LINC00894通过miR-205-5p/ZEB1轴对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的 探究长链非编码RNA 00894(LINC00894)基因对人胃癌细胞增殖、转移的影响,验证LINC00894、miR-205-5p、ZEB1在胃癌中的调控关系。方法 采用RT-qPCR检测LINC00894在胃癌细胞系、正常胃细胞系、临床胃癌及正常胃组织样本中的表达水平;通过随访,探究LINC00894的表达水平与胃癌患者预后的关系;构建LINC00894敲减细胞系和过表达细胞系,并采用RT-qPCR检测敲减及过表达效率;通过CCK-8、克隆形成和Transwell实验检测细胞增殖与转移能力;采用双荧光素酶报告实验、RT-qPCR实验和Western blot实验检测LINC00894、miR-205-5p和ZEB1的靶向调控关系。结果 LINC00894基因在胃癌组织或细胞中的表达量明显高于胃正常组织或细胞,且LINC00894基因高表达的胃癌患者预后更差;LINC00894基因的敲减抑制了胃癌细胞的活力、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力,相反,LINC00894基因的过表达得到相反地结果;LINC00894通过靶向miR-205-5p并下调其表达,从而促进ZEB1的表达。结论 LINC00894在胃癌中扮演癌基因的角色,可能通过miR-205-5p/ZEB1轴促进胃癌细胞增殖和转移。

miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制

目的 探讨miR-205-5p靶向ERBB3调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制血管生成在痔疮中的分子机制。方法 收集2021年07月至2022年06月临床12例患者的痔核和正常肛周组织,通过qRT-PCR检测临床病理样本中miR-205-5p和ERBB3的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p与ERBB3的靶向关系。将miR-205-5p mimic、pcDNA-ERBB3、miR-205-5p inhibitor、sh-ERBB3、oe-ERBB3及阴性对照质粒分别或共同转染至痔疮模型大鼠和HUVEC细胞。HE、TUNEL染色观察组织病理和细胞凋亡情况,免疫组化检测ERBB3、VEGFR2蛋白定位及表达水平,Western blot检测ERBB3、VEGFR2、Cyclin D1、Cleaved-caspase 3、Bax、Bcl-2和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。MTT、划痕愈合、Transwell实验、流式细胞术、血管形成实验检测各组HUVEC细胞增殖、迁移、侵袭能力、凋亡率和血管生成量。结果 痔疮临床样本中miR-205-5p呈低表达,ERBB3呈高表达(P <0.001),miR-205-5p与ERBB3(WT)的3'UTR靶向结合(P <0.001)。miR-205-5p mimic组痔疮大鼠和HUVEC细胞中ERBB3表达量显著降低(P <0.01,P <0.001),VEGFR2(P <0.001)、Cyclin D1(P <0.01)、Bcl-2(P <0.001)、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR(P <0.001)水平显著下调,Cleaved-caspase 3和Bax水平显著上调(P <0.01),大鼠肛周组织病理状况改善,HUVEC细胞增殖、迁移和侵袭力均降低(P <0.001),凋亡率升高(P <0.001),血管生成数量及分支减少(P <0.001),pcDNAERBB3逆转了这一效应(P <0.001)。结论 miR-205-5p能通过靶向抑制ERBB3表达,下调PI3K/AKT/mTOR通路活性,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,减少血管生成,从而缓解痔疮进展。

miR-205、血清淀粉样蛋白A联合检测在自发性早产早期评估中的价值

目的探讨miR-205、血清淀粉样蛋白A(SAA)联合评估早期自发性早产的价值。方法选取2019年1月至2021年12月于我院建档并随访至分娩的自发性早产孕妇137例(早产组)和正常分娩孕妇165例(对照组)为研究对象,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定血清中miR-205水平,GenruiPA300全自动特定蛋白分析仪检测SAA浓度,分析二者评估早期自发性早产的价值。结果早产组miR-205、SAA分别为(1.51±0.43)RQ,65.19(33.66,126.62)mg/L,显著高于对照组[(0.73±0.21)RQ,8.66(5.34,11.95)mg/L],差异有统计学意义(t=19.404,Z=-10.179,均P<0.05)。miR-205、SAA评估早期自发性早产的曲线下面积分别为0.954、0.885,miR-205曲线下面积较大,二者联合诊断价值最高,曲线下面积为0.971。结论miR-205评估早期自发性早产价值较高,临床可联合检测miR-205、SAA以提高评估效能。

MiR-205-3p靶向PRMT5改善P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡

目的:研究miR-205-3p对P.g-LPS所致HUVECs炎症反应和凋亡的影响及调控机制。方法:利用P.g-LPS刺激HUVECs构建细胞损伤模型,实验分为Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-205组、LPS+si-NC组、LPS+si-PRMT5组、LPS+miR-205+pc-NC组和LPS+miR-205+pc-PRMT5组,RT-qPCR和Western blot检测miR-205-3p、PRMT5和凋亡蛋白表达;ELISA检测炎症因子表达;Tunel染色和流式细胞术检测HUVECs凋亡;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-205-3p和PRMT5的靶向关系。结果:P.g-LPS刺激HUVECs后,炎症因子表达和凋亡率显著升高,miR-205-3p下调,PRMT5上调(P <0.05)。miR-205-3p可以抑制PRMT5表达,且过表达miR-205-3p和PRMT5低表达均可以降低炎症因子表达和降低细胞凋亡率(P <0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miR-205-3p可靶向抑制PRMT5的表达(P <0.05)。且过表达PRMT5可明显逆转过表达miR-205-3p对炎症反应和凋亡的抑制作用(P <0.05)。结论:P.g-LPS促进HUVECs炎症反应和凋亡;miR-205-3p靶向负调控PRMT5表达来改善P.g-LPS诱导的HUVECs炎症反应和凋亡。

皮肤恶性黑色素瘤组织miR-205、miR-367表达及其临床意义

目的探讨皮肤恶性黑色素瘤(CMM)组织中miR-205、miR-367的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法选取2013年5月至2019年12月我院收治的85例CMM患者术中切除的肿瘤组织作为CMM组,另选取同期于本院治疗的80例皮肤良性色素痣患者的痣组织标本作为对照组。采用qRT-PCR法检测miR-205、miR-367的表达水平。收集CMM患者的临床病理资料,分析miR-205、miR-367表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法绘制患者术后3年的生存曲线,采用Log-rank检验分析患者生存率。COX比例风险回归模型分析预后的影响因素。结果CMM组患者miR-205表达水平低于对照组(P<0.05),miR-367表达水平高于对照组(P<0.05)。miR-205低表达组患者溃疡、临床分期高、肿瘤侵袭、KPS评分低、原发灶厚、Clark分级高、淋巴结转移的比例高于miR-205高表达组(P<0.05),miR-367高表达组患者以上指标比例高于miR-367低表达组(P<0.05)。随访3年,中位时间为28.3个月,失访1例。Kaplan-Meier生存曲线显示,miR-205高表达组患者3年生存率高于miR-205低表达组(P<0.05);miR-367低表达组患者3年生存率高于miR-367高表达组(P<0.05)。COX多因素分析显示,临床分期高、KPS评分低、Clark分级高、淋巴结转移及miR-367表达升高为患者预后的危险因素,miR-205表达升高为其保护因素(P<0.05)。结论CMM组织中miR-205低表达,miR-367高表达,且均与患者溃疡、临床分期高、肿瘤侵袭、KPS评分低、原发灶厚、Clark分级高、淋巴结转移和预后不良有关,可作为CMM患者预后评估的潜在标志物。

丙型肝炎患者血清miR-155、miR-205-5p水平变化及诊断价值

目的探讨丙型肝炎患者血清miR-155和miR-205-5p表达水平的变化及临床意义。方法收集丙型肝炎患者141例,根据基因分型将其分为丙型肝炎病毒(HCV)-1b组(92例)和非HCV-1b组(49例),另取同期于本院进行体检的健康志愿者141例为对照组。比较3组一般资料、生化指标及血清miR-155、miR-205-5p水平;根据肝炎活动度分级,将丙型肝炎患者分为G0、G1、G2、G3、G4级,比较5组血清miR-155、miR-205-5p水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-155、miR-205-5p诊断丙型肝炎患者肝炎活动度为G1—G4级的临床价值。结果HCV-1b组和非HCV-1b组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平均高于对照组,血清白蛋白(ALB)水平低于对照组(P<0.05);对照组、非HCV-1b组和HCV-1b组血清miR-155水平依次升高,血清miR-205-5p水平依次降低(P<0.05);随着肝炎活动度分级的增加,血清miR-155水平依次升高,miR-205-5p水平依次下降(P<0.05);miR-155、miR-205-5p以及两者联合诊断丙型肝炎患者肝炎活动度为G1—G4级的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.793和0.913,联合优于二者各自单独诊断(P<0.05)。结论丙型肝炎患者血清miR-155水平上升,miR-205-5p水平下降,两者联合对肝炎活动度为G1—G4级的诊断具有较高效能。

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的:探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法:采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为:对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低(P<0.05);与si-NC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.05);与miR-NC+模型组比较,miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleavedcaspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05);lncRNA CTBP1-AS2可负调控miR-205-5p表达;与si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miRNC+模型组比较,si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平均明显升高(P<0.05)。结论:干扰lncRNA CTBP1-AS2表达可通过促进miR-205-5p表达抑制细胞凋亡及炎症反应,从而减轻IL-1β诱导的大鼠髓核细胞损伤。

miR-205通过JAK2/STAT3信号通路影响三阴性乳腺癌细胞的体外转移活性

目的探究miR-205与JAK2/STAT3在三阴性乳腺癌发展中的作用关系,以期为三阴性乳腺癌的治疗提供新思路。方法使用实时荧光定量PCR法和Western印迹检测癌组织和癌旁组织中miR-205和JAK2的表达水平。用miR-205 mimic、miR NC、pcDNA3.1 JAK2和pcDNA3.1 NC转染MDA-MB-231细胞后,Western印迹实验检测JAK2途径蛋白的表达。划痕实验检测MDA-MB-231细胞的迁移情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,集落形成实验分析MDA-MB-231细胞的生长能力,流式细胞术分析MDA-MB-231细胞凋亡情况,荧光素酶报告基因实验分析miR-205和JAK2的相互作用情况。结果在三阴性乳腺癌组织中,miR-205表达水平降低,JAK2的表达水平升高。通过在MDA-MB-231细胞实验中过表达miR-205后,三阴性乳腺癌细胞的生长、侵袭和转移能力均受到抑制,同时凋亡率显著增加。另外,在MDA-MB-231细胞实验中过表达JAK2后,三阴性乳腺癌细胞的生长、侵袭和转移能力均增加,同时凋亡率显著降低。荧光素酶报告基因实验发现,miR-205能够靶向抑制JAK2活性。结论miR-205能够靶向调控JAK2/STAT3途径,进而抑制三阴性乳腺癌细胞的生长、侵袭和转移,并同时促进三阴性乳腺癌细胞凋亡。

miR-205和张力蛋白同源缺失基因在食管癌组织中的表达及与根治术后预后的关系

目的探讨miR-205与10号染色体磷酸酶和张力蛋白同源缺失基因(PTEN)在食管癌组织中的表达及与根治术后预后的关系。方法2018年9月~2019年9月收治的食管癌病人78例均行根治术,收集癌旁组织和癌组织标本,采用荧光定量PCR法检测癌旁组织和癌组织miR-205、PTEN表达,分析食管癌病人癌组织miR-205、PTEN表达水平与病理特征的关系,所有病人随访至2022年9月30日,采用Kaplan-Meier分析食管癌病人癌组织miR-205、PTEN表达与预后的关系。结果食管癌病人癌组织miR-205表达水平高于癌旁组织,PTEN表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);食管癌病人癌组织miR-205表达水平与PTEN表达水平呈负相关(r=-0.397,P<0.001);淋巴结转移、低分化、Ⅲ~Ⅳ期食管癌病人癌组织miR-205表达水平分别高于无淋巴结转移、高中分化、Ⅰ~Ⅱ期病人,差异有统计学意义(P<0.05),PTEN表达水平分别低于无淋巴结转移、高中分化、Ⅰ~Ⅱ期病人,差异有统计学意义(P<0.05);所有病人随访3年,失访2例,死亡32例,存活44例,死亡病人癌组织miR-205表达水平高于存活病人,PTEN表达水平低于存活病人,差异有统计学意义(P<0.05);Kaplan-Meier分析显示,癌组织miR-205、PTEN高表达与低表达病人的生存曲线比较差异有统计学意义,癌组织miR-205低表达、PTEN高表达病人的生存率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管癌病人癌组织miR-205、PTEN表达水平与预后密切相关,检测食管癌病人癌组织miR-205、PTEN表达水平,可作为预测预后的重要参考指标。

子宫内膜异位症患者miR-21、miR-145、miR-205水平表达与不孕不育的关系及预后

目的分析子宫内膜异位症(EMS)患者微小RNA-21(miR-21)、miR-145、miR-205水平表达与不孕不育的关系及预后效果。方法选取石家庄市人民医院2020年11月至2022年4月行腹腔镜手术治疗的90例EMS患者,术后3个月评估其妊娠结局,根据妊娠结局将其分为观察组(为不孕不育组,n=39例)、对照组(为妊娠成功组,n=51例),选用实时荧光定量PCR检测miR-21、miR-205、RNA-145水平,对患者行EMS生育指数(EFI)测评;分析EMS患者miR-21、miR-145和miR-205表达水平与EFI评分的相关性;分析影响EMS患者妊娠结局的因素及给予药物治疗后的效果。结果观察组血清miR-21、miR-145、异位子宫内膜组织miR-21、miR-145水平低于对照组,血清miR-205、异位子宫内膜组织miR-205水平高于对照组(P<0.05)。EMS患者血清及异位子宫内膜组织miR-145、miR-21和miR-205表达水平与EFI评分呈负相关(P<0.001)。经多因素logistic回归分析,异位子宫内膜组织miR-21水平为EMS患者术后不孕不育的影响因素(P<0.05)。EMS患者采取药物治疗后,其异位子宫内膜组织miR-21、miR-205、miR-145水平分别为1.53±0.23、0.99±0.21、5.19±0.84。结论EMS术后不孕不育患者血清及异位子宫内膜组织miR-21、miR-205、miR-145水平表达异常,有助于早期筛查不孕不育患者,对于高危患者应积极给予治疗措施,协助患者妊娠。

血清miR-205联合sCD40L检测对老年创伤性骨折术后DVT的预测价值分析

目的:探讨血清微小RNA(miR)-205联合可溶性细胞表面分化抗原40配体(sCD40L)检测对老年创伤性骨折术后深静脉血栓(DVT)预测的价值。方法:选取2018年1月至2020年1月南阳文和骨科医院收治的创伤性骨折患者120例,根据患者术后是否发生DVT分为DVT组(n=45)和非DVT组(n=75),另选取同期50名健康志愿者为对照组。检测并比较三组血清miR-205、sCD40L水平,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-205、sCD40L单独及联合检测对老年创伤性骨折术后发生DVT的诊断灵敏度、特异度。结果:DVT组血清miR-205、sCD40L水平高于非DVT组和对照组(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清miR-205、sCD40L单独检测诊断老年创伤性骨折患者术后发生DVT的曲线下面积(AUC)分别为0.901、0.855,灵敏度分别为82.2%、75.6%,特异度均为85.3%;两者联合检测诊断老年创伤性骨折患者术后发生DVT的AUC为0.961,灵敏度为90.1%,特异度为94.7%,均高于两者单独检测。结论:血清miR-205、sCD40L在老年创伤性骨折患者术后DVT患者中表达水平显著升高,两者联合检测能提高DVT的诊断效能。

LncRNA NEAT1作为ceRNA解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用

目的探讨LncRNA NEAT1作为ceRNA解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用。方法培养MH-S肺巨噬细胞,转染siCtrl、silncRNA NEAT1、silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂后,qRT-PCR检测E2F1的mRNA转录水平,WB检测E2F1的蛋白水平;并用RIP和RNA pull-down检测lncRNA NEAT1和miR-205-5p的结合情况。建立矽肺和对照小鼠模型,并尾静脉注射小鼠模型(siCtrl、silncRNA NEAT1、silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂),qRT-PCR检测E2F1的mRNA转录水平,WB检测E2F1的蛋白水平。结果与siCtrl组(1.15±0.10)比较,转染silncRNA NEAT1后E2F1表达(0.38±0.08)下调;与silncRNA NEAT1组比较,转染silncRNA NEAT1+miR-205-5p抑制剂后E2F1表达(0.58±0.10)上调,差异有统计学意义(P<0.01)。抗AGO2抗体可以将lncRNA NEAT1沉淀下来,表明lncRNA NEAT1可以与AGO2形成复合物,竞争性结合miR-205-5p。与NEAT1-Mut组(1.04±0.05)、NEAT1-NC组(0.99±0.04)比较,NEAT1处理后miR-205-5p(3.90±0.10)显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA NEAT1可作为ceRNA,解除miR-205-5p对E2F1的靶向作用。

VEGF和miR-205及靶蛋白Ezrin和LaminA/C在卵巢癌中的表达及意义

目的:分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),miR-205,Ezrin,Lamin A/C在卵巢癌组织中的表达及意义。方法:采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测卵巢癌患者和正常女性血清中VEGF的含量;免疫组织化学检测上皮性卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中血管内皮细胞生长因子受体-1(vascular endothelial cell growth factor receptor-1,VEGFR-1),VEGFR-2,Ezrin,Lamin A/C蛋白的表达情况和CD31所标记的微血管密度(microvessel density,MVD);采用荧光定量PCR方法检测卵巢上皮性癌组织、卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中miR-205,Ezrin和Lamin A/C的相对表达量。结果:VEGF在上皮性卵巢癌患者血清中的表达水平为(116.10±11.94),高于正常女性(40.04±4.97,P<0.05);VEGFR-1和VEGFR-2在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达率分别为75.9%和91.4%,高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的阳性表达率(P<0.05),VEGFR-1和VEGFR-2在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);MVD在上皮性卵巢癌组织中的计数为(7.56±0.51),高于正常卵巢组织(1.22±0.56,P<0.05),MVD在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-205在上皮性卵巢癌组织中的相对表达量为(0.106±0.035),高于正常卵巢组织中的相对表达量(0.0007±0.0005,P<0.05),miR-205在卵巢良性肿瘤组织中的相对表达量为(0.0002±0.0003),高于正常卵巢癌组织中的相对表达量,但差异无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学结果显示:Ezrin和Lamin A/C在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率分别为51.7%和60.3%,低于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的阳性表达率(P<0.05),Ezrin和Lamin A/C在卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR结果显示:Ezrin和Lamin A/C在上皮性卵巢癌组织中的相对表达量低于正常卵巢组织中的相对表达量(P<0.05);Ezrin和Lamin A/C在卵巢良性组织中的相对表达量高于在上皮性卵巢癌组织,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:VEGF在上皮性卵巢癌患者血清中表达上调;miR-205在上皮性卵巢癌组织中表达上调;差异蛋白Ezrin和Lamin A/C在上皮性卵巢癌组织中表达下调,提示VEGF和miR-205及靶蛋白Ezrin和Lamin A/C与卵巢癌的侵袭、转移相关。

长链非编码MALAT-1调控miR-205的表达影响非小细胞肺癌细胞的生长和迁移

目的:探讨在非小细胞肺癌中,LncRNA MALAT-1与miR-205的相互关系,以及影响肺癌细胞生物学行为的机制。方法:q PCR检测不同非小细胞肺癌中LncRNA MALAT-1的表达情况;双荧光素酶报告基因检测MALAT-1与miR-205的相互作用;Transwell侵袭实验和划痕实验检测抑制MALAT-1后肺癌细胞侵袭能力的变化,以及抑制miR-205的表达后肺癌细胞迁移和侵袭能力的恢复情况;裸鼠皮下成瘤检测抑制LncRNA MALAT-1后肺癌细胞体外成瘤体积和质量变化。结果:与其他肺癌细胞株相比,A549细胞中MALAT-1表达最高,miR-205的表达水平最低;双荧光素酶实验证实MALAT-1能与miR-205的3'UTR特异性结合,可以调控miR-205的表达与活性;抑制MALAT-1的表达后可以降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力;抑制miR-205的表达水平过后,肺癌细胞的迁移和侵袭能力相对增强;抑制MALAT-1的表达后,荷瘤小鼠的肿瘤体积和重量都明显减小。结论:MALAT-1可以调控miR-205的表达影响肺癌细胞A549的侵袭和迁移能力。

miR-205通过下调ZEB1和ZEB2表达抑制肾小管上皮细胞转分化

目的探讨miR-205在肾小管上皮细胞转分化的作用机制。方法将miR-205 mimics和scrambled control分别转染HK-2转分化细胞株,采用real-time q PCR检测miR-205和ZEB1、E-cadherin、α-SMA mRNA的表达水平;运用Western blotting检测ZEB1、ZEB2、E-cadherin、α-SMA的表达水平。通过细胞免疫组化检测β-catenin的异位表达情况和E-cadherin的表达情况。结果miR-205 mimics转染HK-2转分化细胞株后,ZEB1和ZEB2的表达水平较高糖组得到大幅下调(P<0.01),而E-cadherin的表达水平较高糖组显著提高(P<0.01),同时间质细胞特征分子α-SMA的表达水平显著降低(P<0.01)。miR-205 mimics也显著抑制了HK-2转分化过程中β-catenin异位表达,在维持上皮细胞的形态方面也起着重要的作用。结论 miR-205可通过下调ZEB1和ZEB2的表达,抑制了肾小管上皮间质转分化进程。

miR-184及miR-205在绵羊不同生长时期毛囊及其他组织中的表达研究

为了研究miR-184及miR-205在绵羊毛囊发育过程中的作用,本研究以绵羊为研究材料,检测了miR-184及miR-205在毛囊3个发育时期及不同组织中的表达情况,进行了基因组定位及前体预测,并预测了可能的靶基因及调控的基因通路。结果发现,miR-184的表达量从毛囊生长期到衰退期呈逐步上升的趋势,而miR-205则表现为先上升后下降,其在衰退期表达量最高。2个microRNA在绵羊的多个组织中均有表达。两者的候选靶基因涉及15个基因通路,可能通过Wnt通路调控毛囊的生长周期。

卵巢癌患者血浆miR-205、miR-212及miR-429的水平分析及意义

目的探讨卵巢癌患者血浆miR-205、miR-212及miR-429水平,分析3者与卵巢癌临床病理学特征的关系。方法收集本院收治的71例上皮性卵巢癌患者未经治疗前的血浆标本(上皮性卵巢癌组),采用实时定量RT-PCR(qRTPCR)法检测以上标本的miR-205、miR-212及miR-429水平,收集卵巢癌患者的临床病理学参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移情况),比较不同miR-205、miR-212及miR-429水平的临床病理参数分布差异,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价血浆miR-205、miR-212及miR-429水平在卵巢癌诊断中的临床价值。同时选取同期的68例女性健康体检者(健康对照组)及66例良性卵巢肿瘤患者(良性卵巢肿瘤组)的血浆标本作对照。结果上皮性卵巢癌组的血浆miR-205水平高于良性卵巢肿瘤组和健康对照组,但miR-212和miR-429水平低于良性卵巢肿瘤组和健康对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);上皮性卵巢癌组中的miR-205水平与年龄、临床分期、分化程度及淋巴结转移有关,miR-212水平与临床分期、分化程度有关,miR-429水平与临床分期、淋巴结转移有关,以上差异均有统计学意义(P<0.05);卵巢癌患者血浆miR-205水平与miR-212及miR-429均呈负相关(r=-0.572、-0.325),miR-212与miR-429呈正相关(r=0.473),差异均有统计学意义(P<0.05);血浆miR-205、miR-212及miR-429诊断卵巢癌的AUC、灵敏度和特异度分别为0.915、92.1%和86.2%,0.944,87.3%和91.0%,0.905、88.5%和83.6%。结论卵巢癌患者血浆中miR-205呈高表达,miR-212和miR-429呈低表达,与临床病理学参数有关,且在卵巢癌诊断中有一定的价值,可用于卵巢癌的辅助诊断和病情评估。

非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p水平及其临床意义

目的:探讨非小细胞肺癌患者外周血有核细胞miR-205-5p的表达水平是否可作为分子标志物。方法:收集昆明医科大学第三附属医院2011年6月至2012年6月非小细胞肺癌首诊患者60例,其中无远处转移患者30例,有远处转移患者30例。另外收集健康志愿者30例作为对照组。qPCR技术检测人支气管上皮细胞BEAS-2B、云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90、云南宣威肺腺癌细胞XWLC-05以及人外周血有核细胞的表达水平。分析外周血有核细胞miR-205-5p的表达水平与非小细胞肺癌患者血清标志物水平、TNM分期、淋巴结转移、远处转移等临床病理参数的相关性。结果:miR-205-5p在BEAS-2B细胞中表达水平低(0.820 8±0.255 3),而在YTMLC-90(17.507 2±1.906 3)和XWLC-05(5.725 2±1.012 0)细胞中表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);miR-205-p在健康人外周血中的表达水平显著低于无转移的以及转移的非小细胞肺癌患者(1.073 0 vs3.658 8、19.6324,均P<0.01)。外周血有核细胞miR-205-5p的阳性表达率与非小细胞肺癌患者性别、年龄、淋巴结转移、病理类型和血清肿瘤标志物水平(CEA、CA125、CA242)无关(P>0.05),而与患者远处转移、TNM分期、血清肿瘤标志物CA153水平明显相关(P<0.01)。结论:miR-205-5p表达水平异常升高可能作为非小细胞肺癌患者转移相关的分子标志物。

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P<0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-205在ITP患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的：研究micro-RNA（miR-205）在原发性免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia，ITP）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）中的表达和意义。方法收集43例 ITP患者和38例健康人的外周静脉血2 ml，分离PBMC，提取细胞总 RNA，逆转录合成 cDNA，以 U6为内参，应用实时荧光定量 PCR（Real time PCR）的方法检测miR-205的表达量；分析miR-205与血小板计数结果之间的相关性。结果 ITP初诊患者（Naive ITP） PBMC miR-205的表达水平与健康对照组相比上调（1.81±0.48 vs 0.92±0.25，t＝10.31，P＜0.01）；治疗后不完全缓解组（incmplete remissiongroup，IR group）和初诊患者相比，miR-205的表达水平差异无统计学意义（P＝0.112），和正常对照组相比，则表达升高（1.63±0.65 vs 0.92±0.25，t＝7.2，P＜0.01）；14例治疗后完全缓解组（complete remission group，CR group）治疗后（After treatment）PBMC miR-205的表达低于治疗前（before treatment）的表达水平（1.07±0.43 vs 1.91±0.34，t＝5.68，P＜0.01）；ITP患者PBMC中miR-205的表达量与血小板计数呈负相关（r＝－0.0696，P＜0.05）。结论miR-205在 ITP初诊患者PBMC中高表达，而治疗完全缓解后表达水平又降低，并且表达水平与血小板数量呈负相关，表明其可能与 ITP的发生发展相关，或许会成为 ITP诊疗新的标志物。