HIF-1α与miR-210-3p在子宫内膜异位症组织中的表达及相关性

目的研究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在子宫内膜异位症(EMS)患者异位内膜组织中的表达。方法选取56例EMS手术患者,所有病例均经腹腔镜或开腹手术确诊,经病理证实为EMS,术中留取异位内膜组织为试验组,同期选取正常子宫内膜组织22例为对照组,应用免疫组织化学法(SP)测定2组内膜组织中HIF-1α的表达,并采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测2组标本中miR-210-3p相对表达水平;采用Spearman法分析异位内膜组织中HIF-1α与miR-210-3p表达水平相关性分析。结果异位内膜组织中miR-210-3p相对表达量显著高于正常内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);异位内膜组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率高于正常内膜组织,差异有统计学意义(P=0.036);Spearman相关性分析结果显示异位内膜组织中HIF-1α与miR-210-3p表达水平呈正相关(r=0.573,P<0.001)。结论EMS患者异位内膜组织中HIF-1α与miR-210-3p表达上调,两者呈正相关,可能协同参与了EMS的发生发展。

血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值

目的:探讨血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值。方法:选取198例冠心病患者为研究对象,根据是否并发左心室肥厚分为并发组(n=82)和未并发组(n=116)。比较两组患者一般资料、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、血脂及细胞因子水平,Logistic回归分析影响冠心病患者并发左心室肥厚的因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值。结果:两组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平无统计学差异(P>0.05)。并发组患者年龄、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及总胆固醇(TC)水平、中性粒细胞/淋巴细胞(NLR)及血小板/淋巴细胞比值(PLR)高于未并发组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,患者年龄大、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致响患者冠心病患者并发左心室肥厚的相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,年龄、miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、TC、NLR及PLR对预测冠心病患者并发左心室肥厚均较高价值,且各指标联合预测的价值更高(P<0.05)。结论:患者年龄大、微小核酸(miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p)及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致冠心病患者并发左心室肥厚风险因素,微小核酸、TC、NLR及PLR联合检测对预测冠心病患者并发左心室肥厚有较高价值。

卒中后认知障碍患者血清miR-210-3p水平与认知障碍相关性分析

目的:探讨轻中度缺血性卒中后认知障碍(PSCI)患者血清miR-210-3p的表达水平及与认知障碍的相关性。方法:选取2019年1月—2021年11月某院收治的轻中度缺血性卒中后认知障碍患者30例为研究组,并选取同期该院健康体检者30例作为对照组。采用蒙特利尔认知量表(MoCA)对受试者进行认知评估,采用荧光定量PCR检测患者血清中miR-210-3p表达水平,针对miR-210-3p表达水平与MoCA评分进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-210-3p表达水平对PSCI的诊断价值。结果:研究组患者血清中miR-210-3p表达水平为(0.045±0.035),低于健康对照组的(0.380±0.475),差异有统计学意义(P<0.001);研究组患者血清中miR-210-3p表达水平与MoCA评分呈正相关性(R=0.486,P<0.05);ROC曲线分析表明,miR-210-3p在轻中度缺血性PSCI中具有良好的诊断性能,灵敏度0.815,特异度0.875,曲线下面积(AUC)为0.937(95%CI 0.831~0.986),截断值0.095(P<0.01)。结论:miR-210-3p在轻中度缺血性PSCI血清中的表达是下降的,与MoCA评分呈正相关性,可作为PSCI的潜在分子生物标志物,而且可能为该病的预防和治疗提供新的见解。

miR-210-3p和miR-532-3p在子宫内膜癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨miR-210-3p和miR-532-3p在子宫内膜癌中的表达及其对预后的影响。方法回顾性收集2017年6月至2018年6月于同济大学附属第一妇婴保健院收治并行手术治疗的子宫内膜癌患者的手术标本59例纳入研究,另选取同期20例行子宫肌瘤切除术患者的正常子宫内膜组织作为对照。RT-qPCR检测miR-210-3p和miR-532-3p的相对表达量,分析miR-210-3p和miR-532-3p表达与临床病理和预后的关系,并采用CoX回归模型分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果子宫内膜癌组织中miR-210-3p的水平为1.93±0.37,明显高于正常子宫内膜组织(0.49±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组织中miR-532-3p的水平为0.64±0.16,明显低于正常子宫内膜组织(1.42±0.39),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织中miR-210-3p和miR-532-3p表达与FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结有无转移、分化程度有关(P<0.001);miR-210-3p低表达患者5年的生存率为77.78%,明显高于miR-210-3p高表达患者(52.17%),差异有统计学意义(P<0.05);miR-532-3p低表达患者5年的生存率为53.57%,明显低于miR-532-3p高表达患者(80.65%),差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、分化程度、组织学类型、miR-210-3p和miR-532-3p是影响子宫内膜癌患者预后独立的危险因素(P<0.05)。结论miR-210-3p在子宫内膜癌组织中高表达,miR-532-3p在子宫内膜癌组织中低表达,miR-210-3p和miR-532-3p的表达与子宫内膜癌患者的预后具有一定的相关性,可为预后判断提供一定的参考。

miR-210-3p通过自噬调控MC3T3-E1细胞成骨分化的机制研究

目的:探讨微小RNA-210-3p(microRNA-210-3p,miR-210-3p)通过自噬对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化的影响。方法:(1)采用脂质体转染法构建miR-210-3p过表达或沉默的MC3T3-E1细胞模型,设置阴性对照(negative control,NC)mimic组、miR-210-3p mimic组、NC inhibitor组和miR-210-3p inhibitor组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标及自噬相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(2)用雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别构建自噬激活和抑制模型,设置control组、RAPA组和3-MA组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测自噬激活或抑制后MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(3)设置NC mimic组、NC mimic+RAPA组和miR-210-3p mimic+RAPA组,Western blot和RT-qPCR检测各组MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化。结果:(1)与NC mimic组相比,miR-210-3p mimic组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度升高,矿化结节数目增加,细胞自噬水平显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-210-3p inhibitor组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞内Runx2疫荧光强度降低,矿化结节数目减少,细胞自噬水平显著升高(P<0.05)。(2)与control组相比,3-MA组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度升高,而RAPA组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度降低。(3)miR-210-3p过表达可逆转RAPA对MC3T3-E1细胞成骨分化的抑制作用(P<0.01)。结论:miR-210-3p可通过降低自噬水平促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。

miR-210-3p通过靶向ATG7抑制人膀胱癌细胞J82的自噬和诱导凋亡

目的探索miR-210-3p抑制人膀胱癌细胞J82机制。方法应用定量实时PCR(qRTPCR)检测miR-210-3p及其靶基因自噬相关基因7(autophagy-relatedgene7,ATG7)在J82细胞中的表达。为验证miR-210-3p和ATG7之间的生物学关系,进行荧光素酶报告检测。通过体外实验研究miR-210-3p和ATG7在J82细胞中的生物学功能,包括CCK-8法检测细胞增殖情况,hoechst染色检测细胞凋亡,westernblot检测细胞自噬。结果miR-210-3p表达明显下调ATG7表达水平,生物信息学预测和荧光素酶报告实验证明miR-210-3p抑制ATG7是通过直接结合到ATG73’-未翻译区域(3’-UTR)。在J82细胞中,miR-210-3p上调可抑制ATG7表达、细胞自噬和细胞增殖,同时诱导细胞凋亡。结论miR-210-3p通过负调控ATG7抑制细胞增殖和自噬,并促进凋亡,从而促进膀胱癌细胞J82细胞死亡。因此,在膀胱癌中抑制自噬对于开发针对膀胱癌的自噬靶向治疗至关重要。本研究补充了miRNA调控膀胱癌的相关机制。

老年慢性心力衰竭患者血浆miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p水平与其营养状况和睡眠质量的相关性

目的探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与其营养状况和睡眠质量的相关性。方法采用微型营养评价量表(MNA)与匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评估106例CHF患者营养状况及睡眠质量;将患者按不同MNA、PSQI和心功能分组,比较各组血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平,并分析其相关性。结果随着心功能分级的增加,miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平逐渐增加,MNA评分逐渐减少,PSQI评分逐渐增加。miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平互呈正相关;miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与营养状况呈负相关;miR-423-5p、miR-499-5p与睡眠质量呈正相关(P<0.05)。结论血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与CHF患者心力衰竭程度、营养状况和睡眠质量密切相关。

血清miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p在慢性心力衰竭大鼠中的表达及意义

目的探讨血清微小RNA-423-5p(miR-423-5p)、微小RNA-499-5p(miR-499-5p)、微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在慢性心力衰竭(CHF)大鼠中的表达及意义。方法SD大鼠随机分为对照(NC)组(n=15)和CHF组(n=15),采用腹腔注射阿霉素建立CHF模型。建模6周后检测两组心功能指标[左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)]、血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平及氨基末端脑利钠肽前体(NTpro-BNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用Pearson法分析血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与心功能指标、NTpro-BNP、cTnI相关性。结果与NC组比较,CHF组心功能指标LVEDV和LVESV升高(P<0.05),miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p表达水平升高(P<0.05),NTpro-BNP和cTnI水平升高(P<0.05),LVEF降低(P<0.05)。CHF大鼠血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与LVEDV、LVESV、LVEF无明显相关性(P>0.05),而CHF大鼠血清miR-423-5p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.668,P=0.007;r=0.622,P=0.004),CHF大鼠血清miR-499-5p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.532,P=0.013;r=0.663,P=0.041),CHF大鼠血清miR-210-3p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.598,P=0.019;r=0.533,P=0.041)。结论CHF大鼠血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平升高,且与NTpro-BNP和cTnI密切相关。

miR-210-3p在肺癌组织中的表达及其对预后的影响分析

目的评估miR-210-3p在肺癌组织中的表达及其对预后的影响。方法选择2012年2月—2017年12月于邯郸市第一医院诊治的187例肺癌患者作为研究对象,回顾分析其临床资料。比较肺癌患者肺癌组织及癌旁组织中miR-210-3p相对表达量,分析miR-210-3p相对表达量与患者各项临床病理资料之间关系,同时对患者的生存曲线进行统计分析。结果与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-210-3p表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-210-3p表达与肺癌的临床分型和淋巴结转移情况有关(P<0.05),与性别、年龄、吸烟史、肺癌组织类型及肿瘤组织大小无关(P>0.05)。临床分期为Ⅲ/Ⅳ期、有淋巴结转移的肺癌患者miR-210-3p表达水平明显高于临床分期为Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移肺癌患者(P<0.05)。随着miR-210-3p表达水平的升高,肺癌患者的生存率明显下降(P<0.05)。结论肺癌组织中miR-210-3p相对表达量高于癌旁组织。肺癌组织中miR-210-3p表达水平与肺癌的临床分型和淋巴结转移情况有关。

低氧诱导因子-1α通过提高miR-210-3p表达水平促进口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的:研究低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)是否通过改变miR-210-3p的表达水平影响口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的进展。方法:低氧培养CAL-27细胞并检测细胞内HIF-1α、miR-210-3p的表达水平;重组HIF-1α刺激CAL-27细胞后检测miR-210-3p的表达水平是否发生变化;转染短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)改变CAL-27细胞内miR-210-3p的表达水平后,用划痕实验和CCK-8实验来观察其对CAL-27细胞迁移、增殖能力的影响。结果:低氧导致CAL-27细胞内HIF-1α及miR-210-3p表达量增高;重组HIF-1α处理后的CAL-27细胞内miR-210-3p表达量升高;过表达miR-210-3p会促进CAL-27细胞的增殖及迁移能力,反之细胞的增殖和迁移能力则受到抑制。结论:MiR-210-3p在OSCC细胞增殖和迁移过程中起到重要作用,HIF-1α通过影响miR-210-3p表达来参与肿瘤进程。

低表达miR-210-3p调控大鼠垂体瘤GH3与MMQ细胞株增殖与迁移

目的:探讨低表达miR-210-3p对大鼠垂体瘤GH3和MMQ细胞株的增殖与迁移的作用。方法:将培养好的大鼠垂体瘤MMQ与GH3细胞株随机分为低表达miR-210-3p组和阴性对照组,分别转染miR-210-3p inhibitor和miR-210-3p NC,荧光定量PCR检测实验组与对照组的miR-210-3p的表达;转染后24 h、48 h、72 h分别进行CCK8检测增殖能力;用Transwell来检测大鼠垂体瘤细胞的迁移能力;用Western- boltting技术分别检测低表达miR-210-3p组和阴性对照组的FGFRL-1的蛋白表达;用双荧光素酶实验验证miR-210-3p的靶基因。结果:转染低表达病毒后MMQ与GH3垂体瘤细胞株的细胞增殖能力下降较阴性对照组比较差异,P 【0.05,有统计学意义;低表达miR-210-3p组MMQ与GH3垂体瘤细胞系与阴性对照组相比细胞迁移能力下降,P 【0.05,有统计学意义;转染低表达病毒组的细胞株与对照组相比,靶基因蛋白表达有差异,P 【0.05;miR-210-3p可与FGFRL-1 mRNA的3’-UTR结合,FGFRL-1为miR-210-3p的靶基因。结论:miR-210-3p低表达抑制大鼠垂体瘤细胞的增殖与迁移。

miR-210-3p在骨质疏松性骨折中靶基因预测及信号通路的生物信息学分析

目的通过生物信息学分析人miR-210-3p染色体定位、物种保守性、碱基序列,并分析其调控骨质疏松性骨折的靶基因及分子功能。方法通过NCBI、PubMed、UCSC等数据库查找miR-210-3p物种保守性和碱基序列,借助TargetScan、miRDB、miRTarBase、GeneCards预测miR-210-3p调控骨质疏松性骨折作用靶点,借助STRING在线数据库和Cytoscape 3.7.0本地软件构建PPI网络图,通过DAVID在线数据库对靶基因进行GO、KEGG富集性分析。结果已知的成熟miR-210-3p序列在多个物种间具有高度保守性。PPI网络分析显示,miR-210-3p的靶点之间具有非常复杂的作用网络,尤其是靶基因BDNF、TWIST1、MEF2D、MEF2A的编码蛋白在调控骨质疏松性骨折中起关键作用。GO分析发现其靶基因参与骨骼系统发育、骨化、成骨细胞分化等生物学过程。结论分析结果初步提示miR-210-3p通过调控靶基因广泛参与多种重要的生物学过程,为深入研究miR-210-3p参与抗骨质疏松性骨折机制提供了新的思路与线索。

肺腺癌患者血清中mi R-498,miR-339-5p和miR-210-3p水平表达的临床诊断价值

目的研究肺腺癌(lung adenocarcinoma,LA)患者血清中微核糖核酸(miRNA)在肺腺癌患者及正常人群组血清中的表达水平,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值。方法收集60例肺腺癌及40例正常人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time PCR,qRT PCR)检测各组血清miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的表达情况。统计分析各组miRNA的表达差异以及单个miRNA在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析三者联合检测的诊断价值。结果相比正常人群,肺腺癌患者血清中miR-210-3p表达增加(6.41±1.85 vs 4.52±1.45),miR-498(2.09±0.88vs 3.01±0.69)和miR-339-5p(0.8±0.53 vs 1.24±0.58)表达下降,差异有统计学意义(t=4.72,1.34,2.75,均P<0.05)。受试者工作特征曲线下面积(AUC)分析结果显示,miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的AUC分别为0.788(95%CI0.695~0.864),0.715(95%CI 0.616~0.801)和0.799(95%CI 0.707~0.872);三者联合检测在肺腺癌诊断中AUC值为0.902(95%CI 0.826~0.952),三者联合检测优于单个miRNA的检测,差异有统计学意义(t=14.09~18.65,均P<0.05)。结论miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p在肺腺癌患者血清中的表达情况改变,对肺腺癌具有一定的临床诊断价值。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

lncRNA NPIPA9靶向miR-210-3p对前列腺癌细胞生长和迁移的影响

目的分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量,通过过表达lncRNA NPIPA9检测miR-210-3p的相对表达量及对前列腺癌细胞生长和迁移的影响。方法通过Oncomine数据库分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA NPIPA9在前列腺癌细胞株DU-145、PC-3、C4-2B、22Rv1、LNCaP和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中的相对表达量。体外培养前列腺癌PC-3细胞,分为两组:NPIPA9组和对照组,NPIPA9组转染100 nmol/L lncRNA NPIPA9载体,对照组转染100 nmol/L对照载体。CCK-8法检测PC-3细胞的增殖活力。Transwell实验检测PC-3细胞的迁移能力。生物信息学技术预测lncRNA NPIPA9的潜在靶点。双荧光素酶报告基因实验确定lncRNA NPIPA9和miR-210-3p的靶向结合关系。RT-qPCR检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中miR-210-3p相对表达量的影响。Western blotting法检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中核因子κB(NF-κB)通路蛋白表达量的影响。计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果前列腺癌组织中lncRNA NPIPA9相对表达量低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。前列腺癌细胞株中lncRNA NPIPA9相对表达量均低于RWPE-1细胞,差异具有统计学意义(P<0.01);前列腺癌PC-3细胞中lncRNA NPIPA9相对表达量最低,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,lncRNA NPIPA9对前列腺癌PC-3细胞活力具有抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞迁移数目分别为(101.70±8.63)、(45.97±8.83)个,lncRNA NPIPA9对PC-3细胞迁移具有抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.01)。lncRNA NPIPA9可以直接靶向结合miR-210-3p,差异具有统计学意义(P<0.01)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞中miR-210-3p相对表达量分别为5.32±0.79和1.11±0.56,lncRNA NPIPA9可直接下调PC-3细胞中miR-210-3p表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,lncRNA NPIPA9能够降低PC-3细胞中NF-κB通路蛋白c-Myc、MMP-9、VEGF、p65、p50表达。结论lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中表达下调,其通过靶向并负调控miR-210-3p,降低前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移能力。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

miR-141-3p靶向调控HMGB1对LPS诱导的A549细胞损伤的影响

目的探讨miR-141-3p通过靶向调控高迁移率族蛋白1(HMGB1)对脂多糖(LPS)诱导的A549细胞损伤的影响。方法以Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞作为研究对象,将miR-141-3p mimics、mimics NC、HMGB1基因过表达质粒(pcDNA3.1-HMGB1)和空载质粒(Vector)分别或共转染至A549细胞中,再采用10μg/ml LPS处理24 h。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞增殖活性;比色法检测各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与HMGB1之间的靶向调控关系。结果LPS干预后,A549细胞增殖活性及细胞中miR-141-3p表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平及上清液中LDH活性升高(P<0.05)。过表达miR-141-3p可增强LPS处理后的A549细胞增殖活性(P<0.05),降低细胞凋亡率及细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和上清液中LDH活性(P<0.05)。然而,HMGB1基因过表达可逆转miR-141-3p对LPS诱导A549细胞损伤的改善作用。双荧光素酶报告基因实验证实,HMGB1是miR-141-3p下游靶基因。结论miR-141-3p可抑制LPS诱导的A549细胞凋亡,降低炎症因子表达水平,改善A549细胞损伤,其作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。

miR-21-3p靶向STAT3促进银屑病角质形成细胞增殖的研究

目的探讨miR-21-3p及其靶蛋白信号转导子和转录激活子3蛋白(STAT3)在寻常型银屑病发生过程中角质形成细胞的作用意义。方法对皮肤组织中STAT3蛋白表达情况的检测选择免疫组织化学法,对健康人群皮肤组织及银屑病患者皮损组织miR-21-3p表达量的检测选择实时荧光定量PCR法,靶基因STAT3和miR-21-3p关系的检测选择双荧光素酶报告基因。化学合成miR-21-3p模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞,对不同分组细胞进行CCK8、流式细胞凋亡实验,探究分析miR-21-3p调控细胞表型主要作用。对于转染细胞中STAT3蛋白表达情况,选择Western Blot检测。结果寻常型银屑病患者皮肤组织中miR-21-3p呈高表达(P<0.05)。STAT3免疫组化阳性表达定位于细胞浆,在银屑病组患者皮损组织阳性表达率为82.22%(37/45)高于正常皮肤组织(P<0.01)。双荧光素酶报告基因显示miR-21-3p与STAT3存在结合,呈靶向关系。miR-21-3p mimics促进HaCaT细胞增殖活性,抑制细胞凋亡;miR-21-3p inhibitor抑制HaCaT细胞的增殖能力,促使细胞趋向凋亡。miR-21-3p转染HaCaT过表达可对STAT3蛋白表达量产生促进,相反则降低(F=48.632,P<0.01)。结论miR-21-3p呈现正调控关系,能够靶向调控STAT3;两者共同作用参与并加重银屑病的病程,并抑制患者细胞凋亡,调节角质形成细胞增殖活性。