结直肠癌组织LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达及与预后的关系

目的分析结直肠癌组织长链非编码RNA(LncRNA)LINC00342、微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)表达水平与患者术后5年内预后的关系。方法采集133例结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测LncRNA LINC00342和miR-203a-3p表达;术后随访5年记录患者生存和死亡情况。比较不同情况下LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达及临床病理参数。分析结直肠癌组织中LncRNA LINC00342、miR-203a-3p表达的相关性、与预后的关系及对预后的预测价值。结果结直肠癌组织中LncRNA LINC00342表达水平高于癌旁组织,miR-203a-3p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。结直肠癌组织中LncRNA LINC00342与miR-203a-3p表达水平呈负相关(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例分别高于LncRNA LINC00342低表达组和miR-203a-3p高表达组(P<0.05)。LncRNA LINC00342高表达组、miR-203a-3p低表达组术后5年总生存率更低(P<0.05)。死亡组肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移患者比例、LncRNA LINC00342表达水平高于存活组,miR-203a-3p表达水平低于存活组(P<0.05)。肿瘤低分化、TNMⅢ期、有淋巴结转移、LncRNA LINC00342高表达、miR-203a-3p低表达是影响患者术后5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。LncRNA LINC00342和miR-203a-3p联合对预后的预测价值高于单独预测。结论结直肠癌组织中LncRNA LINC00342呈高表达,miR-203a-3p呈低表达,二者联合检测有望成为预测术后生存的临床评估指标。

miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞(P均<0.05)。TargetScan数据库分析显示,Survivin基因在3′UTR端存在7个连续的可以与miR-203a-3p互补的核苷酸序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染Survivin-WT和miR-203a-3p mimic质粒的TE-1细胞荧光素酶活性低于其他细胞(P<0.05)。培养12、24、36、48 h时细胞活力miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05);细胞迁移距离及侵袭细胞数miR-203a-3p抑制组>对照组、阴性对照组>miR-203a-3p模拟组(P均<0.05)。结论miR-203a-3p高表达可抑制食管癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向负调控Survivin有关。

神经胶质瘤组织中miR-203a-3p、PHOX2B表达水平与临床特征及预后的关系

目的探究神经胶质瘤组织中微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)、配对同源异型盒蛋白2B(PHOX2B)表达水平与临床特征及预后的关系。方法选取2017年6月至2020年4月我院收治的96例神经胶质瘤患者,术中采集切除的胶质瘤组织及相应癌旁组织,采用qRT-PCR和免疫组化法检测胶质瘤组织和癌旁组miR-203a-3p、PHOX2B mRNA表达;采用Pearson法分析miR-203a-3p、PHOX2B mRNA的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-203a-3p、PHOX2B mRNA与神经胶质瘤患者预后的关系;采用COX回归分析影响神经胶质瘤患者预后的危险因素。结果胶质瘤组织miR-203a-3p水平和阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05),PHOX2B mRNA水平和阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson相关性分析,神经胶质瘤患者miR-203a-3p、PHOX2B mRNA水平呈负相关(P<0.05)。miR-203a-3p、PHOX2B与KPS评分、肿瘤组织坏死和WHO分级有关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析得出,miR-203a-3p高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05),PHOX2B mRNA高表达组生存率显著低于低表达组(P<0.05)。COX回归分析表明,miR-203a-3p、PHOX2B mRNA、肿瘤组织坏死和WHO分级是影响神经胶质瘤患者预后的危险因素(P<0.05)。结论在神经胶质瘤中miR-203a-3p表达水平显著降低,PHOX2B mRNA表达水平显著升高,二者与临床特征及预后密切相关。

子宫肌瘤组织中miR-203a-3p及CBX8表达水平及其临床意义

目的探究子宫肌瘤组织中微小RNA(miR)-203a-3p及染色体结合蛋白8(CBX8)表达水平及其临床意义。方法选取2019年6月至2021年6月该院收治的112例子宫肌瘤患者作为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测子宫肌瘤组织与肌瘤旁组织miR-203a-3p、CBX8 mRNA表达水平,免疫组织化学法检测CBX8蛋白表达。以子宫肌瘤组织中miR-203a-3p表达的中位数为界,将子宫肌瘤患者分为miR-203a-3p低表达组和miR-203a-3p高表达组。以子宫肌瘤组织中CBX8蛋白免疫组化染色的评分为界,将子宫肌瘤患者分为CBX8蛋白阴性表达组和阳性表达组。在Targetscan数据库中进行miR-203a-3p、CBX8靶向关系查询。对112例子宫肌瘤患者术后进行2年随访,根据随访结果将患者分为复发组与未复发组。采用Pearson相关分析子宫肌瘤组织miR-203a-3p表达水平与CBX8 mRNA表达水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析子宫肌瘤患者术后复发的影响因素。结果子宫肌瘤组织中miR-203a-3p表达水平明显低于肌瘤旁组织,CBX8 mRNA表达水平明显高于肌瘤旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。CBX8蛋白阳性率(45.54%,51/112)明显高于肌瘤旁组织(21.43%,24/112),差异有统计学意义(χ^(2)=14.613,P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,子宫肌瘤组织中miR-203a-3p表达水平与CBX8 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.562,P<0.05)。Targetscan数据库检索结果显示,miR-203a-3p与CBX8存在特异性结合位点。miR-203a-3p低表达组、高表达组均纳入56例患者。miR-203a-3p低表达组与高表达组肿瘤最大径、肌瘤数目、生殖道炎、月经紊乱情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。CBX8蛋白阴性表达组纳入61例患者,阳性表达组纳入51例患者。CBX8蛋白阴性表达组、阳性表达组肿瘤最大径、肌瘤数目、生殖道炎、月经紊乱情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。子宫肌瘤患者随访率为100%,术后复发组纳入41例患者,未复发组纳入71例患者,复发率为36.61%。两组肌瘤最大径、肌瘤数目、生殖道炎、月经紊乱情况及CBX8 mRNA、miR-203a-3p水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,肌瘤最大径≥3 cm、肌瘤数目多发、CBX8 mRNA表达水平升高、有生殖道炎、有月经紊乱为子宫肌瘤患者术后复发的危险因素(P<0.05),miR-203a-3p表达水平升高为子宫肌瘤患者术后复发的保护因素(P<0.05)。结论子宫肌瘤组织中miR-203a-3p表达水平降低,CBX8 mRNA表达水平升高,与临床病理特征及复发密切相关,可能作为子宫肌瘤诊断以及预后评估的标志物。

经阴道超声联合血清miR-1266、miR-203a-3p对宫颈癌及癌前病变的鉴别诊断价值

目的:探讨经阴道彩色多普勒超声(TVCDS)联合血清微小RNA-1266(miR-1266)、微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)对宫颈癌及癌前病变的鉴别诊断价值。方法:选取本院2022年8月至2023年10月收治的宫颈癌患者97例为宫颈癌组,另选取同期宫颈癌前病变患者99例为癌前病变组。TVCDS及TVCDS联合miR-1266、miR-203a-3p与宫颈活检诊断宫颈癌的一致性采用Kappa检验;宫颈癌发生的影响因素采用多因素Logistic回归分析;TVCDS联合血清miR-1266、miR-203a-3p水平对宫颈癌的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果:宫颈癌组鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)199和CA125水平及生产次数>3次的比例均高于癌前病变组(P<0.05)。宫颈癌组血清miR-1266水平与癌前病变组相比明显升高(t=8.293,P<0.05),血清miR-203a-3p水平较癌前病变组降低(t=9.713,P<0.05)。TVCDS联合血清miR-1266、miR-203a-3p与宫颈活检的一致性(Kappa值=0.766)高于单独TVCDS诊断(Kappa值=0.704)。多因素Logistic分析显示,SCC、CEA、CA199、CA125、miR-1266、miR-203a-3p均为宫颈癌发生的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TVCDS联合血清miR-1266、miR-203a-3p的敏感度(94.85%)优于三者单独诊断,诊断准确度(88.27%)优于血清miR-1266和miR-203a-3p单独诊断。结论:宫颈癌患者血清miR-1266水平升高、miR-203a-3p水平降低,TVCDS联合血清miR-1266、miR-203a-3p对宫颈癌的诊断价值较高。

lncRNA LUCAT1靶向miR-203a-3p影响LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LUCAT1靶向miR-203a-3p对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的影响。方法qRT-PCR检测脓毒症急性肺损伤患者外周血中和不同浓度(7.5、15、30 mg/L)LPS处理Ⅱ型肺泡上皮细胞中lncRNA LUCAT1和miR-203a-3p表达水平。用30 mg/L LPS处理Ⅱ型肺泡上皮细胞,细胞分为NC组、LPS组、si-NC+LPS组、silncRNA LUCAT1+LPS组、miR-NC+LPS组、miR-203a-3p+LPS组、anti-miR-NC+si-lncRNA LUCAT1+LPS组、anti-miR-203a-3p+si-lncRNA LUCAT1+LPS组。q RT-PCR检测lncRNA LUCAT1和miR-203a-3p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved-caspase-3蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β含量;双荧光素酶报告实验检测lncRNA LUCAT1和miR-203a-3p靶向关系。结果在脓毒症急性肺损伤患者外周血中及不同浓度LPS处理Ⅱ型肺泡上皮细胞中lncRNA LUCAT1表达水平增加,miR-203a-3p表达水平降低。LPS增加Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,增多TNF-α、IL-6、IL-1β含量;干扰lncRNA LUCAT或过表达miR-203a-3p降低LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达水平,减少TNF-α、IL-6、IL-1β含量。lncRNA LUCAT1通过调控miR-203a-3p表达,抑制anti-miR-203a-3p可以逆转干扰lncRNA LUCAT1对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的影响。结论lncRNA LUCAT1通过靶向负调控miR-203a-3p减弱LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应。

原发性肝癌患者循环miR-203a-3p表达水平与SOCS1和SOCS3的关系及意义

目的:探讨肝癌患者循环miR-203a-3p表达与SOCS1和SOCS3的关系及意义。方法:选取50例拟行手术治疗的原发性肝癌患者为研究组,术前留取血样,术中留取病理组织和癌旁组织;另取50例同期入院体检的健康志愿者为对照组,留取血样。采用荧光定量PCR实验测定血样miR-203a-3p表达水平;免疫蛋白印迹实验测定组织SOCS1和SOCS3表达;甲基化特异性PCR实验测定组织SOCS1和SOCS3的甲基化水平。结果:研究组循环miR-203a-3p水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组病理组织SOCS1和SOCS3表达水平低于癌旁组织,病理组织SOCS1和SOCS3甲基化程度高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组循环miR-203a-3p水平与组织SOCS1和SOCS3表达呈正相关性(r=0.576和r=0.475,P<0.05),与组织SOCS1和SOCS3甲基化程度呈负相关性(r=-0.585和r=-0.579,P<0.05)。结论:miR-203a-3p可能对原发性肝癌的SOCS1、SOCS3甲基化修饰有影响,有望为其临床诊治提供新靶点。

miR-203a-3P通过靶向PRMT5抑制胃癌细胞增殖

目的:探讨miR-203a-3p在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响。方法:收集胃癌组织标本44例,采用Real-time PCR方法检测胃癌组织标本中miR-203a-3p的表达,并分析其表达水平与临床病理参数的关系;生物信息学预测miR-203a-3p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证;免疫组化检测胃癌组织标本中PRMT5的表达情况,分析其表达水平与miR-203a-3p表达的相关性;利用脂质体介导的瞬时转染方法过表达miR-203a-3p或同时过表达miR-203a-3p和PRMT5,并通过CCK-8实验检测胃癌细胞的增殖情况。结果:胃癌组织中miR-203a-3p的表达水平与正常组织对照相比显著降低(P<0.01),并且miR-203a-3p的表达水平与肿瘤细胞的分化程度显著相关;荧光素酶报告基因实验证实miR-203a-3p可以直接结合在PRMT5 3'-UTR上,即PRMT5是miR-203a-3p的直接靶基因;在胃癌组织标本中,PRMT5表达水平显著高于正常组织对照(P<0.01),并且其表达水平与miR-203a-3p表达呈显著负相关(r=-0.4124,P<0.01);过表达miR-203a-3p后,胃癌BGC823细胞的增殖能力显著低于miR-NC对照组(P<0.01),并且,"挽救"实验表明在过表达miR-203a-3p的细胞中同时过表达PRMT5后会部分恢复miR-203a-3p对细胞增殖的抑制(P<0.01)。结论:miR-203a-3p可通过下调靶基因PRMT5的表达,进而抑制胃癌细胞增殖。因此,miR-203a-3p可作为胃癌疾病临床治疗的潜在靶点。

过表达miR-203a-3p对脂多糖致大鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响及其机制

目的探讨过表达miR-203a-3p对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤后肺纤维化的影响及其机制。方法采用多次小剂量注射LPS制备大鼠急性肺损伤后肺纤维化模型,并将造模成功的大鼠随机分成模型组(Model组)、agomir阴性对照组(agomir-NC组)和miR-203a-3p agomir组(agomir组),另设对照组(Control组),每组15只。造模前1 d及造模开始后1周,给予尾静脉注射miR-203a-3p agomir干预。造模2周后,测定肺组织湿/干比重(W/D)及肺组织羟脯胺酸(Hyp)含量;HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及肺纤维化程度;ELISA法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;qRT-PCR检测大鼠肺组织中miR-203a-3p和卵泡抑素样蛋白1(Fstl1)mRNA表达水平;Western blot检测大鼠肺组织中Fstl1蛋白表达水平;双荧光素酶报告系统检测miR-203a-3p和Fstl1的靶向关系。结果与Control组比较,Model组大鼠肺损伤及肺纤维化程度较为严重,肺组织W/D值及Hyp含量增加(P<0.05),BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05),肺组织中miR-203a-3p表达水平降低(P<0.05),而Fstl1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与Model组比较,agomir组大鼠肺损伤及纤维化得到改善,肺组织W/D值及Hyp含量降低(P<0.05),BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低(P<0.05),肺组织中miR-203a-3p表达水平升高(P<0.05),而Fstl1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验证实,Fstl1是miR-203a-3p靶基因。结论miR-203a-3p过表达可改善LPS诱导的急性肺损伤后肺纤维化,其机制可能与靶向下调Fstl1表达有关。

miR-203a-3p通过ALOX15途径抑制胃癌细胞铁死亡

目的探讨miR-203a-3p通过ALOX15途径调控胃癌细胞铁死亡的机制。方法检测胃癌组织和癌旁正常组织的铁死亡指标——活性氧诱导脂质过氧化(lipid-ROS)水平。对胃癌组织miR-203a-3p与lipid-ROS进行Pearson相关性分析。在胃正常细胞和胃癌细胞株中过表达或敲低相关分子后,检测其lipid-ROS和线粒体膜电位(MMP)。结果miR-203a-3p水平胃癌组织高于癌旁正常组织,胃癌细胞株高于胃正常细胞;lipid-ROS水平胃癌组织低于癌旁正常组织,胃癌细胞株低于胃正常细胞(P<0.05)。在胃癌组织中,miR-203a-3p与lipid-ROS呈负相关(P<0.05)。胃癌组织ALOX15 mRNA低于癌旁正常组织(P<0.05)。过表达miR-203a-3p后,胃正常细胞lipid-ROS、胃癌细胞MMP、所有细胞ALOX15 mRNA和蛋白水平降低;敲低miR-203a-3p后,胃癌细胞lipid-ROS、所有细胞ALOX15 mRNA和蛋白升高;敲低ALOX15时胃正常细胞lipid-ROS和胃癌细胞MMP降低,过表达ALOX15后胃癌细胞lipid-ROS升高(P<0.05)。结论胃癌细胞高表达的miR-203a-3p可靶向ALOX15,减少ALOX15表达,抑制其铁死亡发生。

miR-203a-3p通过SLUG调控上皮间质化抑制肝癌细胞的迁移及侵袭

目的探究miR-203a-3p对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养HepG2细胞,将实验分为对照组(人肝癌细胞)、miRNA-NC组(转染阴性对照序列)和miR-203a-3p组(转染miR-203a-3p mimic)。Transwell和细胞划痕实验用以检测细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶实验用以验证miR-203a-3p和锌指转录因子(SLUG)的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)用以检测miR-203a-3p和SLUG mRNA表达;蛋白质免疫印迹(WB)用以检测SLUG蛋白以及上皮间质转化相关蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达;裸鼠成瘤实验用以检测转染后细胞体内成瘤能力。结果与对照组相比,miRNA-NC组细胞侵袭和迁移能力、miR-203a-3p的表达、SLUG mRNA和蛋白的表达、上皮间质转化相关蛋白的表达均差异无统计学意义(P>0.05);miR-203a-3p组细胞侵袭和迁移能力、SLUG mRNA和蛋白的表达、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低,miR-203a-3p的表达、E-cadherin、Occludin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论miR-203a-3p可能靶向调控SLUG,抑制上皮间质转化过程,从而抑制肝癌细胞迁移及侵袭。

miR-203a-3p.1调控VCAN作为胃癌潜在治疗靶点的生物信息学研究

目的采用生物信息学技术探讨胃癌发生及进展的机制。方法采用GEO分析数据集GSE54129中胃癌组织标本与正常胃黏膜组织标本的差异表达基因(DEGs),然后用DAVID数据库对DEGs进行富集分析,STRING构建蛋白质相互作用(PPI)网络,Cytoscape软件可视化,MCODE和cytoHubba筛选关键基因,并在GEPIA数据库及胃癌组织标本中验证关键基因,之后用Target Scan7.2数据库预测调控靶基因的miRNAs。结果共筛选出630个DEGs(305个上调基因及325个下调基因),富集分析结果提示DEGs主要参与细胞外基质组织形成、蛋白质细胞外基质、肝素结合、化学致癌信号通路。进一步构建PPI网络,利用Cytoscape7.2数据库进行可视化分析,最终确定3个关键DEGs,包括VCAN、IGFBP7、FSTL1。利用GEPIA数据库验证关键DEGs,结果证实VCAN在胃癌组织中高表达(P<0.05),并与胃癌患者的不良预后有关。Target Scan7.2数据库预测结果提示has-miR-203a-3p.1可与VCAN mRNA的3′UTR结合。结论has-miR-203a-3p.1调控的VCAN是胃癌潜在治疗靶点。

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织。使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达。体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组。在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达。结果卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05)。miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05)。结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控VEGF-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关。

子宫内膜异位症不孕症患者血清miR-203a-3p、SOCS1、SOCS3表达

目的:探究子宫内膜异位症不孕患者血清中miR-203a-3p、细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、SOCS3表达及临床意义。方法:收集本院2015年1月-2019年1月行手术治疗的子宫内膜异位症不孕患者,经术后随访24个月均妊娠者76例(异位组),根据妊娠结局良好组(41例)及不良组(35例);本院体检健康女性76例为对照组。实时荧光定量PCR仪检测血清中miR-203a-3p表达,酶联免疫吸附试验测定血清SOCS1、SOCS3水平。Pearson法分析异位组miR-203a-3p与SOCS1、SOCS3的相关性。用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-203a-3p、SOCS1、SOCS3水平对子宫内膜异位症不孕的诊断价值。结果:与对照组相比,异位组血清miR-203a-3p水平较高,血清SOCS1、SOCS3水平较低;与Ⅰ/Ⅱ期相比,Ⅲ/Ⅳ期患者血清miR-203a-3p水平较高,SOCS1、SOCS3水平较低(均P<0.05)。Pearson分析显示,miR-203a-3p与SOCS1、SOCS3均呈负相关关系(P<0.05)。miR-203a-3p、SOCS1、SOCS3诊断子宫内膜异位症不孕症的曲线下面积(AUC)分别为0.866、0.818、0.806,三者联合诊断的AUC为0.929,特异性为90.8%,敏感度为84.2%。异位组中,与妊娠结局良好组相比,不良组患者血清miR-203a-3p水平较高,SOCS1、SOCS3水平较低(均P<0.05)。结论:子宫内膜异位症不孕患者血清miR-203a-3p水平异常升高,血清SOCS1、SOCS3水平异常降低,miR-203a-3p、SOCS1、SOCS3对子宫内膜异位症不孕症有一定诊断价值。

miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭

背景与目的:生物信息学分析提示GATA6是miR-203a-3p的潜在靶基因,明确miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭。方法:采用LipofectamineTMRNAiMAX对培养的KYSE-70和KYSE-180细胞瞬时转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-203a-3p和GATA6的表达水平。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GATA6蛋白的水平。质粒联合转染后检测相对萤光素酶活性。对食管鳞癌患者标本进行恶性肿瘤与异型增生组织miR-203a-3p和GATA6的表达检测。结果:RTFQ-PCR及Western blot检测结果显示,与对照组比较,GATA6基因和蛋白的表达在miR-203a-3p转染组中降低,在miR-203a-3p inhibitor组却升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-203a-3p转染组KYSE-70细胞增殖能力下降,miR-203a-3p inhibitor组中却升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在KYSE-180中虽然差异无统计学意义,但其趋势却与KYSE-70一致。与对照组比较,在KYSE-70和KYSE-180细胞系中,侵袭细胞数值/视野在miR-203a-3p转染组中均明显下降(P<0.01),在miR-203a-3p inhibitor组中却明显升高(P<0.05)。与miR-203a-3p掠夺型+GATA6野生型组和miR-203a-3p野生型+GATA6突变型组比较,相对萤光素酶活性在miR-203a-3p野生型+GATA6野生型组中降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与异型增生组织相比较,100%(10/10)食管鳞癌患者miR-203a-3p在恶性肿瘤组织的表达下调,而GATA6表达水平上调。结论:miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭能力。

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制。方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋亡率,Western blot检测AKT2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-203a-3p和AKT2的调控关系。结果:随着放射剂量的增加,骨肉瘤细胞MG-63中miR-203a-3p的表达量被显著抑制(P <0.05);过表达miR-203a-3p可增加MG-63细胞的放射敏感性,促进MG-63细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-203a-3p靶向负调控AKT2的表达;抑制AKT2表达可增强骨肉瘤MG-63细胞的放射敏感性;过表达AKT2逆转了上调miR-203a-3p对MG-63细胞的放射增敏作用,抑制MG-63细胞凋亡。结论:miR-203a-3p通过靶向抑制AKT2表达增强骨肉瘤MG-63细胞的放射敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。miR-203a-3p有望成为骨肉瘤临床放射增敏靶点。

miR-203a-3p对胰腺癌细胞系Panc-1生长增殖、迁移侵袭的促进作用

目的研究微小RNA-203a-3p (miR-203a-3p)对胰腺癌细胞系Panc-1增殖、集落形成以及迁移侵袭的影响,确定其潜在机制,为胰腺癌患者的临床诊治提供参考。方法通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-203a-3p在胰腺癌细胞株Panc-1、Aspc-1以及人胰腺导管上皮细胞(HPNE)中的表达水平;将miR-203a-3p模拟物(miR-203a-3p mimics)、miR-203a-3p抑制物(miR-203a-3p inhibitor)及其阴性对照NC mimics、NC inhibitor转染到Panc-1中。实验组分为NC mimics组、miR-203a-3p mimics组、NC inhibitor组、miR-203a-3p inhibitor组。CCK-8实验和集落形成实验分别检测细胞增殖活性和细胞集落形成数量,Transwell实验检测迁移细胞和侵袭细胞数量。结果 qRT-PCR实验结果显示在Panc-1、Aspc-1细胞中,miR-203a-3p的表达水平分别上升了7.71倍和6.15倍,差异具有统计学意义(P<0.05);过表达miR-203a-3p后Panc-1细胞系中miR-203a-3p表达水平升高了27.94倍,抑制miR-203a-3p表达后Panc-1细胞系中miR-203a-3p表达水平降低了0.47倍,与相应对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);过表达miR-203a-3p后促进了Panc-1的增殖、集落形成和迁移侵袭;细胞中转染miR-203a-3p inhibitor后,抑制了Panc-1的增殖、集落形成,迁移侵袭能力受到抑制(P<0.05)。结论 miR-203a-3p能够促进胰腺癌细胞系Panc-1生长增殖及迁移侵袭能力。

miR-203a-3p在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIANA Tools、miRDB和TargetScan网站预测miR-203a-3p的靶基因。将miR-203a-3p mimic及NC mimic、miR-203a-3p inhibitor及NC inhibitor转染至BxPC-3细胞,用qPCR法检测胰腺癌细胞和胰腺正常上皮细胞HPNE中miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a表达水平,以CCK-8法、Transwell小室法和克隆形成实验分别检测BxPC-3细胞的增殖、迁移、侵袭和集落形成能力。结果:通过TCGA数据库筛选出18个胰腺癌组织中差异表达的miRNA,其中miR-203a-3p、miR-192-5p、miR-451a具有物种保守性,且其与胰腺癌临床癌症分期、细胞周期和患者生存率相关(均P<0.05);生物信息学网站预测显示miR-203a-3p的候选靶基因是PPM1A,PPM1A与多基因存在相互作用。miR-203a-3p、miR-192-5p和miR-451a在BxPC-3和Aspc-1细胞中均高表达(均P<0.01)。miR-203a-3p mimic组BxPC-3细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著提高(均P<0.01);miR-203a-3p inhibitor组细胞中miR-203a-3p表达水平以及细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(均P<0.01)。结论:miR-203a-3p在胰腺癌组织及细胞中均高表达,其表达与患者生存和临床分期相关,可调控BxPC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

miR-203a-3p靶向JDP2基因调控结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的探讨miR-203a-3p靶向Jun二聚化蛋白(JDP)2基因对结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法将miR-con组(转染miR-con)、miR-203a-3p组(转染miR-203a-3p mimics)、anti-miR-203a-3p组(转染anti-miR-203a-3p)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-JDP2组(转染pcDNA-JDP2)、anti-miR-203a-3p+si-con组(共转染anti-miR-203a-3p和si-con)、anti-miR-203a-3p+si-JDP2组(共转染anti-miR-203a-3p和si-JDP2)、miR-con+野生型3′URT-荧光素酶表达载体(JDP2-WT)组(共转染miR-con和JDP2-WT)、miR-con+突变型3′URT-荧光素酶表达载体(JDP2-MUT)组(共转染miR-con和JDP2-MUT)、miR-203a-3p+JDP2-WT组(共转染miR-203a-3p和JDP2-WT)、miR-203a-3p+JDP2-MUT组(共转染miR-203a-3p和JDP2-MUT),均用脂质体法转染至结肠癌HT29细胞中;采用qRT-PCR检测miR-203a-3p和JDP2 mRNA表达水平;Western印迹检测蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞SW480、SW620、LOVO和HT29中miR-203a-3p表达水平显著升高,JDP2表达水平显著降低(P<0.05);干扰miR-203a-3p表达、过表达JDP2均可抑制HT29细胞增殖、迁移和侵袭,并下调基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、周期蛋白依赖性激酶(CDK)4及细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达(P<0.05)。miR-203a-3p靶向调控JDP2的表达,干扰miR-203a-3p抑制HT29细胞增殖、迁移和侵袭的结果被沉默JDP2表达所逆转,沉默JDP2表达能够减弱干扰miR-203a-3p对HT29细胞抗增殖、抗迁移、抗侵袭作用。结论干扰miR-203a-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其机制可能与靶向调控JDP2有关。

miR-203a-3p靶向GLS1调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的 探究微小核糖核酸(micro RNAs,miRNA,miR)-203a-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法 采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RTPCR)检测HCC细胞、人正常肝细胞以及临床HCC组织中mi R-203a-3p相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测mi R-203a-3p对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测mi R-203a-3p的潜在靶基因(GLS1),双荧光素酶实验进行验证;探究HCC细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β和c-Myc表达。结果 HCC癌组织中mi R-203a-3p(0.32±0.07)表达明显低于癌旁正常组织(1.02±0.03),差异有统计学意义(t=41.105,P<0.001);HCC细胞Hep G2(0.34±0.05),HCCLM3(0.58±0.06),Huh7(0.43±0.05),Hep3B(0.29±0.04)中mi R-203a-3p相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2(1.01±0.02)中mi R-203a-3p表达,差异有统计学意义(F=119.080,P<0.001)。与Blank组相比,mi R-203a-3p过表达组HCC细胞增殖(0.61±0.05 vs 1.24±0.06),迁移率(21.43%±2.01%vs 60.22%±3.14%)及侵袭能力(76.54±13.56 vs221.06±16.54)均明显降低,差异有统计学意义(t=14.849,13.900,10.562,均P<0.001)。GLS1是mi R-203a-3p的靶基因,mi R-203a-3p靶向负调控GLS1表达。HCC细胞中GLS1高表达呈现高酶活性,HCC细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank组和si RNA-NC组明显降低,差异有统计学意义(F=64.754,35.627,均P<0.001)。GLS1抑制组细胞增殖(0.59±0.04)、迁移率(30.15%±1.02%)和侵袭能力(69.59±15.74)较Blank组明显降低(1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52),差异均有统计学意义(t=16.499,16.278,11.215,均P<0.001)。mi R-203a-3p过表达和GLS1表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β和c-Myc的表达,差异均有统计学意义(t=11.129~28.213,均P<0.001)。转染GLS1可逆转mi R-203a-3p对HCC细胞生物学行为及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论 HCC中mi R-203a-3p显著低表达,其过表达能够抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1调控谷氨酰胺代谢及mi R-203a-3p靶向GLS1调控Wnt/β-catenin信号通路活性有关。