节炎细胞模型。采用RT-qPCR检测骨关节炎小鼠模型样本以及对照组小鼠样本中miR-200c-3p的表达水平。采用RT-qPCR检测LPS处理前后小鼠原代软骨细胞中miR-200c-3p和Zeb1的表达水平变化。CCK-8实验检测miR-200c-3p过表达对骨关节炎细胞模型增殖能力的影响;流式细胞术检测miR-200c-3p过表达对骨关节炎细胞模型凋亡水平的影响;酶联免疫吸附试验检测miR-200c-3p过表达对骨关节炎细胞模型中炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量的影响。生物信息学分析RNA pull down实验和荧光素酶报告实验验证miR-200c-3p和下游靶基因相互作用。功能拯救实验验证Zeb1对miR-200c-3p作用的影响。结果miR-200c-3p在OA小鼠关节软骨组织和LPS处理的软骨细胞中显著下调。Zeb1在LPS处理的软骨细胞中显著上调。miR-200c-3p上调显著抑制了脂多糖诱导的软骨细胞凋亡和炎症损伤。Zeb1是miR-200c-3p的下游靶基因。Zeb1过表达逆转miR-200c-3p过表达对骨关节炎小鼠模型中软骨细胞凋亡和炎症反应的影响。结论miR-200c-3p通过靶向Zeb1抑制骨关节炎小鼠模型中软骨细胞凋亡并且缓解炎症反应,有助于发现骨关节炎治疗的有效靶点。

MIF激活lncRNA-ZEB1-AS1/miR-200b信号通路促进结肠癌增殖和转移作用研究

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在结肠癌中发挥的作用及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR检测MIF在结肠癌组织和癌旁组织中的表达及其对结肠癌患者预后的影响;qRT-PCR和免疫荧光检测MIF在结肠癌细胞HCT116和正常肠上皮细胞HIEC-6中的表达;si-RNA沉默MIF在HCT116细胞中的表达,CCK-8、Transwell和细胞划痕实验观察HCT116细胞增殖和迁移能力的变化,同时检测长链非编码RNA锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1(lncRNA-ZEB1-AS1)表达;starBase数据库预测分析lncRNA-ZEB1-AS1和miR-200b间的关系,双荧光素酶进行验证;分别过表达lncRNA-ZEB1-AS1和沉默miR-200b后检测HCT116增殖能力变化。结果:MIF在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织;MIF在HCT116细胞中表达显著高于HIEC-6细胞。靶向沉默MIF表达后,HCT116细胞增殖和转移能力降低,且lncRNA-ZEB1-AS1表达随着MIF沉默显著降低;starBase数据库预测及双荧光素酶标记实验结果表明lncRNA-ZEB1-AS1抑制miR-200b表达,且过表达lncRNAZEB1-AS1和沉默miR-200b均可逆转沉默MIF导致的细胞增殖能力下降。结论:MIF可能通过激活ZEB1-AS1/miR-200b信号通路促进结肠癌细胞的增殖和转移。

miR-200及其靶基因ZEB1/2在急性肺损伤后早期肺纤维化中上皮-间质转化(EMT)过程

目的观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c及其靶基因ZEB1/2的表达变化.方法应用LPS 3次打击的方法构建小鼠急性肺损伤后早期肺纤维化模型,分别于造模后第3、7、14、21天处死小鼠,留取肺组织备用.各组小鼠肺组织切片行HE和Masson染色并在光学显微镜下观察病理改变;Real-time PCR检测肺组织miR-200b、miR-200c、ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA表达;Western blot检测肺组织ZEB1、ZEB2、E-cadherin、Vimentin、α-SMA蛋白表达.结果 (1)病理结果:与对照组相比,LPS处理后第3天肺组织胶原纤维开始沉积,随着时间延长,肺纤维化程度逐渐加重;(2)Real time-PCR结果:随着肺纤维化程度加重,miR-200b、miR-200c水平均呈下降趋势,第7、14、21天时均显著低于对照组(P<0.01);ZEB1 m RNA、ZEB2 m RNA水平呈上升趋势,且ZEB2 m RNA较ZEB1 m RNA表达增加更显著;(3)Western blot结果:随着急性肺损伤后肺纤维化的进展,ZEB1、ZEB2蛋白表达亦升高,与其m RNA表达变化相一致;上皮标志物E-cadherin蛋白表达逐渐减少,间质标志物Vimentin、α-SMA蛋白表达逐渐增多.结论在LPS诱发急性肺损伤后早期肺纤维化过程中miR-200b/c表达降低,并通过负性调控其靶控基因转录抑制因子ZEB1/2的表达促进上皮向间质转化.

食管鳞癌中微小RNA miR-200c的表达及其意义

目的检测食管鳞癌中微小RNA miR-200c的表达,探讨其与肿瘤发展和分期的关系。方法应用实时荧光定量PCR方法检测76例各类分期分型食管鳞癌和配对癌旁组织中miR-200c的表达,分析其表达与肿瘤临床分期和病理分型的关系。结果食管鳞癌组织与癌旁组织比较,miR-200c的表达显著减少(P<0.01);miR-200c的表达在中晚期(III、IV期)食管鳞癌组织较早中期(Ⅰ、Ⅱ)食管鳞癌组织降低更为显著(P<0.01)。结论 miR-200c在食管鳞癌发生发展过程中表达有明显降低,其表达水平可作为潜在的食管鳞癌临床分期分级和预后的指标。

miR-200c在胃癌中的表达水平与患者临床病理特征的关系

目的:探讨miR-200c在胃癌组织中的表达水平与胃癌患者临床病理特征及无病生存期(diease free survial,DFS)的关系。方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年1月64例胃癌手术切除的标本及相关临床资料,采用实时荧光定量PCR技术检测miR-200c在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达。回顾性分析miR-200c表达水平与胃癌患者的临床病理特征及DFS相关性。结果:胃癌组织中miR-200c的表达水平显著低于癌旁非癌组织(3.29 vs 5.91,P<0.01)。miR-200c的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、转移和脉管瘤栓呈显著负相关(均P<0.01)。miR-200c高表达组患者中位DFS明显长于低表达组患者(22.0 vs 13.5个月,P<0.01),其表达水平与患者DFS呈正相关(P<0.01)。结论:miR-200c在胃癌组织中低表达,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度和脉管瘤栓呈负相关,与DFS呈正相关,在胃癌的发生发展及预后中具有重要作用。

胃癌中DNA甲基化对miR-200c 141表达影响的研究

目的:探讨胃癌组织中miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141表达水平和临床病理特征的相关性。方法:运用实时定量PCR(qRT-PCR)和BS-MSP方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-200c/141CpG岛的表达与其基因甲基化水平。统计学分析miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c/141水平和临床病理特征的关系。结果:miR-200c/141CpG岛的甲基化水平在胃癌组织中显著升高,miR-200c和miR-141的水平显著降低,miR-200c/141CpG岛的甲基化水平与miR-200c和miR-141的水平呈负相关。结论:胃癌组织中升高的miR-200c/141CpG岛的甲基化水平诱导miR-200c和miR-141表达降低。

miR-200c阻滞转化生长因子-β1在腹膜后成纤维细胞增殖和迁移侵袭中的作用

目的:阐明miR-200c对腹膜后成纤维细胞增殖的影响,并分析其分子机制,为抑制腹膜后纤维化提供理论依据。方法:收集36例人腹膜后组织,原代培养成纤维细胞,以5 ng/ml TGF-β1刺激者为TGF-β1组,pc DNA3.1-miR-200c转染成纤维细胞,再给予5 ng/ml TGF-β1刺激者为miR-200c组,仅以pc DNA3.1质粒转染者为pc DNA3.1质粒组,正常培养的成纤维细胞为对照组。分别以噻唑蓝(MTT)细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell细胞小室迁移实验检测成纤维细胞增殖和迁移能力,并以ELISA实验检测各组细胞裂解液中Akt蛋白的含量。结果:miR-200c组成纤维细胞的增殖OD值明显比TGF-β1组降低(P<0.01);与TGF-β1组相比,miR-200c组细胞迁移率明显降低(P<0.01);miR-200c组Akt蛋白的含量比TGF-β1组明显降低(P<0.01)。结论:miR-200c下调Akt通路而抑制TGF-β1对成纤维细胞的增殖或迁移效果,对抑制腹膜纤维化具有重要意义。