五倍子瘢痕膏对瘢痕疙瘩miR-21/mTOR信号通路相关分子表达的影响

目的观察五倍子瘢痕膏对瘢痕疙瘩miR-21/mTOR信号通路关键分子miR-21、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、10号染色体张力缺失蛋白磷酸酶(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响。方法将36只裸鼠瘢痕疙瘩模型随机分成治疗组和对照组,每组18只。治疗组涂抹五倍子瘢痕膏,对照组仅涂抹制作五倍子瘢痕膏的基质,3次/d,连续30 d。然后分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术检测治疗组、对照组及正常皮肤组中miR-21和PI3K、PTEN、Akt、mTOR的表达。结果RT-PCR检测结果显示,治疗组和正常皮肤组miR-21相对表达量差异无统计学意义(P>0.05,t=1.24),但二者与对照组相比均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,t=2.76、2.81);免疫组化检测结果显示,PI3K、Akt、mTOR在对照组中高表达,而在治疗组和正常皮肤组中低表达;PTEN在对照组中低表达,而在治疗组和正常皮肤组中高表达。结论五倍子瘢痕膏抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的机制可能与其通过抑制miR-21表达而上调PTEN表达,进而下调mTOR信号通路中PI3K、Akt、mTOR表达有关。其中PTEN是负反馈调节因子;下游的核糖体蛋白S6激酶(S6K)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(4EBP),二者均是蛋白翻译的关键调节因子。

黄芪甲苷靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR通路激活肺泡细胞自噬治疗肺纤维化

目的探究黄芪甲苷-IV(Astragaloside IV,AS-IV)靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活自噬,抑制特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)发展进程的作用机制。方法通过气管注射10 mg·kg^(-1)博莱霉素造模小鼠IPF,分别以10、20、40 mg·kg^(-1) AS-IV及5 mg·kg^(-1)醋酸泼尼松连续治疗28 d。对肺样本进行伊红美蓝,马松染色,及透射电镜观察。实时荧光定量法(qRT-PCR)或蛋白免疫印迹法(Western blot)检测样本中miR-21、P62、Beclin^(-1)、LC3B、PTEN、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR等的表达。结果醋酸泼尼松及40 mg·kg^(-1) AS-IV可显著减少肺纤维组织增生与炎性细胞浸润,抑制嗜锇性板层小体变性,促进肺泡上皮细胞中自噬体的形成,显著上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例与Beclin^(-1)、PTEN蛋白表达,下调P62、miR-21表达,并抑制mTOR与AKT的磷酸化。但AS-IV治疗对PI3K表达无明显影响。结论AS-IV通过靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活,从而激活肺泡细胞自噬逆转IPF。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的miR-24调控ox-LDL诱导的HUVECs自噬机制研究

目的探讨miR-24对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的影响及其相关机制,为进一步阐明miR-24在动脉粥样硬化(AS)中的作用提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-24的表达;应用蛋白免疫印迹法(western blot)和qRT-PCR法检测Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、p-mTOR、p-PI3K、p-Akt的蛋白和mRNA表达水平;应用透射电子显微镜技术检测细胞的自噬小体生成情况;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、细胞划痕法、Caspase-3比色法和Hoechst 33258染色法分别检测细胞活性、迁移和凋亡情况。结果应用ox-LDL诱导HUVECs后,发现HUVECs中miR-24的表达显著降低(P<0.05)。miR-24过表达可明显抑制ox-LDL诱导的HUVECs自噬(P<0.05),而miR-24低表达则会增加ox-LDL诱导的HUVECs自噬(P<0.05)。miR-24过表达可显著降低Beclin-1的表达水平,上调LC3Ⅰ/LC3Ⅱ的水平(P<0.05),同时,miR-24过表达可显著促进p-PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达(P<0.05)。此外,miR-24过表达显著抑制HUVECs的活力和迁移,增加Caspase-3活性并促进其凋亡(P<0.05)。结论miR-24的过表达可激活PI3K/Akt/mTOR信号通路而降低ox-LDL诱导的HUVECs的自噬水平并促进其凋亡,miR-24可能成为AS的潜在治疗新靶点。

PI3K/AKT/mTOR信号通路在膀胱癌中的作用

目的:分析磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路在膀胱癌中的作用。方法:选取60只SD健康雄性大鼠,采用随机数字法分为对照组、模型组和干预组,每组各20只。模型组和干预组大鼠以致癌物BBN灌胃8周建立膀胱癌模型,建模成功后,干预组大鼠注射PI3K抑制剂,连续干预6周。观察三组大鼠膀胱组织病理学变化,比较各组大鼠血清炎性因子指标、氧化应激指标、PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白表达和CK-19、CYFRA21-1水平的变化。结果:与对照组相比,模型组和干预组大鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、C反应蛋白(CRP)、丙二醛、一氧化氮、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达量、CK-19、CYFRA21-1水平升高,总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平降低(P<0.05)。与模型组相比,干预组血清TGF-β1、IL-1β、CRP、丙二醛、一氧化氮、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达量、CK-19、CYFRA21-1水平均降低,T-AOC、SOD水平升高(P<0.05)。结论:PI3K抑制剂通过PI3K/AKT/mTOR信号通路遏制膀胱癌的发展。

miR-21靶向PTEN调控AKT/FoxO1信号通路对胃癌细胞凋亡的机制研究

目的:探究miR-21靶向PTEN调控AKT/FoxO1信号通路对胃癌细胞凋亡的影响。方法:将胃癌SGC-7901细胞分为miR-NC inhibitors组(SGC-7901细胞中转染miR-NC inhibitors质粒)、miR-21 inhibitors组(SGC-7901细胞中转染miR-21 inhibitors质粒)、miR-21 inhibitors+sh-PTEN组(SGC-7901细胞中转染miR-21 inhibitors和sh-PTEN质粒);Control组(不转染任何质粒的SGC-7901细胞)。qRT-PCR检测细胞中miR-21 mRNA表达;采用CCK-8、Transwell小室法和流式细胞仪检测细胞增殖、侵袭能力和凋亡率;蛋白质印迹检测细胞中PTEN、AKT、p-AKT、PI3K、p-PI3K、FoxO1蛋白表达;双荧光素酶报告检测miR-21和PTEN的靶向关系。结果:人正常胃黏膜上皮细胞GES-1(1.00±0.10)相比,胃癌细胞SGC-7901中miR-21(1.89±0.17)表达明显升高(P<0.05)。Control组相比,miR-21 inhibitors组细胞中miR-21表达(0.83±0.10)、增殖率(45.31±4.92)%、侵袭数目(62.34±5.83)个和p-PI3K/PI3K(0.42±0.05)、p-AKT/AKT(0.51±0.05)比值均明显降低,细胞凋亡率(23.48±3.51)%、PTEN(0.98±0.10)和FoxO1(0.76±0.08)蛋白表达明显升高(P<0.0001)。pcDNA-NC组相比,pcDNA-PTEN组细胞增殖率(48.26±5.01)、侵袭细胞数(65.37±6.02)个和细胞中p-PI3K/PI3K(0.46±0.05)、p-AKT/AKT(0.55±0.06)比值均明显降低,细胞凋亡率(25.61±3.27)%及细胞中PTEN(0.91±0.09)和FoxO1(0.70±0.08)蛋白表达升高(P<0.05)。预测发现PTEN的3'UTR端与miR-21有碱基互补结合点位。miR-NC组相比,转染野生型PTEN(PTEN-WT)时miR-21组(0.32±0.03)荧光素酶活性明显降低(P<0.05)。miR-21 inhibitors组相比,miR-21 inhibitors+sh-PTEN组细胞增殖率(90.25±9.14)%和侵袭细胞数(125.69±10.31)个和细胞中p-PI3K/PI3K(0.80±0.08)、p-AKT/AKT(0.76±0.08)比值明显增加,细胞凋亡率(6.24±1.32)和细胞中PTEN(0.30±0.04)、FoxO1(0.38±0.05)蛋白表达降低(P<0.0001)。结论:敲减miR-21可靶向负调控PTEN表达,调控AKT/FoxO1信号通路,抑制胃癌细胞的增殖和侵袭,促进凋亡。

miR-21通过调节TGF-β/activin信号通路影响人骨髓间质干细胞向成骨细胞分化的机制

目的研究miR-21调控转化生长因子(TGF)-β/activin信号通路对人骨髓间质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞的影响。方法将BMSCs培养后分为空白对照组(无转染)、miR-21过表达组(转染miR-21 mimics)及miR-21敲低组(转染miR-21 inhibitor)后对细胞进行转染,TGF-β/激活蛋白(activin)信号通路上miR-21的靶基因为TGF-β受体Ⅱ(TGF-βR2)、TGF-β1,RT-PCR检测miR-21、TGF-βR2、TGF-β1、骨特异性转录因子(Runx2)、成骨细胞特异基因(Osterix)mRNA;Western印迹检测TGF-βR2、TGF-β1、Runx2、Osterix蛋白;检测成骨细胞钙沉积、碱性磷酸酶(ALP)活性及骨桥蛋白(OPN)的表达。结果与空白对照组相比,miR-21过表达组中TGF-β1与TGF-βR2 mRNA及蛋白的表达均显著上升(P<0.05),而miR-21敲低组中TGF-β1与TGF-βR2 mRNA及蛋白的表达显著降低(P<0.05)。miR-21与TGF-β1、TGF-βR2基因均呈正相关(r=0.568,P<0.05;r=0.627,P<0.05)。与miR-21敲低组、空白对照组对比,miR-21过表达组可以显著提高ALP的活性、相同时间内钙沉积较明显并且其PCR扩增产物也较长。miR-21过表达组中Rumx2与Osterix mRNA及蛋白的表达较对照组显著上升(P<0.05),而miR-21敲低组中成骨细胞Rumx2与Osterix mRNA及蛋白的表达较空白对照组和miR-21过表达组显著降低(P<0.05)。miR-21与成骨细胞相关基因Rumx2、Osterix均呈正相关(r=0.627,P<0.05;r=0.516,P<0.05)。结论miR-21能够促进BMSCs分化为成骨细胞,其机制可能是通过上调TGF-β/activin信号通路中TGF-β1、TGF-βR2的表达。

利多卡因通过调控miR-520a/AKT/mTOR/p70S6K通路对SH-SY5Y细胞自噬的影响

目的探讨利多卡因通过调控自噬对神经毒性的影响及相关分子机制。方法培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y,MTT实验和乳酸脱氢酶(LDH)测定检测利多卡因对SH-SY5Y细胞活力和毒性的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-520a的相对表达;Western blot检测利多卡因对AKT/mTOR/p70S6K通路相关蛋白和自噬相关蛋白的影响;细胞免疫荧光染色评估LC3B的表达;生物信息学预测AKT1是miR-520a的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a和AKT1之间的相互作用。结果与对照组比较,SH-SY5Y细胞活力受到明显的抑制,且呈时间和剂量依赖性,LDH的释放量随利多卡因剂量增多而增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低,LC3B的荧光强度显著增强,miR-520a的表达显著增加,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-520ainhibitor组WT-AKT1的荧光素酶活性显著升高(P<0.05),而MUT-AKT1的荧光素酶活性没有变化(P>0.05)。与利多卡因组+NC inhibitor组比较,利多卡因+miR-520a inhibitor组SH-SY5Y细胞中miR-520a水平降低,LDH的释放量显著降低,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著降低,p62蛋白表达显著升高,LC3B的荧光强度显著降低(P<0.05)。结论利多卡因通过上调miR-520a的表达和抑制AKT/mTOR/p70S6K信号通路促进神经细胞自噬。

miR-21通过NF-κB信号通路影响血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞炎症因子表达

目的探讨miR-21对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾小球系膜细胞增殖和炎症因子的影响。方法以AngⅡ诱导体外培养人肾小球系膜细胞HMC,在AngⅡ诱导的HMC细胞中转染miR-21模拟物。采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,Western blot检测NF-κB信号通路核心分子IκBα和p65蛋白及磷酸化水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。采用NF-κB信号通路激活剂PMA处理,检测对炎症因子表达的影响。结果 AngⅡ组HMC细胞中miR-21表达水平较Control组降低(P<0.05),细胞增殖能力明显升高(P<0.05),炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达升高(P<0.05)。进一步在AngⅡ组过表达miR-21后,IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05),细胞增殖能力明显降低(P<0.05),IL-6、IL-1β和TNF-α的表达亦降低(P<0.05)。NF-κB信号通路激活剂处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α的含量较AngⅡ+miR-21组升高(P<0.05)。结论过表达miR-21能够通过NF-κB信号通路调控AngⅡ诱导的HMC细胞增殖和炎症因子的表达。

基于mTOR信号探究miR-183-5p对肝癌细胞血管生成及VEGF表达的影响

目的肝癌是一种高发病率和高死亡率的常见肿瘤。miR-183-5p在多种肿瘤中被证明可促进血管形成。然而,miR-183-5p在肝癌血管形成中的作用机制仍有待进一步探索。因此本文将探究miR-183-5p影响肝癌血管形成的分子调控机制。方法生信分析miR-183-5p在肝癌组织中的表达水平。qRT-PCR检测miR-183-5p在肝癌细胞系中的表达。细胞功能实验探究miR-183-5p异常表达对肝癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和HUVECs细胞血管形成的影响。Western blot检测VEGFA、mTOR的表达。ELISA检测肝癌细胞分泌的VEGFA表达。mTOR通路激活剂MHY1485处理进一步探究miR-183-5p介导mTOR信号通路对肝癌细胞血管形成的影响。结果本研究发现miR-183-5p在肝癌组织和细胞中高表达,沉默miR-183-5p可明显抑制进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭以及HUVECs细胞血管形成。同时,沉默miR-183-5p可以抑制mTOR信号通路的活性。mTOR通路激活剂MHY1485处理可以逆转沉默miR-29c-3p对HUVECs血管形成的抑制作用。结论本研究证实了miR-183-5p通过激活mTOR信号通路促进了肝癌细胞血管形成的分子机制,本研究进一步完善了我们对肝癌细胞血管形成的认识,以及为开发新型肝癌治疗策略提供了新思路。

miR-21调控STAT3信号通路对肾母细胞瘤细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-21调控STAT3信号通路来对肾母细胞瘤细胞的增殖及迁移产生影响。方法RT-PCR测定人肾母细胞瘤组织以及癌旁组织中miR-21的表达。将人肾母细胞瘤细胞分为空白组、si-miR-21组(转染si-miR-21)和simiR-21 NC组(转染si-microRNA-21 NC),Western blot检测STAT3信号通路中相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达,MTS实验检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞的凋亡,Transwell实验检测迁移能力。结果与癌旁组织相比,人肾母细胞瘤组织的miR-21相对表达量明显升高(P<0.05)。细胞转染后,3组p-STAT3、Bcl-2、Bcl-xl相对表达量、A490吸光度值以及细胞迁移数差异均有统计学意义(P<0.001),与空白组比较,si-miR-21组升高(P<0.05),si-miR-21 NC组下降(P<0.05)。三组细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.001),与空白组比较,si-miR-21组下降(P<0.05),simiR-21 NC组升高(P<0.05)。转染细胞miR-21与p-STAT3、Bcl-2及Bcl-xl呈正相关(r=0.824、0.778、0.837,P<0.001)。结论过表达miR-21促进肾母细胞瘤细胞的增殖及迁移作用,其机制可能是通过上调STAT3信号通路来实现。

miR-184靶向AGO2调控AKT/mTOR信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的研究miR-184在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其相关机制。方法收集2015年1月至2017年1月南阳市中心医院87例膀胱癌患者的手术切除标本,采用qRT-PCR检测膀胱癌及癌旁组织中miR-184的表达;通过生物信息学方法预测miR-184的靶基因并采用双荧光素酶实验及免疫荧光进行验证。在人膀胱癌细胞系T24中转染miR-184过表达质粒,MTT、Transwell侵袭和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blot检测AKT/mTOR通路蛋白的表达。结果miR-184在膀胱癌组织中的相对表达水平1.238±0.026明显低于癌旁组织2.601±0.054,差异有统计学意义(t=22.57,P<0.01);且其表达水平与膀胱癌患者的TNM分期(t=-5.61,P<0.001)、淋巴结转移(t=-2.35,P=0.011)及组织学分级存在明显相关(t=2.171,P=0.033)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-184能直接靶向结合AGO2基因3′-UTR。体外实验结果表明,转染miR-184模拟物后,膀胱癌细胞T24中AGO2 mRNA和蛋白的表达水平明显下调,细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,p-mTOR、p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-184在膀胱癌组织中低表达,上调miR-184表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与AKT/mTOR信号通路的调节有关。

miR-21介导的转化生长因子-β信号通路在子宫内膜异位症发病中的作用

子宫内膜异位症(EMS)发病机制尚不明确。纤维化的发生可能是EMS发生机制的一个重要方面。研究发现,miR-21在致纤维化中发挥着重要的调节作用。同时,致纤维化因子转化生长因子-β(TGF-β)可能参与EMS形成的多个过程,且与其纤维化的程度密切相关;TGF-β/Smad信号通路是引起纤维化及其进展的关键通路,参与多种纤维化疾病的发生。因此,miR-21是否与TGF-β/Smad通路相关,是否通过该通路参与EMS的发生,其在EMS发病机制中发挥怎样的作用以及通过调控miR-21能否成为EMS治疗的新策略,这些都需要进一步研究证实。本文将围绕以上问题进行一综述。

益气活血汤通过miR-21/PTEN信号通路抑制肺癌细胞恶性生物学行为

目的:探讨益气活血汤(Yiqi Huoxue decoction)对肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制。方法:以不同浓度益气活血汤含药血清(5%、10%、15%)处理人肺癌A549细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法、Transwell小室实验、流式细胞术、Western blot法和定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法研究益气活血汤含药血清对细胞增殖、迁移和侵袭能力、细胞凋亡、第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)蛋白和miR-21表达的影响。结果:与无药血清组相比较,不同剂量的益气活血汤含药血清处理后,A549细胞存活率降低、迁移和侵袭能力下降;细胞凋亡率上升、细胞内PTEN mRNA及其蛋白表达增加、miR-21表达下降,且10%含药血清组的效果最佳。转染miR-21 mimics后,A549细胞中miR-21表达上调,PTEN蛋白表达下调;10%含药血清处理后PTEN蛋白表达上调。结论:益气活血汤可有效抑制人肺癌A549细胞恶性细胞生物学行为,且可能与miR-21/PTEN信号通路的调控有关。

miR-10b通过mTOR/P70S6K信号通路对宫颈癌大鼠的作用机制研究

目的探讨miR-10b通过mTOR/P70S6K信号通路对宫颈癌大鼠的作用机制。方法采用人宫颈癌HeLa细胞株构建宫颈癌大鼠模型,分为Gg组(宫颈癌大鼠)、Gm组(注射miR-10b-mimics)、Gi组(注射miR-10b-inhibitions)。采用HE染色观察癌组织变化,Western blotting、RT-PCR检测mTOR/P70S6K的mRNA和蛋白表达水平,Transwell检测HeLa细胞的侵袭能力。结果Gg组肿瘤组织出现丰富的血供,界限分明,切面呈鱼肉状,肿瘤细胞大小较为均等;Gm组肿瘤组织中有大量纤维血管形成,肿瘤细胞大小不等,胞浆着色较深;Gi组肿瘤组织中纤维血管较少,胞浆着色稍浅。Western blotting结果显示,mTOR/P70S6K蛋白表达水平为Gm组<Gg组<Gi组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,mTOR/P70S6K mRNA水平为Gi组>Gg组>Gm组(P<0.05),miR-10b mRNA水平为Gi组<Gg组<Gm组(P<0.05)。Transwell结果显示,肿瘤细胞侵袭能力为Gi组>Gg组>Gm组(P<0.05)。结论miR-10b过表达可激活mTOR蛋白,增加P70S6K活性,抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移,有望成为宫颈癌治疗的新靶点。

血清外泌体miR-21靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路诱导肺癌细胞的生长和转移的机制分析

目的探讨肺癌患者血清外泌体miR-21对肺癌细胞生长和转移的影响及机制。方法收集18例健康志愿者和20例肺癌患者的血清,提取并鉴定血清外泌体(记为Normal exo和LCA exo),qRT-PCR检测Normal exo和LCA exo中miR-21的表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-21与PTEN的靶向关系,肺癌细胞A549中转染miR-NC(miR-NC组)、miR-21 mimic(miR-21组)、miR-21 mimic+PTEN质粒(miR-21+PTEN组)后,CCK8法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,Western blot检测PTEN蛋白表达。将10μg/mL时Normal exo和LCA exo及等体积的PBS(Normal exo组、LCA exo组、PBS组)与A549细胞共孵育,检测细胞中miR-21表达,PTEN蛋白表达,细胞增殖、迁移和侵袭能力。A549细胞与10μg/mL时LCA exo共孵育后转染PTEN质粒(LCA exo+PTEN组),然后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。Western blot检测PBS组、Normal exo组、LCA exo组和LCA exo+PTEN组A549细胞中磷酸酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)磷酸化水平。结果Normal exo和LCA exo符合外泌体的结构及生物学特征。LCA exo组中miR-21表达显著高于Normal exo组(P<0.001)。PTEN为miR-21的靶基因,与miR-NC组比较,miR-21组A549细胞PTEN表达下调(P<0.001),细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05)。与miR-21组比较,miR-21+PTEN组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05)。相比于PBS组,LCA exo组细胞PTEN表达显著下调(P<0.001),细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.05),PI3K和AKT磷酸化水平显著增加(P<0.001);与LCA exo组比较,LCA exo+PTEN组A549细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05),PI3K和AKT磷酸化水平显著降低(P<0.001)。结论肺癌患者血清外泌体传递miR-21靶向PTEN促进肺癌细胞的生长和转移。

miR-26a抑制ST3GAL6基因介导mTOR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制

目的:探究miR-26a靶向调控ST3GAL6基因介导mT OR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制。方法:构建肺癌小鼠模型,将小鼠分为正常组和模型组;免疫组化检测ST3GAL6在肺组织中的表达情况,qRT-PCR法检测miR-26a在组织中的表达;细胞分为空白组、阴性对照组、miR-26a mimic组、miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组、miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组和miR-26a mimic+RAD001(mT OR抑制剂)组;qRT-PCR法检测细胞中miR-26a和ST3GAL6 mRNA的表达情况;MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖和凋亡情况;Western blot法测定各组细胞ST3GAL6、p-mT OR、Akt蛋白相对表达量。结果:miR-26a和ST3GAL6在肺癌小鼠肺癌组织中均高表达(均P <0. 05)。与空白组相比,miR-26a mimic组ST3GAL6 mRNA及蛋白表达上升,Akt、p-mT OR蛋白表达上升,细胞增殖率上升、凋亡率下降(均P <0. 05);而miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组ST3GAL6mRNA及蛋白表达下调,Akt、p-mT OR蛋白表达下降,细胞增殖率下降、凋亡率上升(均P <0. 05)。同时,miR-26a表达在miR-26a mimic组和miR-26a mimic+RAD001组中上升,miR-26a inhibitor组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组中下降(均P <0. 05)。结论:miR-26a下调ST3GAL6基因,抑制mT OR信号通路活化,抑制肺癌细胞增殖及促进细胞的凋亡。

miR-100通过Akt/mTOR信号通路对胃癌细胞增殖的负调控作用

目的探讨miR-100对胃癌细胞的生物学作用及对蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的调控作用。方法应用定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、MKN-45和胃黏膜上皮细胞株GES-1中miR-100的表达差异;将人工合成的miR-100模拟剂(mimics)及阴性对照转染至人胃癌细胞株BGC-823中,使用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;应用双荧光素酶报告基因验证miR-100靶基因,应用qRT-PCR和蛋白质印迹法分析Akt/mTOR信号通路相关基因及蛋白表达水平。结果胃癌细胞株miR-100的表达水平显著低于胃黏膜上皮细胞株(P<0.05);转染后48h、72h,miR-100 mimcs组吸光度值均显著低于对照组(P<0.05);流式细胞术显示miR-100 mimics组G_(0)/G_(1)期细胞比率显著高于对照组(P<0.05),S期、G_(2)/M期细胞比率均显著低于对照组(P<0.05);miR-100 mimics组细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);双荧光素酶报告显示miR-100 mimics组野生型mTOR荧光酶活性被抑制(P<0.05);miR-100 mimics组胃癌细胞Akt、mTOR、p70S6K的mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论miR-100在胃癌细胞中表达降低,miR-100可靶向调控mTOR抑制胃癌细胞增殖,阻碍细胞周期进程。

miR-21调控PI3K/Akt信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的:观察miR-21对PI3K/Akt信号通路活化和宫颈癌细胞凋亡的影响,初步探讨相关作用机制。方法:利用miRNA表达数据库和TCGA生存分析数据库分析miRNA与宫颈癌的关系。选取宫颈癌患者63例和妇科体检正常人60例作为研究对象,分别用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法和蛋白质印迹(Western blot)法检测患者宫颈癌组织、癌旁组织以及正常宫颈组织miR-21、PI3K、Akt蛋白相对表达量。将人宫颈癌Hela细胞分为NC组(转染阴性对照序列)、mimics组(转染miR-21 mimics)和inhibitor组(转染miR-21 inhibitor),qPCR检测转染细胞miR-21、PI3K mRNA和Akt mRNA相对表达量,Western blot检测转染细胞PI3K和Akt蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:生物信息学分析方法发现,miR-21低表达的患者有良好的预后(P<0.05)。宫颈癌组织miR-21相对表达量明显高于癌旁组织和正常组织,PI3K m RNA、Akt mRNA及蛋白相对表达量明显高于癌旁组织和正常组织,且癌旁组织高于正常组织(均P<0.05)。转染后,mimics组细胞凋亡率低于NC组,inhibitor组细胞凋亡率高于NC组(均P<0.05);mimics组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白及其mRNA表达水平均高于NC组和inhibitor组(P<0.05),inhibitor组低于NC组(P<0.05);mimics组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值高于NC组和inhibitor组,inhibitor组低于NC组(P<0.05)。结论:宫颈癌发病与miR-21过表达相关,miR-21可能通过激活PI3K/Akt信号通路抑制宫颈癌细胞凋亡。

miR-186通过Shp2和PI3K/Akt/mTOR信号通路对肺腺癌细胞的抑制作用

目的探讨miR-186过表达对肺腺癌细胞生长的影响及其是否与调节Shp2和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。方法将人肺腺癌细胞A549分为Con-mimic组、miR-186-mimic组和Con组,采用CCK8细胞增殖实验检测miR-186对细胞增殖的影响;采用划痕实验检测miR-186对细胞转移的影响;采用Transwell细胞侵袭实验检测miR-186对细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR和Western Blot检测miR-186对Shp2基因mRNA和蛋白水平的影响;采用Western blot检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达水平。结果相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的细胞集落形成率即增殖率均极显著下调(P<0.01);相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的细胞转移能力均极显著受限(P<0.01);相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的细胞侵袭能力均极显著受限(P<0.01)。相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的Shp2的mRNA和蛋白表达水平均极显著下调(P<0.01);相较Con-mimic组和Con组,miR-186-mimic组的PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平均显著下调(P<0.05)。结论miR-186可以通过下调Shp2基因表达和激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而实现对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。

五倍子瘢痕膏提取液通过miR-21靶向调控mTOR通路对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨五倍子瘢痕膏提取液通过micro RNA-21(mi R-21)对瘢痕疙瘩成纤维细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target protein of rapamycin,m TOR)信号通路的调控作用及对其增殖、凋亡的影响。方法 mi R-21mimic、inhibitor转染至人瘢痕疙瘩成纤维细胞,予以五倍子瘢痕膏提取液干预后,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western Blot检测mi R-21、10号染色体张力缺失蛋白磷酸酶(phospatase and tensin homologdeleted on chromasom ten,PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、p-mTOR表达情况。双萤光素酶报告基因验证mi R-21对PTEN mRNA的靶向作用;CCK8法及流式细胞仪检测瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡情况。结果双萤光素酶报告基因验证mi R-21能够靶向调控瘢痕疙瘩成纤维细胞PTEN mRNA表达;在瘢痕疙瘩成纤维细胞中过表达mi R-21可下调PTEN mRNA和蛋白表达水平,以及上调p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平,从而促进其增殖、抑制其凋亡。而五倍子瘢痕膏提取液能减弱这一作用且呈浓度依赖性,抑制mi R-21表达则呈现相反的作用。结论五倍子瘢痕膏提取液抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的机制与其通过mi R-21上调m TOR信号通路中PTEN表达,进而下调p-Akt、p-mTOR表达有关。