背景:目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及...背景:目前已有针对miRNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,PLCD3)及其靶向miRNA(miR-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的:探讨miR-34a-5p/PLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法:选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time PCR法检测滑膜中PLCD3及miR-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为miR-34a-5p模拟物组、pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p模拟物+pCDH-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂组、si-PLCD3组、miR-34a-5p抑制剂+si-PLCD3组,通过Real-time PCR法检测PLCD3和miR-34a-5p表达的关系;通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响;使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平;使用ELISA法检测炎症因子的表达。结果与结论:①PLCD3是miR-34a-5p的直接靶标,同时PLCD3和miR-34a-5p表达水平呈负相关。②PLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移,而miR-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移;miR-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高,而PLCD3过表达则表现出相反趋势。③PLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达,而miR-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明,miR-34a-5p/PLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。展开更多
文摘目的探讨miR-203a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法2020年1月至12月筛选靶向B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的微小核糖核酸(microRNA,miRNA),对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)进行转染,检测细胞增生、迁移和凋亡情况,同时检测细胞中Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、beclin-1、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated-protein light-chain-3,LC3Ⅱ)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)蛋白表达水平。结果miR-203a-5p与Bcl-2有潜在的结合位点;瘢痕疙瘩中miR-203a-5p mRNA低于正常皮肤、Bcl-2 mRNA高于正常皮肤(P<0.05)。miR-203a-5p抑制剂组KFs细胞增殖率(136.42±15.36)、迁移细胞数(117.14±15.92)、Bcl-2(1.56±0.20)和beclin-1(0.96±0.13)、LC3Ⅱ(1.86±0.32)和collagenⅠ(0.82±0.09)升高,KFs细胞凋亡率(2.63±0.32)、Bax(0.23±0.04)和Caspase-3(0.19±0.03)降低(P<0.05);miR-203a-5p模拟组则相反。结论miR-203a-5p通过Bcl-2/beclin-1通路能抑制KFs细胞增殖和迁移,促进KFs细胞凋亡。