miR-20a-5p调控NFKBIB对人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤增殖的影响

目的探讨miR-20a-5p对人肾母细胞瘤细胞系WiT49裸鼠移植瘤的影响及作用机制。方法从GEO数据库下载基因表达芯片,应用GEO2R获得差异基因miR-20a-5p;通过cBioPortal数据库获得与miR-20a-5p表达具有正相关关系的NF-κB基因;通过targetscan数据库预测miR-20a-5p靶基因可能为NF-κB转录因子抑制蛋白家族的NFKBIB,并使用双荧光素酶实验进行验证;体外培养肾母细胞瘤细胞系WiT49,采用miR-20a-5p模拟物及其抑制基因构建慢病毒载体分别转染至WiT49细胞;将12只裸鼠随机分为3组,WiT49模型组、WiT49-miR-20a-5p过表达组、WiT49-miR-20a-5p敲低组;裸鼠成瘤实验检测各组瘤块质量及体积;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组瘤块中miR-20a-5p、NFKBIB及NF-κB表达情况;通过CCK-8细胞增殖实验验证各组瘤细胞增殖情况。结果miR-20a-5p在肾母细胞瘤中高表达,且与NF-κB表达呈正相关,miR-20a-5p与NFKBIB具有相互结合位点且存在结合作用;裸鼠成瘤实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组瘤块体积及质量较WiT49模型组均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组中miR-20a-5p及NF-κB表达均高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p过表达组中NFKBIB表达低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8细胞增殖实验中WiT49-miR-20a-5p过表达组细胞24及48 h吸光度高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p敲低组细胞24、48及72 h吸光度均低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-20a-5p可能是通过调控NFKBIB激活NF-κB通路促进人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤生长。

红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响

目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。

贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响研究

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向。本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响。方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率。本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061)。结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%)。观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组。观察组治疗后的CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著。

膀胱癌组织miR-20a-5p、NR4A3表达及其与患者临床病理特征、预后的关系

目的分析膀胱癌(BC)组织miR-20a-5p、核受体亚家族4成员3(NR4A3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取2016年12月—2019年1月曲靖市第一人民医院泌尿外科行手术治疗BC患者30例,收集其膀胱癌组织及相应的癌旁组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BC癌组织中miR-20a-5p、NR4A3的表达水平,并分析miR-20a-5p、NR4A3表达与BC临床病理特征的关系;Kaplan-Meier曲线分析miR-20a-5p、NR4A3与BC患者预后的关系;Cox风险比例回归模型评估BC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,BC癌组织中miR-20a-5p表达上升(t/P=7.013/<0.001),NR4A3表达下降(t/P=9.658/<0.001)。TargetScan网站显示,miR-20a-5p与NR4A3存在靶向关系,且Pearson相关性分析显示,BC癌组织中miR-20a-5p与NR4A3表达呈负相关(r/P=-0.599/<0.001)。病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者miR-20a-5p高于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者(t/P=2.159/0.040、2.157/0.040、2.403/0.023),病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者NR4A3表达显著低于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(t/P=3.421/0.002、5.445/<0.001、2.849/0.008)。BC患者3年总生存率为63.33%,miR-20a-5p高表达组3年生存率低于低表达组(χ^(2)/P=4.474/0.034),而NR4A3低表达组低于高表达组(χ^(2)/P=9.853/0.002);miR-20a-5p高表达是影响BC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=2.028(1.764~2.895)]。结论BC癌组织中miR-20a-5p表达上升,NR4A3表达下降,与BC病理分级、淋巴结转移、TNM分期及预后有关,且miR-20a-5p高表达为BC患者预后的独立危险因素。

LncRNA HOTAIR通过靶基因miR-20a-5p调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制研究

目的:探讨lnc RNA HOTAIR通过靶基因mi R-20a-5p对淋巴瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制研究。方法:合成HOTAIR si RNA和si RNA NC质粒后,分别转染淋巴瘤Raji细胞,RT-q PCR检测HOTAIR的m RNA表达,分别通过CCK-8实验、Transwell和细胞划痕愈合实验检测Raji细胞的增殖、侵袭和迁移情况。mi Rcode软件预测lnc RNA HOTAIR的靶基因,并通过双荧光素酶实验分析HOTAIR与靶基因的关系。合成mi R-20a-5p inhibitor和inhibitor NC后,瞬时转染Raji细胞,RT-q PCR检测mi R-20a-5p表达,分析下调mi R-20a-5p对Raji细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。用lnc RNA HOTAIR过表达质粒和mi R-20a-5p模拟物同时转染Raji细胞,分析Raji细胞的增殖、侵袭和迁移能力。过表达或下调mi R-20a-5p后,分析JAK/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果:转染HOTAIR si RNA后Raji细胞中HOTAIR表达降低(P<0.01),转染mi R-20a-5p inhibitor后Raji细胞中mi R-20a-5p表达降低(P<0.01);HOTAIR与mi R-20a-5p存在靶向及负调控关系(r=-0.826);沉默HOTAIR促进mi R-20a-5p表达,抑制Raji细胞增殖、侵袭和迁移;下调mi R-20a-5p表达促进Raji细胞增殖、侵袭和迁移。上调mi R-20a-5p可逆转过表达HOTAIR对Raji细胞增殖、侵袭和迁移的促进作用。下调mi R-20a-5p表达激活了细胞内JAK/STAT3信号通路。结论:HOTAIR通过靶向mi R-20a-5p影响淋巴瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与JAK/STAT3信号通路激活有关。

外泌体miR-20a-5p调控Sp1/CD147信号通路促进非小细胞肺癌的骨转移

目的探究外泌体miR-20a-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)骨转移的调控作用及机制。方法提取并鉴定16HBE、A549、PC9、H1299细胞以及转染miR-20a-5p mimic和miR-NC的A549细胞所分泌的外泌体。qRT-PCR检测各种细胞及外泌体中miR-20a-5p的表达。将A549和RAW264.7细胞分为PBS组、16HBE exo组、A549 exo组、miR-NC exo组和miR-20a-5p exo组。Transwell小室检测A549细胞迁移和侵袭能力,TRAP染色检测破骨细胞分化。Western blot检测各组RAW264.7细胞Sp1和CD147的表达。6周龄的雌性Balb/c裸鼠随机分为5组,分别注射PBS(A组)、16HBE exo(B组)、A549 exo(C组)、miR-NC exo(D组)和miR-20a-5p exo(E组)外泌体4周,构建NSCLC骨转移的小鼠模型;HE染色观察各组小鼠骨转移情况。结果透射电镜下观察到A549 exo、PC9 exo、H1299 exo、16HBE exo为具有双层膜的囊泡样结构,粒径在30~100 nm,且均表达CD9、CD81、HSP70标志蛋白。miR-20a-5p高表达于NSCLC细胞及其外泌体。与PBS组相比,A549 exo组肿瘤细胞迁移和侵袭能力显著增加(P<0.001),RAW264.7细胞中miR-20a-5p表达上调(P<0.001),破骨细胞分化显著增加(P<0.001),Sp1和CD147表达显著增加(P<0.001)。与miR-NC exo组相比,miR-20a-5p exo组A549细胞迁移和侵袭能力增加(P<0.001),RAW264.7细胞中miR-20a-5p表达上调(P<0.001),破骨细胞分化显著增加(P<0.001),Sp1和CD147表达显著增加(P<0.001)。在小鼠体内实验中,A组、B组骨组织骨小梁结构完整,组织中有少量肿瘤细胞,骨髓腔相对完整,病变较少;C组小鼠骨组织出现大量肿瘤细胞且细胞紧密排列,骨小梁显著破坏,核浆比例严重失调,病变显著增加;E组小鼠骨组织中出现大量肿瘤细胞,骨小梁破坏严重,病变较D组显著。结论外泌体miR-20a-5p可显著促进NSCLC的体内外转移,其机制可能为激活破骨细胞Sp1/CD147信号通路从而促进破骨细胞的分化。

LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴调控乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制

目的 探讨LncRNA XIST对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及机制。方法 选取正常乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、T47D和Bcap-37细胞,将不同物质转染至MCF-7、T47D细胞,设为空白组(无转染)、si-XIST组(转染si-XIST)、si-NC组(转染si-NC)、微小RNA-20a-5p(miR-20a-5p)组(转染miR-20a-5p mimics)及miR-NC组(转染miR-NC)。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。采用荧光素酶报告基因实验验证LncRNA XIST与miR-20a-5p及miR-20a-5p与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的靶向关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LncRNA XIST、miR-20a-5p的表达水平。采用Western blot检测HMGA2的表达水平。结果 与MCF-10A细胞比较,MCF-7、T47D和Bcap-37细胞中LncRNA XIST表达水平升高,miR-20a-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调LncRNA XIST或上调miR-20a-5p抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡(P<0.05)。LncRNA XIST负性调控miR-20a-5p, miR-20a-5p负性调控HMGA2。结论 下调LncRNA XIST通过miR-20a-5p/HMGA2轴抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。

miR-17-5p、miR-17-3p和miR-20a-5p在胃间质瘤中表达

目的探讨miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p在胃间质瘤(gastric stromal tumor,GST)中的差异表达及其与临床病理因素的关系。方法提取正常胃组织及GST组织共72例标本的总RNA,应用Real time RT-PCR方法检测miR-17-5p、miR-17-3p及miR-20a-5p的表达,用SPSS 19.0分析其与临床病理因素的关系及3个miRNA间的相关性。结果在GST中,miR-17-3p、miR-17-5p在肿瘤组织中表达较胃正常组织低(P<0.001),但是在低危组和中高危组GST中表达差异无统计学意义(P>0.05);miR-20a-5p表达在胃正常组织、低危组和中高危组之间均有差异表达,且随着恶性度的增加而下降(P<0.001),3种miRNA的表达水平与肿瘤的侵袭、转移、年龄、肿瘤最大直径和核分裂象密切相关,而与瘤体是否破溃无关。结论 miR-17-5p、miR-17-3p、miR-20a-5p在GST中下调并相互作用可能是促进GST发生、发展因素之一。

miR-20a-5p在胰腺癌中的表达及作用机制研究

目的检测并分析胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中miR-20a-5p的表达情况及对胰腺癌细胞发生、发展的影响。方法收集16对手术切除胰腺癌患者的癌组织及对应癌旁组织、5种胰腺癌细胞株及1株正常胰腺导管上皮细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测临床标本及胰腺癌细胞株中miR-20a-5p的表达水平;通过转染miR-20a-5p mimics及miR-20a-5p inhibitor分别上调及下调胰腺癌细胞(AsPC-1、BxPC-3)中miR-20a-5p的表达水平,采用CCK-8、EdU及流式凋亡实验检测过表达及敲低miR-20a-5p后对胰腺癌细胞活力、增殖及凋亡能力的影响。结果胰腺癌组织中miR-20a-5p的表达量显著高于癌旁组织(P<0.01),5种胰腺癌细胞系中miR-20a-5p的表达量较正常胰腺细胞也明显升高(P<0.05)。CCK-8及EdU实验结果显示,过表达miR-20a-5p促进胰腺癌细胞增殖能力,反之,干扰miR-20a-5p抑制胰腺癌细胞增殖。凋亡检测结果显示,过表达miR-20a-5p抑制胰腺癌细胞凋亡能力,反之,干扰miR-20a-5p促进胰腺癌细胞凋亡。结论胰腺癌组织和胰腺癌细胞系均高表达miR-20a-5p,上调miR-20a-5p能促进胰腺癌细胞增殖及抗凋亡能力。

胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达及其临床意义

目的 检测胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达,并探讨其临床意义。方法 选取180例初诊胃癌患者(癌症组)和153名健康志愿者对照组。取外周血检测血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;比较癌症组不同临床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;癌症组随访1年,分析死亡的影响因素,评估血清miR-20a-5p、miR let-7a表达对癌症组1年内死亡的预测价值。结果 癌症组血清miR-20a-5p表达高于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR-20a-5p表达均高于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组血清miR let-7a表达低于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR let-7a表达均低于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组1年内死亡率为17.78%,Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移、血清miR-20a-5p表达、未遵医嘱治疗均是影响癌症组1年内死亡的危险因素(RR=4.076,4.100,4.845,4.968,5.924,4.768,P<0.05),血清miR let-7a表达是其保护因素(RR=0.587,P<0.05);血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合预测癌症组1年内死亡的灵敏度、AUC均高于单独预测(P<0.01)。结论 胃癌患者血清miR-20a-5p表达高,miR let-7a表达低,与临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移均有关,上述因素均可影响患者的生存率,且血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合可预测胃癌1年内死亡风险。

miR-20a-5p表达对胃粘膜相关组织淋巴瘤增殖的影响及其机制研究

目的探讨miR-20a-5p的表达对胃粘膜相关组织(MALT)淋巴瘤的增殖影响及其相关分子机制。方法收集18例人胃MALT淋巴瘤组织及邻近正常胃粘膜组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测组织中miR-20a-5p的相对表达;应用miR-20a-5p mimic和miR-20a-5p inhibitor分别转染Raji淋巴瘤细胞,以细胞增殖活性(CCK-8)实验分析miR-20a-5p对细胞的增殖的影响;通过计算机靶基因预测软件Target Scan、双荧光素酶报告基因实验及Western blot实验确定miR-20a-5p作用的可能靶基因;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中runt相关转录因子3(RUNX3)的相对表达量。结果与邻近正常粘膜组织相比,胃MALT淋巴瘤组织中miR-20a-5p的表达异常增高(P<0.05)。CCK-8实验显示,与对照组相比,miR-20a-5p mimic转染Raji淋巴瘤细胞的吸光度显著升高(P<0.05),miR-20a-5p inhibitor组吸光度显著降低(P<0.05)。生物信息学软件预测RUNX3为miR-20a-5p作用的靶基因。双荧光素酶报告实验证明miR-20a-5p与RUNX3的3’UTR区特异性结合。Western Blot实验结果显示miR-20a-5p mimic组RUNX3蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),miR-20a-5p inhibitor组RUNX3蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。MALT淋巴瘤患者标本中的RUNX3 mRNA水平均显著低于邻近胃粘膜组织(P<0.05)。人MALT淋巴瘤组织中miR-20a-5p表达与RUNX3 mRNA表达呈负相关关系(P<0.05)。结论 miR-20a-5p可促进Raji淋巴瘤细胞的增殖,其机制与下调RUNX3的表达有关。miR-20-5p在胃MALT呈低表达,与RUNX3表达呈负相关关系,miR-20-5p为MALT淋巴瘤的临床治疗提供新靶标。

针刺对CIRI大鼠缺血侧海马区miRNA表达及miR-20a-5p和miR-22-5p的影响

目的观察针刺对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠缺血侧海马区miRNA表达及miR-20a-5p和miR-22-5p的影响,以探究针刺修复CIRI的可能机制。方法60只大鼠采用随机数字表法分成正常组、假手术组(Sham组)、CIRI组及CIRI+针刺组,每组15只。CIRI组及CIRI+针刺组参照优化版Zea Longa线栓法复制大脑中动脉缺血再灌注模型;Sham组只插入线栓不阻断中动脉。Sham组及CIRI组造模后不予针刺,CIRI+针刺组造模后于人中、百会、大椎穴予针刺干预,正常组不予任何处理。分别于治疗前后行神经功能症状缺损评分观察大鼠神经症状变化;治疗后,采用TTC染色检测脑梗死面积比;基因芯片技术检测CIRI大鼠缺血侧海马区miRNA表达;qPCR检测CIRI大鼠缺血侧miR-20a-5p、miR-22-5p的表达量。结果(1)与治疗前比较,治疗后CIRI+针刺组的神经功能症状缺损评分显著下降(P<0.01),其余各组差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,与正常组及Sham组比较,CIRI组及CIRI+针刺组神经功能症状缺损评分及脑梗死面积比均显著升高(P<0.01);与CIRI组比较,CIRI+针刺组神经功能症状缺损评分及脑梗死面积比明显下降(P<0.05)。(2)基因芯片检测结果示,与正常组比较,CIRI组差异表达4个miRNA,且其中2个参与调控细胞增殖、3个参与调控细胞凋亡;与Sham组比较,CIRI组差异表达5个miRNA,且其中3个参与调控细胞增殖、1个参与调控细胞凋亡;与CIRI组比较,CIRI+针刺组差异表达16个miRNA,且其中12个参与调控细胞增殖、10个参与调控细胞凋亡。CIRI+针刺组与CIRI组改变了相同功用的miRNA,其中包括miR-20a-5p和miR-22-5p。(3)qPCR结果示,与正常组比较,CIRI组miR-20a-5p表达增加(P<0.01)、miR-22-5p表达降低(P<0.01);与Sham组比较,CIRI组miR-20a-5p表达增加(P<0.01)、miR-22-5p表达降低(P<0.05);与CIRI组比较,CIRI+针刺组miR-20a-5p表达降低(P<0.01)、miR-22-5p表达增加(P<0.05)。结论针刺能明显改善CIRI大鼠神经功能症状缺损评分及脑梗死面积比,促进脑缺血再灌注后修复,其机制可能与激发多种类、多功能miRNA的改变,特别是与下调miR-20a-5p、上调miR-22-5p的表达量,促进细胞增殖、抑制细胞凋亡功能相关。

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果HOXB13促进了A549细胞的增殖(P<0.05);生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低(P<0.05);而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高(P<0.05);细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间(P<0.05)。结论miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。

GJIC、UBE2C及miR-20a-5p在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨细胞间隙连接通讯(gap junction in-tereellular communication,GJIC)、泛素偶联酶(Ubiquitin conjugating enzyme E2C,UBE2C)及miR-20a-5p基因在胃癌组织中的表达及临床意义,为胃癌患者的临床治疗提供参考价值。方法:本研究采用便利抽样的方法,随机收集了2017年1月至2021年1月在大庆龙南医院收治的110例胃癌标本作为观察组和110例胃部粘膜标本作为对照组,采用荧光免疫检测法检测GJIC、UBE2C及miR-20a-5p基因表达状况。结果:UBE2C在胃癌患者中阳性表达率为86.36%,正常胃粘膜组织中阳性表达率为28.18%,差异具有统计学意义(χ^(2)=19.32,P=0.00);miR-20a-5p在胃癌患者中阳性表达率为89.10%,正常胃粘膜组织中阳性表达率为36.36%,差异具有统计学意义(χ^(2)=20.16,P=0.00);miR-20a-5p中的表达与患者的淋巴转移、肿瘤分期及Lauren分型呈显著相关(P<0.05);在人类正常胃部粘膜中具有较强的GJIC功能,随着胃癌细胞系恶性程度的增强细胞GJIC功能降低或缺失。多因素回归显示淋巴结转移、Lauren分型、肿瘤分期与miR-20a-5p及UBE2C表达相关(P<0.05)。结论:GJIC、UBE2C及miR-20a-5p在胃癌组织具有较高的表达性,与胃癌的发生具有较大的关联性。

HAGLROS靶向miR-20a-5p调控高糖诱导的心肌细胞增殖和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HAGLROS对高糖(HG)诱导的心肌细胞H9c2增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:H9c2细胞分为对照组(NC组,细胞正常培养)、HG组(33 mmol/L葡萄糖作用细胞24 h)、HG+si-NC组(33 mmol/L葡萄糖作用转染si-NC的细胞24 h)、HG+si-HAGLROS组(33 mmol/L葡萄糖作用转染si-HAGLROS的细胞24 h)、HG+miR-NC组(33 mmol/L葡萄糖作用转染miR-NC的细胞24 h)、HG+miR-20a-5p组(33 mmol/L葡萄糖作用转染miR-20a-5p mimics的细胞24 h)、HG+si-HAGLROS+anti-miR-NC组(33 mmol/L葡萄糖作用于共转染si-HAGLROS与anti-miR-NC的细胞24 h)和HG+si-HAGLROS+anti-miR-20a-5p组(33 mmol/L葡萄糖作用于共转染si-HAGLROS与anti-miR-20a-5p的细胞24 h),实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中HAGLROS和miR-20a-5p表达,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞术和蛋白印迹(Western blotting)分别检测细胞存活率、凋亡率及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的半胱天冬酶-3(cleaved-caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证HAGLROS与miR-20a-5p调控关系。结果:与NC组比较,HG组HAGLROS水平升高(P<0.05),miR-20a-5p水平降低(P<0.05),H9c2细胞存活率和CyclinD1蛋白水平降低(P<0.05),而细胞凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05)。与HG+si-NC组比较,HG+si-HAGLROS组H9c2细胞存活率和CyclinD1、p-PI3K和p-AKT蛋白水平升高(P<0.05),而细胞凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与HG+miR-NC组,HG+miR-20a-5p组H9c2细胞存活率和CyclinD1蛋白表达升高(P<0.05),而细胞凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+si-HAGLROS+anti-miR-NC组比较,HG+si-HAGLROS+anti-miR-20a-5p组H9c2细胞存活率和CyclinD1、p-PI3K和p-AKT蛋白表达降低(P<0.05),而细胞凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。HAGLROS在H9c2细胞中靶向负调控miR-20a-5p表达。结论:低表达HAGLROS可促进HG诱导的心肌细胞增殖且抑制细胞凋亡,其作用机制与上调miR-20a-5p表达和激活PI3K/AKT信号通路有关。

miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和组织中的表达及调控靶基因信号通路富集分析

目的观察miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,并用生物信息学方法分析其靶基因和富集的信号通路,探讨其生物学行为和功能。方法采用实时荧光定量PCR法检测miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞和正常胃黏膜细胞以及其在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其临床意义,采用mir WALK网站数据库的预测软件预测其靶基因,选择该网站10个软件中具备3个以上软件支持的靶基因,用DAVID 6.7在线富集其靶基因参与的信号通路。结果 miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞中表达上调(P均<0.05),胃癌组织相对于癌旁组织亦明显上调表达(P<0.05),miR-20b-5p表达上调与胃癌淋巴结侵袭转移以及浸润深度关系密切(P均<0.05);生物信息学分析提示,miR-20a-5p/miR-20b-5p的靶基因富集存在于肿瘤相关的多个信号通路中。结论 miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞系及组织中呈高表达,并于与淋巴结侵袭转移以及浸润深度有关,可作为胃癌潜在的生物学标志物。

miR-20a-5p通过靶向MRTFA缓解ox-LDL诱导的内皮细胞损伤

目的探讨miR-20a-5p是否可通过靶向心肌素相关转录因子A(MRTFA)缓解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法 RT-qPCR检测miR-20a-5p在不同剂量不同时间oxLDL诱导的HUVEC中的表达;MTT法、流式细胞术和Western blot检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL诱导HUVEC增殖和凋亡的影响;乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定过表达miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC中LDH释放的影响;ELISA法检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL处理的HUVEC中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和丙二醛(MDA)的影响;荧光素酶报告和Western blot实验验证miR-20a-5p与MRTFA的靶向关系。结果 miR-20a-5p的表达随着ox-LDL诱导时间和剂量的增加而逐渐下降;过表达miR-20a-5p可部分逆转ox-LDL诱导对HUVEC增殖和凋亡的影响;上调miR-20a-5p可部分修复ox-LDL诱导对HUVEC氧化应激损伤;MRTFA是miR-20a-5p的靶基因;在ox-LDL诱导HUVEC中,MRTFA过表达可逆转miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC细胞增殖和凋亡、氧化应激损伤指标的影响。结论 miR-20a-5p靶向MRTFA修复ox-LDL诱导的HUVEC损伤。

miR-20a-5p在结核分枝杆菌感染的人巨噬细胞中负向调控Jnk2基因的表达

目的分析结核分枝杆菌(Mtb)感染的人巨噬细胞中miR-20a-5p对Jnk2基因表达的影响,探究miR-20a-5p基因调控细胞内信号通路的潜在机制。方法用miR-20a-5p、miR-20a-5p抑制剂(miR-20a-5p inhibitor,简写为miR-20a-inh)以及阴性对照(negative control,NC)慢病毒(慢病毒携带绿色荧光蛋白GFP标记)分别转染人巨噬细胞THP-1,流式细胞仪分选出GFP阳性THP-1细胞并用H37Ra感染,实时定量PCR技术(qPCR)检测AKT/JNK信号通路基因Akt1、Akt2、Jnk1、Jnk2的表达。蛋白质印迹法检测H37Ra感染的GFP+THP-1细胞中总Jnk2和p-JNK的蛋白表达水平。结果在miR-20a-5p过表达的THP-1细胞中,Jnk2基因表达水平降低,当miR-20a-5p被抑制时,Jnk2基因表达水平升高。蛋白质印迹法检测蛋白质水平上的p-JNK2(p54)表达趋势与qPCR结果相一致,即与miR-20a-5p表达呈负相关。结论在基因和蛋白表达层面证实结核分枝杆菌感染人巨噬细胞后miR-20a-5p负向调控Jnk2表达。

脑卒中后认知功能障碍患者miR-20a-5p miR-29c-3p表达及相关因素

目的探讨miR-20a-5p、miR-29c-3p在脑卒中后认知功能障碍中的表达水平以及相关影响因素。方法选取河南大学第一附属医院2020-01—2022-06收入的脑卒中患者159例,根据其认知功能情况分为正常组(62例)、轻度障碍组(38例)、中度障碍组(36例)、重度障碍组(23例),测4组患者血清miR-20a-5p、miR-29c-3p水平,分析miR-20a-5p、miR-29c-3p与脑卒中后认知功能障碍关系,以miR-20a-5p、miR-29c-3p鉴别轻度、中度认知功能障碍患者界值(0.51、0.78)为分界点将97例脑卒中后认知功能障碍患者分为miR-20a-5p高表达组、低表达组与miR-29c-3p高表达组、低表达组。采用Logistic回归模型探究miR-20a-5p、miR-29c-3p高、低表达的影响因素。结果正常组miR-20a-5pmRNA表达水平<轻度障碍组<中度障碍组<重度障碍组,正常组miR-29c-3p mRNA表达水平>轻度障碍组>中度障碍组>重度障碍组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-20a-5p高表达组年龄≥68、合并高血压与糖尿病、MMSE得分<15占比显著高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-29c-3p低表达组年龄≥68、合并高血压与糖尿病、MMSE得分<15占比显著高于高表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示年龄、高血压、糖尿病、MMSE得分是miR-20a-5p、miR-29c-3p表达的影响因素(P<0.05)。结论miR-20a-5p mRNA异常高表达、miR-29c-3p mRNA异常低表达会增加脑卒中后患者认知功能障碍风险,且认知功能障碍越严重,异常表达越明显。年龄、高血压、糖尿病、MMSE得分是miR-20a-5p、miR-29c-3p表达的影响因素。

血清miR-191-5p和miR-20a-5p联合作为脑卒中后认知功能障碍诊断标志物的研究

目的观察卒中后认知障碍患者血清中miR-191-5p和miR-20a-5p变化,以探讨两者联合是否能够作为脑卒中后认知障碍的诊断标志物。方法收集36例脑卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)患者、36例脑卒中后认知正常(post-stroke cognitive normal,PSCN)患者和37例年龄匹配对照组(age-matched control,AMC)的样本。使用ROC曲线和AUC分析比较miR-191-5p和miR-20a-5p及其联合对PSCI的诊断能力。结果与PSCN和AMC相比,PSCI患者血清中,miR-191-5p和miR-20a-5p均升高,ROC曲线显示miR-191-5p的AUC(95%CI)为0.647(P<0.05),灵敏度为66.7%,特异度为55.6%;miR-20a-5p的AUC(95%CI)为0.759(P<0.05),灵敏度为77.8%,特异度为61.1%;两者联合的AUC(95%CI)为0.861(P<0.05),灵敏度为88.9%,特异度为72.2%。而且miR-191-5p和miR-20a-5p均与PSCI患者的MoCA评分相关,miR-191-5p(r=-0.488,P<0.01),miR-20a-5p(r=-0.624,P<0.01)。结论血清miR-191-5p和miR-20a-5p表达与卒中后认知功能存在显著相关性,提示miR-191-5p联合miR-20a-5p可能是PSCI的诊断标志物。